用作治疗炎症及其它疾病的前药的新型双用途肽酶抑制剂

摘要

本发明涉及通式(1)和(2)的化合物A－B－D－B’－A’(1)和A－B－D－E(2)，其中A和A’可以相同或不同，并且为残基(I)，其中X为S、O、CH

说明书

技术领域

本发明涉及多种新型物质和化合物，所述的化合物能协同抑制酶 二肽基肽酶IV(DPIV)以及具有相似的酶作用的肽酶和丙氨酰氨基肽酶 N(APN)以及具有相似的酶作用的肽酶(“双重抑制剂”)。而且，本发 明涉及制备新型DPIV和APN双重抑制剂的方法。本发明还涉及前述 新型化合物在医药领域中的用途。而且，本发明涉及前述双重抑制剂 用于预防和治疗显示出过度免疫应答和具有炎症发生的疾病的用途， 所述疾病为神经元疾病和脑损伤、肿瘤疾病、皮肤疾病、II型糖尿病 和SARS。

背景技术

酶二肽基肽酶IV(DPIV，CD26，EC 3.4.14.5)是一种随处存在且催 化肽水解的丝氨酸蛋白酶，特别地在脯氨酸之后和-达到较小的程度- 在丙氨酸之后或-有限制-进一步在氨基酸如丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸和 甘氨酸之后在N-末端的第二个位置上。属于具有DPIV相似的酶作用 的酶基因家族的酶，特别是-DP 8、DP 9和FAP/Seprase[T.Chen等人： Adv.Exp.Med.Biol.524，79，2003]。也发现一种特别地类似于DPIV的 底物特异性用于吸引素(attractin)(Mahagony蛋白质)[J.S.Duke-Cohan 等人：J.Immunol.156，1714，1996]。所述酶也受到DPIV抑制剂的抑制。

属于丙氨酰氨基肽酶组的(也随处存在)为主要表现为II型膜蛋白 的氨基肽酶N(APN，CD13，EC 3.4.11.2)，和细胞溶质可溶性丙氨酰氨 基肽酶(EC 3.4.11.14，嘌呤霉素(puromycine)-灵敏型氨基肽酶，氨基肽 酶PS，脑啡肽(encephaline)降解型氨基肽酶)。丙氨酰氨基肽酶(包括前 述的氨基肽酶)依赖金属，例如依赖锌，和低聚肽的N-末端氨基酸之后 催化肽键的水解起作用，在APN的情况下，优选N-末端的丙氨酸[A.J. Barrett等人：Handbook of Proteo-lytic Enzymes，Academic Press 1998]。 氨基肽酶N的所有抑制剂也抑制细胞溶质的丙氨酰氨基肽酶，虽然细 胞溶质的氨基肽酶的特异性抑制剂存在[M.Komodo等人：Bioorg.and Med.Chem.9，121，2001]。

对于两组酶，在不同的细胞系统中均证实了重要的生物功能。这 对于如下特别是是真实的：免疫系统[U.Lendeckel等人：Intern.J.Mol. Med.4，17，1999；T.等人：Intern.J.Mol.Med.4，3，1999；I. De Meester等人：Advanc.Exp.Med.Biol.524，3，2002；国际专利申请 No.WO 01/89,569；国际专利申请No.WO 02/053,170；国际专利申 请No.PCT/EP 03/07,199]；神经元系统[国际专利申请No.WO 02/053,169和德国专利申请No.10337074.9]；成纤维细胞[德国专利申 请No.10330842.3]；角质形成细胞[国际专利申请No.WO 02/053,170]；皮脂腺的细胞/皮脂腺细胞(sebatocytes)[国际专利申请No. PCT/EP 03/02,356]；肿瘤以及用于病毒引起的感染，如例如冠状病毒 属(Coronavirusses)[D.P.Kontoyiannis等人：Lancet 361，1558，2003]。

DPIV的能力，特别是灭活内分泌激素GIP和GLP的能力导致发 展了用于治疗葡萄糖代谢失调的新型治疗概念[D.M.Evans：Drugs 5， 577，2002]。

对于两组酶，存在已知不同的抑制剂[评论参见：D.M.Evans： Drugs 5,577,2002；和M.-C.Fournie-Zaluski和B.P.Roques：在J. Langner and S.Ansorge中：Ectopeptidases，Kluwer Academic/Plenum Publishers，51页，2002]。

丙氨酰氨基肽酶和二肽基肽酶IV的分别抑制以及具有相似的底物 特异性的酶的抑制，特别是这两组酶的酶的组合抑制，导致强烈抑制 免疫细胞的DNA合成，和因此导致强烈抑制细胞繁殖以及细胞因子产 生的变化，特别是导致(免疫-调节有效的)TGF-β1的诱导[国际专利申请 No.WO 01/89,569；国际专利申请No.WO 02/053,170]以及导致抑制 TH1和TH2型炎症细胞因子例如白细胞介素(IL-4)的产生和释放 (IL-4)[国际专利申请No.WO 02/053,170和德国专利申请No.10102 392.8]。丙氨酰氨基肽酶抑制剂在调节T细胞中具有强的诱导TGF-β1 作用[国际专利申请No.PCT/EP 03/07,199]。在神经元系统中，急性和 慢性脑损伤过程的减少或阻滞为通过抑制所述两种酶系统来证实[国际 专利申请No.WO 02/053,169和德国专利申请No.10337074.9]。而且， 其证实对于成纤维细胞[德国专利申请No.10330842.3]、角质形成细 胞[国际专利申请No.WO 02/053,170)和皮脂腺细胞[国际专利申请 No.PCT/EP 03/02,356]，丙氨酰氨基肽酶N和DPIV的组合抑制具有抑 制细胞因子产生的增长和变化的作用。

这产生令人惊奇的结果，丙氨酰氨基肽酶和二肽基肽酶IV以及具 有相似作用的酶在不同的器官和细胞系统中执行基本的中枢生物功 能，并且这两组酶的组合抑制表示用于治疗多种-在大多数情况下慢性- 疾病的新型有效的治疗原理。

在接受的动物模式中，申请人可以同时显示出，特别是组合给药 两组所述肽酶的抑制剂，导致对不同细胞系统的生长抑制或过度免疫 应答的抑制、以及慢性炎性过程和脑损伤的抑制，也可以在人体内[国 际专利申请No.WO 01/89,569]。分别给药单一的已知抑制剂导致降低 的作用。

迄今为止报道的结果主要是单独利用丙氨酰氨基肽酶N和二肽基 肽酶IV的已知抑制剂，特别是两组酶的组合抑制剂，所述抑制剂在文 献中公开，部分可市售获得。

发明内容

现在，令人惊奇地是，发现了新型主要是非肽低分子量物质，其 可以作为前药施用，和其可以在生理学和病理学条件下作为有效药剂 或有效药剂的混合物起作用，并且其以双重方式抑制丙氨酰氨基肽酶N 和具有相似的底物特异性的酶，和二肽基肽酶IV及也具有相似的底物 特异性的酶。所述前药的转化是通过-S-S-或-Se-Se-桥进行，优选通过 细胞硫醇(具有-SH-基团的化合物)。

因此，在此公开的类型的前药优选地在细胞核组织中起作用。而 且，通过利用所述前药，可以防止出现由于结合血浆中的游离肽酶而 使所述抑制剂的抑制能力降低。

因此，本发明涉及新型物质，其能特异性抑制切割Ala-对硝基苯 胺的肽酶和切割Gly-Pro-对硝基苯胺的肽酶，因此，其以仅仅一种物质 组合了协同抑制两组肽酶的能力。

而且，本发明涉及新型物质，其不仅可以本身使用，而且可作为 用于其它物质的原材料使用，用于预防和治疗具有过度免疫应答的疾 病(自身免疫性疾病、变态反应和移植排异反应、败血症)，其它的慢性 炎症疾病，包括动脉硬化、神经元疾病和脑损伤、皮肤疾病(特别是粉 刺和银屑病)，肿瘤疾病和特定的病毒感染(特别是SARS)以及II型糖 尿病。

本发明涉及通式(1)和(2)的化合物或其与有机酸和/或无机酸的酸 加成盐，

A-B-D-B′-A′(1)和

A-B-D-E      (2)，其中

-A和A’可以相同或不同，并且为残基

其中X为S、O、CH₂、CH₂CH₂、CH₂O或CH₂NH，和Y为H或 CN，和^★指手性碳原子；

-B和B′可以相同或不同，且为包含或不包含O、N或S、未取代 的或取代的、无支链的或支链的亚烷基残基、环亚烷基残基、芳亚烷 基残基、杂环亚烷基残基、杂芳基亚烷基残基、芳基酰氨基亚烷基残 基、杂芳基酰氨基亚烷基残基、具有一个或多个五、六或七元环的未 取代的或单或多取代的亚芳基残基或杂亚芳基残基；

-D为-S-S-或-Se-Se-；和

-E为基团-CH₂-^★CH(NH₂)-R⁹，其中R⁹为包含或不包含O、N或S、 未取代的或取代的、无支链的或支链烷基残基、环烷基残基、芳烷基 残基、杂环烷基残基、杂芳基烷基残基、芳基酰氨基烷基、杂芳基酰 氨基烷基残基、具有一个或多个五、六或七元环的未取代的或单或多 取代的芳基或杂芳基残基，和^★指手性碳原子。

通式(1)和(2)的化合物的优选的实施方案由从属权利要求2至10 得到。

本发明还涉及根据下页给出的合成的一般方案制备通式(1)和(2)的 化合物的方法，其中A、A’、B、B’、D和E具有前述详细提及的含义， 其中根据下述合成方案1。

用于化合物A-B-D-B’-A’和A-B-D-E的合成方案

-通式化合物

其中(SG)为保护基，和为B的结构元件，用以下通式的杂环化合物 转化，

其中X为S、O、CH₂、CH₂CH₂、CH₂O或CH₂NH，和Y为H或 CN；得到的以下通式的缩合产物

用下述通式化合物转化，

其中为B的结构元件；和脱去保护基(SG)得到反应产物，将其 转化成通式A-B-D-B’-A’(1)化合物，其中A和A’可以相同或不同，和 B和B’可以相同或不同，且其中A、A’、B、B’和D可具有前述含义； 或

-下述通式的化合物

其中(SG)为保护基，和为B的结构元件，用以下通式杂环化合 物转化，

其中X为S、O、CH₂、CH₂CH₂、CH₂O或CH₂NH，和Y为H或 CN；得到的以下通式的缩合产物

用以下通式化合物转化，

其中为B的结构元件；和形成的反应产物用以下通式化合物转 化

HS-CH₂-CH[-NH-(SG)]-(R⁹)

和脱去保护基(SG)，将其转化成通式A-B-D-E(2)的化合物，其中 A、B、D和E可具有前述含义；或

-以下述通式的化合物

其中(SG)为保护基，为B的结构元件和Z为残基，其活化用于 硫醇交换的基团-S-S-，由能下通式的杂环化合物转化，

其中X为S、O、CH₂、CH₂CH₂、CH₂O或CH₂NH，和Y为H或 CN；得到的以下通式的缩合产物

用以下通式化合物转化，

HS-CH₂-CH[-NH-(SG)]-(R⁹)

脱去保护基(SG)得到通式A-B-D-E(2)化合物，其中A、B、D和 E可具有前述含义；或

-以下通式化合物

其中SG是保护基，且是B的结构元件，用以下通式的杂环化 合物转化，

其中X为S、O、CH₂、CH₂CH₂、CH₂O或CH₂NH，和Y为H或 CN；得到的反应产物用以下通式化合物转化，

HS-CH₂-CH[-NH-(SG)]-R⁹

形成通式A-B-D-E(2)的化合物，其中A、B、D和E可具有前述含 义；或

-以下通式化合物

其中SG为保护基，和为B的结构元件，由具有以下通式的杂 环化合物转化

其中X为S、O、CH₂、CH₂CH₂、CH₂O或CH₂NH，和Y为H或 CN；和得到的反应产物由脱去保护基转化成通式A-B-D-B’-A’(1)的化 合物，其中A和A’可以相同或不同，B和B’可以相同或不同，和其中 A、A’、B、B’和D可具有前述含义，或

-以下通式的化合物

其中(SG)为保护基，和为B的结构元件；用以下通式的杂环化 合物转化，

其中X为S、O、CH₂、CH₂CH₂、CH₂O或CH₂NH，和Y为H或 CN；得到的以下通式的缩合产物

用以下通式化合物转化，

其中为B的结构元件和Z为活化用于硫醇交换的包含-S-S-基团 的分子残基，(SG)为保护基；且得到的以下通式的反应产物

由具有以下通式的化合物转化，

HS-CH₂-CH[-NH-(SG)]-(R⁹)

