用于控制、预防和治疗肥胖和进食障碍的组合物和方法

摘要

提供了防止、治疗或控制与肥胖、饮食和营养相关的病症或失调的组合物和方法。提供的方法概括地包括为了防止、治疗或控制与肥胖、饮食和营养相关的病症和失调，将胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求2005年3月31日申请的U.S.临时专利申请号 60/667,335，2005年3月31日申请的U.S.临时专利申请号60/666,681， 2005年4月28日申请的U.S.临时专利申请号60/675,441，和2006年 1月20日申请的U.S.临时专利申请号60/760,583，在此将每篇的全部 内容引入用于所有目的。

技术领域

本发明涉及药物领域，特别涉及健康、饮食和营养领域。本发明 涉及肽的用途，更特别地涉及胰淀素(amylin)和胰淀素激动剂的用 途。

发明背景

包括胰淀素、降钙素、降钙素基因相关肽(CGRP)、肾上腺髓质 素(ADM)和促黑激素(也称为“AFP-6”)的肽激素的胰淀素家族， 是通常涉及代谢病症和失调的肽激素家族。已经报道了通常通过结合 两个密切相关类型IIG-蛋白结合的受体，降钙素受体(CTR)和降钙 素受体样受体(CRLR)，来介导胰淀素家族肽激素的生物作用。克隆 和功能研究已经显示出，CGRP、ADM和胰淀素与CTR或CRLR和 受体活性修饰蛋白(RAMP)的不同组合相互作用。认为需要RAMP 和CTR或CRLR的共同表达来产生降钙素、CGRP、ADM和胰淀素 的功能受体。还没有报道过AFP-6的特异性受体；然而，结合研究表 明AFP-6结合所有胰淀素家族的已知受体。

总的说来，胰淀素调节胃排空，并抑制胰高血糖素分泌和食物摄 入，因此调节循环中葡萄糖出现的速率。在人类试验中，胰淀素类似 物，普兰林肽，已经显示出降低体重或体重增加。胰淀素在治疗代谢 病症如糖尿病和肥胖中是有效的。胰淀素还用于治疗疼痛、骨病、胃 炎，调节脂质，特别是甘油三酯，或影响身体组成如优选损耗脂肪和 保持瘦组织。参见，例如，U.S.专利No.5,175,145，5,677,279，5,405,831， 6,114,304和U.S.专利申请公开No.2002-0010133，2003-0130177， 2004-0022807和2005-0197287。

激素命名为降钙素(CT)是因为其应答诱导的血钙过多而分泌以 及其快速的降血钙(hypocalcemic)效果。CT对血浆钙水平具有作用 并抑制破骨细胞功能，并广泛用于治疗骨质疏松。在治疗上，鲑鱼CT (sCT)看来似乎提高了骨密度并降低了骨折率，具有最小的副作用。 在过去25年内CT还成功用作骨的佩吉特式病的治疗，这是一种可以 导致一个或多个骨骼部位扩大或畸形骨的慢性骨骼病。CT还广泛使 用是因为其对骨质疏松过程中经受的骨疼痛的效果，尽管对于该效果 的机理还没有得到清楚的了解。

降钙素基因相关肽(CGRP)是一种神经肽，其受体广泛分布于 体内，包括神经系统和心血管系统。这种肽似乎能调节感官神经传递 且是迄今为止发现的最有效内源血管扩张肽的一种。对于CGRP报道 的生物效果包括：炎症中物质P的调节，神经肌肉接头处的烟碱受体 活性，胰腺酶分泌的刺激，胃酸分泌的降低，外周血管扩张，心跳加 速，神经调节，钙代谢的调节，生骨刺激，胰岛素分泌，体温提高和 食物摄入降低(Wimalawansa(1997)Crit Rev Neurobiol.11：167-239)。

肾上腺髓质素(ADM)几乎处处表达，含有肽的组织比不含的多 得多。Hinson等(2000)Endocrine Reviews 21：138-167详细描述了 ADM对心血管系统，细胞生长，中枢神经系统和内分泌系统的作用， 具有各种生物作用，包括，血管扩张，细胞生长，激素分泌的调节， 和尿纳排泄。

AFP-6(即，促黑激素)的表达主要在垂体和胃肠道。在体内研 究中，AFP-6给药导致正常和自发高血压大鼠中的血压下降且小鼠中 的AFP-6体内给药导致胃排空和食物摄入的抑制(Roh等，(2004)J. Biol.Chem.279：7264-7274)。

估计约64％美国人超重或肥胖(大概约97百万成人)，通常认为 这些数量正在递增。肥胖或超重实质性地提高了以下疾病的死亡率风 险：高血压；血脂异常；2型糖尿病；冠心病；中风；膀胱病；胆囊 病；骨关节炎；睡眠窒息和呼吸问题；和子宫内膜、乳房、前列腺和 结肠癌。较高的体重还与所有原因死亡率的提高相关。此外，肥胖或 超重可以导致人对其自身具有消极的自我形象。

在人类中，认为超重或肥胖的患者是具有等于或高于25的身体 质量指数(BMI)的那些。BMI是表示体重与身高的关系(或比例) 的常用测量。这是其中以公斤计的人体重除以以米计的身高的平方 (即，wt/(ht)²)的数学式。认为具有25至29.9BMI的个体是超重的， 同时认为30至39.9BMI的个体是肥胖的，认为具有40或更大BMI 的个体是病态肥胖的。根据对成人超重和肥胖的鉴定、评价和治疗的 NIH临床准则，认为具有25或更大BMI的所有成人(18岁或更大) 作为超重和肥胖的结果处于早死和残废的风险中。随着个体肥胖严重 程度的提高，这些健康风险更加提高。

出于这些原因，对治疗肥胖存在各种关注。现有治疗包括标准饮 食和锻炼，非常低热饮食，行为治疗，包括食欲抑制剂、生热药物、 食物吸收抑制剂的药物治疗，机械装置，如jaw wiring、腰带和气球， 以及外科手术，如胃旁路。Jung等(1991)Clinical Endocrinology 35： 11-20；Bray(1992)Am，J.Clin，Nutr.55：538S-544S。

通常，然而，尽管消耗脂肪是理想的，消耗瘦身体质量(蛋白质) 不是。瘦身体质量在代谢和生理上是高度活性的，并且大小通常是在 遗传上限定和维持的。瘦身体质量含有所有身体蛋白质。不存在真实 的蛋白质存储，因为每个蛋白质分子在维持体内平衡中具有作用。认 为身体蛋白质的损耗对个体的健康是有害的。瘦身体质量中的大部分 蛋白质在骨骼肌肉块中。瘦身体质量是50-60％重量的肌肉质量，剩余 的是骨和腱。蛋白质构成肌肉、内脏、红细胞和结缔组织中的关键细 胞结构。控制代谢的酶和维持免疫功能的抗体也是蛋白质。因此，理 想的是防止或最小化瘦身体物质的损耗，即使同时减少身体脂肪。

热量限制，与其形式无关，可以引起身体蛋白质的分解代谢并产 生负的氮平衡。因此，补充蛋白质的饮食具有提高的流行性，作为热 量限制过程中降低氮损耗的方法。已经报道了改进的保持蛋白质的禁 食在体重减轻中是有效的。Lee等(1992)Clin.Pediatr.31：234-236。 然而，这些饮食只产生适度的氮保持。存在促进脂肪损耗但保持瘦身 体质量或最小化其损耗的有效途径的需要。

通过许多因素，包括食欲，食物利用率，家族，同辈和文化习惯， 来控制进食，并在自愿控制下尝试。目前的流行趋势，特定食物的促 销活动以及一些活动和职业高度促进了为瘦于健康需要的体重的节 食。进食障碍涉及各种进食行为的严重紊乱，如食物摄入的极端和不 健康的降低或严重的暴食，以及体型或体重的苦恼感或极端关注。研 究者正在研究怎样和为什么最初自愿行为，如进食比通常更小或更大 量的食物，在一些人中在某些点超过对照并发展成进食障碍。对食欲 控制的基础生物学的研究和通过长期暴食或饥饿的改变具有未揭示的 大量复杂性，但是从长远看来具有形成用于进食障碍的新药物治疗的 潜能。

进食障碍的主要类型是神经性厌食和神经性暴食。第三种，暴食 障碍，已经提出但还未批准为正式的精神病诊断。进食障碍通常在青 春期或成人期早期过程产生，但是一些报道表明它们的发作可能在儿 童期或成人期后期过程中发生。进食障碍通常与其他精神障碍如抑 郁、物质滥用和焦虑症共同发生。此外，患有进食障碍的人可以经受 各种身体健康并发症，包括严重的心脏病和肾衰竭，这些疾病可能导 致死亡。因此，进食障碍作为真实和可治疗疾病的认识是至关重要的。

仍然存在对改变身体组成以及控制、预防或治疗肥胖症和进食障 碍以及相关病症和障碍的有效方法和组合物的需要。

在此引用的所有专利、专利申请和出版物因此以其整体引入作为 参考。

概述

一方面中，提供的方法包括胰淀素或胰淀素激动剂，包括胰淀素 类似物和胰淀素衍生物，在控制患者暴食的方法中的用途。一个实施 方案中，提供了控制暴食的方法，其中该方法包括将控制或降低患者 暴食有效量的胰淀素或胰淀素激动剂给药于需要的患者。一个实施方 案中，提供了控制患者暴食的方法，包括在一天内患者最可能暴食的 时间将有效量的胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。一个实施方案 中，提供了控制患者暴食的方法，进一步包括给药于患者至少一种抑 制一天内患者不可能暴食时间饥饿的其他药物。一些实施方案中，至 少一种抑制饥饿的其他药物是西布茶明、奥利司他、PYY或PYY类 似物、CB-1拮抗剂如利莫那班(rimonabant)、瘦素或瘦素类似物或 苯丁胺。一些实施方案中，至少一种抑制饥饿的其他药物具有比胰淀 素更长的体内半衰期。

一个实施方案中，提供了控制暴食的方法，其中该方法包括将控 制或降低患者应答应激条件的暴食有效量的胰淀素或胰淀素激动剂给 药于需要的患者。另一个实施方案中，提供了控制暴食的方法，其中 该方法包括将控制或降低患者不应答应激条件的暴食有效量的胰淀素 或胰淀素激动剂给药于需要的患者。

在一些其中患者需要控制暴食的实施方案中，暴食的控制包括暴 食情况频率的降低，暴食情况持续时间的降低，暴食情况过程中消耗 的总量的降低，抵抗暴食情况发作困难的降低，或其任意组合。在一 些其中患者需要控制暴食的实施方案中，身体不饥饿时患者进食大量 食物，患者进食直至不舒服的饱足，情绪上苦恼时患者进食，患者已 经诊断为焦虑症如强迫症，所述患者已经诊断为患有冲动控制问题， 患者已经诊断为物质滥用者如药物滥用者或酒精滥用者，或其任意组 合。

一方面中，提供的方法包括胰淀素或胰淀素激动剂，包括胰淀素 类似物和胰淀素衍生物，用于改变患者偏食的用途。一个实施方案中， 提供了改变患者偏食的方法，包括将与给药不存在下患者的偏食相比 较改变患者偏食有效量的胰淀素或胰淀素激动剂给药于渴望改变偏食 的患者。

一些实施方案中，偏食的改变包括对高脂肪食物偏好的降低、高 脂肪食物摄入的降低、对甜食偏好的降低、甜食摄入的降低、对巧克 力食物偏好的降低、巧克力食物摄入的降低、对咸食偏好的降低、咸 食摄入的降低，或其任意组合。在一些实施方案中，偏食的改变包括 对低脂食物偏好的提高、低脂食物摄入的增加，或两者。

在一个实施方案中，提供了改变患者偏食的方法，包括将改变患 者应答应激条件的偏食的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于渴望改 变偏食的患者。在一个实施方案中，提供了改变患者偏食的方法，包 括将改变患者未应答应激条件的偏食的有效量胰淀素或胰淀素激动剂 给药于渴望改变偏食的患者。

一方面中，提供的方法包括胰淀素或胰淀素激动剂，包括胰淀素 类似物和胰淀素衍生物，用于治疗、降低或防止患者食物渴求(food cravings)的用途。在一个实施方案中，提供了用于治疗、降低或防止 患者食物渴求的方法，包括将治疗、降低或防止患者食物渴求有效量 的胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。一些实施方案中，患者渴求甜 食、巧克力、咸味食物、咸食、脂肪食物或其任意组合。一些实施方 案中，患者食物渴求的治疗包括对特定食物渴求频率的降低、对特定 食物渴求持续时间的降低、对特定食物渴求的强度降低、抵抗对特定 食物渴求难度的降低、食用特定食物的频率降低或其任意组合。

在一方面中，提供的方法包括胰淀素或胰淀素激动剂，包括胰淀 素类似物和胰淀素衍生物，用于降低患者中与降低的热量摄入相关的 应激的用途。一个实施方案中，提供了用于降低患者中与降低的热量 摄入相关的应激的方法，包括将降低患者与降低的热量摄入相关的应 激有效量的胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。在一个实施方案中， 患者与降低的热量摄入相关的应激呈现为抑郁。

一方面中，提供的方法包括胰淀素或胰淀素激动剂，包括胰淀素 类似物和胰淀素衍生物，用于降低患者服用减轻体重药物引起的压力 的用途。在一个实施方案中，提供了降低患者服用减轻体重药物引起 的压力的方法，包括将降低患者服用减轻体重药物引起的压力的有效 量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。在一个实施方案中，服用引起 体重减轻的药物引起的患者压力是由靶向大脑的药物引起的，如西布 茶明和利莫那班(rimonabant)。

一方面中，提供的方法包括胰淀素或胰淀素激动剂，包括胰淀素 类似物和胰淀素衍生物，在调节患者代谢速率的方法中的用途。在一 个实施方案中，提供了提高患者代谢速率的方法，包括将提高患者代 谢速率的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。在另一个实施方 案中，提供了保持患者代谢速率的方法，包括将保持患者代谢速率的 有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。在另一个实施方案中，提 供了方法减轻患者代谢速率降低的方法，包括将减轻患者代谢速率降 低的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。在一些实施方案中， 患者这样的代谢速率降低可能是由于降低热量的饮食、限制饮食或减 肥引起的。

在另一个实施方案中，提供了降低至少一个代谢平台期(metabolic plateau)的方法，包括将降低患者至少一个代谢平台期的有效量胰淀 素或胰淀素激动剂给药于患者。在一些实施方案中，代谢平台期的降 低是代谢平台期持续时间的降低、代谢平台期频率的降低、代谢平台 期开始的延迟或其任意组合。

在其中患者的代谢速率得到调节或患者的代谢平台期得到降低的 一些实施方案中，患者的代谢速率提高至少约5％，与其他相同的患 者在相同的时间段在基本上相似或相同的条件且没有给药胰淀素或胰 淀素激动剂下相比较。

在其中患者的代谢速率得到调节或患者的代谢平台期得到降低的 一些实施方案中，患者食用降低热量的饮食、限制饮食、已经减肥、 正在减肥、正在开始降低热量的饮食或正在开始限制饮食。在其中患 者的代谢速率得到调节或患者的代谢平台期得到降低的一些实施方案 中，随着胰淀素或胰淀素激动剂的给药，患者的瘦组织质量没有减少 或瘦组织质量增加。在一些实施方案中，患者处于产生降低的代谢速 率的风险中。在其中患者正在开始降低热量的饮食或限制饮食的一些 实施方案中，在降低热量的饮食或限制饮食开始时或之前开始胰淀素 或胰淀素激动剂的给药。在其中患者代谢速率提高的一些实施方案 中，患者已经诊断为精神障碍，如边缘性人格障碍或抑郁。

在另一个概括的方面中，提供的方法包括胰淀素或胰淀素激动 剂，包括胰淀素类似物和胰淀素衍生物，用于改变患者的脂肪组成或 分布的用途。在一个实施方案中，提供了通过提高代谢速率降低患者 脂肪组织的方法，包括将提高患者代谢速率的有效量胰淀素或胰淀素 激动剂给药于患者。在其中通过代谢速率提高降低患者脂肪组织的一 些实施方案中，随着胰淀素或胰淀素激动剂的给药，患者的瘦组织质 量没有降低、得到保持或增加。在其中通过代谢速率提高降低患者脂 肪组织的一些实施方案中，脂肪组织作为总身体质量的百分比降低， 例如，降低至少1％的总身体质量。在其中通过代谢速率提高降低患 者脂肪组织的一些实施方案中，患者食用降低热量的饮食或限制饮 食。

在一个实施方案中，提供了改变患者脂肪分布的方法，包括将改 变患者脂肪分布的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。在一个 实施方案中，提供了在患者中产生更理想脂肪分布的方法，包括将在 患者中产生更理想脂肪分布的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患 者。在一个实施方案中，提供了预防或降低患者异位脂肪分布的方法， 包括将预防或降低患者异位脂肪分布的有效量胰淀素或胰淀素激动剂 给药于患者。在另一个实施方案中，提供了降低患者内脏脂肪含量的 方法，包括将降低患者内脏脂肪的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药 于患者。

在其中患者的脂肪分布得到改变的一些实施方案中，该方法降低 了产生代谢紊乱的风险，代谢紊乱选自多囊卵巢综合征、代谢综合症 和心血管疾病。在其中患者的脂肪分布得到改变的一些实施方案中， 该方法导致较高的皮下脂肪比内脏脂肪的比例，与患者相比较在胰淀 素或胰淀素激动剂给药时。在其中患者的脂肪分布得到改变的一些实 施方案中，该方法导致皮下脂肪与内脏脂肪较高比例的。在其中患者 的脂肪分布得到改变的一些实施方案中，该方法导致异位脂肪的降低 或内脏脂肪的降低或其组合。在其中患者的脂肪分布得到改变的一些 实施方案中，该方法进一步导致瘦身体质量的增加，例如，作为肌肉 细胞质量增加的结果。在其中患者的脂肪分布得到改变的一些实施方 案中，内脏脂肪或异位脂肪或两者以高于皮下脂肪的速率得到代谢。

