一种从白花龙胆花中提取龙胆苦苷的工艺

摘要

本发明涉及一种从白花龙胆花中提取龙胆苦苷的工艺，该工艺是指将干燥的白花龙胆花粉碎后，在室温下利用乙醇作为提取溶剂进行冷浸提取，经浓缩、吸附、干燥后得到纯度较高的龙胆苦苷。本发明首次对白花龙胆花中的龙胆苦苷的提取制备过程进行了研究，确定了白花龙胆花中龙胆苦苷的最佳冷浸提取条件和纯化工艺，可满足各种以白花龙胆花为主要原料的药物开发的需求。

说明书

技术领域

本发明涉及龙胆苦苷的提取方法，尤其涉及一种从白花龙胆花中提取龙胆苦苷的工艺。

背景技术

白花龙胆是龙胆科(Gentianaceae)龙胆属(Gentiana Toum L.)植物麻花秦艽(Gentiana straminea Maxim.)的民间俗称，藏医称“解吉嘎保”，是我国重要的常用中藏药材资源之一，已有2000年的药用历史。麻花秦艽又名西秦艽、大秦艽、左秦艽、左扭根等，民间因其花的颜色为白色，将其称为白花龙胆。作为传统常用中药，历代本草皆有收载，其始载于《神农本草经》，列为中品，其根部的主要成份是裂环烯醚萜苷类：龙胆苦苷、当药苦苷、当药苷，具有多种药效——如祛风湿、退虚热、舒筋止痛的作用，可用于治疗风湿性关节痛、结核病潮热、小儿疳热、黄疸性肝炎、小便不利等症。

《中国药典》2005年版将秦艽、麻花秦艽、粗茎秦艽和小秦艽4种植物收载为中药秦艽的基原植物，以根入药，但在传统藏药中，麻花秦艽除根外，还以花入药，即白花龙胆花。目前，还没有关于从白花龙胆花中提取龙胆苦苷的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种以白花龙胆花为原料、提高龙胆苦苷得率的从白花龙胆花中提取龙胆苦苷的工艺。

为解决上述问题，本发明所述的一种从白花龙胆花中提取龙胆苦苷的工艺，包括以下步骤：

①将干燥的白花龙胆花粉碎至20～80目；

②用乙醇在室温下对白花龙胆花按料液1：5～1：30的重量体积比进行冷浸提取后过滤，得滤液；

③浓缩滤液，得浓缩液；

④将浓缩液用大孔吸附树脂吸附后，依次用水、乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；

⑤将洗脱液浓缩至粘稠状，经干燥即可。

所述步骤②中乙醇的浓度为50％～95％。

所述步骤④中乙醇的浓度为30％～90％。

所述步骤⑤中干燥为冷冻干燥。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

1、本发明首次对白花龙胆花中的龙胆苦苷的提取制备过程进行了研究，由于龙胆苦苷是一种热不稳定物质，在高温下易转化，因此本发明采用可保持其活性的冷浸法，对影响提取得率及龙胆苦苷含量的各个参数(粒度、料液比、乙醇浓度、提取时间和提取次数)采用L₁₆(4⁵)正交表进行优化，参见表1、表2：

表1：正交试验因素水平表

 

    水平       A：粒度B：乙醇浓度                  (％)C：料液比             (W/V)D：提取时间                   (h)           E：提取次数120601:1061240701:15122360801:20183480901:25244

表2：正交试验结果及数据分析

 

顺序号A粒度B乙醇浓度C料液比D提取时间E提取次数龙胆苦苷含量(mg·g^-1)1111110.5532122223.7703133335.2354144444.9415212344.0876221432.8807234123.6818243213.5679313425.45010324314.02211331245.016

 

12342135.35513414236.36314423146.16815432415.48016441324.936k13.6244.1133.3463.9403.405k23.5544.2104.6734.6794.460k34.9614.8535.1054.5704.958k45.7374.6994.7524.6875.053R2.1830.5861.7590.7471.648