脱去保护基(SG)形成通式A-B-D-E(2)的化合物，其中A、B、D和 E可具有前述含义。

本发明还涉及前述和以下详细描述的通式(1)和(2)的化合物用作药 物。

而且，本发明涉及前述和以下详细描述的通式(1)和(2)的化合物用 作抑制剂前体或抑制剂前药。

优选的实施方案来形成于从属权利要求14至16。

而且，本发明涉及至少一种前述和以下更详细描述的通式(1)和(2) 的化合物用于预防和治疗具有过度免疫应答和炎症发生的疾病的用 途，所述疾病包括动脉硬化、神经元疾病、脑损伤、皮肤疾病、肿瘤 疾病和病毒引起的疾病以及II型糖尿病。

本发明还涉及至少一种前述和以下详细描述的通式(1)和(2)的化合 物在制备用于预防和治疗具有过度免疫应答和炎症发生的疾病的药物 中的用途，所述疾病包括动脉硬化、神经元疾病、脑损伤、皮肤疾病、 肿瘤疾病和病毒引起的疾病以及II型糖尿病。

所述用途的优选的实施方案为权利要求19至20所保护。

而且，本发明涉及由至少一种以下详细说明的通式(1)和(2)的化合 物制备至少一种二肽基肽酶IV(DPIV)和具有相似的酶作用的肽酶，以 及丙氨酰氨基肽酶N(APN)和具有相似的酶作用的肽酶的抑制剂的方 法，其中将至少一种通式(1)和(2)的化合物根据下述详细说明暴露于如 它们在细胞和组织中存在的还原条件下。

所述方法的优选的实施方案形成于权利要求22。

本发明还涉及药物或化妆品制品，其包括根据权利要求1至10和 根据以下详细说明所述的至少一种通式(1)和(2)的合物，任选地与一种 或多种药物或化妆品上可接受的载体、辅助化合物和/或助剂的组合。

本发明的新化合物具有通式(1)：

A-B-D-B’-A’(1)

或通式(2)：

A-B-D-E      (2)。

令人惊奇地发现，所述式的化合物自身具有对如下所述酶和在定 义的条件下对所述化合物反应的酶的抑制作用，所述化合物为二肽基 肽酶IV(DPIV)和具有相似的酶作用的肽酶、丙氨酰氨基肽酶N(APN) 和具有相似的酶作用的肽酶的抑制剂。

在下述说明书和在权利要求书中使用术语“二肽基肽酶IV”(DPIV， CD26，EC 3.4.14.5)，所述丝氨酸蛋白酶被认为催化特定地在脯氨酸和 更少程度的丙氨酸之后和-受限制-在其他氨基酸如分别在丝氨酸、苏氨 酸、缬氨酸和甘氨酸之后在肽的N-末端的第二位的肽键水解。

在本发明的说明书和在权利要求中使用术语“具有二肽基肽酶IV 相似的酶作用的肽酶”，该肽酶被认为催化特定地在脯氨酸或丙氨酸之 后在N-末端的第二位上的肽水解。对于具有二肽基肽酶IV相似的酶作 用的肽酶的实例为，不限制本发明，DP 8、DP 9和FAP/Seprase[T.Chen 等人，a.a.O.]和吸引素(mahagony蛋白质)[J.S.Duke-Cohan等人，a. a.O.]。

在本发明的说明书和在权利要求书中使用术语“丙氨酰氨基肽酶 N”(APN，CD13，EC 3.4.11.2)，该蛋白酶被认为其操作金属-(锌-)依赖 性，且催化特定在肽的N-末端氨基酸之后，优选在N-末端的丙氨酸之 后的的肽键水解。

在本发明的说明书和在权利要求中使用术语“具有丙氨酰氨基肽 酶NV相似的酶作用的肽键酶”，该肽酶被认为其-如APN-操作金属依 赖性和催化肽键水解，所述肽键特定在肽的N-末端氨基酸之后，优选 在N-末端的丙氨酸之后。具有丙氨酰氨基肽酶N相似的酶作用的肽酶 的实例为，不限制本发明，细胞溶质可溶性丙氨酰氨基肽酶(EC 3.4.11.14，嘌呤霉素(puromycine)-灵敏型氨基肽酶、氨基肽酶PS、脑 啡肽降解型氨基肽酶)[A.J.Barret等人，a.a.O.]。

在本发明的说明书和在权利要求书中使用术语“抑制剂”，这类自 然来源的、合成来源的或自然来源与合成改良的化合物被认为具有调 节，特别是抑制一种酶或一组酶的作用。所述调节作用可以基于大多 数不同的作用，而不受前述术语“抑制剂”的宽泛定义的限制。根据本 发明，优选的抑制剂为对酶有抑制作用，更优选对几组酶有抑制作用 的抑制剂，例如对二肽基肽酶IV(DPIV)和具有二肽基肽酶IV相似的酶 的作用的肽酶有抑制作用的抑制剂，或分别对如上所定义的丙氨酰氨 基肽酶N(APN)和具有丙氨酰氨基肽酶N相似的酶作用的肽酶有抑制 作用的抑制剂。

在本发明的说明书中和权利要求书中的使用术语“前体”，这些天 然存在或合成的或天然存在但合成改性的化合物被认为可以在定义的 条件下从其它化合物化学衍生。因此，抑制剂前体被认为是天然或合 成来源的化合物或天然但合成改性的化合物，其可转化成系统抑制剂。

在本发明说明书中和权利要求书中使用术语“前药”，这类天然存 在或合成或天然存在但合成改性的化合物被认为可以在定义的条件下 从其它化合物化学衍生，所述定义的条件优选生理学或病理学条件， 其中这些其它化合物显示出与原料定性和/或定量上不同的药理学效 果。因此，抑制剂前药被认为是天然或合成来源的化合物或天然但合 成改性的化合物，其可以优选在生理学或病理学条件下，更优选在哺 乳动物例如人类的生理学或病理学条件下，系统地转化成具有抑制作 用的新物质。这不排除本身能在之前被转化成具有定义的药理学(例如 抑制)作用、发展为药理学作用(例如抑制两种前述酶的一种)的药物的 前药。在哺乳动物或人类中将前药转化成药物的条件分别可以具有， 如它们通常存在于哺乳动物例如人类或哺乳动物例如人类的体内的生 理学环境中的那些。可选地，这样的生理条件可仅仅存在于哺乳动物 例如人类中定义的条件下，例如定义的生理条件，如存在于疾病状态 中的，或者它们可以受外界影响而诱导或引起，例如(不受限制)对哺乳 动物的有机体如例如人类的有机体的药物影响。

在前述通式(1)和(2)的化合物中，A和A’为残基，可以相同或不 同，

其中X为S、O、CH₂、CH₂CH₂、CH₂O或CH₂NH，和Y为H或 CN，和^★为手性碳原子。特别优选的是根据本发明或其中A和A’相同 的通式(1)化合物，以及其中前述的A-表示的残基X为S、CH₂或CH₂CH₂和/或Y为H或CN的通式(1)和(2)的化合物。

在本发明的进一步优选的实施方案中，通式(1)和(2)的化合物为特 别有效的抑制剂的前药，其中用^★表示的手性碳原子具有S-或L-构型。

在前述通式(1)和(2)的化合物中，B和B’可以相同或不同，为如下 残基：包含或不包含O、N或S的、未取代的或取代的、无支链的或 支链的亚烷基-残基、环亚烷基-残基、芳亚烷基-残基、杂环亚烷基- 残基、杂芳基亚烷基-残基、芳基酰氨基亚烷基-残基、杂芳基酰氨基亚 烷基-残基、具有一个或多个五、六或七元环的未取代的或单或多取代 的亚芳基-残基或杂芳基-残基。

在本发明的说明书中和权利要求中使用术语“烷基-残基”认为是由 用单键彼此连接的碳原子与结合到所述碳原子的氢原子组成的一价直 链(无支链)或支链残基。因此，本发明的烷基-残基为饱和的一价烃基 残基。优选地，在通式(1)和(2)的化合物中的烷基-残基包括1至18个 碳原子，因此，其选自残基甲基、乙基、正-丙基、异丙基和下述残基 的大量不同的直链和支链异构体：丁基、戊基、己基、庚基、辛基、 壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷 基、十六烷基、十七烷基和十八烷基。特别优选的为具有1至12个碳 原子的直链和支链烷基-残基；具有1至6个碳原子的直链和支链烷基- 残基是更优选的。最优选的是残基甲基、乙基、正丙基、异丙基、正 丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。

因此，在本发明的说明书中和权利要求中，术语“链烯基-残基”和 “链炔基(alkinyl)残基”被认为是具有至少2个碳原子和至多18个碳原 子的一价直链(“无支链”)或支链残基，其中碳原子为通过单键和至 少一个双键或三键彼此连接，所述双键或三键分别在分子中的任意但 定义的位置，氢原子键合到碳原子的剩余键。这样的残基为例如，优 选乙烯基残基或烯丙基残基；然而，包含碳-碳多键的残基不限于所述 残基。

在本发明的说明书中和权利要求中，术语“亚烷基-残基”被认为是 二价直链(“无支链”)或支链残基，其中碳原子通过单键彼此连接， 氢原子键合到碳原子上。因此，本发明的亚烷基-残基为饱和的二价烃- 残基。在通式(1)和(2)的化合物中的优选的亚烷基-残基包括1至18个 碳原子，因此其选自残基亚甲基、亚乙基、亚正丙烯基、2，2-亚丙基、 1，2-亚丙基和下述残基的大量不同的直链和支链异构体：亚丁基、亚戊 基、亚己基、亚庚基、亚辛基、亚壬基、亚癸基、亚十一烷基、亚十 二烷基、亚十三烷基、亚十四烷基、亚十五烷基、亚十六烷基、亚十 七烷基和亚十八烷基。特别优选的为具有1至12个碳原子的直链和支 链亚烷基-残基，具有1至6个碳原子的直链和支链亚烷基-残基是更优 选的。最优选的是残基亚甲基、亚乙基、亚正丙基、2，2-亚丙基、1，2- 亚丙基和大量不同的亚丁基异构体。

在本发明的通式(1)和(2)的部分中化合物中，烷基-残基和/或亚烷 基-残基可以为被O-原子、N-原子或S-原子间隔的碳原子链；因此，在 所述链中，可能存在一个或多个-CH₂-基团、一个或多个基团-O-、-NH- 和-S-，而在所述链中，通常不存在两个基团-O-、-NH-和/或-S-彼此相 接。所述一个或多个基团-O-、-NH-或-S-可以插入分子中的任意位置。 优选地，如果存在伊尔克(ilk)的杂基团，则伊尔克基团存在于分子 中。

根据本发明，在通式(1)和(2)的化合物中的直链和支链烷基或亚烷 基-残基可以是取代的，在进一步的实施方案中，具有一个或多个取代 基，优选一个取代基。所述取代基可以位于由碳原子形成的主链的任 意位置，并可以优选地，不限制本发明，选自卤素原子如氟、氯、溴 和碘，特别优选氯和溴，各自具有1至6个C-原子的烷基，特别优选 具有1至4的C-原子的烷基，在烷基残基中具有1至6个C-原子、优 选在烷基-残基中具有1至3个C-原子的烷氧基，未取代的或具有彼此 独立的包含1至6个C-原子、优选1至3个C-原子的一个或两个烷基 -残基，取代的氨基、羰基基团和羧基基团。后者也可以以在烷基-残基 中与具有1至6个碳原子的醇的盐或酯形式存在；因此，术语“羧基- 基团”包括通式结构-COO^-M⁺(M＝单价金属原子比如碱金属原子，或相 应当量的多价金属原子，比如半当量的二价金属原子如碱土金属原子) 或通式结构-COOR_x(Rx＝具有1至6个碳原子的烷基基团)。所述取代的 烷基-基团选自上述详细提及的烷基基团，特别优选甲基、乙基、正- 丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基。烷氧基为其中经 由O-原子键合到碳原子形成的主链上的上述定义的烷基基团。它们优 选地选自残基甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异 丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。氨基基团为通式结构-NR_xR_y，其中残 基R_x和R_y可彼此独立地指定为氢或具有1至6个碳原子、优选具有1 至3个C-原子的烷基基团(根据前述定义)，其中残基R_x和R_y可以彼此 相同或不同。作为特别优选的取代基的这样的氨基为-NH₂、-NH(CH₃)、 -N(CH₃)₂、-NH(C₂H₅)和-N(C₂H₅)₂。术语“氨基基团”也包含其中存在作为 季铵离子的上述定义的结构，或因为与有机酸或无机酸形成盐(例如结 构R_xR_yR_zN⁺Q^-的残基，其中R_x、R_y和R_z可以相同或不同，优选相同， 和R_x和R_y可具有上述定义的含义，且至少一个残基是与有机酸或无机 酸季铵化的氢，和Q为来自有机酸或无机酸的酸的酸-残基)或者是因 为与适当的季铵化试剂形成盐，所述季铵试剂为本领域技术人员已知 的，比如(但不限于)烷基卤化物。