在另一个方面中，提供的方法包括胰淀素或胰淀素激动剂，包括 胰淀素类似物和胰淀素衍生物，用于减轻病态肥胖患者体重的用途。 在一个实施方案中，提供了降低病态肥胖患者重量的方法，包括将所 述患者体重降低至低于病态肥胖并将进一步降低患者重量的有效量胰 淀素或胰淀素激动剂给药于患者。在一个实施方案中，提供的方法包 括最初在给予胰淀素或胰淀素激动剂之前，将患者的BMI降低至低于 40的水平。在其中病态肥胖患者的重量得到减轻的一些实施方案中， 病态肥胖患者具有40或更高的身体质量指数。在一个实施方案中， 提供了减轻具有40以下BMI的患者的体重的方法，包括将降低患者 体重的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。

在其中在给药胰淀素或胰淀素激动剂之前病态肥胖患者的体重得 到降低的一些实施方案中，通过降低热量摄入、增加身体活动、药物 治疗、肥胖外科手术或其任意组合来减轻患者的重量。在一个实施方 案中，肥胖外科手术是胃旁路外科手术。在一些实施方案中，该方法 进一步包括给药有效量的至少一种第二种减肥剂，例如，西布茶明、 奥利斯他、瘦素或利莫那班。在一些实施方案中，胰淀素或胰淀素激 动剂与至少第二种减肥剂一起给药，同时或按次序。

在另一个方面中，提供的方法包括给予患者胰淀素或胰淀素激动 剂，包括胰淀素类似物和胰淀素衍生物，单次剂量，一天一次或多次， 用于患者减轻重量。在一些实施方案中，胰淀素或胰淀素激动剂和至 少一种已知导致体重减轻的其他药物一起给药，同时或按次序。在一 些实施方案中，给药的至少一种已知导致体重减轻的其他药物作为单 次剂量或作为连续剂量来给药。

在另一个方面中，提供的方法包括给予患者胰淀素或胰淀素激动 剂，包括胰淀素类似物和胰淀素衍生物，连续剂量，用于减轻患者体 重。在一些实施方案中，胰淀素或胰淀素激动剂与至少一种已知导致 体重减轻的其他药物一起给药，同时或按次序。在一些实施方案中， 给药的至少一种已知导致体重减轻的其他药物作为单次剂量或作为连 续剂量来给药。

在另一个方面中，提供的方法包括胰淀素或胰淀素激动剂的用 途，包括胰淀素类似物和胰淀素衍生物，用于治疗已经进行肥胖外科 手术患者的骨质丢失。在一个实施方案中，提供降低已经进行肥胖外 科手术患者骨质丢失的方法，包括将降低患者骨质丢失的有效量的胰 淀素或胰淀素激动剂给药于患者。在其中用胰淀素或胰淀素激动剂治 疗骨质丢失的一些实施方案中，该方法进一步包括给药至少一种已知 能有效治疗骨质丢失的其他药物，例如，利塞膦酸盐、阿仑膦酸盐、 雷洛昔芬、降钙素或特拉帕肽。

在另一个方面中，提供的方法包括胰淀素或胰淀素激动剂，包括 胰淀素类似物和胰淀素衍生物，用于提高患者生热作用的用途。在一 个实施方案中，提供了提高患者生热作用的方法，包括将提高患者生 热作用的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。

在另一个方面中，提供的方法包括胰淀素或胰淀素激动剂，包括 胰淀素类似物和胰淀素衍生物，用于提高患者氧化代谢的用途。在一 个实施方案中，提供了提高患者氧化代谢的方法，包括将提高患者氧 化代谢的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。

本发明还涉及肥胖、进食障碍和相关病症、障碍和疾病的控制、 治疗和预防，以及胰淀素或胰淀素激动剂和本发明的组合物用于制造 治疗这些病症药物的用途。

附图简述

图1A-1D是描绘了胰淀素对应激和非应激条件下偏食的效果的 图。在这些图中，R表示接受束缚应激的动物和C表示未接受束缚应 激的对照动物。图1A描绘了作为基准百分比的平均蔗糖对食物的比 例，图1B描绘了总的食物消耗，图1C描绘了所消耗的平均总千卡， 图1D描绘了所消耗的平均蔗糖千卡。

图2是描绘了胰淀素对来自高脂肪食物的热量摄入百分比的作用 的图。

图3是描绘了胰淀素对来自高脂肪和低脂食物的总热量摄入的作 用的图。

图4是描绘了偏食研究中胰淀素对总体重增加的作用的图。

图5是描绘了偏食研究中胰淀素对身体组成的作用的图。

图6是描绘了胰淀素对暴食等级平均总分的作用的图。空心条表 示所有安慰剂接受者(n＝53)、实心条表示普兰林肽TID接受者 (n＝59)，带有阴影线的条表示普兰林肽CSI接受者(n＝47)。

图7是描绘了从基准开始暴食等级平均总分改变的图。

图8是描绘了DIO大鼠28天的累积食物摄入的图，DIO大鼠接 受载体(圆圈)或胰淀素(三角形)1-14天，此后只接受载体。

图9是描绘了DIO大鼠百分比体重(载体校准的)改变的图，DIO 大鼠接受载体(圆圈)或胰淀素(三角形)1-14天，此后只接受载体。

图10A和10B是描绘了给药载体或胰淀素1-14天和只给药载体 15-28天对体重作用的图。图10A是描绘了对身体脂肪作用的图，图 10B是描绘了对身体蛋白质作用的图。

图11是描绘了过夜禁食小鼠食物消耗对示例化合物，化合物2 的剂量剂量依赖性降低的图。

图12A和12B是描绘了胰淀素激动剂对饮食诱导肥胖(DIO)大 鼠的热量摄入(图12A)和体重(图12B)作用的图。

图13是描绘了示例化合物对身体组成作用的图。

图14A和14B是描绘了示例化合物(化合物1)对胃排空(图14A) 和血钙过少(图14B)的图。

图15是描绘了胰淀素，单独或结合西布茶明，对DIO大鼠体重 的作用的图。实心方块表示载体，实心圆圈表示西布茶明单独，空心 三角形表示胰淀素单独，和实心三角形表示胰淀素和西布茶明的组 合。

图16A和16B是描绘了在两周内单独或结合给药西布茶明 (3mg/kg/天)和胰淀素(100μg/kg/天)对体重的作用的图。图16A 是描绘了对身体脂肪作用的图，图16B是描绘了对身体蛋白质作用的 图。

图17是描绘了给药各种剂量CB-1拮抗剂，单独或结合胰淀素 (100μg/kg/天)，对体重作用的图。圆圈部位中结合的时间过程描绘 于图18A和18B中。

图18A和18B是描绘了给药CB-1拮抗剂和胰淀素，单独或结合， 对体重作用的图。图18A描绘了给药CB-1拮抗剂(1mg/kg/天)和胰 淀素(100μg/kg/天)的作用，单独或结合，图18B描绘了给药CB-1 拮抗剂(3mg/kg/天)和胰淀素(100μg/kg/天)的作用，单独或结合。

发明详述

我们已经发现了用于控制、治疗和预防肥胖、进食障碍以及相关 病症和障碍的各种方法和组合物。在一个方面中，提供了减轻渴望或 需要的患者的体重的方法和治疗或预防与体重减轻相关的病症，如代 谢速率和生热作用的改变。在另一个方面中，提供了减轻病态肥胖患 者体重的方法，包括给药有效量的胰淀素或胰淀素激动剂。还提供了 减轻肥胖外科手术相关的骨质丢失的方法。在另一个方面中，提供了 用于控制、预防或治疗与进食相关的病症或障碍，如暴食、食物渴求 和食物相关应力障碍。

本公开还涉及令人惊讶的发现：胰淀素和胰淀素激动剂能够改变 患者在应激和非应激条件下的偏食。因此，在另一个方面中，提供了 改变偏食的方法。偏食的改变包括对特定食物类型偏好的改变，特定 食物类型摄入量的改变，渴求频率、渴求持续时间、渴求强度、抵抗 渴求的难度的改变及其任意组合。在一些实施方案中，偏食包括对甜 食、巧克力食物、咸食及其任意组合的偏好。

在此所述的方法使用胰淀素或胰淀素激动剂的给药，用于控制、 预防或治疗这样的病症或障碍。

尽管“肥胖”通常定义为身体质量指数超过30，出于本发明的目 的，任何患者，包括身体质量指数低于30但需要或希望减轻体重或 防止体重增加的那些，包括于“肥胖”的范围中。因此，具有低于30 和25和以上(认为超重)或低于25BMI的患者也包括于本发明的患 者中。病态肥胖指的是40或更高的BMI。在一个实施方案中，“需要 的患者”是肥胖的。胰岛素抵抗、葡萄糖不耐受性或具有任何形式糖 尿病(例如，1型、2型或妊娠糖尿病)的患者可以得益于这种方法。 在另一个实施方案中，患者可能患有或易于患有与进食相关的病症如 暴食或食物渴求。

“患者”可以包括任何哺乳动物，包括人。“患者”还可以包括宠 物(例如，狗、猫、马)，以及其他动物(例如，牛、绵羊、猪、山 羊)。得益于在此公开的方法的患者可以是超重或肥胖的；然而，他 们也可以是瘦的。得益于在此所公开方法的患者可以是渴望减轻体重 的或可能具有进食障碍，如暴食，或进食病症，如食物渴求。得益于 在此公开的方法的患者可能渴望改变偏食。除了这些病症以外，他们 可能具有代谢紊乱或病症。示例性代谢紊乱包括糖尿病、代谢综合症、 胰岛素抵抗和血脂异常。患者可以是任何年龄。因此，这些障碍可以 在年轻人和成人(在此定义为65岁或以下的那些)以及婴儿、儿童、 青少年和老年人(在此定义为超过65岁)中发现。实际上，特定部 分的人群可能特别倾向于患有特定病症，如青少年和年轻人的进食障 碍。

“代谢速率”意思是每单位时间释放/消耗的能量。可以通过食物 消耗、作为热量释放的能量或代谢过程中使用的氧来估算每单位时间 的代谢。想要减轻体重时通常理想的是具有较高的代谢速率。例如， 具有高代谢速率的人比对于该活动具有低代谢速率的人能够消耗更多 的能量(身体燃烧更多的热量)来进行活动。

如在此所用的，“瘦组织质量”或“瘦身体质量”指的是肌肉和骨。 瘦身体质量不必定指的是无脂肪质量。瘦身体质量在中枢神经系统(脑 和脊髓)、骨髓和内脏内含有少量(大概3％)脂肪。根据密度来测量 瘦身体质量。测量脂肪质量和瘦组织质量的方法包括，但不限于，水 下称重、空气置换测热法、x-射线、双重能量x-射线吸收测量(DEXA) 扫描、MRI和CT扫描。在一个实施方案中，使用水下称重测量脂肪 质量和瘦组织质量。

“脂肪分布”意思是体内脂肪堆积的位置。这样的脂肪堆积位置 包括皮下、内脏和异位脂肪存储。

“皮下脂肪”意思就在皮肤表面下的脂质存储。使用测量皮下脂 肪可用的任何方法来测量患者的皮下脂肪含量。测量皮下脂肪的方法 是本领域已知的，例如，U.S.专利No.6,530,886中所述的那些，在此 将其整体引入作为参考。

“内脏脂肪”意思是作为腹部内脂肪组织的脂肪堆积。内脏脂肪 围绕内脏并可以通过肝脏代谢来产生血液胆固醇。内脏脂肪与提高的 病症风险相关，这些病症如多囊卵巢综合症、代谢综合症和心血管疾 病。

“异位脂肪存储”意思是构成瘦身体质量的组织和器官(例如， 骨骼肌、心脏、肝脏、胰腺、肾脏、血管)内或周围的脂质堆积。通 常，异位脂肪存储是体内传统脂肪组织存储外的脂质累积。

如在此所用的，以及本领域充分理解的，“治疗”是用于获得有 益或所需结果，包括临床结果的方法。“治疗”或“减轻”疾病、障 碍或病症意思是与未治疗障碍相比较，症状的程度、不利的临床呈现 或两者，障碍或病态的程度，不利临床呈现减轻和/或时间过程进展减 缓或延长。对于在此公开的方法的目的，有益或所需的临床结果包括， 但不限于，一种或多种症状的减轻或缓解，疾病程度的消除，病态的 稳定(即没有恶化)，疾病进展的延迟或减缓，疾病的缓解或减轻以 及好转(不管是部分或全部)不管是可检测的或不可检测的。“治疗” 还可以意思是延长存活，与如果没有接受治疗预期的存活相比较。此 外，通过给药一剂药时不必定发生治疗，但是给药一系列药剂时通常 发生。因此，可以以一次或多次给药来给药治疗有效量，这是足以减 轻疾病、障碍或病症的含量，或足以治疗疾病、障碍或病症的含量。

如在此所用的，单数形式“一个”、“一种”和“这个”包括复数 指代物除非另外指出或从文中明显看出。例如，从文中可以明显看出， “一种”胰淀素激动剂可以包括一种或多种胰淀素激动剂。

在一方面中，在此提供的方法用于提高患者的代谢速率，降低患 者代谢速率的降低，或保持患者的代谢速率。在一个实施方案中，代 谢速率可以涉及超过瘦身体组织优选使用身体脂肪作为能量源。在一 个方面中，给药胰淀素或胰淀素激动剂后瘦身体质量没有降低。在另 一个方面中，给药胰淀素或胰淀素激动剂后减少或防止了瘦身体质量 的降低。再一方面中，给药胰淀素或胰淀素激动剂后增加了瘦身体质 量。可以通过比较脂肪组织与瘦身体组织的含量，该含量通过在治疗 阶段开始和结束时测量总体重和脂肪含量来确定，来测定这种对于脂 肪作为能量源的优先选择。代谢速率提高是患者在一定的时间段内使 用热量或另一种能量源的较高水平，与患者在另一个时间段内在没有 给药胰淀素或胰淀素激动剂的基本相似或相同条件下的热量或其他能 量源的使用水平相比较。在一些实施方案中，患者的代谢速率提高， 即使与胰淀素或胰淀素激动剂给药不存在下相比较患者的热量摄入降 低。与胰淀素或胰淀素激动剂给药不存在下相比较，可以降低热量摄 入，例如，由于降低热量的饮食、限制饮食或提高的饱腹感或降低饥 饿。在一个实施方案中，患者代谢速率提高至少约5％，在其他实施 方案中，患者的代谢速率提高至少约10％、15％、20％、25％、30％或 35％，与患者在另一个时间段在没有给药胰淀素或胰淀素激动剂的基 本上相似或相同条件下的热量或其他能量源的使用水平相比较。使用 呼吸热量计测量代谢速率的增加。该实施方案中所用的胰淀素或胰淀 素激动剂的有效量为有效提高患者代谢速率的含量。

在另一个实施方案中，提供了降低患者代谢速率降低的方法。这 样的代谢速率降低可以是任何导致代谢速率降低的病症或营养或物理 疗法的结果，例如由于降低热量的饮食、限制饮食或体重减轻。限制 饮食包括对饮食中允许的食物类型或食物含量或两者的容许或禁止， 或两者，不必定基于热量。例如，作为单独的饮食，具有降低代谢速 率的身体补偿基于较低的热量摄入。本质上，身体下调对食物的需求， 因此依靠较少的食物生活。随着饮食持续，降低了热量摄入的极限。 结束饮食时，由于降低的热量摄入极限和较低的基础代谢速率，个体 通常增加体重同时进食正常的饮食(NIH Technology Assessment Conference Panel(1992)Ann.Intern.Med.116：942-949；Wadden(1993) Ann.Intern.Med.119：688-693)。在一个方面中，提供了降低患者代 谢速率损耗的方法，其中代谢速率损耗是降低热量的饮食或体重减轻 的结果。使用这样的方法，患者中患者代谢速率降低至少减轻约10％、 15％、20％、25％、30％、3 5％、40％、50％、60％、70％、80％、90％ 或95％。对于这样的方法，在导致代谢速率损耗或降低的病症或营养 或物理疗法开始时给药胰淀素或胰淀素激动剂是理想的。然而，还考 虑到在病症或营养或物理疗法开始之前开始胰淀素或胰淀素给药。在 一种情况中，使用呼吸热量计测量代谢速率。该实施方案中所用的胰 淀素或胰淀素激动剂的有效量是有效降低患者代谢速率降低的含量。

在另一个方面中，提供了降低代谢平台期的方法，其中该方法包 括将有效量的胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。在一个实施方案 中，患者正在减肥，或已经减肥，例如，由于降低热量的饮食、增加 锻炼或其结合。“代谢平台期”意思是身体调整来改变热量或能量输 入时稳定代谢速率的时间间隔。热量输入或消耗的改变可以是，例如， 降低热量的饮食或增加的身体活动的结果。例如，可以在减肥方案过 程中体重减轻减缓或停止时观察到这样的平台期。在一个实施方案 中，本发明的方法降低了患者代谢平台期的持续时间，与其他相同患 者在相同时间段内在没有给药胰淀素或胰淀素激动剂的基本相似或相 同条件下的代谢平台期的持续时间相比较。在另一个实施方案中，提 供的方法降低了代谢平台期的频率，与在其他相同患者中在相同时间 段内在没有给药胰淀素或胰淀素激动剂的基本相似或相同条件下的代 谢平台期的频率相比较。再一实施方案中，提供的方法延迟了代谢平 台期的开始，与其他相同患者在相同时间段内在没有给药胰淀素或胰 淀素激动剂的基本相似或相同条件下的代谢平台期的开始相比较。在 一个实施方案中，通过绘制降低或没有体重减轻的时间段来鉴定代谢 平台期。在一个实施方案中，降低至少一个代谢平台期。在其他实施 方案中，降低至少两、三、四、五、六、七、八、九或十个代谢平台 期。在另一个方面中，与相同或相似条件下没有给药胰淀素或胰淀素 激动剂的患者相比较延迟代谢平台期一天。在其他方面中，患者的代 谢平台期延迟2天、3天、4天、5天、6天、1周、10天、2周或3 周。