从表1、表2可以看出，各因素对提取效果的影响程度为：样品粒度>料液比>提取次数>提取时间>乙醇浓度。同时，表明采用本发明的工艺可以提高龙胆苦苷得率，并减小了工业消耗、降低了生产成本。

2、由于本发明采用乙醇为溶剂，因此在提取过程中安全可靠，易于工业化生产。

3、本发明的实现，可满足各种白花龙胆花药物开发的需求。

具体实施方式

实施例1：一种从白花龙胆花中提取龙胆苦苷的工艺，包括以下步骤：

①将25kg干燥的白花龙胆花粉碎至20目；

②用125L、50％的乙醇溶液在室温下对白花龙胆花冷浸提取4次，每次6h，通过200目滤布过滤，过滤后得滤液；

③合并四次滤液，用江苏星海仪器设备公司生产的20L旋转蒸发仪在40℃以下减压浓缩，浓缩后得浓缩液。对浓缩液利用高效液相色谱HPLC(来源：美国安捷伦公司，Agilent1100)测定白花龙胆花中龙胆苦苷的含量为6.28mg/g；

④首先将南开大学化工厂生产的D-101型大孔吸附树脂在5％的NaOH溶液和5％的HCL溶液中分别浸泡24h后，用蒸馏水冲洗至pH值为中性，即得处理好的大孔吸附树脂；然后将8L浓缩液用处理好的D-101型大孔吸附树脂吸附，先用蒸馏水洗脱至洗脱液澄清无色，再用浓度为30％乙醇溶液进行洗脱，HPLC法检测直至洗脱液中没有龙胆苦苷；

⑤收集洗脱所得的龙胆苦苷溶液，用20L旋转蒸发仪在40℃以内减压浓缩至粘稠状，再将浓缩液置于美国LABCONCO生产的6L冷冻干燥机中，于-20℃冷冻4h，再经真空干燥36h，即可得到130.8g纯度为81％的龙胆苦苷。

实施例2：一种从白花龙胆花中提取龙胆苦苷的工艺，包括以下步骤：

①将5kg干燥的白花龙胆花粉碎至60目；

②用75L、95％的乙醇溶液在室温下对白花龙胆花冷浸提取1次，时间为18h，通过200目滤布过滤，过滤后得滤液；

③将所得滤液用20L旋转蒸发仪在40℃以下减压浓缩，浓缩后得浓缩液。对浓缩液利用HPLC测定白花龙胆花中龙胆苦苷的含量为6.06mg/g；

④将3.5L浓缩液用处理好的D-101型大孔吸附树脂吸附，先用蒸馏水洗脱至洗脱液澄清无色，再用浓度为60％乙醇溶液进行洗脱，HPLC法检测直至洗脱液中没有龙胆苦苷；

⑤收集洗脱所得龙胆苦苷溶液，用20L旋转蒸发仪在40℃以内减压浓缩至粘稠状，再冷冻干燥即可得到34.5g纯度为82％的龙胆苦苷。

实施例3：一种从白花龙胆花中提取龙胆苦苷的工艺，包括以下步骤：

①将1kg干燥的白花龙胆花粉碎至80目；

②用30L、60％的乙醇溶液在室温下对白花龙胆花冷浸提取2次，每次24h，通过200目滤布过滤，过滤后得滤液；

③合并两次所得滤液，用20L旋转蒸发仪在40℃以下减压浓缩，浓缩后得浓缩液。对浓缩液利用HPLC测定白花龙胆花中龙胆苦苷的含量为6.38mg/g；

④将4L浓缩液用处理好的D-101型大孔吸附树脂吸附，先用蒸馏水洗脱至洗脱液澄清无色，再用浓度为90％乙醇溶液进行洗脱，HPLC法检测直至洗脱液中没有龙胆苦苷；

⑤收集洗脱所得龙胆苦苷溶液，用20L旋转蒸发仪在40℃以内减压浓缩至粘稠状，再冷冻干燥即可得到5.76g纯度为87％的龙胆苦苷。