在本发明的说明书中和权利要求中，术语“环烷基”用于彼此连接 形成闭合环的未取代或取代的一价残基-CH₂-基团。根据本发明，所 述环优选地可包含3至8个成环原子，可仅仅包含碳原子或包含一个 或多个杂原子，所述杂原子选自-O-、-S-和-NR_x-，其中R_x为氢或者具 有1至6个碳原子的烷基残基(如上定义的)。在将杂原子插入环中的情 况下，所述杂原子可以是-在多于一个杂原子的情况下-相同或不同。优 选地，在杂原子存在的情况下，一个杂原子被插入环中。特别优选 地，在纯碳环中，残基为环戊基、环戊烯基、环戊二烯基、环己基、 环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚烯基、环庚二烯基和环庚三烯 基。在本发明的进一步的实施方案中，通常被称为杂环烷基-残基的包 含杂原子的环烷基-残基的实例为四氢呋喃基、吡咯烷基、吡唑烷基、 咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基和吗啉基。

在碳环或杂环环烷基-残基上的可能取代基可以优选地是，不限制 本发明，选自前述对于直链烷基的取代基。环烷基基团的特别优选的 取代基为取代基-Cl、-Br、-甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正丁基、 异丁基、仲丁基或叔丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、 正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基、-NH₂、-NH(CH₃)、 -N(CH₃)₂、-NH(C₂H₅)和-N(C₂H₅)₂、羰基和羧基。

在本发明的说明书中和权利要求中，术语“环亚烷基”用于连接形 成闭合环的未取代的或取代的二价残基-CH₂-基团。根据本发明，这 些可以优选地在环中包含三至八个原子，其可以仅仅由碳原子组成或 者包含一个或多个选自下述的杂原子：-O-、-S-和-NR_x-，其中R_x为 氢或具有1至6个碳原子的烷基-残基(如上定义的)。特别优选的纯碳 环为残基亚环戊基、亚环戊烯基、亚环戊二烯基、亚环己基、亚环己 烯基、亚环己二烯基、亚环庚基、亚环庚烯基、亚环庚二烯基和亚环 庚三烯基。而且，上述关于出现在通式(1)和(2)的化合物中的环烷基- 残基定义的杂环基团可以以二价残基的形式作为基团“B”，特别优选 的为其中一个基团-O-或-NR_x-插入所述环的环状二价残基。在那些情 况下，两个化合价位于环中的任意C-原子上。优选地，一个杂原子或 两个杂原子插入到所述环中，在该基团特别优选的实施方案中，二价 残基衍生自四氢呋喃、吡咯烷、吡唑烷、咪唑啉、哌啶、哌嗪和吗 啉。

在这些碳环或杂环亚环烷基-残基上的可能取代基可以优选地是， 不限制本发明，选自前述对于直链烷基的取代基。亚环烷基基团的特 别优选的取代基为取代基-Cl、-Br、-甲基、乙基、正丙基、异丙基、 正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异 丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基、-NH₂、 -NH(CH₃)、-N(CH₃)₂、-NH(C₂H₅)和-N(C₂H₅)₂、羰基和羧基。

在本发明的说明书中和权利要求中，使用术语“芳基残基”，其被 认为是衍生自具有芳香特性(4n+2，在环轨域中离域的π-电子)的环状分 子的一价烃残基，其可以是未取代的或取代的。这种芳基-残基的环结 构可以是具有一个环的五、六或七元环结构，或由两个或多个(“成环的 ″)环彼此键合形成的结构，其中所述成环的环具有相同或不同的多个 环成员，特别是C-原子。在系统由超过一个环彼此缩合组成的情况 下，苯并缩合环是特别优选的，即其中至少一个环是芳香的、仅仅包 含C-原子的六元环(苯环)的环状系统。芳基环的典型的但不限于此的 实例为环戊二烯基-残基(C₅H₅^-)(为五元环)、苯基-残基(为六元环)、环 庚三烯基-残基(C₇H₇⁺)(为七元环)、萘基-残基(为包括两个成环的六元环 的环状系统)以及衍生自蒽和菲(为三个成环的六元环)的一价残基。根 据本发明，最优选的芳基残基为苯基-和萘基-残基。

碳环的芳基-残基的可能取代基可以优选地选自对于直链烷基基团 提及的取代基，本发明不限于这些取代基。用于芳基基团的特别优选 的取代基为取代基-Cl、-Br、-甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁 基、异丁基、仲丁基或叔丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧 基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基、-NH₂、-NH(CH₃)、 -N(CH₃)₂、-NH(C₂H₅)和-N(C₂H₅)₂、羰基和羧基。根据本发明，一个或 多个可以彼此相同或不同的伊尔克(ilk)的取代基可以键合到一个芳 基-残基上。在芳基环(-系统)上的取代位置可以任意地选择。

在芳基-残基应用于本发明的说明书和权利要求时，其具有与术语 “亚芳基-残基”的定义可比较的定义：在这点上，二价残基被认为其选 择的基本组成及其取代基与前述芳基-残基的定义相当，不同在于其为 其中插入可以在两个任意的碳原子间进行的二价残基。

在本发明的说明书中和权利要求中，术语“杂芳基-残基”被认为是 其中环结构包含一个或多个杂原子而没有丧失分子芳香性的芳基-残基 (根据前述提及的定义)，所述杂原子优选地选自基团O、N或S。根据 本发明，杂芳基-残基可以为未取代的或取代的。这种芳基-残基的环结 构可以是具有一个环的五、六或七元环结构，或由两个或多个(″成环 的″)环彼此键合形成的结构，其中所述成环的环可具有相同或不同数 量的环成员。所述杂原子可以存在于环系统的一个单独的环或多于一 个环中。所述杂芳基-残基优选地由一个或两个环组成。在系统由超过 一个环彼此缩合组成的情况下，苯并缩合环是尤其优选的，即其中至 少一个环是芳香族碳环的(即，仅仅包含C-原子)六元环的环状系统。 特别优选的杂芳基-残基选自呋喃基、噻吩基、吡啶基、吲哚基、苯并 呋喃基(cumaronyl)、硫萘次甲基、喹啉基(苯并吡啶基)、喹唑啉基(苯 并嘧啶基)或喹氧啉基(chinoxylinyl)(苯并吡嗪基)。

在这些杂芳基-残基上的可能取代基可以优选地选自前述对于直链 烷基的取代基，但本发明不限于这些取代基。用于杂芳基-基团的特别 优选的取代基为取代基-Cl、-Br、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正 丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙 氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基、-NH₂、-NH(CH₃)、 -N(CH₃)₂、-NH(C₂H₅)和-N(C₂H₅)₂、羰基和羧基。根据本发明，一个或 多个可以是彼此相同或不同的伊尔克(ilk)的取代基可以是键合到杂 芳基-残基上。在杂芳基环(-系统)的取代位置可以任意地选择。

在杂芳基-残基应用于本发明的说明书和权利要求时，其具有与术 语“杂亚芳基-残基”的定义可比较的定义：在这点上，其被认为是其中 一般组成和其选择及其取代基与前述“杂芳基-残基”的定义相当的二价 残基，不同在于其为其中插入可以分别在两个任意的环或环系统或氮 原子之间进行的二价残基。

在本发明的说明书的上下文和权利要求中，术语“芳烷基-残基”、 “杂芳基烷基-残基”、“杂环烷基-残基”、“芳基酰氨基烷基-残基”和“杂 芳基酰氨基烷基-残基”指其中它们的一个键根据前述的一般和具体定 义被下述基团取代的烷基-残基(或更特定地为“亚烷基-残基”)：芳基残 基(根据前述的一般和具体定义)、杂芳基-残基(根据前述的一般和具体 定义)、杂环烷基-残基(根据前述的一般和具体定义的被杂原子取代的 环烷基-残基)、芳基酰氨基-残基(根据下述一般和具体的定义)或杂芳基 酰氨基-残基(根据下述一般和具体的定义)。这些残基可以是未取代的 或取代的。

在本发明的优选的实施方案中，芳烷基-残基为伊尔克(ilk)残基， 其中芳基-残基为苯基-残基、取代的苯基-残基、萘基-残基或取代的萘 基-残基，且烷(烯)基-基团为具有1至6个碳原子的直链或支链。在 非常特别和有利的方式中，残基苄基、苯乙基、萘甲基和萘乙基可用 作芳烷基-残基，其中苄基-残基是特别优选的。

在这些芳基基团或芳烷基-残基上的可能取代基可以优选地选自前 述对于直链烷基的取代基，但本发明不限于那些取代基。芳烷基-残基 的特别优选的取代基为取代基-Cl、-Br、甲基、乙基、正丙基、异丙 基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧 基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基、-NH₂、 -NH(CH₃)、-N(CH₃)₂、-NH(C₂H₅)和-N(C₂H₅)₂、羰基和羧基。根据本发 明，一个或多个可以彼此相同或不同的伊尔克(ilk)的取代基可以键 合到的芳烷基-残基的芳基上。在芳基环(-系统)的取代位置可以任意地 选择。

在本发明的优选的实施方案中，杂烷基-残基为其中根据本发明的 杂芳基烷基-残基的杂芳基-残基被取代和亚烷基基团为具有1至6个碳 原子的直链或支链的残基。这种杂芳基-残基的环结构可以是具有一个 环的环结构，或由两个或多个(″成环的″)环彼此键合形成的结构，其 中所述成环的环可具有相同或不同数量的环成员。所述杂原子可以存 在于环系统的一个或多个环中。所述杂芳基烷基-残基的杂芳基-残基 优选地由一个或两个环组成。在杂芳基烷基系统由超过一个环彼此缩 合组成的情况下，苯并缩合环是尤其优选的，即其中至少一个环是芳 香族碳环的六元环的环状系统。特别优选的杂芳基烷基-残基选自呋喃 基甲基和乙基、苯硫基甲基和乙基、吡啶基甲基和乙基、吲哚基甲基 和乙基、苯并呋喃基甲基和乙基、萘硫基甲基和乙基、喹啉基-(苯并吡 啶基-)甲基和乙基、喹唑啉基-(苯并嘧啶基)和喹氧啉基(chinoxylinyl) -(苯并吡嗪基-)甲基和乙基。

在这些杂芳基烷基-残基的杂芳基上的可能取代基可以优选地选自 前述对于直链烷基的取代基，但本发明不限于此。杂芳基-基团的特别 优选的取代基为取代基-Cl、-Br、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正 丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙 氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基、-NH₂、-NH(CH₃)、 -N(CH₃)₂、-NH(C₂H₅)和-N(C₂H₅)₂、羰基和羧基。根据本发明，一个或 多个可以彼此相同或不同的伊尔克(ilk)的取代基可以键合到的杂芳 基烷基-残基上。在杂芳基环(-系统)的取代位置可以任意地选择。在本 发明的优选的实施方案中，杂环烷基-残基为其中包含一个或多个选自 -O-、-S-和-NR_x-的杂原子的根据前述的一般和具体定义的环烷基-残 基，其中R_x为氢或具有1至6个碳原子的烷基残基(如上定义的)，且 杂环烷基-残基的烷(烯)基基团为具有1至6个碳原子的直链的或支链 烃。在多于一个杂原子插入环的情况下，这些杂原子可以相同或不 同。优选地，将一个杂原子并入所述环。在本发明的进一步实施方案 中，也称为杂环烷基-残基的包含杂原子的环烷基残基的优选的实例为 残基四氢呋喃基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基 和吗啉基。

在这些杂环烷基-残基上的可能取代基可以优选地选自前述对于直 链烷基基团的取代基，但本发明不限于那些取代基。用于杂芳基-基团 的特别优选的取代基为取代基-Cl、-Br、甲基、乙基、正丙基、异丙 基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基、甲氧基、乙氧基、正丙氧 基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基、-NH₂、 -NH(CH₃)、-N(CH₃)₂、-NH(C₂H₅)和-N(C₂H₅)₂、羰基和羧基。根据本发 明，一个或多个可以彼此相同或不同的伊尔克(ilk)的取代基可以键 合到的一个杂环烷基-残基上。在杂环烷基-环(-系统)上的取代位置可以 任意地选择。

在本发明的说明书中和权利要求中，使用术语“芳基酰氨基烷基- 残基”和“杂芳基酰氨基烷基-残基”被认为是其在其一个键上用通式 Ar-NR_x-C(＝O)-或通式Ar-C(＝O)-NR_x-的芳基酰氨基-残基或杂芳基酰氨 基-残基取代的上述一般和具体定义的烷基残基(-更确切地为-亚烷基- 残基)，其中R_x为氢或具有1至6个碳原子的烷基，Ar为根据前述的 一般或具体定义的任意的芳基残基或杂芳基-残基。这些芳基-或杂芳 基-残基可以是未取代的或取代的。芳基酰氨基烷基-残基的优选的实 例，不限制本发明，为2-、3-或4-苯甲酸-氨基-正丁基残基或2-硝基-3-、 -4-、-5-或-6-苯甲酸-酰氨基-正丁基-残基；杂芳基酰氨基烷基-残基的优 选的但非限制性实例为2-、4-、5-或6-吡啶-3-碳酸-酰氨基-正丁基-残 基。