再一实施方案中，提供了保持患者代谢速率的方法。在一个实施 方案中，患者处于损耗代谢速率的风险中，例如，由于降低热量的饮 食、限制饮食或预期体重减轻的开始。代谢速率的保持是患者在一个 时间段内的热量或另一种能量源使用水平的维持，与其他相同患者在 相同时间段内在没有给药胰淀素或胰淀素激动剂的基本相似或相同条 件下的热量或其他能量源的使用水平相比较。在一方面中，代谢速率 维持在导致代谢速率降低事件开始之前的患者代谢速率的15％内。在 其他方面中，将代谢速率维持在患者代谢速率10％内、7％内、5％内、 3％内或更少。一方面中，在降低热量的饮食、限制饮食或锻炼方案开 始时给药胰淀素或胰淀素激动剂。

可以使用测定这样速率的任何可用方法来测定代谢速率，例如通 过使用呼吸热量计。这样用于测量代谢速率的方法和装置是本领域已 知的并描述于，例如，U.S.专利No.4,572,208，4,856,531，6,468,222， 6,616,615，6,013,009和6,475,158。或者，可以通过测量饮食阶段后 动物分解代谢的瘦组织对脂肪组织的含量来测定动物的代谢速率。因 此，可以在饮食阶段结束时测量总体重和脂肪含量。在大鼠中，测定 总身体脂肪通常使用的方法是外科手术取出并称重腹膜后脂肪垫，这 是位于腹膜后的身体脂肪，腹膜后是后腹壁和后体壁腹膜之间的区 域。认为垫的重量与动物的百分比身体脂肪直接相关。因为大鼠的体 重和身体脂肪之间的相关性是线性的，肥胖动物具有相应较高百分比 的身体脂肪和腹膜后脂肪垫重量。

在另一个方面中，提供了通过提高患者代谢速率降低脂肪质量的 方法，其中该方法包括将通过提高患者代谢速率降低脂肪质量的有效 量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。脂肪质量可以表示为总身体质 量的百分比。在一些方面中，脂肪质量在治疗过程中降低至少1％、 至少5％、至少10％、至少15％、至少20％或至少25％。在一方面中， 患者的瘦组织质量在治疗过程中没有降低。在另一方面中，患者的瘦 组织质量在治疗过程中维持或增加。在另一方面中，患者食用降低热 量的饮食或限制饮食。“降低热量的饮食”意思是患者每天摄入较少 的热量，与相同患者的正常饮食相比较。在一种情况中，患者每天消 耗至少低50卡路里。在其他情况中，患者每天消耗至少低100、150、 200、250、300、400、500、600、700、800、900、1000卡路里。

在一个实施方案中，提供了改变患者脂肪分布的方法，其中该方 法包括将改变患者脂肪分布的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患 者。在一个方面中，改变由患者提高的内脏脂肪或异位脂肪或两者的 代谢引起。在一些实施方案中，该方法涉及内脏脂肪或异位脂肪或两 者以高于皮下脂肪至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％ 或50％的速率代谢。在一方面中，该方法导致有利的脂肪分布。在一 个实施方案中，有利的脂肪分布是提高的皮下脂肪对内脏脂肪、异位 脂肪或两者的比例。在一个方面中，该方法涉及瘦身体质量的增加， 例如，作为肌肉细胞质量增加的结果。

在另一个实施方案中，提供了降低患者皮下脂肪含量的方法，其 中该方法包括将降低患者皮下脂肪的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给 药于需要的患者。在一个实施方案中，患者皮下脂肪的含量降低至少 约5％。在其他实施方案中，皮下脂肪的含量降低至少约10％、15％、 20％、25％、30％、40％或50％，与给药胰淀素或胰淀素激动剂之前的 患者相比较。

在此所述的方法可以用于降低患者的内脏脂肪含量。在一种情况 中，患者皮下脂肪降低至少约5％。在其他情况中，患者的皮下脂肪 降低至少约10％、15％、20％、25％、30％、40％或50％，与给药胰淀 素或胰淀素激动剂之前的患者相比较。可以通过测定患者内脏脂肪含 量的任何可用方式来测量内脏脂肪。这样的方法包括，例如，通过CT 扫描和MRI的腹部层析X射线摄影法。测定内脏脂肪的其他方法描 述于，例如，U.S.专利No.6,864,415、6,850,797和6,487,445。

在一个实施方案中，提供了防止患者异位脂肪累积或降低异位脂 肪含量的方法，其中该方法包括将防止患者异位脂肪累积或降低异位 脂肪含量的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于需要的患者。在一种 情况中，患者异位脂肪的含量降低至少约5％，与给药胰淀素或胰淀 素激动剂之前的患者相比较。在其他情况中，异位脂肪的含量降低至 少约10％、15％、20％、25％、30％、40％或50％。或者，异位脂肪的 含量与患者皮下脂肪相比较，按比例降低5％、10％、15％、20％、25％、 30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。使用任何可用于 测量异位脂肪的方法来测量患者的异位脂肪。

在另一个实施方案中，提供了在患者中产生更有利脂肪分布的方 法，其中该方法包括将产生有利脂肪分布的有效量胰淀素或胰淀素激 动剂给药于患者。在一个实施方案中，胰淀素或胰淀素激动剂的给药 降低了患者内脏脂肪或异位脂肪或两者的含量。在一个实施方案中， 该方法优先降低内脏或异位脂肪或两者组合的含量，超过皮下脂肪的 降低。这样的方法导致较高比例的皮下脂肪对内脏脂肪或异位脂肪。 这样提高的比例可以导致降低的产生心血管疾病、多囊卵巢综合征、 代谢综合症或其任意组合的风险。在一个实施方案中，以高于皮下脂 肪5％的速率代谢异位或内脏脂肪。在其他实施方案中，以高于皮下 脂肪至少10％、15％、20％、25％、30％、50％、60％、70％、80％、90％ 或100％的速率代谢异位或内脏脂肪。

再一方面中，提供的方法包括治疗有效量的胰淀素或胰淀素激动 剂结合糖皮质激素的使用。糖皮质激素具有提高脂肪质量和降低瘦肉 质量的不利作用。因此，考虑到胰淀素或胰淀素激动剂可以在糖皮质 激素使用有益的条件下结合糖皮质激素使用。

在另一个实施方案中，提供了改变人体测量参数(例如腰围、臀 围、腰臀比例)的方法。腰围是腹部肥胖的测量。在一个实施方案中， 提供了减小患者腰围的方法，其中该方法包括将减小患者腰围的有效 量胰淀素或胰淀素激动剂给药于需要的患者。在一个实施方案中，患 者的腰围减小至少约1％。在其他实施方案中，患者的腰围减小至少 约2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％，与给药胰淀素或 胰淀素激动剂之前的患者相比较。在一个实施方案中，患者的腰围减 小至少约1cm。在其他实施方案中，患者的腰围减小至少约2cm、3cm、 4cm、5cm或6cm，与给药胰淀素或胰淀素激动剂之前的患者相比较。

在另一个实施方案中，提供了减小患者臀围的方法，其中该方法 包括将减小患者臀围的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于需要的患 者。在一个实施方案中，患者的臀围减小至少约1％。在其他实施方 案中，患者的腰围减小至少约2％、3％、4％、5％或6％，与给药胰淀 素或胰淀素激动剂之前的患者相比较。在一个实施方案中，患者等腰 围减小至少约1cm。在其他实施方案中，患者的腰围减小至少约2cm、 3cm、4cm、5cm或6cm，与给药胰淀素或胰淀素激动剂之前的患者相 比较。

还提供了减轻病态肥胖患者重量的方法，首先将患者的重量降低 至低于病态肥胖的水平，然后给药有效量的胰淀素或胰淀素激动剂来 进一步减轻患者重量。将患者重量减轻至低于病态肥胖的方法包括减 少热量摄入、增加身体活动、药物治疗、肥胖外科手术，如胃旁路外 科手术，或前述方法的任意组合。在一个方面中，给药胰淀素或胰淀 素激动剂进一步减轻患者的重量。在另一个实施方案总，提供了降低 具有40或更低BMI患者的身体质量指数(BMI)的方法，通过给药 进一步减轻患者重量的有效量胰淀素或胰淀素激动剂。

在另一个方面中，提供了降低产生代谢紊乱的风险的方法，其中 该方法包括将降低患者重量的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患 者。

在另一个方面中，提供了控制或改变进食行为的方法，其中该方 法包括将控制或改变患者进食行为的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给 药于需要的患者。在一个实施方案中，提供了控制暴食的方法，其中 该方法包括将控制或制止患者暴食的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给 药于需要的患者。在一个实施方案中，在一天中患者最可能暴食的时 间给药胰淀素或胰淀素激动剂。在一方面中，暴食的特征在于1)在 分开的时间段(例如，在任何2-小时的时间段内)，进食明显大于大 部分人在相似时间段和相似环境下食用的食物量和2)在事件过程中 缺乏对进食的控制感(例如，不能停止进食或控制吃什么或吃多少的 感觉)。在一个实施方案中，用于控制暴食的胰淀素激动剂包括体内 半衰期比胰淀素长的激动剂。

在一个实施方案中，提供了减轻暴食的方法，其中该方法包括将 减轻患者暴食的有含量胰淀素或胰淀素激动剂给药于需要的患者。暴 食的减轻包括暴食情况的频率、暴食情况的持续时间、暴食情况过程 中消耗的总量、抵抗暴食情况发作的难度的降低及其任意组合，与胰 淀素或胰淀素激动剂给药不存在下的频率、持续时间、含量和抵抗力 相比较。因此，例如，在一个实施方案中，该方法包括暴食情况频率 的降低。在另一个实施方案中，该方法包括暴食情况持续时间的减少。 再一实施方案中，该方法包括暴食情况过程中消耗的总量的降低。再 一实施方案中，该方法可以包括抵抗暴食情况发作难度的降低。

在一些实施方案中，暴食特别地是暴食甜食、巧克力食物、咸食、 高脂肪食物，或其任意组合，在应激或非应激条件下。在一个实施方 案中，暴食特别地是暴食咸食，包括高脂肪食物。在一个实施方案中， 暴食特别地是暴食甜食，在应激和非应激条件下。

可以使用调查表和暴食等级(BES)来测定或测量暴食。基于总 的BES分数(通过总合每个单独项目的分数来计算)，可以将暴食严 重程度分成三类(轻微、中度和严重)。因此，提供了降低患者BES 分数的方法，包括将降低患者BES分数的有效量胰淀素或胰淀素激动 剂给药于需要的患者。在一些实施方案中，胰淀素或胰淀素激动剂的 给药改变了患者的BES类别，例如，从严重改变至中度、从严重改变 至轻微或从中度改变至轻微。

暴食的一些信号包括身体不饥饿时食用大量食物、快速进食、因 为对于他或她吃了多少感觉困窘而藏匿食物、进食直至不舒服的饱腹 感，或其任意组合。许多暴食者是情绪食者，即，他们的暴食是由他 们的情绪状态引发的(例如，一些暴食者在伤心时进食，一些在开心 时进食，一些在压力下进食)。大量暴食者患有焦虑症，如强迫症； 冲动控制问题；或人格障碍，如边缘性人格障碍或抑郁症。在一个实 施方案中，暴食应答应激条件。其他暴食者是物质滥用者，如药物滥 用者或酒精滥用者。不是每个患有暴食症的人都是超重的，如诊断为 易饿症的那些暴食者。

暴食患者通常在一天的特定时间暴食，因此应当根据患者什么时 候最可能暴食来调整治疗。例如，如果患者大部分在晚上7点后暴食， 患者应当在7点或7点前不久给药胰淀素或胰淀素激动剂。在一个实 施方案中，在他们易于暴食的时间将胰淀素或胰淀素激动剂给药于患 者。在其他实施方案中，在患者易于暴食的至少约15分钟、至少约30 分钟、至少约45分钟、至少约1小时、至少约1小时10分钟或至少 约2小时前将胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。

该实施方案中胰淀素或胰淀素激动剂的有效量是有效制止或控制 患者暴食欲望的含量。因此，胰淀素或胰淀素激动剂的有效量将根据 患者和他们渴望暴食的水平而改变。此外，如果患者在一天的一个点 渴望暴食比另一个点的低，因此调整剂量，在患者具有较低暴食欲望 的时间提供较低的剂量，和在患者具有较高暴食欲望的时间提供较高 剂量。在一个实施方案中，在他们具有高暴食欲望的时间将峰剂量的 胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。在其他实施方案中，在他们具有 高暴食欲望之前至少约15分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、 至少约1小时、至少约1小时30分钟或至少约2小时将峰剂量的胰 淀素或胰淀素激动剂给药于患者。在一些实施方案中，胰淀素或胰淀 素激动剂剂量为25μg至240μg，或可以更高或更低。

在控制暴食和其他进食行为的特定方法中，胰淀素或胰淀素激动 剂是治疗过程中给药于患者的仅有的抗肥胖或减肥剂。

在控制暴食的其他方法中，患者可以进一步给药至少一种其他已 知抑制饥饿或控制食欲的药物。这样的药物包括，但不限于，利莫那 班、西布茶明、奥利司他、exendin或其类似物，PYY或其类似物、CB-1、 瘦素和苯丁胺。

在另一实施方案中，提供了改变患者偏食的方法，其中方法包括 将改变患者偏食的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于需要的患者。 如在此所述的，本发明的方法包括改变应激条件下的偏食，以及改变 非应激条件下的偏食。在一个实施方案中，偏食包括对甜食、巧克力 食物、咸食、高脂肪食物、低脂食物及其任意组合的偏好。因此，例 如，在一个实施方案中，提供了改变患者偏好甜食的方法，所述方法 包括将有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于希望改变偏好甜食的患 者。在另一个实施方案中，提供了改变偏好巧克力食物的方法。在另 一个实施方案中，提供了改变偏好咸食的方法。在另一个实施方案中， 提供了改变偏好高脂肪食物的方法。在另一个实施方案中，提供了改 变偏好低脂食物的方法。

偏食的改变包括对该食物偏好的降低，该食物摄入量的降低，一 种食物类型超过另一种食物类型偏好的提高，渴望该食物频率、渴望 该食物的持续时间、渴望该食物的强度、抵抗对该食物渴望的难度、 应答该食物渴望进食的频率的改变及其任意组合，与胰淀素或胰淀素 激动剂给药不存在下的频率、持续时间、强度或抵抗力相比较。

再一实施方案中，方法包括降低患者对甜食的偏好。再一实施方 案中，方法包括降低患者对巧克力食物的偏好。再一实施方案中，方 法包括降低患者对咸食的偏好。再一实施方案中，方法包括降低患者 对高脂肪食物的偏好。再一实施方案中，方法包括降低患者对低脂食 物的偏好。再一实施方案中，方法包括提高患者对咸食的偏好超过巧 克力食物。再一实施方案中，方法包括提高患者对低脂食物的偏好超 过高脂食物。

在另一个实施方案中，提供了治疗、降低或预防食物渴求的方法， 该方法包括将治疗、降低或防止患者食物渴求的有效量胰淀素或胰淀 素激动剂给药于患者。食物渴求意思是患者对特定类型食物的渴望。 最常见的食物渴求包括对糖食如巧克力的渴求，对咸食如咸点心和脂 肪点心的渴求。可以使用本领域已知的或是研究食物渴求的人员创造 的调查表来测量食物渴望。这样的调查表优选基于数量等级将食物渴 求水平分级，如果不具有食物渴求，患者标为0，如果患者具有严重 食物渴求，标为10(如果基于1-10的等级)。调查表优选还包括关于 患者渴求哪种食物类型的问题。

在一个实施方案中，方法包括降低患者对甜食、巧克力食物、咸 食、高脂肪食物等的渴求频率。在另一个实施方案中，方法包括降低 患者对甜食、巧克力食物、咸食、高脂肪食物等的渴求持续时间。再 一实施方案中，方法包括降低患者对甜食、巧克力食物、咸食、高脂 肪食物等的渴求强度。再一实施方案中，方法包括降低患者抵抗甜食、 巧克力食物、咸食、高脂肪食物等渴求的难度。再一实施方案中，方 法包括降低患者应答甜食、巧克力食物、咸食、高脂肪食物等渴求的 进食频率。再一实施方案中，方法包括降低患者的甜食摄入。再一实 施方案中，方法包括降低患者的巧克力食物摄入。再一实施方案中， 方法包括降低患者的咸食摄入。再一实施方案中，方法包括降低患者 高脂肪食物的摄入。

用于治疗食物渴求的胰淀素或胰淀素的有效量是有效降低患者对 特定类型食物渴求的含量。因此，根据待治疗的患者和他们对特定食 物渴望的强度，有效量是不同的。例如，遭受压力的人比没有遭受压 力的人更渴望糖食，因此需要更高剂量的胰淀素或胰淀素激动剂。此 外，患有多囊卵巢综合症的人渴求高碳水化合物的食物，因此需要更 高剂量的胰淀素或胰淀素激动剂。

