一种节旋蓝细菌质粒的分离与纯化方法

摘要

一种分离与纯化节旋蓝细菌质粒的方法。常规的CTAB法或SDS法虽均能提取出清晰的基因组DNA，但用SDS法提不到质粒，用CTAB法也只能提到隐约可见、模糊的质粒，不能满足研究需要。本发明的CTAB－蛋白酶K法，即在CTAB提取液及第一次沉淀后的DNA溶解液中加入适量的蛋白酶K，不仅能提得清晰的基因组DNA，而且还能得到清晰的质粒；进一步用本发明的凝胶冻融－高速离心纯化法，即将质粒所在的凝胶带切入灭菌离心管中，加入约与胶块等体积的TE缓冲液并于－20℃冷冻60min后取出并融化，转至铺有灭菌脱脂棉或玻璃棉的微孔离心柱中13,000rpm离心15min，质粒即在离心管底部的溶液中，能得到高质量、完整的质粒。