在这些芳基酰氨基烷基-残基和杂芳基酰氨基烷基上的可能取代基 可以优选地选自前述对于直链烷基的取代基，而本发明不限于那些取 代基。芳基酰氨基烷基-残基和杂芳基酰氨基烷基-残基的芳基基团或杂 芳基基团的特别优选的取代基为取代基-Cl、-Br、甲基、乙基、正丙基、 异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基、甲氧基、乙氧基、正丙 氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基、-NH₂、 -NH(CH₃)、-N(CH₃)₂、-NH(C₂H₅)和-N(C₂H₅)₂、羰基和羧基。根据本发 明，一个或多个可以彼此相同或不同的伊尔克(ilk)的取代基可以键 合到芳基酰氨基烷基-残基或杂芳基酰氨基烷基-残基上的芳基或杂芳 基上。在芳香环(-系统)上的取代位置可以任意地选择。

对于在本发明的说明书的上下文和权利要求书中采用的芳烷基-残 基、杂芳基烷基-残基、杂环烷基-残基、芳基酰氨基烷基-残基和杂芳 基酰氨基烷基-残基而言，其具有与下述术语“芳亚烷基残基”，“杂芳 基亚烷基-残基”，“杂环亚烷基-残基”，“芳基酰氨基亚烷基-残基”和 “杂芳基酰氨基亚烷基-残基”可比较的定义：这些理解为如下二价残 基：其中其一般组成和其选择及其取代基相当于前述“芳烷基-残基”、 “杂芳基烷基-残基”、“杂环烷基-残基”、“芳基酰氨基烷基-残基”和“杂 芳基酰氨基烷基-残基“相当的定义，不同在于其为其中插入可以分别 在环或环系统的亚烷基基团的两个碳原子、或在杂环环状系统的杂芳 基的氮原子上进行的二价残基。

在通式(1)和(2)中，残基D为-S-S-或-Se-Se-。这两个S-或Se-原子 分别在通式(1)和(2)的化合物分子的两个部分之间形成桥，其可以在自 然，特别在还原条件下脱去。因此，所述分子的两个部分释放，其对 二肽基肽酶IV(DPIV)和具有相似的酶作用的肽酶以及丙氨酰氨基肽酶 N(APN)和具有相似的酶作用的肽酶显示出抑制作用。

在前述通式(2)中，E为基团-CH₂-C^★H(NH₂)-R⁹，其中R⁹为包含或 不包含O、N或S的未取代的或取代的无支链的或支链烷基-残基、环 烷基-残基、芳烷基-残基、杂环烷基-残基、杂芳基烷基-残基、芳基酰 氨基烷基-残基、杂芳基酰氨基烷基-残基、具有一个或多个五、六或七 元环的未取代的或单取代的多取代的芳基残基或杂芳基残基。对于烷 基-残基、环烷基-残基、芳基烷基-残基、杂环烷基-残基、杂芳基烷基 -残基、芳基酰氨基烷基-残基、杂芳基酰氨基烷基-残基具有一个或多 个五、六或七元环的未取代的或单或多取代的芳基-残基或杂芳基-残 基的符合本发明的可用的或优选的实例以及对于这些残基的可能的和 优选的取代基，其可以参照相应残基的前述定义及其优选的实施方 案；这些定义对用E表示的通式(2)的残基同样适用。

在所述式E中，被氨基取代的碳原子为手性碳原子，用^★表示。在 本发明的进一步优选的实施方案中，通式(2)的这些化合物为其中用^★表示的手性碳原子具有S-或L-构型的特别有效的抑制剂的前药。

根据本发明，E优选地指2-氨基亚烷基残基，例如2-氨基-3-苯丙 基-残基或未取代的或被杂原子比如-S-、-S(＝O)-、-N-或-O-取代的2- 氨基亚烷基残基，例如2-氨基-4-甲基戊基-残基、2-氨基-4-甲基丁硫 基-残基或2-氨基-4-甲基-丁硫氧基(sulfoxybutyl)-残基。

在本发明的进一步优选的实施方案中，在通式(1)和(2)中的残基B 和/或B’为残基R¹，其具有1至6个碳原子的直链或支链的亚烷基-残 基的。特别优选的通式(1)和(2)的化合物包括以一种或多种选自下述基 团的形式存在的B和/或B’：-CH₂-(亚甲基)、-CH₂-CH₂(亚乙基)或 (H₃C)₂-C＜(2，2-亚丙基)。

在也可选择的进一步优选的实施方案中，B和/或B’为残基 -(CH₂)_n-R²-R³-R⁴-，其中n为1至5的整数；如果R³为O＝C＜或-SO₂-， R²为-NH-或-NH-C(＝NH)-NH-，或其中如果R³为-NH-，R²为O＝C＜； R⁴为包含或不包含O、N或S的未取代的或取代的无支链的或支链的 亚烷基-残基、环亚烷基-残基、芳基亚烷基-残基、杂环亚烷基-残基、 杂芳基亚烷基-残基、具有一个或多个五、六或七元环的未取代的或单 或多取代的亚芳基残基或杂亚芳基残基。进一步优选n为1至5的整 数，以致前述残基的优选的实例包含亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁 基和亚戊基；R²和R³组合优选地形成酰氨基-基团-C(＝O)-NH-或 -NH-C(＝O)-。进一步优选的为下述具有残基B和/或B’的通式(1)和(2) 的化合物：其中B为前述的通式，且R⁴为氨基取代的亚烷基-残基， 例如氨基亚乙基残基或未取代的或(例如用硝基)取代的亚苯基-残基或 未取代的或取代的吡啶基-2，5-烯基(ene)-残基。

在也可选择的进一步优选的实施方案中，B和/或B’为式-R⁷-R⁸-的 残基，其中R⁷为单或多取代的亚苄基残基，和R⁸为单键或包含或不包 含O、N或S的、未取代的或取代的、无支链的或支链的亚烷基残基、 环亚烷基残基、芳亚烷基残基、杂环亚烷基残基或杂芳基亚烷基残基， 其可以优选地包含作为官能团的一个或多个氨基、羰基或羧基或具有 一个或多个五、六或七元环的未取代的或单或多取代的亚芳基残基或 杂亚芳基残基。对于前述残基及其可能的本发明的取代基的定义，其 可以参照前述特定的残基或取代基的一般或具体的定义。

根据本发明，进一步优选的是如下通式(1)或(2)的化合物，其中B 和B’可以相同或不同，其表示残基-(CH₂)_n-R²-R³-R⁴，其中如果R³为 O＝C＜或-SO₂-，R²为-NH-或-NH-C(＝NH)-NH-，或其中如果R³为 -NH-，R²为O＝C＜和其中R⁴为

--CH(COOH)-R¹-，其中如果R²为O＝C＜和R³为-NH-，R¹具有前 述含义；或

其中如果R²为O＝C＜和R³为-NH-，R¹具有前述含义；或

--CH(NHR⁵)-R¹-，如果R²为-NH-或-NH-C-(＝NH)-NH-和R³为 O＝C＜，其中R⁵为H或酰基残基，优选苄氧基羰基残基、芴-9-基甲氧 基羰基残基、叔-丁氧基羰基残基或苯甲酰基残基；或

其中R⁴为亚苯基和如果R³为O＝C＜或-SO₂-，R²为-NH-或 -NH-C(＝NH)-NH-，或其中如果R³为-NH-，R²为O＝C＜；或

其中R⁵为H或酰基残基，优选苄氧基羰基残基、芴-9-基甲氧基羰 基残基或苯甲酰基残基和如果R³为O＝C＜或-SO₂-，R²为-NH-或 -NH-C(＝NH)-NH-，或其中如果R³为-NH-，R²为O＝C＜；或

其中亚烷基为具有1至6个碳原子的无支链的或支链的亚烷基残 基，和如果R³为O＝C＜或-SO₂-，R²为-NH-或-NH-C(＝NH)-NH-，或 其中如果R³为-NH-，R²为O＝C＜；或

其中亚烷基为具有1至6个碳原子的无支链的或支链的亚烷基残 基，和如果R³为O＝C＜或-SO₂-，R²为-NH-或-NH-C(＝NH)-NH-，或 其中如果R³为-NH-，R²为O＝C＜；或

其中如果R³为O＝C＜或-SO₂-，R²为-NH-或-NH-C(＝NH)-NH-，或 其中如果R³为-NH-，R²为O＝C＜；或

其中R⁶为H、NO₂、CN、卤素或酰基残基，和如果R³为O＝C＜ 或-SO₂-，R²为-NH-或-NH-C(＝NH)-NH-，或其中如果R³为-NH-，R²为O＝C＜；或

其中R⁶为H、NO₂、CN、卤素或酰基残基，和如果R³为O＝C＜ 或-SO₂-，R²为-NH-或-NH-C(＝NH)-NH-，或其中如果R³为-NH-，R²为O＝C＜；或

其中R⁶为H、NO₂、CN、卤素或酰基残基，和如果R³为O＝C＜ 或-SO₂-，R²为-NH-或-NH-C(＝NH)-NH-，或其中如果R³为-NH，R²为O＝C＜；或

其中如果R³为O＝C＜或-SO₂-，R²为-NH-或-NH-C(＝NH)-NH-，或 其中如果R³为-NH-，R²为O＝C＜。

可选地，根据本发明，通式(1)和(2)的化合物是进一步优选的，其 中B和B’可以相同或不同，表示残基-R⁷-R⁸-，其中R⁷和R⁸组合为残 基

(其中R⁷为上述基团，不含R⁸，和其中R⁶的位置取决于R⁸的位 置)，其中R⁸和R⁶具有前述含义，即，其中R⁶为H、NO₂、CN、卤素 或酰基残基，和其中R⁸为单键或包含或不包含O、N或S的、未取代 的或取代的、无支链的或支链的亚烷基残基、环亚烷基残基、芳亚烷 基残基、杂环亚烷基残基或杂芳基亚烷基残基，所述杂环亚烷基残基 或杂芳基亚烷基残基优选地包含作为官能基团的一个或多个氨基、羰 基或羧基或其为具有一个或多个五、六或七元环的未取代的或单或多 取代的亚芳基残基或杂亚芳基残基。

进一步优选的通式(1)和(2)的化合物为下述的：其中B和B’相同 或不同，彼此独立地表示残基-R⁷-R⁸-，其中R⁷为前述通式的单或多取 代的亚苄基残基(不含R⁸)，且R⁸为

-NH-或-C₁-至C₆-亚烷基-NH-与下述的组合

--C(＝O)-C₁-至C₆-亚烷基-或

--C(＝O)-亚芳基-或

--SO₂-C₁-至C₆-亚烷基，或

--SO₂-亚芳基-或

(在2、3或4位取代)，或

--C(＝O)-CH(NHR⁵)-R¹，其中R¹和R⁵具有前述含义；或

-O＝C＜与下述的组合

--NH-C₁-至C₆-亚烷基-，或

--NH-亚芳基-或

--NH-CH(COOH)-R¹-，其中R¹具有前述含义；或

--O-C₁-至C₆-亚烷基-或

--O-亚芳基-或

--O-C₁-至C₆-亚烷基-NH-C(＝O)-CH(NH₂)-R¹-，其中R¹具有前述含 义，或

--O-C₁-至C₆-亚烷基-C(＝O)-NH-CH(COOH)-R¹-，其中R¹具有前 述含义。

根据本发明，通式(1)和/或(2)的化合物以中性分子存在，或根据 本发明作为中性分子使用。可选地，通式(1)和/或(2)的化合物也可以 以其与无机酸和/或有机酸的酸加成盐形式存在。因为在分子中存在碱 性中心(主要是碱性氮原子)，这种酸加成盐为通过加入一或多分子H- 酸化合物(酸)，优选一分子H-酸化合物形成，并提供分子在 极性介质如例如在水中改善的溶解性。后述特征对于这类显示出药理 学作用的化合物具有特别的影响。

在本发明的优选的实施方案中，酸加成盐为药学可接受的酸的 盐，其有利地选自(但不限制本发明)通式(1)或(2)的化合物的盐酸化 物、三氟醋酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、甲酸盐和/或柠檬酸盐。

通式(1)的特别优选的和有利可用的化合物的特征在于具有通式 (1a)

其中X、Y和B具有前述含义。因此，具有特别可用的优点，本 发明的目的是通式(1a)的化合物的酸加成盐，优选与药学可接受的无 机酸和/或有机酸，特别是与前述的酸的酸加成盐。