另一个实施方案中，提供了降低患者中与降低热量摄入相关的压 力的方法，该方法包括将降低与降低的热量摄入相关的压力的有效量 胰淀素或胰淀素激动剂给药于需要的患者。与降低的热量摄入相关的 压力意思是患者消耗的热量降低而引起的抑郁或焦虑的感觉。降低压 力意思是改善患者的抑郁状态(通过提高他们保持良好状态和情绪的 整体感觉)或降低患者的焦虑感。用于降低与降低的热量摄入相关压 力的方法的胰淀素或胰淀素激动剂的有效量是有效改善患者抑郁(或 保持良好状态或情绪的感觉)的含量或有效降低焦虑感的含量。因此， 根据待治疗的患者以及他们由降低的热量摄入引起的抑郁或焦虑的强 度，有效量是不同的。

减轻重量意思是患者在治疗过程中(不管治疗过程是天、周、月 或年)失去部分总体重。或者，可以将减轻重量定义为脂肪重量对瘦 肉重量比例的降低(换句话说，患者失去脂肪质量，但是维持或增加 了瘦肉质量，不必定对应于总体重的损耗)。该实施方案中给药的胰 淀素或胰淀素激动剂的有效量是有效减轻患者在治疗过程中的体重的 含量，或者，有效减少患者在治疗过程中的脂肪重量百分比的含量。 在特定的实施方案中，在治疗过程中，患者体重减轻至少约1％、至 少约5％、至少约10％、至少约15％或至少约20％。或者，在治疗过 程中，患者的脂肪质量百分比降低至少1％、至少5％、至少10％、至 少15％、至少20％或至少25％。

在特定的实施方案中，提供了降低患者重量的方法，包括将有效 量的胰淀素或胰淀素激动剂以单次剂量在一天内一次或多次给药于患 者。单次剂量是药物的间歇剂量(与连续灌注相对)。患者每天可以 给药一个或多个单次剂量。单次剂量无论何时给药于患者，可以是相 同的，或可以调整使得患者在一天的特定时间与其他时间相比较给药 较大的单次剂量。特定制剂例如持续释放制剂中胰淀素或胰淀素激动 剂的给药，单次剂量可以给药较少频率，例如，每三天一次，一周一 次，一个月两次，每个月一次。此外，单次剂量之间的时间优选足够 长来使前次单次剂量中给药的药物来清除患者的血流。一些实施方案 中，给药半衰期长于胰淀素的胰淀素激动剂。

在其他实施方案中，提供了减轻患者重量的方法，包括将有效量 的胰淀素或胰淀素激动剂以连续剂量给药于患者。连续剂量意思是药 物的连续灌输，例如，通过静脉内注射或经皮贴剂。或者，连续剂量 可以以将药物在一定的时间段内释放至患者全身的受控释放胶囊或片 剂的形式口服给药。通过连续剂量给药时，在约1小时的时间段内释 放药物，更优选在约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18或24 小时的时间段内释放药物。

在一些实施方案中，提供了减轻体重的方法，其中胰淀素或胰淀 素激动剂没有与一种已知引起体重减轻的其他药物共同给药。在其他 实施方案中，提供了减轻体重的方法，其中将至少一种已知引起体重 减轻的其他药物与胰淀素或胰淀素激动剂共同给药于患者。这样的其 他药物通过任一种方式具有这种体重减轻效果，包括但不限于，抑制 饥饿、控制食欲、提高代谢等。在一个实施方案中，将至少一种已知 引起体重减轻的其他药物与胰淀素或胰淀素激动剂共同给药。“共同 给药”意思是作为和第二种减肥化合物的单次给药来给药胰淀素或胰 淀素激动剂，作为分开的药剂同时给药或按序给药。按序给药指的是 在已知引起重量减轻的第二种药物之前或之后给药胰淀素或胰淀素激 动剂。在一方面中，在至少一种已知引起重量减轻的其他药物之前或 之后约30分钟，更优选在至少一种已知引起重量减轻的其他药物之 前或之后约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12小时，给药 胰淀素或胰淀素激动剂。至少一种已知引起重量减轻的其他药物可以 作为单次剂量或作为连续剂量来给药。

胰淀素和胰淀素激动剂降低或保护对抗应激及其影响，并具有抗 焦虑、抗抑郁和抗精神病效果，如共有的U.S.专利申请60/667,335和 60/760,583和2006年3月31日申请的PCT申请代理编号no.0110-PCT-0 中所述的，在此将每篇引入作为参考。

在另一个实施方案中，提供了降低服用引起重量减轻药物相关压 力的方法，该方法包括将降低服用引起重量减轻药物相关压力的有效 量胰淀素或胰淀素激动剂给药于需要的患者。服用引起重量减轻药物 相关的压力确定意思是患者消耗的热量降低而引起的抑郁或焦虑感。 降低压力意思是改善抑郁状态(通过提高他们保持良好状态和情绪的 整体感觉)或减轻焦虑感。

出售的或临床研究下的通过靶向大脑控制食欲的药物，如利莫那 班和西布茶明，可以使服用的患者具有抑郁或焦虑感。利莫那班靶向 大脑中的内源性大麻素受体，以及脂肪组织中的受体，已知其在食物 渴求中起作用。认为西布茶明通过提高大脑中去甲肾上腺素和5-羟色 胺的活性来起作用。胰淀素和胰淀素激动剂通过改善患者的抑郁状态 和/或降低患者的焦虑感来改善患者由使用这样的药物引起的抑郁或焦 虑感。

用于降低服用引起重量减轻药物引起压力的方法的胰淀素或胰淀 素激动剂的有效量是有效改善抑郁(或保持良好状态或情绪的感觉) 的含量或有效降低焦虑感的含量。因此，根据待治疗的患者和使用引 起重量减轻药物引起的抑郁或焦虑的强度，有效量是不同的。

在另一个方面中，提供了减轻已经进行过肥胖外科手术患者的骨 质丢失的方法，该方法包括将降低患者骨质丢失的有效量胰淀素或胰 淀素激动剂给药于需要的患者。骨质丢失意思是与患者外科手术前的 骨密度相比较，骨密度的降低。降低骨质丢失的意思是与已经进行过 肥胖外科手术但没有通过本发明的方法治疗的相似患者相比较，防止 任何骨质丢失或降低骨质丢失的含量。可以通过任何已知方法来测量 骨质丢失，包括使用DEXA骨光密度分析法来测量骨密度。肥胖外科 手术包括，但不限于，Sapala-Wood Micropouch roux-en-Y胃旁路外 科手术、可调节性束胃带捆扎术、垂直束带造形术、roux-en-Y胃旁 路、胆胰绕道手术和十二指肠转位手术。

用于降低已经进行过肥胖外科手术患者骨质丢失方法的胰淀素或 胰淀素激动剂的有效量是有效防止或减缓骨吸收的含量。除了胰淀素 或胰淀素激动剂，患者可以给药本领域已知防止或减缓骨质丢失的其 他药物。这样的药物包括，但不限于，利塞膦酸盐、阿仑膦酸盐、雷 洛昔芬、降钙素和特拉帕肽。

在另一个实施方案中，提供了提高患者生热作用的方法，该方法 包括将提高患者生热作用的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于需要 的患者。生热作用是通过提高身体代谢速率以热释放热量的过程。通 过几种机制，包括补充剂、营养、锻炼和暴露于寒冷来激活生热作用。

在另一个实施方案中，提供了提高患者氧化代谢的方法，该方法 包括将提高患者氧化代谢的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患 者。氧化代谢是通过其使用氧从碳水化合物(糖)制造能量的过程。

在另一个方面中，提供了诱导饱腹感的方法，其中该方法包括将 诱导患者饱感或饱腹感的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于需要或 渴望的患者。在一个实施方案中，提供了诱导患者饱腹感的方法，包 括将患者已经食用比给药不存在下诱导饱感或饱腹感少的食物后诱导 患者饱感或饱腹感的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于需要或渴望 的患者。在一些实施方案中，胰淀素或胰淀素激动剂的给药诱导患者 食用至少约少5％食物，至少约少10％食物，至少约少15％食物，至 少约少20％食物，或至少约少25％食物后的饱感或饱腹感。

再一方面中，提供了控制患者饥饿的方法，其中方法包括将控制 患者饥饿的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。

再进一步的方面中，提供了延长患者饱腹感的方法，其中该方法 包括将延长患者饱腹感的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。

再一方面中，提供了降低、缓解或防止患者偏食的方法，其中该 方法包括将降低、缓解或防止患者偏食的有效量胰淀素或胰淀素激动 剂给药于患者。

在进一步的方面中，提供了降低患者热量摄入的方法，其中该方 法包括将有效量的胰淀素或胰淀素激动剂作为患者食物或点心的替代 给药于患者。再进一步的方面中，提供了通过减少饭量降低热量摄入 的方法，其中该方法包括将降低患者摄入食量的有效量胰淀素或胰淀 素激动剂给药于所述患者。

另一个方面中，提供了控制食物摄入的方法，其中该方法包括将 导致患者控制或停止食物摄入的有含量胰淀素或胰淀素激动剂给药于 患者。再一方面中，提供了确保或有助于顺从降低热量或限制饮食的 方法，其中该方法包括将有效量的胰淀素或胰淀素激动剂给药于所述 患者。另一个实施方案中，提供了控制患者热量摄入的方法，其中方 法包括将有效量的胰淀素或胰淀素激动剂在一天中患者更可能暴食或 吃甜食或咸食的特定时间给药于患者。

再一方面中，提供了调节患者设定值(set point)的方法使得身 体对体内平衡的倾向调节至更健康的设定值，其中该方法包括将有效 量的胰淀素或胰淀素激动剂给药于所述患者。在另一个实施方案中， 提供了维持体重减轻或维持已经减轻的体重的方法，其中该方法包括 将维持患者重量减轻或患者已经减轻的体重的有效量胰淀素或胰淀素 激动剂给药于患者。在一个实施方案中，通过重新设定患者的设定值 来维持重量减轻。

在另一个实施方案中，提供了改善、调节或防止患者减肥剂副作 用的方法，该方法包括将改善、调节或防止患者服用减肥剂副作用的 有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患者。在另一个实施方案中，提 供了改善、调节或防止患者减肥剂不利生理副作用的方法，该方法包 括将缓解、调节或防止减肥剂不利生理副作用的有效量胰淀素或胰淀 素激动剂给药于患者。

在另一个实施方案中，提供了改善、调节或防止患者减肥剂的不 利胃肠道副作用的方法，该方法包括将改善、调节或防止患者服用减 肥剂的不利胃肠道副作用的有效量胰淀素或胰淀素激动剂给药于患 者。在这样的实施方案中，胰淀素或胰淀素激动剂具有胃肠保护效果。

此外，在此所述的本发明的任一个方面中，其中胰淀素或胰淀素 激动剂与至少一种其他减肥(或抗-肥胖)或减轻体重药物共同给药， 胰淀素或胰淀素激动剂结合至少一种其他减肥(或抗-肥胖)或减轻体 重药物的使用导致协同效果。

在此所述的实施方案中，其中胰淀素或胰淀素激动剂与至少一种 其他减肥(或抗肥胖)或体重减轻药物共同给药，胰淀素或胰淀素激 动剂结合至少一种其他减肥(或抗肥胖)或重量减轻药物的使用导致 对于至少一种化合物需要较低的剂量，而具有相同的效果。

在另一个方面中，还可以结合用于在此所述方法中的胰淀素或胰 淀素激动剂，和一种或多种用于控制、防止或治疗肥胖或进食障碍或 病症的活性成分。例如，在一个实施方案中，提供了降低具有40或 更低BMI患者的BMI的方法，通过给药胰淀素或胰淀素激动剂结合 至少第二种降低患者BMI有效量的减肥剂。这样的第二种减肥化合物 包括西布茶明、奥利司他、瘦素和利莫那班。例如，胰淀素或胰淀素 激动剂可以结合一种或多种其他化合物，以单一剂型，或分开剂型， 用于同时或按序给药于需要的患者。在一个实施方案中，胰淀素或胰 淀素激动剂与第二种减肥化合物共同给药，例如，作为与第二种减肥 化合物的单次给药，作为分开的药剂同时给药，或按序给药，其中化 合物的给药可以在时间上以秒、分钟或小时分开。按序给药还可以包 括第一个过程的减肥剂例如胰淀素或胰淀素激动剂的给药，接着至少 一个过程的另一种减肥剂的给药。治疗过程可以重叠或不重叠。

按序给药时，可以以两次或多次给药来给药组合物。在可替换的 实施方案中，可以通过不同的途径给药一种或多种胰淀素或胰淀素激 动剂和一种或多种其它活性成分。本领域技术人员还将认识到各种活 性成分可以结合胰淀素或胰淀素激动剂给药，可以用来增大或协同提 高肥胖或进食障碍或病症的控制、防止、改善、减轻或治疗。

根据在此提供的方法，与至少一种其他减肥(或抗肥胖)或减轻 重量药物共同给药时，胰淀素或胰淀素激动剂可以是：(1)在复合的 制剂中共同配制和给药或同时传送；(2)作为分开的制剂通过交替或 平行传送；或(3)通过本领域已知的任何其他联合治疗方案。当以 交替治疗传送时，提供的方法可以包括按序给药或传送活性成分，例 如，在分开的溶液、乳浊液、悬浮液、片剂、丸剂或胶囊中，或通过 分开注射器中的不同注射。通常，在交替治疗过程中，按序即连续给 药每种活性成分的有效剂量，而在连续治疗中，一起给药两种或多种 活性成分的有效剂量。还可以使用各种顺序的间歇联合治疗。

在特定的实施方案中，在此提供的化合物可以结合其他可购得的 减肥助剂或其他减肥剂使用，如例如，PYY和PYY激动剂、GLP-1 和GLP-1激动剂、DPPIV抑制剂、CCK和CCK激动剂、exendin和 exendin激动剂、GIP和GIP激动剂以及瘦素和瘦素激动剂。用于提供 的方法中的正在研发中的其他抗肥胖剂在本发明的方法中也是所关注 的。其他抗肥胖剂包括苯丁胺、芬氟拉明、西布茶明、利莫那班和奥 利司他。

因此，在一方面中，胰淀素或胰淀素激动剂可以用作联合治疗的 一部分，用于控制、防止或治疗肥胖或进食障碍或病症。用作治疗肥胖 或减轻重量的联合治疗一部分的优选化合物包括，但不限于，影响神 经递质或神经离子通路的中枢神经系统药剂，包括抗抑郁剂(安非他 酮)、去甲肾上腺素再吸收抑制剂(GW320659)、选择性5-羟色胺2c 受体激动剂、选择性5HT 2c受体激动剂、antiseizure剂(topiramate、 唑尼沙胺)、一些多巴胺拮抗剂和大麻素-1受体拮抗剂(CB-1受体拮 抗剂)(利莫那班)；瘦素/胰岛素/中枢神经系统通路药剂，包括瘦素 类似物、瘦素转运和/或瘦素受体启动子、纤毛神经营养因子 (Axokine)、神经肽Y和agouti-相关肽拮抗剂、阿黑皮素原和可卡因 和苯丙胺调节的转录启动子、α-黑素细胞刺激激素类似物、 melanocoritin-4受体激动剂和影响胰岛素代谢/活性的药剂，其包括蛋 白质-酪氨酸磷酸酶-1B抑制剂、过氧化物酶增殖子激活的受体-γ受体 拮抗剂、短效溴隐亭(ergoset)、促生长素抑制素激动剂(octreotide) 和adiponectin/Acrp30(Famoxin或脂肪酸代谢氧化诱导剂)；胃肠-神 经通路药剂，包括提高缩胆囊肽活性(CCK)、PYY活性、NPY活性 和PP活性，提高胰高血糖素-样肽1活性(exendin4、、二肽肽酶IV 抑制剂)的那些和降低ghrelin活性的那些，以及胰淀素类似物(普兰 林肽)；可以提高静止代谢速率的药剂(选择性β-3刺激剂/激动剂、 解偶联蛋白同系物和甲状腺受体激动剂)；其它更多不同的药剂，包 括黑色素浓缩激素拮抗剂、植物甾醇类似物、功能油、P57、淀粉酶 抑制剂、生长激素片段、脱氢表雄甾酮硫酸盐的合成类似物、脂肪细 胞11B-羟基类固醇脱氢酶1型活性的拮抗剂、促肾上腺皮质激素释放 激素激动剂、脂肪酸合成的抑制剂(cerulenin和C75)、羧基肽酶抑制 剂、茚满酮/茚满醇、氨基类固醇(trodusquemine/trodulamine)和其他 胃肠脂酶抑制剂(ATL962)；苯丙胺，如右旋苯丙胺；其它类交感神 经肾上腺素剂，包括苯丁胺、甲基苯异丙基苄胺、苯二甲吗啉、马吲 哚和diethylpropion。

