一种均相荧光免疫检测领域新型荧光物质组合技术

摘要

本发明涉及一种均相荧光免疫检测领域荧光物质新型组合技术。技术方案是分别制备铕(Eu)和阿莱克萨红(Alexa 680)荧光纳米微球，并分别标记同一抗原的两株单克隆抗体。两种荧光纳米微球标记抗体同时加入到检测反应液中，用时间分辨荧光检测仪或荧光分光光度计在激发光为340nm，发射光730nm处检测反应液的荧光强度。如果反应液中存在待测抗原，将形成抗原、抗体复合物，使Eu荧光纳米微球和Alexa 680荧光纳米微球紧密接触，Eu荧光纳米微球受到340nm紫外光激发后，发射出的550－700nm荧光可以进一步激发Alexa 680发射出710－750nm荧光。以梯度稀释的已知抗原作标准曲线，可计算出待测样品中目的抗原的浓度。以铕(Eu)和阿莱克萨红(Alexa 680)两种荧光物质组合，采用均相免疫检测法来检测待测抗原的浓度，Eu发射光与Alexa 680发射光之间没有重叠，可避免目前Eu与Cy5或Cy3等荧光染料组合目的荧光信号与本底荧光之间重叠和干扰问题，显著提高730nm荧光信号的信噪比，可广泛用于细胞因子、激素和疾病标志蛋白的定量检测。