通式(1a)的特别有利的化合物列在下表1中，但本发明不限于那些 化合物：

表1通式A-B-D-B’-A’(1)的化合物的实例

和其酸加成盐，优选与药理学可接受的无机酸和/或有机酸，优选前述 药理学可接受的酸的其酸加成盐。

通式(2)的特别优选的和有利可用的化合物的特征在于具有通式 (2a)。

其中X、Y、R⁹和B具有前述含义，和其酸加成盐，优选与药学 可接受的无机和/或有机酸，优选前述提及的药学可接受的酸的其酸加 成盐。

通式(2a)的特别优选下表2中的化合物及其酸加成盐，优选与药学 可接受的无机和/或有机酸的酸加成盐，但本发明不限于这些化合物。

表2通式A-B-D-E(2)的化合物的实例

本发明还涉及制备下述通式的化合物的方法

A-B-D-B′-A′(1)和

A-B-D-E      (2)。

在所述式(1)和(2)中，A、A’、B、B’、D和E具有前面详细描述的 含义。关于制备新化合物(1)和/或(2)的方法，根据前述的合成方案1：

-通式化合物

其中(SG)为保护基，和为B的结构元件；用以下通式的杂环化合物 转化，

其中X为S、O、CH₂、CH₂CH₂、CH₂O或CH₂NH，和Y为H或 CN；得到的以下通式的缩合产物

用下述通式化合物转化，

其中为B的结构元件；和脱去保护基(SG)得到反应产物，将其 转化成通式A-B-D-B’-A’(1)化合物，其中A和A’可以相同或不同，和 B和B’可以相同或不同，且其中A、A’、B、B’和D可具有前述含义； 或

-下述通式的化合物

其中(SG)为保护基，和为B的结构元件，用以下通式杂环化合 物转化，

其中X为S、O、CH₂、CH₂CH₂、CH₂O或CH₂NH，和Y为H或 CN；得到的以下通式的缩合产物

用以下通式化合物转化，

其中为B的结构元件；和形成的反应产物用以下通式化合物转 化

HS-CH₂-CH[-NH-(SG)]-(R⁹)

和脱去保护基(SG)，将其转化成通式A-B-D-E(2)的化合物，其中 A、B、D和E可具有前述含义；或

-以下述通式的化合物

其中(SG)为保护基，为B的结构元件和Z为残基，其活化用于 硫醇交换的基团-S-S-，由能下通式的杂环化合物转化，

其中X为S、O、CH₂、CH₂CH₂、CH₂O或CH₂NH，和Y为H或 CN；得到的以下通式的缩合产物

用以下通式化合物转化，

HS-CH₂-CH[-NH-(SG)]-(R⁹)

脱去保护基(SG)得到通式A-B-D-E(2)化合物，其中A、B、D和 E可具有前述含义；或

-以下通式化合物

其中SG是保护基，且是B的结构元件，用以下通式的杂环化 合物转化，

其中X为S、O、CH₂、CH₂CH₂、CH₂O或CH₂NH，和Y为H或 CN；得到的反应产物用以下通式化合物转化，

HS-CH₂-CH[-NH-(SG)]-R⁹

形成通式A-B-D-E(2)的化合物，其中A、B、D和E可具有前述含 义；或

-以下通式化合物

其中SG为保护基，和为B的结构元件，用具有以下通式的杂 环化合物转化

其中X为S、O、CH₂、CH₂CH₂、CH₂O或CH₂NH，和Y为H或 CN；和得到的反应产物由脱去保护基(SG)转化成通式A-B-D-B’-A’(1) 的化合物，其中A和A’可以相同或不同，B和B’可以相同或不同，和 其中A、A’、B、B’和D可具有前述含义，或

-以下通式的化合物

其中(SG)为保护基，和为B的结构元件；用以下通式的杂环化 合物转化，

其中X为S、O、CH₂、CH₂CH₂、CH₂O或CH₂NH，和Y为H或 CN；得到的以下通式的缩合产物

用以下通式化合物转化，

其中为B的结构元件和Z为活化硫醇交换的-S-S-基团的残基， (SG)为保护基；且得到的以下通式的反应产物

由具有以下通式的化合物转化，

HS-CH₂-CH[-NH-(SG)]-(R⁹)

脱去保护基(SG)形成通式A-B-D-E(2)的化合物，其中A、B、D和 E可具有前述含义。

在前述制备步骤中被插入通式(1)和(2)的化合物的合成中间体中的 保护基(“SG”)可以是有机合成领域的技术人员根据其实际经验已知的 任意保护基团，并且根据本发明它们不受限制。优选的保护基为用于 保护氨基酸侧链的保护基，比如氨基甲酸乙酯保护基，例如苄氧基羰 基-残基、芴-9-基甲氧基羰基-残基、叔-丁氧基羰基-残基等。

在前述制备步骤的上下文中已经插入通式(1)和(2)的化合物的合成 中间体中的基团Z为活化包含S-S-基团用于硫醇交换的分子的残基， 因此，结合S-原子的基团交换另一分子的S-原子(任选地结合取代基)。 这种基团是有机合成领域的技术人员已知的，本发明不限于其活化用 于硫醇交换的某些基团。优选的但非限制性实例为基团3-硝基-2-吡啶 基、5-硝基-2-吡啶基、2-，3-或4-吡啶基、2-硝基苯基、甲氧基羰基或 N-甲基-N-苯氨羰基。

在用于合成产生通式(1)和(2)的化合物的一般反应方案中使用的和 在面和下述制备步骤说明中使用的符号

和

分别指在通式(1)和(2)的化合物中的残基B或B’的结构元件。应当理解 在残基B或B’中，使用术语“结构元件”分别组成各自具有活性基团的 分子部分，在有机合成中，其结合形成在两个活性基团之间的共价键， 从而在新形成的分子中形成相邻的键配体。这种结构元件的特别的但 非限制性实例是一个分子中羧基和第二分子中羟，其互相结合形成酯 基并脱水，或一个分子中的羧基和第二分子中的氨基，其互相结合形 成酰氨基并脱水。这通过在上述左面显示的两个符号的组合得到的上 述右边显示的符号来表示。

具有特别的优点，可以用在下述合成方案2至17中给出的方法制 备所述化合物(1)和/或(2)：

以下通式的化合物

HO-C(＝O)-CH[-NH(SG)¹]-(CH₂)_n-R²-(SG)²

其中(SG)¹为氨基的保护基，(SG)²为取代基R²的保护基，和R²和n具有前述的一般和具体的含义，用下述通式的杂环化合物转化

其中X为S、O、CH₂、CH₂CH₂、CH₂O或CH₂NH，和Y为H或

CN；形成的以下通式的缩合产物

在脱去保护基(SG)²后，用下述通式的化合物转化

[F¹-R³-R⁴-S-]₂

其中R³和R⁴可具有前述的一般和具体的含义，和F¹为可以与其 它官能基团的一部分反应的官能基团的一部分；和使得到的反应产物 释放保护基(SG)¹，转化成通式A-B-D-B’-A’(1)的化合物，其中A和A’ 可以相同或不同，且B和B’可以相同或不同，且其中A、A’、B、B’ 和D可具有前述含义；在下述反应方案2的情况下，A和A’相同，为 包含所述X和Y的具有键合氮原子的羰基氨基的杂环化合物；B和B’ 也是相同的，是通式-(CH₂)_n-R²-R³-R⁴-的组，n、R²-R³和R⁴具有前述的 一般和具体的含义，和D为-S-S-。

方案2

具有B＝-(CH₂)_n-R²-R³-R⁴-)的对称化合物A-B-D-B-A(1)的合成，

保护基(SG)¹和(SG)²为一般的保护基，如它们是有机合成领域的技 术人员已知用于有机分子中某些基团的中间体保护的基团，其优选地 为氨基甲酸乙酯保护基，其用于例如作为氨基酸保护基。非限制性实 例为苄氧基羰基-残基、芴-9-基甲氧基羰基-残基或叔-丁氧基羰基残基。

使用前述反应方案2的第一个反应步骤-从由式[F¹-R³-R⁴-S-]₂-的 不对称化合物转化形成的二聚物开始，释放保护基(SG)³，可以获得通 式A-B-D-E(2)的不对称化合物，同时用通式HS-CH₂-CH(R⁹)-NH(SG)³化合物转化，其中R⁹具有前述的一般和具体的含义，和(SG)³为氨基的 保护基。这显示在下述反应方案3中。

方案3

具有B＝-(CH₂)_n-R²-R³-R⁴-)的不对称化合物A-B-D-E的合成，

在获得的具有A-B-D-E(2)的不对称化合物中，A为前述提及的包 含X和Y的具有键合氮的α-氨基羰基-残基；B为式-(CH₂)_n-R²-R³-R⁴- 的基团，n、R²、R³和R⁴具有前述的一般和具体的含义，D为-S-S-，E 为基团-CH₂-CH(NH₂)-R⁹，其中R⁹具有前述的一般和具体的含义。

在形成不对称化合物的第二个合成路线中，在随后反应步骤中组 成残基B-从上述反应方案2的第一个中间体开始-，最后得到与在反应 方案3的反应中相同的产物，如在下述反应方案4中所示：

前述第一个中间体脱去保护基(SG)²(参见反应方案2)转化成具有 在随后与通式F³-R³-R^4a-(SG)⁴的化合物反应适当地离去基团F²的化合 物；其中F²和F³指功能(离去)基的一部分。如果R³具有前述的一般 和具体的含义，R^4a为基团R⁴的一部分，(SG)⁴为保护基。后者脱去转 化成适当的离去基团F⁴。在脱去两个保护基(SG)¹和(SG)³后，通式 F⁵-R^4b-S-S-Z的化合物转化(其中F⁵为适当的功能离去基，R^4b为R⁴的第二部分，和Z为活化用于硫醇交换和随后通式 HS-CH₂-CH(R⁹)-NH(SG)³的硫醇转化的分子的残基)形成通式 A-B-D-E(2)的不对称化合物，其中A为前述包含X和Y的具有键合氮 的α-氨基羰基-残基的杂环化合物；B为式-(CH₂)_n-R²-R³-R⁴-，n、R²、 R³和R⁴具有前述的一般和具体的含义，D为-S-S-，和E为基团 -CH₂-CH(NH₂)-R⁹，其中R⁹具有前述的一般和具体的含义。

方案4

具有B＝-(CH₂)_n-R²-R³-R⁴-的不对称化合物A-B-D-E的合成

在前述反应方案4中，(SG)¹、(SG)²、(SG)³和(SG)⁴为一般的保护 基，如它们是有机化学领域的技术人员已知用于有机分子中某些基团 的中间体保护的基团，其优选地为氨基甲酸乙酯保护基，其通常用于 例如作为氨基酸保护基。非限制性实例为苄氧基羰基-残基、芴-9-基甲 氧基羰基-残基或叔-丁氧基羰基-残基。

残基F²、F³、F⁴和F⁵为官能基团的部分，表示离去基团比如例如-H、 -OH、-Cl等，其特别适合于从分子上脱去。Z为活化包含-S-S-基团用 于硫醇交换的分子从而交换另一个分子的S-原子(任选地结合取代基) 的残基。这样的基团为有机合成领域技术人员熟知的，本发明不限于 活化硫醇交换的某些基团。优选的但非限制性的实例为基团3-硝基-2- 吡啶基、5-硝基-2-吡啶基、2-、3-或4-吡啶基、2-硝基苯基、甲氧基羰 基或N-甲基-N-苯基羰基。在前述反应方案中，残基R^4a和R^4b组合指 残基R⁴，其具有前述的一般和具体的含义。

将下述反应方案5的起始化合物，其中R¹具有前述的一般和具体 的含义，可以直接用前述的如下通式的杂环化合物直接转化

脱去保护基(SG)¹，转化成通式A-B-D-B’-A’(1)的对称化合物 (B＝R¹)，其中X、Y和(SG)¹具有前述的一般和具体的含义。

方案5

具有B＝R¹的对称化合物A-B-D-B-A(1)的合成

使用前述反应路线，例如通过与以下杂环化合物进行前述反应， 可以得到其中Y为CN的最终产物。

其中Y为-C(＝O)-NH₂和，将对称反应产物(其中Y仍为 -C(＝O)-NH₂)暴露于羰基氨基转化成氰残基释放出水的条件下。该反 应由下述反应方案5a组成：

方案5a

具有Y＝CN的对称化合物A-B-D-B-A的合成

通式A-B-D-E的不对称化合物，其中B为R¹，且R¹具有前述的 一般和具体的含义，可通过通式HS-CH₂-CH[-NH(SG)³]-R⁹的硫醇化合 物转化和保护基离去，由反应方案5(如上所述)的N-保护反应产物获 得。这显示在反应方案6中。