其他优选的化合物包括ecopipam；oxyntomoduiin(OM)；葡萄糖 -依赖性促胰岛素多肽(GIP)的抑制剂；促胃液素-释放肽；neuronedin B；enterostatin；安非布他酮、SR-58611；CP-045598；AOD-0604； QC-BT16；rGLP-1；1426(HMR-1426)；N-5984；ISIS-113715； solabegron；SR-147778；Org-34517；美拉诺坦-II；西替利司他；c-2735； c-5093；c-2624；APD-356；radafaxine；fluasterone；GP-389255；856464； S-2367；AVE-1625；T-71；油酰-雌酮；肽YY[3-36]鼻内；雄激素受 体激动剂；PYY3-36；DOV-102677；塔格糖；SLV-319；1954(Aventis Pharma AG)；oxyntomodulin，Thiakis；溴麦角隐亭，PLIVA；糖尿病 /高脂血治疗，Yissum；CKD-502；甲状腺受体β激动剂；β-3 adrenoceptor 激动剂；CDK-A激动剂；galanin拮抗剂；多巴胺D1/D2激动剂； melanocortin调节剂；verongamine；神经肽Y拮抗剂；黑色素浓缩激 素受体拮抗剂；双PPARα/γ激动剂；GGEN-P-4；激酶抑制剂；人MCH 受体拮抗剂；GHS-R拮抗剂；ghrelin受体激动剂；DG70抑制剂； cotinine；CRF-BP抑制剂；urocortin激动剂；UCL-2000；impentamine； β-3肾上腺素受体；五肽MC4激动剂；trodusquemine；GT-2016；C-75； CPOP；MCH-1受体拮抗剂；RED-103004；氨基固醇；orxin-1拮抗剂； 神经肽Y5受体拮抗剂；DRF-4158；PT-15；PTPase抑制剂；A37215； SA-0204；糖脂代谢物；MC-4激动剂；produlestan；PTP-1B抑制剂； GT-2394；神经肽Y5拮抗剂；黑素皮质素受体调节剂；MLN-4760； PPARγ/δ双激动剂；NPY5RA-972；5-HT2C受体激动剂；神经肽Y5 受体拮抗剂(苯基脲类似物)；AGRP/MC4拮抗剂；神经肽5拮抗剂 (苯并咪唑)；糖皮质激素拮抗剂；MCHR1拮抗剂；乙酰-CoA羧化 酶抑制剂；R-1496；HOB1调节剂；NOX-B11；肽YY3-36(eligen)； 5-HT 1调节剂；胰腺脂酶抑制剂；GRC-1087；CB-1拮抗剂；MCH-1 拮抗剂；LY-448100；bombesin BRS3激动剂；ghrelin拮抗剂；MC4 拮抗剂；硬脂酰-CoA去饱和酶调节剂；H3组胺拮抗剂；PPARpan激 动剂；EP-01492；激素-敏感脂酶抑制剂；脂肪酸结合蛋白4抑制剂； 硫代内酯衍生物；蛋白质酪氨酸磷酸酶1B抑制剂；MCH-1拮抗剂； P-64；PPARγ配体；黑色素浓缩激素拮抗剂；噻唑gastroprokenietics； PA-452；T-226296；A-331440；免疫药物疫苗；糖尿病/肥胖治疗剂 (Bioagency，Biofrontera Discovery GmbH)；P-7(Genfit)；DT-011M； PTP1B抑制剂；抗-糖尿病肽缀合物；KATP激动剂；肥胖治疗剂 (Lexicon)；5-HT2激动剂；MCH-1受体拮抗剂；GMAD-1/GMAD-2； STG-a-MD；神经肽Y拮抗剂；血管生成抑制剂；G-蛋白-缀合的受体 激动剂；盐碱酸治疗剂(ChemGenex)；抗-肥胖剂(Abbott)；神经肽 Y调节剂；黑色素浓缩激素；GW-594884A；MC-4R激动剂；组胺H3 拮抗剂；orphanGPCR调节剂；MITO-3108；NLC-002；HE-2300； IGF/IBP-2-13；5-HT2C激动剂；ML-22952；神经肽Y受体拮抗剂； AZ-40140；抗-肥胖治疗剂(Nisshin Flour)；GNTI；黑素皮质素受体 调节剂；α-淀粉酶抑制剂；神经肽Y1拮抗剂；β-3adrenoceptor激动 剂；ob基因产物(Eli Lilly&Co.)；SWR-0342-SA；β-3 adrenoceptor 激动剂；SWR-0335；SP-18904；口服胰岛素模拟物；β-3 adrenoceptor 激动剂；NPY-1拮抗剂；β-3激动剂；肥胖治疗剂(7TM Pharma)；11β- 羟基类固醇脱氢酶(HSD)1抑制剂；ORX-431；E-6776；RI-450； 黑素皮质素-4拮抗剂；黑素皮质素-4受体激动剂；肥胖治疗剂 (CuraGen)；瘦素模拟物；A-74498；第二代瘦素；NBI-103；CL-314698； CP-114271；β-3 adrenoceptor激动剂；NMI-8739；UCL-1283；BMS- 192548；CP-94253；PD-160170；烟碱酸激动剂；LG-100754；SB-226552； LY-355124；CKD-711；L-751250；PPAR抑制剂；G-蛋白质治疗剂； 肥胖治疗剂(胰淀素Pharmaceuticals Inc.)；BW-1229；单克隆抗体 (ObeSys/CAT)；L-742791；(S)-sibutramine；MBU-23；YM-268； BTS-78050；tubby-样蛋白质基因；染色体组(进食障碍；Allelix/Lilly)； MS-706；GI-264879A；GW-409890；FR-79620类似物；肥胖治疗剂 (Hybrigenics SA)；ICI-198157；ESP-A；5-HT2C激动剂；PD-170292； AIT-202；LG-100641；GI-181771；抗-肥胖治疗剂(Genzyme)；瘦素 调节剂；GHRH模拟物；肥胖治疗剂(Yamanouchi Pharmaceutical Co. Ltd.)；SB-251023；CP-331684；BIBO-3304；cholsten-3-酮；LY-362884； BRL-48962；NPY-1拮抗剂；A-71378；-didesmethylsibutramine；酰 胺衍生物；肥胖治疗剂(Bristol-Myers Squibb Co.)；肥胖治疗剂(Ligand Pharmaceuticals Inc.)；LY-226936；NPY拮抗剂；CCK-A激动剂； FPL-14294；PD-145942；ZA-7114；CL-316243；SR-58878；R-1065； BIBP-3226；HP-228；talibegron；FR-165914；AZM-008；AZM-016； AZM-120；AZM-090；犁鼻素；BMS-187257；D-3800；AZM-131； 基因发现(Axys/Glaxo)；BRL-26830A；SX-013；ERR调节剂；adipsin； AC-253；A-71623；A-68552；BMS-210285；TAK-677；MPV-1743； 肥胖治疗剂(Modex)；GI-2485573；AZM-134；AZM-127；AZM-083； AZM-132；AZM-115；exopipam；SSR-125180；肥胖治疗剂(Melacure Therapeutics AB)；BRL-35135；SR-146131；P-57；AZM-140；CGP- 71583A；RF-1051；BMS-196085；manifaxine；β-3激动剂；DMNJ(韩 国生物科学和生物技术研究所)；BVT-5182；LY-255582；SNX-024； galanin拮抗剂；神经激肽-3拮抗剂；dexfenfluramine；mazindol； diethylpropion；phendimetrazine；benzphetamine；amfebutmone；舍曲 林；metformin；AOD-9604；ATL-062；BVT-933；GT389-255；SLV319； HE-2500；PEG-akokine；L-796568和ABT-239。

在一些实施方案中，结合胰淀素或胰淀素激动剂使用的化合物包 括利莫那班、西布茶明、奥利司他、PYY或其类似物、CB-1拮抗剂、 瘦素、苯丁胺和exendin类似物。示例剂量范围包括苯丁胺树脂(早 晨30mg)、fenflutamine盐酸盐(一天三次20mg)以及苯丁胺树脂(早 晨15mg)和fenflutamine盐酸盐(晚餐前30mg)和西布茶明(10-20mg) 的组合。Weintraub等(198)Arch.Intern.Med.144：1143-1148。

在其他实施方案中，提供的方法包括结合至少一种其他抗肥胖剂 给药胰淀素或胰淀素激动剂，附加条件是至少一种其他抗肥胖剂不是 NPY1受体拮抗剂、NPY5受体拮抗剂、NPY2受体拮抗剂、NPY4受 体拮抗剂、瘦素、瘦素衍生物、瘦素激动剂、CNTF、CNTF激动剂/ 调节剂、CNTF衍生物、MCH1R拮抗剂、MCH2R拮抗剂、黑素皮质 素4激动剂、MC4受体激动剂、大麻素受体(CB-1)拮抗剂/反向激 动剂、ghrelin拮抗剂、5HT2c激动剂、5-羟色胺再吸收抑制剂、5-羟 色胺转运抑制剂、DPP-IV抑制剂、阿片拮抗剂、orexin拮抗剂、代谢 型谷氨酸盐亚型5受体拮抗剂、组胺3拮抗剂/反向激动剂或 topiramate。在特定的实施方案中，提供的方法包括结合至少一种其他 抗肥胖剂给药胰淀素或胰淀素激动剂，附加条件是至少一种其他抗肥 胖剂不是苯丁胺、利莫那班或西布茶明。

胰淀素和胰淀素激动剂还可以结合用于治疗代谢综合症的化合物 给药，如葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)类似物。在其他的实施 方案中，在此提供的化合物可以和其他止痛药、免疫抑制剂或其他抗 炎剂一起使用。

用于在此公开的方法内容中的化合物包括胰淀素和胰淀素激动 剂。通常，胰淀素和胰淀素激动剂包括胰淀素家族肽激素如胰淀素、 肾上腺髓质素(“ADM”)、降钙素(“CT”)、降钙素基因相关肽 (“CGRP”)、促黑激素(也称为“AFP-6”)和相关肽。天然胰淀素家 族肽激素是本领域已知的，激动剂肽类似物和衍生物也是如此。在此 所述了特定的天然肽，激动剂肽类似物和衍生物，然而应当认为任何 已知的具有在此所述特性的胰淀素家族肽可以结合使用在此公开的方 法。

如本领域技术人员将认识到的，胰淀素家族肽激素在生理上表达 时，通常在C-端是酰胺化的，但是对于在此提供的方法和组合物的目 的是不需要的。换句话说，这些肽的C-端可以具有游离-OH或NH₂- 基团。如在此所述的，这些肽还可以具有其他翻译后修饰。

“胰淀素”意思是称为胰淀素并从胰腺的β-细胞分泌的人肽激 素，及其物种变体，其实例描述于U.S.专利No.5,234,906中，其内容 在此引入作为参考。更具体地，胰淀素是通常应答营养摄入而通过胰 腺β-细胞和胰岛素一起分泌的37-氨基酸多肽激素(参见，例如，Koda 等(1992)Lancet 339：1179-1180)。在这种认识下，“胰淀素”，“野 生型胰淀素”和“天然胰淀素”，即，未修饰的胰淀素，可以交替使 用。胰淀素有时候还称为“LAPP”。

“激动剂”意思是引发胰淀素生物活性的化合物，例如，通过本 领域已知的测量，如在此所讨论的受体结合/竞争研究评价时，具有高 于胰淀素的功效，或与胰淀素相比较，在五个数量级功效内(加或减)， 例如，4，3，2或1个数量级。例如，胰淀素激动剂可以具有比天然 胰淀素高3、5、10、50、100、500、1000倍或更高的活性。或者， 例如，激动剂可以具有比天然胰淀素低2、5、10、15或20倍的活性。

在一个实施方案中，术语激动剂指的是引发与天然胰淀素相似的 生物效果的化合物，例如化合物(1)具有与天然人参照肽相似的如 在此所述的改变偏食的活性，和/或(2)具有与天然人参照肽相似的 如在此所述的改变代谢速率的活性。术语激动剂指的是引发与天然胰 淀素相似的生物效果的化合物，例如化合物具有与天然人参照肽相似 的如在此所述的控制、预防或治疗肥胖或进食障碍或病症的活性。在 一个实施方案中，术语激动剂指的是引发与天然胰淀素相似的生物效 果的化合物，例如化合物(1)在食物摄入、胃排空、胰腺分泌或体 重减轻测试中具有与天然人参照肽相似的活性(PCT申请No. PCT/US2005/004631，2005年2月11日申请，并引入作为参考)，和/ 或(2)其在参照受体测试或竞争性结合测试中与胰淀素特异性结合。 在一个实施方案中，在这样的测试中激动以高于1μM的亲和性剂结 合，在另一个实施方案中，具有高于1-5nM的亲和性。这样的激动剂 可以包括含有胰淀素活性片段的多肽或小化学分子。一些实施方案 中，激动剂是肽，不是小化学分子。然而，考虑到在特定的实施方案 中，可以使用限制性语言将鲑鱼降钙素，降钙素，CGRP和/或其受体 类似物排除在胰淀素激动剂范围之外。在特定的实施方案中，胰淀素 激动剂不是小化学分子，可以使用限制性语言将小化学分子排除在胰 淀素激动剂范围之外。

“类似物”意思是这样的肽：其序列源自胰淀素，包括插入，置 换，延伸和/或删除，与胰淀素或胰淀素肽的片段具有至少一些氨基酸 同一性。类似物与天然胰淀素具有至少50或55％氨基酸序列同一性， 或与天然胰淀素具有至少70％，80％，90％或95％氨基酸序列同一性。 在一个实施方案中，这样的类似物包括保守或非保守氨基酸置换(包 括非天然氨基酸以及L和D型)。类似物包括具有激动剂活性的化合 物和具有拮抗剂活性的化合物。胰淀素激动剂类似物是在此所述的类 似物并作为胰淀素激动剂。类似物，如在此所定义的，也包括衍生物。

“衍生物”定义为具有天然胰淀素或类似物的氨基酸序列，但是 另外具有一个或多个氨基酸侧基，α-碳原子，末端氨基或末端羧酸基 团化学修饰的分子。化学修饰包括，但不限于，添加化学部分，形成 新键和除去化学部分。氨基酸侧基的修饰包括，但不限于，赖氨酸ε- 氨基的酰化，精氨酸、组氨酸或赖氨酸的N-烷化，谷氨酸或天冬氨酸 羧酸基的烷化和谷氨酰胺或天冬酰胺的脱酰胺。末端氨基的修饰包 括，但不限于，脱氨基，N-低级烷基，N-二-低级烷基，限定烷基(例 如，支链，环状，稠合，金刚烷基)和N-芳基修饰。末端羧基修饰包 括，但不限于，酰胺，低级烷基酰胺，限定烷基(支链，环状，稠合， 金刚烷基)烷基，二烷基酰胺和低级烷基酯修饰。低级烷基是C1-C4 烷基。此外，一个或多个侧基，或末端基团，可以通过合成化学领域 技术人员已知的保护基团来保护。氨基酸的α-碳可以是单-或二甲基 化的。

通常，关于氨基酸序列，术语“修饰”包括置换、插入、延伸、 删除和衍化，单独或结合。在一些实施方案中，肽包括一个或多个“非 必需”氨基酸残基的修饰。在该内容中，“非必需”氨基酸残基是可 以改变例如删除或置换而新的氨基酸序列没有消除或实质性降低肽 (例如，类似物肽)活性(例如，激动剂活性)的残基。在一些实施 方案中，肽可以包括一个或多个“必需”氨基酸残基的修饰。在该 内容中，“必需”氨基酸残基是改变例如删除或置换时新的氨基酸序 列中参照肽活性基本上降低或消除的残基。在其中必需氨基酸残基得 到改变的实施方案中，修饰的肽可以具有用于提供的方法中的胰淀素 的活性。置换、插入或删除可以在N-端或C-端，或可以在成分肽激 素的内部。例如，肽可以包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更 多个置换，在整个肽分子中以连续的方式或是间隔的。单独或结合置 换，肽包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个插入，在整个 肽分子中还是以连续的方式或是间隔的。单独或结合置换和/或插入， 肽还可以包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个删除，在整 个肽分子中还是以连续的方式或是间隔的。单独或结合置换、插入和/ 或删除，肽还可以包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个氨 基酸添加。

置换包括保守氨基酸置换。“保守氨基酸置换”是其中氨基酸残 基由具有相似侧链或生理化学特征(例如，静电、氢键合、电子等排、 疏水性)的氨基酸残基置换。氨基酸可以是天然产生的或非天然的(人 造的)。具有相似侧链的氨基酸残基家族是本领域已知的。这些家族 包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸 性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电的极性侧链(例如，甘 氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、 半胱氨酸)、非极性侧链(例如，精氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨 酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸)、β-分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨 酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、 组氨酸)。置换还可以包括非保守改变。

“氨基酸”或“氨基酸残基”意思是天然氨基酸、非天然氨基酸 和修饰的氨基酸。除非所述的相反，通过概括或特异性名称对氨基酸 的任何提及，如果它们的结构允许这样的立体异构形式，包括提及D 和L立体异构体。天然氨基酸包括丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、天 冬酰胺(Asn)、天冬氨酸(Asp)、半胱氨酸(Cys)、谷氨酰胺(Gln)、 谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、异亮氨酸(Ile)、亮 氨酸(Leu)、赖氨酸(Lys)、甲硫氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、脯 氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、色氨酸(Trp)、酪氨酸 (Tyr)和缬氨酸(Val)。非天然氨基酸包括，但不限于，同型赖氨酸、 同型精氨酸、同型丝氨酸、吖丁啶羧酸、2-氨基己二酸、3-氨基己二 酸、β-丙氨酸、氨基丙酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、6-氨基己酸、2- 氨基庚酸、2-氨基异丁酸、3-氨基异丁酸、2-氨基庚二酸、叔-丁基甘 氨酸、2，4-二氨基异丁酸、锁链素、2，2’-二氨基庚二酸、2，3-二氨基庚 二酸、N-乙基甘氨酸、N-乙基天冬酰胺、同型脯氨酸、羟基赖氨酸、 同分异构的-羟基赖氨酸、3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸、异锁链素、 同分异构的-异亮氨酸、N-甲级丙氨酸、N-甲级甘氨酸、N-甲基异亮 氨酸、N-甲基戊基甘氨酸、N-甲基缬氨酸、naphthalanine、正缬氨酸、 正亮氨酸、鸟氨酸、戊基甘氨酸、庚二酸、焦谷氨酸盐和硫代脯氨酸。 其他非天然氨基酸包括修饰的氨基酸残基，其是化学上阻断的，可逆 或不可逆，或在N-端氨基或侧链基团上化学修饰的，例如，N-甲基化 的D和L氨基酸或残基，其中侧链官能团在化学上修饰成另一个官能 团。例如，修饰的氨基酸包括甲硫氨酸亚砜；甲硫氨酸砜；天冬氨酸 (β-甲酯)、天冬氨酸的修饰氨基酸；N-乙基甘氨酸，甘氨酸的修饰氨 基酸；或丙氨酸氨甲酰，丙氨酸的修饰氨基酸。可以引入的其他残基 描述于Sandberg等(1998)J.Med.Chem.41：2481-2491。

