稳定表达T7 RNA聚合酶的ST细胞系及其构建方法和应用

摘要

本发明公开了一株稳定表达T7 RNA聚合酶的细胞系ST/T7，其微生物保藏号是：CGMCC No.2444。本发明将T7 RNA聚合酶基因插入到真核表达载体pIRES2－EGFP中，得到pIRES2－EGFP－T7，转染ST细胞，筛选得到稳定表达T7 RNA聚合酶的细胞系ST/T7。通过RT－PCR检测，可以从ST/T7细胞系中扩增到T7 RNA聚合酶基因的转录产物，用含有T7启动子控制下的红色荧光蛋白基因的表达质粒转染该细胞系，可观察到红色荧光蛋白的表达。本发明ST/T7细胞系能反式提供T7 RNA聚合酶，可用于猪瘟病毒等一些正链RNA病毒的反向遗传操作，还可作为体外转录表达系统，用于研究基因的结构与功能。