方案6

具有B＝R¹的不对称化合物A-B-D-E(2)的合成

如在反应方案6中具有B＝R¹的相同的不对称化合物A-B-D-E(2) 也可按照如在反应方案7中所示的合成路线获得，其中首先用以下杂 环化合物转化起始化合物。

随后用通式HS-CH₂-CH[-NH(SG)³]-R⁹的硫醇化合物转化和脱去保 护基(SG)¹和(SG)³也形成具有B＝R¹的不对称化合物A-B-D-E(2)，其 中R¹可具有前述的一般和具体的含义。

方案7

具有B＝R¹的不对称化合物A-B-D-E(2)的合成

下述合成方案8和9显示了产生合成具有B＝R⁷-R⁸-的 A-B-D-B-A(1)的对称化合物的路线(方案8)，和使用类似于上述的合 成路线-从反应方案8的N-保护的产物开始-合成不对称的化合物 A-B-D-E-(2)。

方案8

具有B＝-R⁷-R⁸-的对称化合物A-B-D-B-A(1)的合成

方案9

具有B＝-R⁷-R⁸-的不对称化合物A-B-D-E(2)的合成

在反应方案8和9中，残基R^8a和R^8b为在所述路线合成的两个步 骤内包含R⁸的这些残基。

跟反应方案9中所示的合成路线一样形成不对称的具有B＝-R⁷-R⁸的不对称化合物A-B-D-E(2)，且与已经示出的反应相当的进一步的两 个合成的部分在下述合成方案10和11中出现。

方案10

具有B＝-R⁷-R⁸-的不对称化合物A-B-D-E(2)的合成

在所有提及的反应方案中，残基F²、F³、F⁴、F⁵和F⁶为官能基团 的部分，表示离去基团比如例如H、-OH、-Cl等，其特别适合于从分 子上脱去。Z为活化包含-S-S-基团用于硫醇交换的分子从而交换结合 到S-原子的基团与另一个分子的S-原子(任选地结合取代基)的残基。 这种基团是有机合成领域的技术人员已知的，本发明不限于其活化用 于硫醇交换的某些基团。优选的但非限制性实例为基团3-硝基-2-吡啶 基、5-硝基-2-吡啶基、2-，3-或4-吡啶基、2-硝基苯基、甲氧基羰基或 N-甲基-N-苯氨羰基。在前述反应方案中，残基R^4a和R^4b指组合残基 R⁴，残基R^8a和R^8b指组合残基R⁸，两者均具有前述的一般和具体的含 义。

方案11

具有B＝-R⁷-R⁸-的不对称化合物A-B-D-E(2)的合成

根据本发明，前述的和在反应方案中描述的形成通式(1)和(2)的化 合物的反应在一定条件下进行，所述条件是有机合成领域的技术人员 已知的，在这方面不需要更进一步的详述。所用的典型的溶剂为极性 有机溶剂或溶剂混合物。特别地，醚类是可想象得到的如THF，酯如 乙酸乙酯或DMF，但本发明不限于此。适于进行转化和所用溶剂的反 应温度通常在-20℃至+50℃，优选10℃至40℃。

根据前述方法，根据本发明的通式(1)和(2)的化合物在其合成期间 以酸加成盐的形式存在，特别是当进行精确的表征和随后在水性环境 中使用时尤其如此。制备与某些生理学(即药理学和/或化妆品)可接受 的无机酸或有机酸的优选的酸加成盐用于通式(1)和(2)的化合物的表征 和随后使用。在本发明的优选的实施方案中，制备如下药学可接受的 酸的盐作为酸加成盐：通式(1)或(2)的化合物的盐酸化物、三氟醋酸 盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、甲酸盐和/或柠檬酸盐。

上述一般和详细提及的化合物(指通式(1)和(2))可用于多种目的， 可以例如使用前述方法之一制备所述化合物，但不限于按所述方法之 一制备所述化合物。本发明令人惊奇地发现所述化合物可用于医学领 域。特别地，人们发现根据本发明的新化合物本身为二肽基肽酶IV或 具有相似的酶作用的酶和丙氨酰氨基肽酶N或具有相似的酶作用的酶 的抑制剂。

在本发明的优选的实施方案中，化合物可以成功地用作抑制剂前 体或抑制剂前药。关于定义术语“抑制剂”、“前体”和“前药”，其可以 参照前述的定义。

本发明进一步优选的化合物用作二肽基肽酶IV(DPIV)和具有相似 的酶作用的肽酶及丙氨酰氨基肽酶N(APN)和具有相似的酶作用的肽 酶的抑制剂的前药。更优选的属于用作二肽基肽酶IV(DPIV)和丙氨酰 氨基肽酶N(APN)的抑制剂前药的所述化合物的化合物。即令人惊奇 地发现根据本发明的化合物可以在生理学或病理学条件下起作用，特 别是在还原条件下-如它们存在于细胞和组织中-成为二肽基肽酶 IV(DPIV)和具有相似的酶作用的肽酶，以及丙氨酰氨基肽酶N(APN) 和具有相似的酶作用的肽酶的高度有效的抑制剂这样的化合物。根据 本发明，可以使用上述通式(1)或(2)的新化合物之一，根据一般和具体 的说明，可以组合使用超过一种上述化合物。所述超过一种化合物的 组合可以包括超过一种通式(1)的化合物，或超过一种通式(2)的化合 物，或超过一种任意地选自通式(1)和(2)的化合物组合的化合物。优选 地，仅仅施用一种通式(1)或(2)的化合物。

本发明还涉及根据前述的一般和详细说明的通式(1)和/或(2)的一 种或多种化合物、至少一种所述化合物、特别优选仅一种所述化合 物，用于预防和治疗具有过度免疫应答和/或炎症发生的疾病的用途， 所述疾病包括动脉硬化、神经元疾病、脑损伤、皮肤疾病、肿瘤疾病 和病毒引起的疾病以及II型糖尿病。

而且，本发明还涉及根据前述的一般和详细说明的通式(1)和/或(2) 的一种或多种化合物、至少一种所述化合物、特别优选仅一种所述化 合物在制备用于治疗具有过度免疫应答和/或炎症发生的疾病药物或化 妆品制剂中的用途，所述疾病包括动脉硬化、神经元疾病、脑损伤、 皮肤疾病、肿瘤疾病和/或病毒引起的疾病以及II型糖尿病。

在本发明的优选的实施方案中，通式(1)和/或(2)的化合物一般和 优选地仅以两个前述表中的化合物使用、或组合使用、或以包括一种 或多种所述化合物的药物或化妆品制剂形式使用来预防和治疗下述疾 病，例如多发性硬化症、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎及其它自身免 疫性疾病和炎症疾病、支气管哮喘及其它过敏疾病、皮肤-和粘膜-疾 病、例如银屑病、粉刺和具有成纤维细胞过度增殖和分化的改性状况 的皮肤疾病、良性纤维组织形成和致硬化的皮肤疾病和成纤维细胞过 度增殖的恶性病症、急性神经元疾病比如例如在局部缺血-或出血性中 风之后由局部缺血引起的脑损伤、颅脑损伤、心脏停搏、心力衰竭或 由于心外科手术引起的病症、慢性神经元疾病例如阿尔茨海默病、皮 克病、渐进性核上性麻痹、皮质基底节变性、额颞痴呆、帕金森病、 特别是与染色体数17相关的帕金森病、亨延顿(氏)舞蹈病、朊病毒引 起的疾病状态和肌萎缩性侧索硬化症、动脉硬化、动脉炎症、慢性阻 塞性梗阻性肺病(COPD)的支架-再狭窄、肿瘤、转移、前列腺癌、严 重急性的呼吸性综合征(SARS)和败血症及败血症样病症和II型糖尿 病。

在本发明的进一步优选的实施方案中，通式(1)和/或(2)的化合物 以一般和优选在仅以两个前述表中的化合物使用、或组合使用、或以 包括一种或多种所述化合物的药物或化妆品制剂形式使用来预防和治 疗移植组织和细胞的排异反应。作为这种用途的一个实例，可以提及 使用一种或多种前述的化合物或包含一种或多种前述化合物的药物制 剂用于同种异基因或异种异基因(xenogene)移植器官、组织和细胞， 比如肾、心脏、肝、胰腺、皮肤或干细胞移植以及针对宿主疾病的移 植物。

在本发明的进一步优选的实施方案中，通式(1)和/或(2)的化合物 一般和优选地仅以两个前述表中的化合物使用、或组合使用、或以包 含一种或多种所述化合物的药物或化妆品制剂形式使用来预防和治疗 由于卫生器材植入有机体引起的反应相关性排异反应或炎症。这些可 以是例如支架、关节植入物(膝关节植入物、髋关节植入物)、骨植入 物、心脏起博器(cardio pace maker)或其它植入物。在本发明的进一 步优选的实施方案中，通式(1)和/或(2)的化合物一般和优选在仅以两 个前述表中的化合物使用、或组合使用、或以包含一种或多种所述化 合物的药物或化妆品制剂使用，用这种方式使得所述化合物或制剂以 包衣或湿润在物料(item)上使用或至少一种所述化合物或制剂与所述 物料是实质上混合的。而且，在这种情况下，局部地或系统地使用一 种所述化合物或制剂是可能的-如果是顺序或同时可使用。

在优选的实施方案中，按上述提及的方式-和用于比较的目的，或 用于预防和治疗上述示例性的但不是全部提及的疾病和病症-通常通式 (1)和(2)的化合物和两个前述表中提及的化合物以及包含所述化合物的 下述药物和化妆品制剂可以单独使用或与它们中的一种以上组合使用 制备用于治疗前述疾病和病症的药物。这些可以包括下述提及用量的 前述化合物，任选地与本身已知的载体物质、辅助物质和/或添加剂的 组合。

在优选的实施方案，前述通式(1)和/或(2)的化合物的用途包括其 中所用的化合物产生至少一种二肽基肽酶IV(DPIV)和具有相似的酶作 用的肽酶以及丙氨酰氨基肽酶N(APN)和具有相似的酶作用的肽酶的 抑制剂的情况。根据本发明，在医学领域中，从化合物产生至少一种 这样的抑制剂，优选两种或超过两种这样的抑制剂，特别优选一种或 两种抑制剂产生了令人惊奇的用途特异性，特别是作为前述的一种或 多种酶的抑制剂。

在进一步优选的实施方案中，如果存在还原条件，特别是如果在 其中得到的化合物形成、显示出其药理学作用的位点存在还原条件， 使用前述式(1)和/或(2)的一种或多种化合物或包括至少一种通式(1)和/ 或(2)的化合物的化妆品或药物制剂产生一种抑制剂，优选一种或两种 上述提及的酶抑制剂。

在化学反应条件中使用的术语“还原条件”被认为是其中通式(1)的 化合物或通式(2)的化合物或一种或多种通式(1)和(2)的化合物组合暴 露于在作用部位的反应条件，所述的作用部位中电子供体提供用于通 式(1)和/或(2)的化合物接受的电子。如发现，在脱去通式(1)和(2)中D 表示的-S-S-或-Se-Se-桥的还原条件下，根据本发明的通式(1)和/或(2) 分别转化成具有-SH-端基或-SeH-端基的两种化合物。

对于本发明，只要它们获得可靠生成了具有-SH-或-Se-端基的相 应分子，通过还原生理反应条件的方式来获得不是至关重要的。根据 本发明的化合物有规律地满足导致体内产生前述酶抑制剂的适当化合 物的条件。

通常至少一种通式(1)和/或(2)的化合物或与两个前述表相应的前 述化合物的含量在本发明用途的范围，对于每个应用单元，对于至少 一种通式(1)和/或(2)的化合物，其在0.01至1000mg的范围内，优选 在0.1至100mg/应用单元的范围内。

在本发明的用途的上下文中，可以按照本领域技术人员本来已知 的任何方式获得至少一种通式(1)和/或(2)的所述化合物的应用。通常 通式(1)和/或(2)的化合物和进一步优选的前述表中的化合物或药物或 化妆品制剂(其包括一种或多种前述的化合物与本来已知的常见载体物 质、辅助物质和/或添加剂的组合)的应用分别作为以下形式的局部应 用形式进行，例如乳膏、软膏、糊剂、凝胶、溶液、喷雾剂、脂质体 和纳米物(nanosomes)、振摇混合物、“聚乙二醇”(pegylated)可降 解的制剂(例如，在生理条件下可降解的)储库基质、水状胶敷料、硬 膏剂、微海绵、预聚物和相似的新载体物质、快速注射或其它包括可 灌滴应用的皮肤基料/载体；以及另一方面，以合适的制剂或合适的盖 仑形式，因此为片剂、糖锭、锭剂、胶囊、气雾剂、喷雾剂、溶液、 乳剂和混悬剂用于作为口服、透皮的、静脉内的、皮下的、皮内的、 肌内、鞘内应用的全身应用。