应当注意到在整个申请中以马库什基团书写可替换物，例如，每 个含有多于一个可能氨基酸的氨基酸位置。特意考虑到马库什基团应 当分开考虑，因此包括另一个实施方案，且不应当把马库什基团认为 单个基团。

“序列同一性”，如本领域公知的，是两个或多个多肽序列或两 个或多个多核苷酸序列之间的关系，如通过比较序列所测定的。在本 领域中，“同一性”还表示多肽或多核苷酸序列之间的序列相关性的 程度，如通过这样序列链之间的配对所测定的。可以通过已知的方法 容易地计算同一性，包括但不限于，描述于Computational Molecular Biology(计算机分子生物学)，Lesk，A.M.等，Oxford University Press， New York(1988)；Biocomputing：Informatics and Genome Projects(生 物计算：信息学和基因组计划)，Smith，D.W.编辑，Academic Press， New York，1993；Computer Analysis of Sequence Data(序列数据的计 算分析)，第I部分，Griffin，A.M和Griffin，H.G.编辑，Humana Press， New Jersey(1994)；Sequence Analysis in Molecular Biology(分子生 物学中的序列分析)，von Heinje，G.，Academic Press(1987)；Sequence Analysis Primer(序列分析引物)，Gribskov，M.和Devereux，J.编辑， Stockton Press，New York(1991)；和Carillo，H.和Lipman，D.，SIAM J Applied Math，48：1073(1988)中的那些。设计测定同一性的方法 来获得测试序列之间最大的匹配。此外，测定同一性的方法以公众可 获得的程序来编撰。可以用来测定两个序列之间同一性的计算机程序 包括但不限于，GCG(Devereux等(1984)Nucleic Acids Resarch 12： 387；一组五个BLAST程序，三个设计用于核苷酸序列探询(BLASTN、 BLASTX和TBLASTX)，两个设计用于蛋白质序列探询(BLASTP和 TBLASTN)(Coulson(1994)Trends in Biotechnology 12：76-80；Birren 等(1997)Genome Analysis 1：543-559)。BLAST X程序可从NCBI 和其他来源公开获得(BLAST Manual，Altschul，S.等，NCBI NLM NIH， Bethesda，MD 20894；Altschul等(1990)J.Mol.Biol.215：403-410)。 公知的Smith Waterman算法也可以用来测定同一性。

用于多肽序列比较的参数通常包括以下的：算法：Needleman和 Wunsch(1970)J.Mol.Biol.48：443-453；比较矩阵：来自Hentikoff和 Hentikoff(1992)的BLOSSUM62(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：10915-10919；Gap Penalty：12；Gap Length Penalty：4。可以使 用这些参数的程序作为“gap”程序可从Genetics Computer Group (“GCG”)，Madison，WI公开获得。上述参数连同没有panalty的末 端gap是用于肽比较的缺省参数。在一个实施方案中，NCBI的BLASTP 程序使用无组成调节的缺省参数，除了10的值，3个子长，BLOSUM62 基质，11的gap延伸值，1的末端gap延价值，用于blast延伸的dropoff (X)(以bit计)7，用于gapped算法的Xdropoff值(以bit计)15， 和用于gapped算法的最终X dropoff值(以bit计)25。

用于核酸分子序列比较的参数包括以下的：算法：算法：Needleman 和Wunsch(1970)J.Mol.Biol.48：443-453；比较矩阵：配对-+10； 错配＝0；Gap Penalty：50；Gap Length Penalty：3。如在此所用的， 使用作为核酸分子序列比较的缺省参数的上述参数和来自GCG的版 本10.2的“gap”程序来测定“％同一性”。

贯穿该说明书，氨基酸序列指的是邻接参照肽的位置a至位置b 的氨基酸。例如，人胰淀素(SEQ ID NO：1)(该实施例中的参照肽) 的1-7h胰淀素指的是从位置1至位置7的氨基酸序列，包括端点。作 为邻接修饰的修饰位置来显示参照肽的修饰。例如，(2Asp 7Lys)1-7h 胰淀素表示人胰淀素的氨基酸序列位置1至7，在位置2具有Cys至 Asp的修饰和位置7的Cys至Lys的修饰。对于另一个实施例， ¹⁸Arg^25，28Pro-h-胰淀素表示人胰淀素的氨基酸序列，在位置18具有His 至Arg的修饰，位置25 Ala至Pro的修饰，和位置28 Ser至Pro的修 饰。

人胰淀素(h胰淀素或h-胰淀素)具有以下氨基酸序列：Lys- Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe- Gly-Ala-Ile-Leu-Ser-Ser-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr(SEQ ID NO：1)。大鼠胰 淀素(r胰淀素)具有以下序列： KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID NO：2)。包括来 自任何物种的胰淀素的使用。

在此公开的方法中使用的胰淀素激动剂包括描述于U.S.专利 No.5,686,411，6,114,304和6,410,511和PCT申请公开No.WO93/10146 中的那些，其内容在此以其整体引入作为参考。这样的化合物包括具 有通式I的那些： ¹A₁-X-Asn-Thr-⁵Ala-Thr-Y-Ala-Thr-¹⁰Gln-Arg-Leu-B₁-Asn-¹⁵Phe-Leu-C₁-D₁-E₁-²⁰F₁-G₁-Asn-H₁- Gly-²⁵I₁-J₁-Len-K₁-L₁-³⁰Thr-M₁-Val-Gly-Ser-³⁵Asn-Thr-Tyr(SEQ ID NO：3)。

其中A₁是Lys，Ala，Ser或氢；

B₁是Ala，Set或Thr；

C₁是Val，Leu或Ile；

D₁是His或Arg；

E₁是Ser或Thr；

F₁是Ser，Thr，Gln或Asn；

G₁是Asn，Gln或His；

H₁是Phe，Leu或Tyr；

I₁是Ala或Pro；

J₁是He，Val，Ala或Leu；

K₁是Ser，Pro，Leu，Ile或Thr；

L₁是Ser，Pro或Thr；

M₁是Asn，Asp或Gln；

X和Y独立地选自具有化学上彼此结合形成分子内连接的侧链的 氨基酸残基。

C-端部分可以是氨基，烷基氨基，二烷基氨基，环烷基氨基，芳 氨基，芳烷基氨基，烷氧基，芳氧基，芳烷氧基或羧基。对于X和Y 合适的侧链包括源自可以形成二硫键的烷基巯基的基团；可以形成环 内酰胺的烷基酸和烷基胺；可以稠合并还原形成烷基胺桥的烷基醛或 烷基卤和烷基胺；或可以连接形成烷基，烯基，炔基，醚或硫醚键的 侧链。优选的烷基侧链包括具有约1至约6个碳原子的低级烷基。

另外一个方面，在此提供用途的组合物和方法涉及SEQ ID NO： 3的激动剂类似物，其不是桥接的，且其中X和Y独立地选自Ala， Ser，Cys，Val，Leu和Ile或Ser或Cys的烷基、芳基或芳烷基酯和 醚。

示例化合物包括，但不限于，des-¹Lys-h-胰淀素(SEQ ID NO：4)， ²⁸Pro-h-胰淀素(SEQ ID NO：5)，^25，28，29Pro-h-胰淀素(SEQ ID NO：6)， ¹⁸Arg^25，28Pro-h-胰淀素(SEQ ID NO：7)和des-¹Lys¹⁸Arg^25，28Pro-h-胰淀 素(SEQ ID NO：8)，所有在治疗的测试动物中显示出体内胰淀素活 性，(例如，引起高血糖症后显著的hyperlactemia)。除了具有胰淀素 的活性特征，还已经发现在此提供的特定化合物与人胰淀素相比较， 具有更理想的溶解性和稳定性特征。这些化合物的实例包括 ²⁵Pro²⁶Val^28，29Pro-h-胰淀素(SEQ ID NO：9)，^25，28，29Pro-h-胰淀素，和 ¹⁸Arg^25，28Pro-h-胰淀素。

其他化合物包括¹⁸Arg^25，28，29Pro-h-胰淀素(SEQ ID NO：10)，des- ¹Lys¹⁸Arg^25，28，29Pro-h-胰淀素(SEQ ID NO：11)，des-¹Lys^25，28，29Pro-h-胰淀素(SEQ ID NO：12)， ²⁵Pro²⁶Val^28，29Pro-h-胰淀素(SEQ ID NO：13)，²³Leu²⁵Pro²⁶Val^28，29Pro-h-胰淀素(SEQ ID NO：14)， ²³Leu²⁵Pro²⁶Val²⁸Pro-h-胰淀素(SEQ ID NO：15)，des-¹Lys²³Leu²⁵Pro²⁶Val²⁸Pro-h-胰淀素(SEQ ID NO：16)，¹⁸Arg²³Leu²⁵Pro²⁶Val²⁸Pro-h-胰淀素(SEQ ID NO：17)，¹⁸Arg²³Leu^25，28，29Pro-h-胰淀素 (SEQ ID NO：18)，¹⁸Arg²³Leu^25，28Pro-h-胰淀素(SEQ ID NO：19)，¹⁷Ile²³Leu^25，28，29Pro-h-胰淀素 (SEQ ID NO：20)，¹⁷Ile^25，28，29Pro-h-胰淀素(SEQ ID NO：21)，des-¹Lys¹⁷Ile²³Leu^25，28，29Pro-h-胰淀素 (SEQ ID NO：22)，¹⁷Ile¹⁸Arg²³Leu-h-胰淀素(SEQ ID NO：23)，¹⁷Ile¹⁸Arg²³Leu²⁶Val²⁹Pro-h-胰淀素 (SEQ ID NO：24)，¹⁷Ile¹⁸Arg²³Leu²⁵Pro²⁶Val^28，29Pro-h-胰淀素(SEQ ID NO：25)， ¹³Thr²¹His²³Leu²⁶Ala²⁸Leu²⁹Pro³¹Asp-h-胰淀素(SEQ ID NO：26)，¹³Thr²¹His²³Leu²⁶Ala²⁹Pro³¹Asp- h-胰淀素(SEQ ID NO：27)，des-¹Lys¹³Thr²¹His²³Leu²⁶Ala²⁸Pro³¹Asp-h-胰淀素(SEQ ID NO：28)， ¹³Thr¹⁸Arg²¹His²³Leu²⁶Ala²⁹Pro³¹Asp-h-胰淀素(SEQ ID NO：29)， ¹³Thr¹⁸Arg²¹His²³Leu^28，29Pro³¹Asp-h-胰淀素(SEQ ID NO：30)，和 ¹³Thr¹⁸Arg²¹His²³Leu²⁵Pro²⁶Ala^28，29Pro³¹Asp-h-胰淀素(SEQ ID NO：31)。

在此公开的方法中所用的胰淀素激动剂包括促黑激素或AFP-6 肽。“促黑激素”或“AFP-6”意思是人肽激素及其物种变体，以任何 生理形式。天然AFP-6是本领域已知的，如功能性AFP-6肽类似物、 衍生物和混合物。任何呈现本领域已知生物活性的本领域已知的任何 AFP-6肽、类似物或衍生物可以结合使用在此公开的组合物和方法。 在一个实施方案中，AFP-6肽、类似物和衍生物具有至少一种天然 AFP-6的激素活性。在特定的实施方案中，AFP-6肽、类似物、衍生 物和混合物是天然AFP-6能够特异性结合的受体的激动剂。

在此公开的方法中所用的胰淀素激动剂包括AFP-6类似物，如US 临时申请No.60/617,468和PCT申请No.PCT/US05/036456中所述的， 在此以其整体引入作为参考。成熟AFP-6，也称为促黑激素，具有以 下氨基酸序列TQAQLLRVGCVLGTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY (SEQ ID NO：32)。AFP-6或AFP-6类似物在C-端可以是或不是酰 胺化的。这样的AFP-6类似物包括具有通式II的那些： X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-QVQNLSHRLWQL-X₂₁-X₂₂- X₂₃-X₂₄-X₂₅-X₂₆-X₂₇-X₂₈-SAPV-X₃₃-PSSPHSY(SEQ ID NO：33)，其中X₁不存 在，TQAQLLRVG(SEQ ID NO：34)，SEQ ID NO：34的一个或多个 连续氨基酸中的任何一个，具有选自C1-C18烷基，取代的烷基或杂 芳基部分取代基的N-芳基或N-酰基；

X₂是M，S，C，取代的L，K，D或E，其中可以通过酰胺键连 接侧链，或可以与X₈形成键例如二硫键或酰胺键的任何氨基酸；

X₃是V，D，L，G，N，A或S；

X₄是V，D，L，G，N，A，S或T；

X₅是V，D，L，G，N，A或S；

X₆是V，D，L，G，N，A，S或不存在；

X-是T，S，Hse(同型SER)，Ahb((S)-2-氨基-3-羟基-3-甲基 丁酸)或(Ahp)(2R，3R)-2-氨基-3-羟基-4-甲基戊酸；

X₈是M，S，C，取代的L，K，D或E，或可以与X2形成键例 如二硫键或酰胺键的任何氨基酸；

X₂₁是M，G，P，A或不存在；

X₂₂是M，G，P，A或不存在；

X₂₃是M，G，P，A或不存在；

X₂₄是M，G，P，A或不存在；

X₂₅是M，G，P，A或不存在；

X₂₆是R或不存在，其中X₂₆不存在时，X₂₇不存在；

X₂₇是Q或不存在，其中X₂₇不存在时，X₂₆不存在；

X₂₈是D或E；

X₃₃是D或E；

及其生物活性片段。

其他实施方案中，AFP-6类似物包括，或其活性片段包括，具有 通式(III)的氨基酸序列的化合物：X₁-X₂-QNLSHRLWQL-X₁₃-X₁₄-X₁₅- X₁₆-X₁₇-X₁₈-X₁₉-X₂₀-SAPV-X₂₅-PSSPHSY(SEQ ID NO：35)，其中：

X₁是Q或不存在；

X₂是V或不存在；

X₁₃是M，G，P，A或不存在；

X₁₄是M，G，P，A或不存在；

X₁₅是M，G，P，A或不存在；

X₁₆是M，G，P，A或不存在；

X₁₇是M，G，P，A或不存在；

X₁₈是R或不存在，其中X₁₈不存在时，X₁₉不存在；

X₁₉是Q或不存在，其中X₁₉不存在时，X₁₈不存在

X₂₀是D或E；

X₂₅是D或E；

及其生物活性片段。

用于公开方法中的示例AFP-6类似物的氨基酸序列包括：

RVGCVLGTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：36)

GCVLGTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：37)

CVLGTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：38)

QVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：39)

VQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：40)

VQNLSHRLQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：41)

TQAQLLRVGCVLGTCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：42)

TQAQLLRVGCVLGTCQVQNLSHRLWQLDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：43)

VGCVLGTCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：44)

CVLGTCQVQNLSHRLWQLRQESAPVEPSSPHSY(SEQ ID NO：45)

TQAQLLRVGCSNLSTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：46)

TQAQLLRVGCNTATCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：47)

RVGCGNLSTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：48)

TQAQLLRVGCDTATCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：49)

TQAQLLRVGCGNLSTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：50)

TQAQLLRVGMVLGTMQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：51)

GMVLGTMQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：52)

VGMVLGTMQVQNLSHRLWQLRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：53)

RVGCGNLSTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：54)

VGCGNLSTCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：55)

VCNTATCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：56)

GCNTATCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVDPSSPHSY(SEQ ID NO：57)

TQAQLLRVGCVLGTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQESAPVEPSSPHSY(SEQ ID NO：58)

TQAQLLRVGCVLGTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVEPSSPHSY(SEQ ID NO：59)

GTMQVQNLSHRLWQLRQDSAPVEPSSPHSY(SEQ ID NO：60)

VGCVLGTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVEPSSPHSY(SEQ ID NO：61)

VGCVLGTCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVEPSSPHSY(SEQ ID NO：62)

GCNTATCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVEPSSPHSY(SEQ ID NO：63)

GCSNLSTCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVEPSSPHSY(SEQ ID NO：64)

GCGNLSTCQVQNLSHRLWQLRQDSAPVEPSSPHSY(SEQ ID NO：65)

GCVLGTCQVQNLSHRLWQLRQESAPVEPSSPHSY(SEQ ID NO：66)。

其他示例AFP-6类似物和衍生物描述于U.S.专利No.6,965,013和 PCT申请公开No.WO2004/048547中，在此将每篇引入作为参考。

在此公开的方法中所用的胰淀素激动剂包括US专利No.6,087,334 中鉴定的类似物，其公开内容在此引入作为参考。这样有用的胰淀素 激动剂包括通式IV的类似物：X₁-Xaa₁-X₂-Xaa₂-X₃-Xaa₃-X₄-Xaa₄-X₅- Xaa₅-X₆(SEQ ID NO：67)，其中

X₁是Lys，Arg或不存在；

X₂是Xaa₆Xaa₇Xaa₈Xaa₉(SEQ ID NO.68)或Z-Xaa₁₀SerThr，如果 X₂是Z-Xaa₁₀SerThr，那么X₁和Xaa₁都不存在；

X₃是AlaThr，AlaSer，SerMet，GluThr或ValThr；

X₄是ArgLeuAla，HisLeuAla，ArgIleAla，LysIleAla，ArgMetAla，HisMetAla， LysMetAla或ArgLeuThr；

X₅是PheLeu，PheIle，PheMet，TyrLeu，TyrIle，TyrMet，TrpIle或TrpMet；

X₆是ArgSerSerGlyTyr(SEQ ID NO：69)，LysSerSerGlyTyr(SEQ ID NO：70)， HisSerSerGlyTyr(SEQ ID NO：71)，ProSerSerGlyTyr(SEQ ID NO：72)，ArgSerArgGlyTyr(SEQ ID NO：73)，ArgThrSerGlyTyr(SEQ ID NO：74)，ArgAlaSerGlyTyr(SEQ ID NO：75)， AlaSerSerGlyTyr(SEQ ID NO：76)，ArgSerAlaGlyTyr(SEQ ID NO：77)，HisSerAlaGlyTyr(SEQ ID NO：78)，ArgSerGlyTyr(SEQ ID NO：79)，ArgSer，LysSer，HisSer，ArgThr，ProSer或Arg；