本发明还涉及通过使用至少一种通式(1)和/或(2)的化合物或包括 至少一种根据前述详细说明的通式(1)和/或(2)的药物或者化妆品制剂 以抑制酶活性必要的数量抑制丙氨酰氨基肽酶N活性或具有相似的酶 作用的肽酶的活性以及二肽基肽酶IV活性或具有相似的酶作用的肽酶 的活性的方法，其单独使用或组合使用丙氨酰氨基肽酶N的抑制剂或 具有相似的酶作用的肽酶的抑制剂和/或DPIV的其它抑制剂或具有相 似的酶作用的肽酶的抑制剂。通常至少一种通式(1)和/或(2)的化合物 或两个前述表的化合物的含量分别在范围，如上所述0.01至1000mg 至少一种化合物/应用单元，优选在0.1至100mg/应用单元的范围内。

进一步，本发明还涉及通过使用至少一种通式(1)和/或(2)的化合 物或根据下述详细说明的药物或者化妆品制剂来局部影响丙氨酰氨基 肽酶N活性或具有相似的酶作用的肽酶的活性以及二肽基肽酶IV活性 或具有相似的酶作用的肽酶的活性的方法，其单独使用或组合使用丙 氨酰氨基肽酶N的抑制剂或具有相似的酶作用的肽酶的抑制剂和/或 DPIV的其它抑制剂或具有相似的酶作用的肽酶的抑制剂，用量为控 制所述酶活性所需的量。而且，在这些情况下，通式(1)和/或(2)的化 合物的含量在上述提及的范围内。

而且，本发明涉及用于从至少一种通式(1)和(2)的化合物产生至少 一种二肽基肽酶IV(DPIV)和具有相似的酶作用的肽酶以及丙氨酰氨基 肽酶N(APN)和具有相似的酶作用的肽酶的抑制剂的方法。根据本发明 的方法包括将至少一种通式(1)和(2)的化合物暴露于前述说明书提及的 还原条件下的步骤。如前所述，本领域技术人员不受用于转化至少一 种通式(1)和/或(2)的化合物的还原条件的限制，所述化合物可以被较好 地认为在本发明的以下抑制剂的合成中的中间体范围内：二肽基肽酶 IV(DPIV)的抑制剂和具有相似的酶作用的肽酶的抑制剂、以及丙氨酰 氨基肽酶N(APN)的抑制剂和具有相似的酶作用的肽酶的抑制剂，所述 化合物被转化成二肽基肽酶IV(DPIV)的实际抑制剂和具有相似的酶作 用的肽酶的抑制剂以及丙氨酰氨基肽酶N(APN)的抑制剂和具有相似 的酶作用的肽酶的抑制剂。

而且，本发明涉及用于预防和治疗多种疾病的方法，例如具有其 它慢性炎症疾病的过度免疫应答的疾病(自身免疫性疾病、变态反应和 移植排异反应)、神经元疾病和脑损伤、皮肤疾病(特别是粉刺和银屑 病)、肿瘤疾病，特别是病毒感染(特别是SARS)以及II型糖尿病，特 别是上述详细提及的疾病。其包括用预防和治疗下述疾病的方法：比 例如多发性硬化症、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎及其它自身免疫性 疾病以及炎症疾病、哮喘支气管炎及其它过敏疾病、皮肤和粘膜疾病 例如银屑病、粉刺和具有成纤维细胞过渡增殖和分化的改性状况的皮 肤疾病、良性纤维组织形成和致硬化的皮肤疾病和成纤维细胞过度增 殖的恶性病症、急性神经元疾病例如局部缺血或出血性中风之后局部 缺血引起的脑损伤、颅脑损伤、心脏停搏、心力衰竭或由于心外科手 术引起的、慢性神经元疾病例如阿尔茨阿海默病、皮克病、渐进性核 上性麻痹、皮质基底节变性、额颞痴呆、帕金森病、特别是与染色体 17相关的帕金森病、亨延顿(氏)舞蹈病、朊病毒引起的疾病状态和肌 萎缩性侧索硬化症、动脉硬化、动脉炎症、支架内再狭窄、慢性阻塞 性肺病(COPD)、肿瘤、转移瘤、前列腺癌、严重急性的呼吸性综合征 (SARS)和败血症及败血症样病症。所述方法包括应用至少一种下述详 细说明的化合物或药物制剂，用量为预防或治疗相应疾病所需的量。 而且，在这些情况下，化合物的含量为前述0.01至1000mg的化合物/ 应用单元的范围内，优选在0.1至100mg/应用单元的范围内。

本发明还涉及药物制剂，其包括至少一种前述一般提及的和详细 说明的通式(1)和(2)化合物，任选地与一种或多种药学可接受的载体物 质、辅助物质和/或助剂的组合。

而且，本发明还涉及化妆品制剂，其包括至少一种前述一般和详 细说明的通式(1)和(2)的至少一种化合物，如果合适，与化妆品可接受 的载体物质、辅助物质和/或助剂组合。

对于这些制剂，药学或化妆品可接受的载体物质、辅助物质和/或 助剂为药物或化妆品领域技术人员熟知的，其不需要更进一步详细描 述。

提及的药物或化妆品制剂可包含至少一种通式(1)或(2)的化合物， 优选一种或两种通式(1)和/或(2)的化合物，用量为药物或化妆品领域预 期效果所需的量。用量不受特别地限制，取决于多个参数，例如应用 途径、具体疾病模式或化妆品状态、可以是哺乳动物例如人类的接受 者的体质、所用化合物的生物利用度等。在特别优选的实施方案中， 药物应用单元或化妆品应用单元分别包含一定量的至少一种通式(1)和 /或(2)的化合物，其在0.01至1000mg化合物/应用单元的范围内，优 选在0.1至100mg/应用单元的范围内。通常，应用单元可以是伊尔克 (ilk)(和包含这种浓度的至少一种通式(1)和/或(2)的化合物)，其中每 天向患者例如哺乳动物，特别是人类应用一个或更少的进一步优选的 两个或三个应用单元，用量为足够对至少一个化合物(1)和/或(2)的系统 药物或化妆品处理所需的量。

具体实施方式

通过下述例如特别优选的实施例来阐述本发明。下述实施方案的 实施例不能认为限制本发明，而仅仅给出了示例性的说明。

实施例

实施例1

通式(1)的化合物的制备

使用下述方法制备通式(1)的化合物：

(a)化合物II(方案12)

将440mg(1mmol)(Boc-Cys-OH)₂1溶于5ml无水THF中。在氩 气下，将158μl(2mmol)噻唑烷加入该溶液中，在0℃25分钟后，逐渐 加入460mg(2，4mmol)N’-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺(EDC)。 在室温下，利用薄层色谱法(TLC)控制转化。6小时后，在0℃，使用 460mg(2.4mmol)EDC和79μl(1mmol)噻唑烷进行进一步的活化。在20 小时后，通过蒸馏除去THF，将固体残余物溶于乙酸乙酯中。用5％的 KHSO₄溶液洗涤乙酸乙酯相3次，用NaCl溶液洗涤一次，用饱和的 NaHCO₃溶液洗涤3次，和用NaCl溶液洗涤3次。将其在Na₂SO₄上干 燥，过滤并浓缩。

通过从乙酸乙酯/石油醚的混合物结晶来纯化得到的粗制品。

得到468mg(80％)的相应Boc-保护的化合物。为了脱去保护基， 将468mg(0.8mmol)的该化合物溶于1.2ml(16mmol)的三氟乙酸和12 ml的二氯甲烷中。利用TLC控制反应，在完成转化后，向反应批料中 加入无水乙醚。滤出沉淀的固体，用乙醚洗涤几次。

产率：446mg(91％)II。

方案12

(b)化合物VI(方案13)

(i)Boc-Lys-噻唑烷(thiazolidide)3

将1.4g(3mmol)Boc-Lys(Fmoc)-OH 2和382μl(3mmol)4-乙基吗啉 溶于7ml无水THF中。将该反应批料冷却至-15℃，在该温度下，加 入390μl(3mmol)的氯甲酸异丁酯。在-15℃，反应时间为15分钟后， 加入284μl(3.6mmol)噻唑烷，在-15℃再搅拌该批料一小时，随后在室 温下过夜。

为了完成转化，再活化一半前述量的批料，在如描述的加入附加 量的4-乙基吗啉和氯甲酸异丁酯和噻唑烷后，将该批料冷却至-15℃。 在室温下再次4小时的反应时间后，将其浓缩，直至完全干燥，并将 残余物溶于乙酸乙酯中。

用5％的KHSO₄溶液洗涤乙酸乙酯相3次，用NaCl溶液洗涤一次， 用饱和的NaHCO₃溶液洗涤3次，和接着用NaCl溶液洗涤至中性。

在Na₂SO₄上干燥后，浓缩乙酸乙酯相，并将残余物溶于30ml吗 啉中以脱去Fmoc-保护基。

在室温下1.5小时的反应时间后，通过蒸馏除去吗啉。将6ml冰 冷的甲醇加入该残余物中。从几乎不溶性4-芴-9-基甲基吗啉中过滤溶 液，并浓缩该溶液。

产率：875mg(92％)3。

(ii)VI的合成

在0℃，向181mg(0.5mmol)4在3ml DMF的溶液中逐渐加入240 mg(1.25mmol)的EDC，接着加入317mg(1mmol)3。

在0℃，搅拌该反应批料1小时，接着在室温下搅拌6小时。在再 加入120mg(0.63mmol)EDC和6小时的培养时间后，通过蒸馏除去 DMF，并将残余物溶于乙酸乙酯中。用5％的KHSO₄溶液洗涤乙酸乙 酯相3次，用NaCl溶液洗涤一次，用饱和的NaHCO₃溶液洗涤3次， 和接着用NaCl溶液洗涤至中性。

在Na₂SO₄上干燥和通过蒸馏除去乙酸乙酯后，残留440mg的粗制 品。

使用在硅胶上色谱纯化，用洗脱液氯仿/甲醇92/8，得到的产率为 250mg(55％)8。

为了保护基团，将20mg(0.022mmol)8溶于220μl在纯乙酸中的1 M HCl中。在室温下静置6小时后，将无水乙醚加入该反应批料中， 过滤沉淀产物并用乙醚洗涤。

产率：15mg(88％)VI。

方案13

用ESI-MS表征得到的化合物。下表3给出了本发明的通式(1)的 化合物的实例。

表3通式A-B-D-B’-A’(1)的化合物的实例

实施例2

通式(2)的化合物的制备

使用下述方法制备通式(2)的化合物：

(a)化合物VII(方案14)

(i)6的合成

将188mg(0.5mmol)的Boc-Cys(Npys)-OH 5溶于2.5ml无水THF 中。在0℃，在氩气下，加入40μl(0.5mmol)噻唑烷，并逐渐加入115 mg(0.6mmol)EDC。在室温下，利用TLC跟踪反应，在4小时后终止。 为了该目的，浓缩反应批料，将固体残余物溶于乙酸乙酯中，接着用 5％的KHSO₄溶液洗涤有机相3次，用NaCl溶液洗涤一次，用饱和的 NaHCO₃溶液洗涤3次和用NaCl溶液洗涤3次。在Na₂SO₄上干燥后， 将其过滤，并浓缩乙酸乙酯相。

产率：191mg(86％)6。

(ii)VII的合成

将29mg(0.065mmol)6溶于5ml ACN/磷酸盐缓冲液(1∶1)中， pH 8.0。在室温下，在氩气下，向该溶液中加入18mg(0.065mmol)β- 氨基硫醇7(根据“Fournier-Zaluski，M.C.；Coric，P.；Turcaud， S.；Bruetschy，L.，Lucas，E.；Noble，F.；Roques，B.P.J.Med.Chem. 1992，35，1259-1266”；“Fournier-Zaluski，M.C.；Coric，P.；Turcaud， S.；Lucas，E.；Noble，F.；Maldonado R.；Roques，B.P.J.Med.Chem. 1992，35，2473-2481”从(S)-苯基丙氨醇开始分三个步骤合成)在5ml ACN/磷酸盐缓冲液中的溶液。在3小时的反应时间后(HPLC控制)，通 过浓缩反应批料终止反应，将在乙酸乙酯中的固体残余物溶解，并用 NaCl-溶液洗涤该相3次。将其在Na₂SO₄上干燥，过滤并浓缩。在硅 胶上用乙酸乙酯/石油醚色谱纯化得到的粗制品。产率为20mg(55％)的 相应Boc保护的化合物。为了脱去保护基，将10mg(0.018mmol)的该 化合物溶于28μl(0.36mmol)的三氟乙酸和280μl的二氯甲烷中。利用 TLC跟踪反应，并通过向反应批料中加入无水乙醚终止反应。用乙醚 洗涤沉淀的产物几次。

产率：8mg(76％)VII。

方案14

(b)化合物X(方案15)