Xaa₁是Cys或不存在；

Xaa₂是Cya或Ala；

Xaa₃是Gln，Ala或Asn；

Xaa₄是Asn，Ala或Gln；

Xaa₅是Val，Ala，Ile，Met，Leu，戊基Gly或丁基Gly；

Xaa₆是Asn，Gln或Asp；

Xaa₇是Thr，Ser，Met，Val，Leu或Ile；

Xaa₈是Ala或Val；

Xaa₉是Thr或Ser；

Xaa₁₀是Leu，Val，Met或Ile；

Z是约1至约8个碳原子的烷酰基或不存在；

及其药物学上可接受的盐。

在此公开的方法中使用的胰淀素激动剂包括胰淀素家族肽，类似 物和衍生物(在此称为LHC(环螺旋C-端)肽)，描述于U.S.专利申 请No.60/543,275和PCT申请No.PCT/US2005/004631中，在此将每 篇以其整体引入作为参考。

所提供方法中使用的LHC肽作为降钙素、胰淀素、CGRP或在此 公开的三种的任意组合的至少一种生物效应的激动剂或结合胰淀素、 降钙素或CGRP的至少一种受体。示例LHC肽的受体结合活性和生 物活性描述于U.S.专利申请No.60/543,275和PCT申请 No.PCT/US2005/004631中。在一个概括的方面中，这些多肽激动剂具 有胰淀素或降钙素及其类似物的至少一个环片段，降钙素或其类似物 的α螺旋片段的至少一部分的α螺旋片段或具有胰淀素α螺旋片段和 降钙素α螺旋片段或其各自类似物的一部分的α螺旋片段，和胰淀素 或降钙素或其类似物的C-端尾，附加条件是降钙素或降钙素类似物的 C-端尾不是脯氨酸(Pro)，羟基脯氨酸(Hyp)，同型丝氨酸(Hse) 或Hse的衍生物。

在特定实施方案中，这些LHC肽具有胰淀素或胰淀素类似物环 片段，至少一部分降钙素或降钙素类似物α螺旋片段，和胰淀素或胰 淀素类似物C-端尾。在其他实施方案中，这些LHC肽具有降钙素或 降钙素类似物环片段，至少一部分降钙素或降钙素类似物α螺旋片段， 和胰淀素或胰淀素类似物C-端尾。更多其他的实施方案中，这些LHC 肽具有胰淀素或胰淀素类似物环片段，至少一部分胰淀素或胰淀素类 似物的α螺旋片段和至少一部分降钙素或降钙素类似物的α螺旋片 段，和胰淀素或胰淀素类似物C-端尾。再多其他的实施方案中，这些 LHC肽具有降钙素或降钙素类似物环片段，至少一部分胰淀素或胰淀 素类似物的α螺旋片段和至少一部分降钙素或降钙素类似物的α螺旋 片段，和胰淀素或胰淀素类似物C-端尾。仍然其他实施方案中，这些 LHC肽具有胰淀素或胰淀素类似物环片段，一部分降钙素或降钙素类 似物的α螺旋片段或至少一部分胰淀素或胰淀素类似物的α螺旋片段 和至少一部分降钙素或降钙素类似物的α螺旋片段和降钙素或降钙素 类似物C-端尾。

在特定的实施方案中，这些LHC肽的环片段进一步包括不超过 一个、两个、三个或四个修饰，包括从胰淀素或降钙素环及其类似物 的置换、插入或删除。进一步考虑到这些LHC肽可以在环的N-端部 分具有另外的修饰，包括N-帽片段，可以具有疏水或亲水特征如乙酰、 异己酰、36-二氧辛酸或1-氨基-4，7，10-三氧杂-13-十三烷胺琥珀酸。修 饰可以进一步包括一个、两个、三个或多个其他的氨基酸。这是允许 许多修饰的方面，这些修饰太多以致不能提及，但是本领域技术人员 基于本申请中进一步举例说明的可以理解。

这样有用的胰淀素激动剂包括LHC肽，包括通式V的氨基酸序 列：Xaa₁ X Xaa₃ Xaa₄ Xaa₅ Xaa₆ Y Xaa₈ Xaa₉ Xaa₁₀ Xaa₁₁ Xaa₁₂ Xaa₁₃Xaa₁₄ Xaa₁₅ Xaa₁₆ Xaa₁₇ Xaa₁₈ Xaa₁₉ Xaa₂₀ Xaa₂₁ Xaa₂₂ Xaa₂₃ Xaa₂₄ Xaa₂₅Xaa₂₆ Xaa₂₇ Xaa₂₈ Xaa₂₉ Xaa₃₀ Xaa₃₁ Xaa₃₂(SEQ ID NO：80)，其中

Xaa₁是A，C，hC(同型Cys)，D，E，F，F，I，K，hK(同型 Lys)，R，hR(同型Arg)，S，Hse(同型Ser)，T，G，Q，N，M， Y，W，P，Hyp(羟基Pro)，H，V或不存在；

Xaa₃是A，D，E，N，Q，G，V，R，K，hK，hR，H，I，L， M或不存在；

Xaa₄是A，I，L，S，Hse，T，V，M或不存在；

Xaa₅是A，S，T，Hse，Y，V，I，L或M；

Xaa₆是T，A，S，Hse，Y，V，I，L或M；

Xaa₈是A，V，I，L，F或M；

Xaa₉是L，T，S，Hse，V，I或M；

Xaa₁₀是G，H，Q，K，R，N，hK或hR；

Xaa₁₁是K，R，Q，N，hK，hR或H；

Xaa₁₂是L，I，V，F，M，W或Y；

Xaa₁₃是A，F，Y，N，Q，S，Hse或T；

Xaa₁₄是A，D，E，G，N，K，Q，R，H，hR或hK；

Xaa₁₅是A，D，E，F，L，S，Y，I，V或M；

Xaa₁₆是L，F，M，V，Y或I；

Xaa₁₇是H，Q，N，S，Hse，T或V；

Xaa₁₈是K，hK，R，hR，H，u(Cit)或n(Orn)；

Xaa₁₉是F，L，S，Hse，V，I，T或不存在；

Xaa₂₀是H，R，K，hR，hK，N，Q或不存在；

Xaa₂₁是T，S，Hse，V，I，L，Q，N或不存在；

Xaa₂₂是F，L，M，V，Y或I；

Xaa₂₃是P或Hyp；

Xaa₂₄是P，Hyp，R，K，hR，hK或H；

Xaa₂₅是T，S，Hse，V，I，L，F或Y；

Xaa₂₆是N，Q，D或E；

Xaa₂₇是T，V，S，F，I或L；

Xaa₂₈是G或A；

Xaa₂₉是S，Hse，T，V，I，L或Y；

Xaa₃₀是E，G，K，N，D，R，hR，hK，H或Q；

Xaa₃₁是A，T，S，Hse，V，I，L，F或Y；和

Xaa₃₂是F，P，Y，Hse，S，T或Hyp；

其中X和Y能够形成键并独立地选自具有化学上彼此结合形成 分子内连接如二硫键的侧链的残基；酰胺键；可以形成环内酰胺的烷 基酸和烷基胺；可以稠合并还原形成烷基胺或桥的烷基醛或烷基卤和 烷基胺；或可以连接形成烷基、烯基。炔基、醚或硫醚键的侧链。

烷基链可以包括具有约1至约6个碳原子的低级烷基。在特定的 实施方案中，分子间键可以是二硫键、酰胺、亚胺、胺、烷基或烯基 键。在特定实施方案中，X和Y独立地选自Ser，Asp，Glu，Lys，Orn 或Cys。在特定实施方案中，X和Y是Cys和Cys。在其他实施方案 中，X和Y是Ser和Ser。仍然其他实施方案中，X和Y是Asp和Lys 或Lys和Asp。

有用的胰淀素激动剂还可以包括含有氨基酸序列通式VI的类似 物：Xaa₁ Xaa₂ Xaa₃ Xaa₄ Xaa₅ Xaa₆ Xaa₇ Xaa₈ Xaa₉ Xaa₁₀ Xaa₁₁ Xaa₁₂ Xaa₁₃Xaa₁₄ Xaa₁₅ Xaa₁₆ Xaa₁₇ Xaa₁₈ Xaa₁₉ Xaa₂₀ Xaa₂₁ Xaa₂₂ PXaa₂₄ T N Xaa₂₇ G S Xaa₃₀ Xaa₃₁ Xaa₃₂(SEQ ID NO：81)，其中

Xaa₁是A，C，D，F，I，K，S，T或不存在；

Xaa₂是C，D，S或不存在；

Xaa₃是A，D，N或不存在；

Xaa₄是A，L，T或不存在；

Xaa₅是A或S；

Xaa₆是T，A，S或V；

Xaa₇是C，K或A；

Xaa₈是A，V，L或M；

Xaa₉是L或T；

Xaa₁₀是G，H，或Q；

Xaa₁₁是K，R，Q或不存在；

Xaa₁₂是L，W或Y；

Xaa₁₃是A，F，N，Q，S或T；

Xaa₁₄是A，D，E，G，N，K，Q或R；

Xaa₁₅是A，D，E，F，L，S或Y；

Xaa₁₆是L或F；

Xaa₁₇是H，Q，S或V；

Xaa₁₈是K，R，hArg，u(Cit)或n(Orn)；

Xaa₁₉是F，L，S或不存在；

Xaa₂₀是H，Q或不存在；

Xaa₂₁是T，N或不存在；

Xaa₂₂是F，L，M，V或Y；

Xaa₂₄是P或R；

Xaa₂₇是T或V；

Xaa₃₀是E，G，K或N；

Xaa₃₁是A或T；和

Xaa₃₂是F，P或Y。

有用的胰淀素激动剂还可以包括含有氨基酸序列通式VII的类似 物：Xaa₁ Xaa₂ Xaa₃ Xaa₄ Xaa₅ T Xaa₇ Xaa₈ Xaa₉ Xaa₁₀ Xaa₁₁ L Xaa₁₃ Xaa₁₄Xaa₁₅ L Xaa₁₇ Xaa₁₈ Xaa₁₉ Xaa₂₀ Xaa₂₁ Xaa₂₂ P Xaa₂₄ T N Xaa₂₇ G S Xaa₃₀Xaa₃₂，(SEQ ID NO：82)，其中

Xaa₁是A，C，F，I，K，S或不存在；

Xaa₂是C，D或S；

Xaa₃是A，D或N；

Xaa₄是A，L或T；

Xaa₅是A或S；

Xaa₇是C或K；

Xaa₈是A或V；

Xaa₉是L或T；

Xaa₁₀是G，H或Q；

Xaa₁₁是K，R或hArg；

Xaa₁₃是A，F，N，S或T；

Xaa₁₄是A，D，E，G，N，Q或R；

Xaa₁₅是A，E，F，L，S或Y；

Xaa₁₇是H，S或V；

Xaa₁₈是K，R，hArg，u(Cit)或n(Orn)；

Xaa₁₉是F，L或S；

Xaa₂₀是H或Q；

Xaa₂₁是T或N；

Xaa₂₂是F，L，M，V或Y；

Xaa₂₄是P或R；

Xaa₂₇是T或V；

Xaa₃₀是E，G，K或N；

Xaa₃₁是A或T；和

Xaa₃₂是F，P或Y。

有用的胰淀素激动剂还可以包括含有氨基酸序列通式VIII的类似 物：Xaa₁ Xaa₂ Xaa₃ Xaa₄ Xaa₅ Xaa₆ Xaa₇ Xaa₈ Xaa₉ Xaa₁₀ Xaa₁₁ Xaa₁₂ Xaa₁₃Xaa₁₄ Xaa₁₅ Xaa₁₆ Xaa₁₇ Xaa₁₈ Xaa₁₉ Xaa₂₀ Xaa₂₁ Xaa₂₂ P Xaa₂₄ T N Xaa₂₇ G S Xaa₃₀ Xaa₃₁ Xaa₃₂(SEQ ID NO：83)，其中

Xaa₁是A，C，D，F，K，T或不存在；

Xaa₂是A，C，D，S或不存在；

Xaa₃是A，D，N或不存在；

Xaa₄是A，L，T或不存在；

Xaa₅是A或S；

Xaa₆是A，S，T或V；

Xaa₇是A，C或K；

Xaa₈是A，L，M或V；

Xaa₉是L或T；

Xaa₁₀是G，H或Q；

Xaa₁₁是K，Q或R；

Xaa₁₂是L，W或Y；

Xaa₁₃是A，N，Q，S或T；

Xaa₁₄是A，D，E，G，K，N，Q或R；

Xaa₁₅是A，D，E，F，L，S或Y；

Xaa₁₆是F或L；

Xaa₁₇是H、Q、S或V；

Xaa₁₈是K或R；

Xaa₁₉是F，L，S或不存在；

Xaa₂₀是H，K，Q或不存在；

Xaa₂₁是Q，T或不存在；

Xaa₂₂是F，L或Y；

Xaa₂₄是P或R；

Xaa₂₇是T或V；

Xaa₃₀是E，K或N；

Xaa₃₁是A或T；和

Xaa₃₂是F，Y或不存在。

在概括的方面中，通式V、VI、VII或VIII的序列进一步包括1、 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多置换、插入、删除、延 伸和/或衍化的修饰。在特定的实施方案中，通式V、VI、VII或VIII 包括位置24的删除。在特定的实施方案中，通式V、VI或VII的序 列包括氨基酸位置22和23之间插入的Val。在其他实施方案中，通 式V、VI或VII的序列包括位置22和23之间插入的Gln。仍然其他 实施方案中，通式V、VI或VII的序列包括位置22和23之间的序列 Gln-Thr-Tyr。仍然其他实施方案中，通式V、VI或VII的序列包括位 置22和23之间的序列Leu-Gln-Thr-Tyr(SEQ ID NO：84)。另一个 概括的方面中，通式V、VI或VII的修饰可以在N-端。在特定的实 施方案中，通式V、VI或VII的N-端部分具有添加的辛基甘氨酸。 其他实施方案中，通式V、VI或VII的N-端部分具有添加的isocap。 其他实施方案描述于PCT申请No.PCT/US2005/004631中，并引入作 为参考。

参照人胰淀素(SEQ ID NO：1；h胰淀素)、大鼠胰淀素(SEQ ID NO：2；r胰淀素)和鲑鱼降钙素(sCT) CSNLSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP(SEQ ID NO：85)描述 的在所示位置带有修饰的示例性化合物包括，

(1-7h胰淀素)(¹⁸Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：86)；

(1-7h胰淀素)(^11，18Arg²²Leu 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：87)；

(1-7h胰淀素)(^11，18Arg²⁴Pro 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：88)；

(1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-24sCT)(30-37h胰淀素)(SEQ ID NO：89)；

(1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-21sCT)(27-37r胰淀素)(SEQ ID NO：90)；

(⁸Val⁹Leu¹⁰Gly 1-15h胰淀素)(¹⁸Arg 16-27sCT)(31-37h胰淀素)(SEQ ID NO：91)；

(¹Ala 1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：92)；

(³Ala 1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：93)；

(⁴Ala 1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：94)；

(⁶Ala 1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：95)；

(²Ala^11，18Arg 1-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：96)；

(Isocap-⁷Ala^11，18Arg 5-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：97)；

(⁴Ala^11，18Arg 1-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：98)；

(⁵Ala^11，18Arg 1-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：99)；

(⁶Ala^11，18Arg 1-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：100)；

(1-7h胰淀素)(¹¹Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：101)；

(¹³Ser¹⁴Gln¹⁵Glu 1-16h胰淀素)(¹⁷Arg³⁰Asn³²Tyr 17-32sCT)(SEQ ID NO：102)；

(³Ala^11，18Arg 1-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：103)；

(乙酰基-^2，7Agy^11，18Arg 1-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：104)；

(乙酰基-^2，7Agy 1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：105)；

(Isocap-⁷Ala¹⁰Aib¹¹Lys(For)¹⁷Aib¹⁸Lys(For)5-27sCT)(33-37h胰淀素) (SEQ ID NO：106)；

(Isocap-⁷Ala¹⁰Aib¹¹Lys(For)¹⁷Aib¹⁸Lys(For)5-24sCT)(30-37h胰淀素) (SEQ ID NO：107)；

(Isocap-⁷Ala¹⁰Aib¹¹Lys(For)¹⁷Aib¹⁸Lys(For)5-22sCT)(^28，29Pro 28-37h胰 淀素)(SEQ ID NO：108)；

(Isocap-⁷Ala¹⁰Aib¹¹Lys(For)¹⁷Aib¹⁸Lys(For)5-21sCT)(^28，29Pro 27-37h胰 淀素)(SEQ ID NO：109)；

(1-7h胰淀素)(LLQQWQKLLQKLKQ(SEQ ID NO：110))(²⁸Pro²⁹Arg³²Thr 27-37h胰淀素)(SEQ ID NO：111)；

(1-7h胰淀素)(LLQQLQKLLQKLKQY(SEQ ID NO：112))(²⁸Pro²⁹Arg³²Thr 28-37h胰淀素)(SEQ ID NO：113)；

(⁶Ser1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：114)；

(⁶Val1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：115)；

(1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-18sCT)(²⁸Pro²⁹Arg³²Thr 27-37h胰淀素)(SEQ ID NO：116)；