在室温下，将73mg(0.08mmol)8和20mg(0.075mmol)β-氨基硫醇 (aminothiol)7在3ml甲醇中搅拌24小时。在通过蒸馏除去甲醇中，用 洗脱液乙酸乙酯/石油醚95/5在硅胶上纯化粗制品。产率为34mg Boc- 保护的二硫化物(63％)，为了脱去保护基，将其溶于750μl二氯甲烷中， 并加入75μl三氟乙酸。在室温下静置6小时后，加入无水乙醚，过滤 沉淀的产物并用乙醚洗涤。产率：29mg(83％)X。

方案15

(c)化合物XI(方案16)

(i)10的合成

将190mg(0.5mmol)3-(Fmoc-氨基甲基)-苯甲酸9和64μl(0.05 mmol)4-乙基吗啉溶于1ml DMF中，并在氩气下冷却至-15℃。向该溶 液中加入65μl(0.5mmol)的氯甲酸异丁酯，在-15℃搅拌该溶液20分 钟，接着加入159mg(0.5mmol)Boc-Lys-噻唑烷3在1.25ml DMF中的 溶液，并在-15℃搅拌该溶液1小时。

在室温下20小时后，在-15℃，再次加入32μl(0.25mmol)4-乙基- 吗啉和33μl(0.25mmol)氯甲酸异丁酯用于再次活化。

在40小时后(TLC控制)，蒸馏DMF，并将其溶于乙酸乙酯中。乙 酸乙酯相用5％的KHSO₄溶液洗3次，用NaCl溶液洗一次，用饱和的 NaHCO₃溶液洗3次，用NaCl溶液洗涤一次，用饱和的NaHCO₃溶液 洗涤3次和用NaCl溶液洗涤3次。在Na₂SO₄上干燥，过滤并接着浓 缩。用具有乙酸乙酯的硅胶色谱纯化得到的粗制品。

产率为174mg(52％)的相应Fmoc-保护的化合物。为了脱去保护 基，将150mg(0.22mmol)的该化合物溶于2.2ml吗啉中，在2小时后， 通过蒸馏除去过量的吗啉。将残余物溶于1ml冰冷的甲醇中，过滤不 溶性4-芴-9-基甲基吗啉并浓缩。

产率：92mg(93％)10。

(ii)11的合成

将78mg(0.21mmol)Boc-Cys(Npys)-OH 5和27μl(0.21mmol)4-乙基 -吗啉溶于0.4ml的THF中，在氩气下冷却至-15℃。向该溶液中加入 28μl(0.21mmol)的氯甲酸异丁酯，在-15℃搅拌20分钟，接着，加入95 mg(0.21mmol)10在0.75ml THF中的溶液。在-15℃1小时和在室温下 20小时后，在-15℃加入13μl 4-乙基吗啉(0.10mmol)和13μl(0.10mmol) 氯甲酸异丁酯用于再次活化步骤。

在24小时(TLC控制)后，通过蒸馏除去THF，并按照化合物10 的方式来处理反应批料。

接着，用具有甲醇/氯仿的硅胶色谱纯化得到的粗制品。产 率：100mg(60％)11。

(iii)XI的合成

将67mg(0.08mmol)11溶于8mg乙腈/磷酸盐缓冲液(1∶1)中， pH 8.0。在室温下，在氩气下，加入21mg(0.08mmol)7在8ml乙腈/ 磷酸盐缓冲液中的溶液。利用HPLC跟踪反应，在终止反应后浓缩反 应批料。将固体残余物溶于乙酸乙酯中，并用NaCl溶液洗涤3次，将 其在Na₂SO₄上干燥，过滤并浓缩。接着，用具有乙酸乙酯/石油醚的 硅胶色谱纯化得到的粗制品。产率为29mg(40％)的相应Boc-保护的化 合物。为了脱去保护基，将22mg(0.024mmol)的该化合物溶于55μl 三氟乙酸和550μl二氯甲烷中。利用TLC检测反应，并在脱去终止后 将乙醚加入该反应批料中。过滤沉淀的产物，用乙醚洗涤几次。产 率：16mg(70％)XI。

方案16

(d)化合物XIII(方案17)

(i)13的合成

将2.5g(5mmol)Boc-p-氨基-Phe(Fmoc)-OH 12溶于25ml无水THF 中。在氩气下，在0℃加入394μl(5mmol)噻唑烷，并逐渐加入1.15 g(6mmol)EDC。在室温下，利用TLC检测反应。在6小时后，在 0℃，加入197μl(2.5mmol)噻唑烷和954mg(5mmol)EDC用于再次活 化步骤。在室温下另外2小时后，通过浓缩反应物终止反应，将反应 固体残余物溶于乙酸乙酯中的中，并且有机相用5％的KHSO₄溶液洗 涤3次，用NaCl溶液洗涤一次，用饱和的NaHCO₃溶液洗涤3次，用 NaCl溶液洗涤3次。接着，将其在Na₂SO₄上干燥，过滤并浓缩。

产率为2.58g(90％)的相应Fmoc-保护的化合物，为了脱去保护基， 将其溶于45ml的吗啉中。在室温下2小时后，通过蒸馏除去过量的吗 啉，并将残余物溶于6ml冰冷的甲醇中。滤出不溶性4-芴-9-基甲基- 吗啉，并浓缩该溶液。

产率：1.23g(78％)13。

(ii)14的合成

将375mg(1mmol)5和127μl(1mmol)4-乙基吗啉溶于3ml无水 的THF中，并在氩气下冷却至-15℃。向该溶液中加入131μl(1mmol) 氯甲酸二异丁酯，在-15℃20分钟后，加入351mg(1mmol)13在0.5ml THF中的溶液。在-15℃1小时和在室温下20小时后(TLC控制)，在 -15℃加入64μl(0.5mmol)4-乙基吗啉和66μl(0.5mmol)氯甲酸异丁酯用 于再次活化步骤。在另外2小时后，通过浓缩反应批料终止反应，溶 解在乙酸乙酯中的固体残余物，并通过如在化合物13上下文中描述的 处理乙酸乙酯相。

用具有乙酸乙酯的硅胶色谱纯化得到的粗制品。产率：350 mg(50％)14。

(iii)XIII的合成

将65mg(0.09mmol)14溶于9ml乙腈/磷酸盐缓冲液(1∶1)中， pH 8.0。在室温下，在氩气下，加入25mg(0.09mmol)7在9ml乙腈/ 磷酸盐缓冲液中的溶液。利用HPLC跟踪该反应，并在浓缩后约3小 时后处理反应批料，将固体残余物溶于乙基酯中，接着用NaCl溶液洗 涤有机相3次。将其在Na₂SO₄上干燥，过滤并浓缩。接着，用具有乙 酸乙酯/石油醚(60∶40)的硅胶色谱纯化得到的粗制品。产率为35 mg(47％)的相应Boc-保护的化合物。为了脱去保护基，将30mg的该 化合物溶于84μl(1.1mmol)的三氟乙酸和840μl的二氯甲烷中。利用 TLC控制反应。在完成后，将无水乙醚加入产物中，并用乙醚洗涤沉 淀的固体几次。产率：22.5mg(70％)XIII。

下表4列出了根据本发明的通式(2)的化合物的7个实例。

方案17

表4通式A-B-D-E(2)的化合物的实例

在释放通式(1)和(2)的前药抑制剂后APN和DPIV的双重抑制

八种化合物选自在前述实施例1和2中制备的化合物(通式(1)和(2) 的化合物I和II和通式(1)和(2)的化合物VII、VIII、X、XI、XII和 XIII)。使用下述方法用二硫苏糖醇(DTT)还原性处理提及的化合物， 以释放来自前药的抑制剂。

用DTT还原的过程：

在室温下，搅拌相同体积在水中或DMF中7·10^-2M的抑制剂的溶 液和0.35M含水DTT溶液(5当量)4小时。

随着前药的还原处理，使用下述方法估计IC₅₀值：

在还原后IC₅₀值的确定：

来自猪肾的二肽基肽酶IV(EC 3.4.14.5.)，冷冻干燥的粉末 (Sigma)。

基质：Ala-Pro-AMC，[S]＝3·10^-5M(2Km)(在反应批料中)

缓冲液：40mM Tris/HCl-缓冲液，pH 7.6，在反应批料中I＝0.125。

亮氨基酸氨基肽酶，微粒体的，来自猪肾(EC 3.4.11.2)。

在3.5M(NH₄)₂SO₄-溶液中的悬浮液(Sigma)。

基质：Leu-AMC，[S]＝1.5·10^-4M(2Km)(在反应批料中)。

缓冲液：40mM Tris/HCl-缓冲液，在反应批料中pH 7.2。

步骤：

通过用水稀释，从还原批料中制备具有定义的抑制剂浓度的10至 12的溶液。这些选自相应的浓度范围，即在完全抑制和不影响酶活性 之间的范围。

在30℃，用80μl在缓冲剂中的相应稀释的酶培养60μl的这些各 种抑制剂溶液或水(标准物)15分钟，然后加入60μl在水中(总体积200μl) 的相应AMC基质。在30℃，使用荧光板-阅读器NOVOstar(BMG Labtechnologies)连续跟踪7-氨基-4-甲基-香豆素的释放。在测量期间， 选择酶浓度使得到荧光的直线增加。

激发和发射波长分别为390和460nm。测量双份进行。绘制转化 率(荧光/分钟的增加)对抑制剂浓度的图，使用计算机程序GraFit计算 IC₅₀值。

为了比较，估计确定的抑制剂抗DPIV(H-Lys[Z(NO₂)]-噻唑烷)和 APN(actinonine)的IC₅₀值。

结果可参见表5。

表5在前药释放(还原)抑制剂后对APN和DPIV的双重抑制

  化合物   APN(IC 50[M])   DP IV(IC 50[M])   I   1,84·10^-4  2,25·10^-5  II   1,08·10^-4  8,07·10^-6  VII   1,66·10^-7  1,18·10^-5  VIII   1,08·10^-7  4,51·10^-6  X   1,33·10^-7  1,25·10^-7  XI   1,90·10^-7  2,80·10^-7  XII   2,07·10^-7  2,56·10^-7  XIII   2,40·10^-7  7,19·10^-6  Lys[Z(NO₂)]-噻唑   烷   4,34·10^-7  Actinonine   3,02·10^-7

实施例3

化合物V至XIII对健康供体的植物血球凝集素诱导的单核细胞 (MNZ)增殖的抑制(表3和4)

通过密度梯度离心从健康供体的周围血液中分离MNZ，并在不含 血清的介质(AIMV)中用1μg/ml植物血球凝集素(PHA)刺激。在微量试 验平皿中，在37℃和5％CO₂中，在不同抑制剂浓度(三次测量)存在下 培养5×10⁴MNZ 48小时。在相同的条件下，培养未刺激的细胞和 PHA刺激而没有抑制剂的MNZ作为对照。通过在新合成的DNA中加 入溴代脱氧尿苷测定细胞的增殖速率(Biotrak-Assay，GE Healthcare)。

在图1中显示的曲线分别表示至少三个不同供体的增殖数据(基于 在不存在抑制剂下PHA-刺激的细胞的相对值)。

实施例4

化合物VII(表4)在葡聚糖硫酸盐诱导的结肠炎小鼠模型中的治疗 效果

在建立的化学诱导的结肠炎模型中测定所述物质的治疗能力。在 该模型中，通过葡聚糖硫酸钠(DSS)在动物结肠中诱导炎症反应，其 组织学类型类似于人类被称为溃疡性结肠炎的慢性炎症结肠病(acute push)形式。炎症反应的程度取决于DSS的浓度。使用建立的纪录系统 测定疾病的严重性，其中应当考虑粪便稠度的变化、粪便中血的检测 和体重丧失的程度，并通过得分来评价。

通过在实验的整个持续期内使用炎性DSS，所述疾病持久地发 展。根据得分10，不得不假定(assume)该疾病可能导致死亡的情况。 最大可达到治疗成功是终止炎症反应的发展。

在试验的整个时期内，饲喂平均重为20g的雌性Balb/c小鼠(8周 龄)3％(w/v)的葡聚硫酸钠和饮用水(随意地)。在2至3天后，对所有动 物可检测到结肠炎样症状(出血性腹泻和体重减轻)。12只动物，在3 天实验中，每天每只通过腹膜内注射接受100μg的溶于生理盐水溶液 (PBS)中的物质VII，或相应量的溶剂(PBS)＝安慰剂。

在图2的曲线图中，给出了相对于安慰剂处理的动物那些用物质 VII处理的小鼠的平均严重性(得分)。在试验第5天至第7天，那些用 物质VII处理安慰剂小鼠的平均得分显著低于用安慰剂处理的动物的 平均得分。在试验结束时，那些用物质VII处理的动物达到对照动物 平均得分的约一半。

实施例5

在表3和4中给出的一些通式(1)和(2)的化合物在DSS诱导的结肠 炎小鼠模型中的治疗成功

在图3中，显示了在试验第7天(试验结束时)各种示例性的物质对 于DSS诱导的结肠炎小鼠模型的治疗能力。根据在实施例4中描述的 方法测定结肠炎活性得分。