(1-7h胰淀素)(¹¹Arg 8-17sCT)(²⁸Pro²⁹Arg³²Thr 27-37h胰淀素)(SEQ ID NO：117)；

(1-7h胰淀素)(¹¹Arg 8-16sCT)(²⁷Tyr²⁸Pro²⁹Arg³²Thr 27-37h胰淀素) (SEQ ID NO：118)；

(1-7h胰淀素)(¹¹Arg 8-15sCT)(²⁷Tyr²⁸Pro²⁹Arg³²Thr 27-37h胰淀素)(SEQ ID NO：119)；

(1-7h胰淀素)(¹¹Arg 8-14sCT)(²⁷Tyr²⁸Pro²⁹Arg³²Thr 27-37h胰淀素) (SEQ ID NO：120)；

(1-7h胰淀素)(^11，18Lys(For)8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：121)；

(⁶D-Thr 1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：122)；

(乙酰基-1-7h胰淀素)(^11，18Lys(PEG5000)8-27sCT)(33-37h胰淀素) (SEQ ID NO：123)；

(乙酰基-¹Ala 1-7h胰淀素)(¹¹Lys(PEG5000)¹⁸Arg 8-27sCT)(33-37h胰 淀素)(SEQ ID NO：124)；

(乙酰基-¹Ala 1-7h胰淀素)(¹¹Arg¹⁸Lys(PEG5000)8-27sCT)(33-37h胰 淀素)(SEQ ID NO：125)；

(1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-21sCT)(19-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：126)；

(1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-21sCT)(¹⁸Leu 18-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：127)；

(1-7h胰淀素)(8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：128)；

(⁵Ser 1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：129)；

(1-12h胰淀素)(¹⁸Arg 13-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：130)；

(1-12h胰淀素)(¹⁸Arg 13-24sCT)(30-37h胰淀素)(SEQ ID NO：131)；

(⁵Ser¹⁵Glu¹⁸Arg 1-18h胰淀素)(19-24sCT)(30-37h胰淀素)(SEQ ID NO：132；

(⁶Hse 1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：133)；

(⁶Ahb 1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：134)；

(⁶Ahp 1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：135)；

⁶Thr(OPO₃H₂)1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：136)；

(⁷Ala^11，18Arg 5-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：137)；

(1-7h胰淀素)(^11，18Orn 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：138)；

(1-7h胰淀素)(^11，18Cit 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：139)；

(1-7h胰淀素)(^11，18homoLys 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：140)；

(L-辛基甘氨酸-1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：141)；

(N-3，6-二氧杂辛酰基-1-7-h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素) (SEQ ID NO：142)；

(环(1-7)-¹Asp⁷Lys^11，18Arg 1-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：143)；

(环(2-7)-²Asp⁷Lys 1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：144)；

(环(2-7)h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：145)；

(1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素-9Anc)(SEQ ID NO：146)；

(1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素-L-辛基甘氨酸)(SEQ ID NO：147)；

(N-异己酰基-1-7-h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：148)；

(1-7h胰淀素)(^11，18homoArg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：149)；

(¹Phe 1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCT)(33-37h胰淀素)(SEQ ID NO：150)；

(1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-24sCT)(³²Thr 30-37h胰淀素)(SEQ ID NO：151)；

(1-7h胰淀素)(^11，18Arg 8-27sCt)(33-37h胰淀素lin)(SEQ ID NO：152)；

(¹⁵Glu¹⁸Arg 1-18h胰淀素)(19-24sCT)(30-37h胰淀素)(SEQ ID NO：153)；

(¹³Ala¹⁴Asp¹⁵Phe 1-18h胰淀素)(19-23sCT)(30-37h胰淀素)(SEQ ID NO：154)；和

(2-18h胰淀素)(19-23sCT)(30-36h胰淀素)(SEQ ID NO：155)。

在此提供的组合物和方法中有用的肽，如以上那些，可以是酸或 酰胺形式。

也可以用于在此提供的组合物和方法中的示例性肽包括：

KCNTATCVLGKLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：156)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：157)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPPTNTGSNTY(SEQ ID NO：158)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNVGSNTY(SEQ ID NO：159)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTLPPTNVGSNTY(SEQ ID NO：160)

KCNTATCVLGRLANFLHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：161)

ACNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：162)

KCNAATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：163)

KCNTAACVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：164)

CANLSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：165)

异己酰基-STAVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：166)

CSNASTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：167)

CSNLATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：168)

CSNLSACVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：169)

KCNTATCVLGRLSQELHKLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：170)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSGTP(SEQ ID NO：171)

CSALSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：172)

Ac-(Agy)SNLST(Agy)VLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：173)

Ac-K(Agy)NTAT(Agy)VLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：174)

异己酰基-STAVL(Aib)RLSQELRLQTYPRTNTGSGTP(SEQ ID NO：175)

异己酰基-STAVLG[K(For)]LSQELH[K(For)]LQTYPRTNTGSGTP (SEQ ID NO：176)

异己酰基-

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异己酰基-

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L-辛基甘氨酸KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：201)

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N-异己酰基-KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：209)

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CSNLSTCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：252)

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：253)。

一些实施方案中，包括氨基酸序列

KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY(SEQ ID NO：253)的 化合物在公开的方法中特别有用。

如在此所述的，用于在此公开的组合物和方法中的胰淀素家族肽 激素还包括肾上腺髓质素(ADM)肽。“肾上腺髓质素”或“ADM” 意思是人肽激素及其物质变种。ADM通过连续酶分裂和酰胺化产自 185个氨基酸前激素原。该过程结束于52个氨基酸生物活性肽的释放。 任何呈现本领域已知生物活性的已知ADM肽，类似物，或衍生物可 以用于在此公开的组合物和方法。在一个实施方案中，ADM肽、类 似物和衍生物具有至少一种天然ADM肽的激素活性。在特定的实施 方案中，ADM肽、类似物和衍生物是天然ADM能够特异性结合的受 体的激动剂。

如在此所述的，用于在此公开的组合物和方法中的胰淀素家族肽 激素还包括降钙素(CT)肽。“降钙素”或“CT”意思是人肽激素及 其物种变体，包括鲑鱼降钙素(sCT)。CT是分离自较大前激素原的 32个氨基酸肽。它含有单个二硫键，其导致氨基端呈现环状。天然CT 肽是本领域已知的，功能性CT肽类似物、衍生物和混合物也是已知 的。任何呈现本领域已知生物活性的本领域已知的CT肽、类似物或 衍生物可以用于在此公开的组合物和方法中。在一个实施方案中，CT 肽、类似物和衍生物具有至少一种天然CT肽的激素活性。在特定的 实施方案中，CT肽、类似物和衍生物是天然CT能够特异性结合的受 体的激动剂。CT肽类似物、衍生物和混合物可以是酰胺化的，如本 领域所知的，或可以是酸形式。示例CT类似物和衍生物包括，但不 限于，描述于U.S.专利No.4,652,627、4,606,856、4,604,238、4,597,900、 4,537,716、4,497,731、4,495,097、4,444,981、4,414,149、4,401,593和 4,397,780，在此引入作为参考。

如在此所述的，用于在此公开的组合物和方法中的胰淀素家族肽 激素还包括降钙素基因相关肽(CGRP)。“降钙素基因相关肽”或 “CGRP”意思是人肽激素及其物种变体，以任何生理形式。CGRP是 37个氨基酸肽并从降钙素前-mRNA的可替换拼接得到编码和表达。 任何呈现本领域已知生物活性的本领域已知的CGRP、CGRP类似物 或CGRP衍生物可以用于在此公开的组合物和方法中。在一个实施方 案中，CGRP肽、类似物和衍生物具有至少一种天然CGRP的激素活 性。在特定的实施方案中，CGRP肽、类似物和衍生物是天然CGRP 能够特异性结合的受体的激动剂。CGRP肽、类似物和衍生物可以酰 胺化，如本领域已知的，或可以是酸形式。示例CGRP类似物和衍生 物包括，但不限于，U.S.专利No.4,697,002和4,687,839中公开的那些， 在此将其引入作为参考。

激动剂和类似物的衍生物也包括在提供的方法内，其中单个氨基 酸的立体化学可以是在一个或多个特异性位点从(L)/S翻转成(D) /R。提供的方法内还包括由Asn、Ser和/或Thr残基的糖基化修饰的 激动剂和类似物。在提供的方法中有用的化合物还可以是在此所述的 肽(天然的、激动剂、类似物和衍生物)的生物活性片段。

含有较少肽特征的胰淀素的激动剂和类似物包括在提供的方法 内。这样的肽模拟物可以包括，例如，以下一个或多个--CO--NH--酰 胺键的取代：depsipeptide肽(--CO--O--)、亚氨基亚甲基(--CH2-- NH--)、反式-烯烃(--CH＝CH--)、β-烯氨基腈(--C(＝CH--CN)--NH--)、 硫代酰胺(--CS--NH--)、硫代亚甲基(-S--CH2--或--CH2-S-)、亚甲 基(--CH2--C2--)和retro-酰胺(--NH--CO--)。

提供的方法中使用的化合物与各种无机和有机酸和碱形成盐。这 样的盐包括用有机和无机酸制备的盐，例如，HCl、HBr、H₂SO₄、H₃PO₄、 三氟醋酸、醋酸、蚁酸、甲磺酸、甲苯磺酸、苹果酸、富马酸和樟脑 磺酸。用碱制备的盐包括，例如，铵盐、碱金属盐(如钠和钾盐)和 碱土金属盐(如钙和镁盐)。在特定的实施方案中，化合物形成醋酸 盐、盐酸盐和三氟醋酸盐。

在此提供的组合物和方法中有用的胰淀素激动剂还可以包括如上 所述的胰淀素及其类似物的片段以及描述于EP289287中的那些，其 内容在此引入作为参考。胰淀素激动剂类似物还可以是具有与SEQ ID NO：1或在此特异描述的具有胰淀素活性的任一种胰淀素类似物至少 60、65、70、75、80、85、90、95或99％氨基酸序列同一性的化合物。 胰淀素激动剂还包括小化学分子和非肽分子，例如，基于小分子化学 的那些。一些实施方案中，胰淀素激动剂不是小化学分子。

胰淀素家族肽或类似物的衍生物也是本领域已知的。这样的衍生 物包括缀合一种或多种水溶性聚合物分子的胰淀素家族肽激素及其类 似物，聚合物如聚乙二醇(PEG)或各种长度的脂肪酸链(例如，硬 脂酰、棕榈酰、辛酰等)，或通过添加聚氨基酸，如聚-his、聚-arg、 聚-lys、聚-ala和聚氨基酸的组合，如聚-his-ala、聚-arg-ala和聚-lys-ala。 肽或其类似物的修饰还可以包括小分子取代基，如短烷基和限制的烷 基(例如，支链、环状、稠合、金刚烷基)和芳香族基团。如在此所 述的，这样的聚合物-缀合和小分子取代修饰可以在N-或C-端或肽内 氨基酸残基的侧链单个发生。或者，沿着肽存在多个衍化位点。用赖 氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸的一个或多个氨基酸的取代可以 提供其他用于衍化的位点。参见，例如，U.S.专利No.5,824,784和 5,824,778。在一些实施方案中，肽可以缀合一个、两个或三个聚合物 分子。

示例水溶性聚合物分子具有约500至20,000道尔顿的分子量范 围。在一些情况中，水溶性聚合物分子连接氨基、羧基或巯基，并可 以通过N或C端连接，或在赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸的 侧链连接。或者，水溶性聚合物分子可以连接二胺和二羧基。在一些 实施方案中，肽连接通过赖氨酸上的ε氨基一个、两个或三个PEG分 子。

衍生物还包括具有一个或多个氨基酸残基化学改变的胰淀素家族 肽激素或类似物。这样的化学改变包括酰胺化、糖基化、酰化、硫化、 磷酸化、乙酰化和环化。化学改变可以单个发生在N-或C-端或肽序 列内氨基酸残基的侧链。在一个实施方案中，这些肽的C端具有游离 -OH或-NH₂基团。在另一个实施方案中，N-端可以加帽异丁基氧羰基、 异己酰基(isocap)、辛基、辛基甘氨酸基团(G(Oct))或8-氨基辛酸 基团。在一个实施方案中，环化可以通过二硫桥接的形成。或者，沿 着肽存在多个化学改变位点。

如在此所用的“胰淀素活性”可以包括至少一种以下所述的本领 域已知的活性。胰淀素活性还包括胰淀素改变偏食、改变暴食、改变 食物渴求或其任何组合的能力。通常，认为胰淀素激动剂或胰淀素激 动剂类似物指的是直接或间接地与一个或多个受体相互作用或结合一 个或多个受体、模拟胰淀素作用的化合物。还将它们称为胰淀素模拟 物。

可以通过进行各种筛选测试或通过诱导哺乳动物血钙过少或降低 餐后高血糖的能力来证实和定量作为胰淀素激动剂和/或类似物的活 性，筛选测试包括伏隔核受体结合测试、比目鱼肌测试、胃排空测试。 测试胰淀素活性化合物的方法是本领域已知的。用于测试胰淀素激动 剂的示例筛选方法和测试描述于U.S.专利No.5,264,372和5,686,411 中，在此将其引入作为参考。

受体结合测试，测量化合物特异性结合膜结合胰淀素受体的能力 的竞争测试。测试中使用的膜制剂的优选来源是基底前脑，其包括来 自依伏神经核和周围部分的膜。测试的化合物与¹²⁵I Bolton Hunter大 鼠胰淀素竞争结合这些受体制剂。竞争曲线，其中将结合的含量(B) 作为配体浓度的log函数作曲线，通过计算机分析，使用通过非线性 回归4-参数逻辑等式(INPLOT程序，GraphPAD Software，San Diego， CA)或Delean等的ALLFIT程序(ALLFIT，2.7版本(NIH，Bethesda， Md.20892))的分析。Munson等(1980)Anal.Biochem.107：220-239。

可以使用之前所述的方法(Leighton等(1988)Nature 3 35：632- 635；Cooper等(1988)Proc.Natl.Acad.ScL.USA 85：7763-7766)进 行比目鱼肌中胰淀素激动剂/类似物的生物活性的测试，其中可以通过 测量胰岛素刺激的糖原合成的抑制来测定胰淀素激动剂活性。简而言 之，示例性方法包括从12-h禁食的雄性Wistar大鼠制得比目鱼肌条。 在连接不锈钢芯片之前连接肌肉的腱。将肌肉条在含有3.5ml Krebs- Ringer碳酸氢盐缓冲剂、7mM N-2-羟乙基-哌嗪-N’-2-乙烷-磺酸，pH7.4 和5.5mM丙酮酸盐的锥形烧瓶中预孵育。将烧瓶密封并以19∶1比例 (v/v)的O₂和CO₂连续充气。肌肉在该介质中在37℃振动水浴中预 孵育30分钟后，将肌肉条转移至含有相同介质(除了丙酮酸盐)的 相似的瓶中，含有添加的[U-¹⁴C]葡萄糖(0.5μCi/ml)和胰岛素 (100μU/ml)。将烧瓶密封并在1-h孵育的最初15分钟中再次充气。 在孵育阶段结束时，将肌肉吸干并快速冷冻于液氮中。可以通过分光 光度计测定孵育介质中乳酸盐的浓度并测量糖原中引入的[U-¹⁴C]葡萄 糖。

测量胃排空速率的方法描述于，例如，Young等(1995)Diabetologia 38：642-648中。在苯酚红方法中，有意识的大鼠通过管饲接受含有 甲基纤维素和苯酚红指示剂的acoloric凝胶。管饲后二十分钟，使用 氟烷将动物麻醉，暴露胃并在幽门和下食道括约肌处夹紧，取出并打 开放入碱性溶液中。胃内含物源自碱性溶液中的苯酚红强度，通过在 560nm波长处的吸收值测量。在氚化葡萄糖方法中，将有意识的大鼠 管饲水中氚化的葡萄糖。通过尾巴将大鼠温和地限制，使用利多卡因 将其尖端麻醉。在各个时间点收集从尾部血液分离的血浆中的氚并在 β-计数器中检测。通常在管饲前约一分钟给予测试化合物。

胰淀素激动剂化合物在受体结合测试中呈现出大约低于约1至 5nM的活性，在一些实施方案中低于约1nM，在一些实施方案中低于 约50pM。在比目鱼肌测试中，胰淀素激动剂化合物显示出大约低于 约1至10微摩尔的EC₅₀值。在胃排空测试中，胰淀素激动剂化合物 显示出大约低于100μg/大鼠的ED₅₀值。

可以使用本领域已知的化学肽合成技术来制备在此所述的肽，例 如，使用自动化或半自动化肽合成仪，标准重组技术，或两者。同样， 可以使用标准化学、生化或体内方法来产生肽的衍生物。

根据常规技术可以在溶液中或固体支持物上合成肽。各种自动化 合成仪是可购得的并可以根据已知方案来使用。参见，例如，Stewart 等(1984)Solid Phase Peptide Synthesis(固相肽合成)，第2版，Pierce Chemical Co.；Tam等(1983)J.Am.Chem.Soc.105：6442；Merrifield (1986)Science 232：341-347；和Barany等(1979)The Peptides(肽)， Gross等编辑，Academic Press，NY，1-284。可以使用自动化或半自 动化肽合成仪进行固相肽合成。通常，使用这样的技术，在室温在惰 性溶剂如二甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮或二氯甲烷中，在偶联剂如二环 己基碳二亚胺和1-羟基苯并三唑存在下，在碱基如二异丙基乙胺存在 下，α-N-氨基甲酰保护的氨基酸和树脂上连接生长中肽链的氨基酸结 合。使用试剂如三氟醋酸或哌啶从所得到的肽-树脂除去α-N-氨基甲 酰保护基团，并且用下一个待添加至肽链的所需N-保护氨基酸重复偶 联反应。合适的N-保护基团是本领域公知的，例如，叔丁氧基羰基 (tBoc)和芴基甲氧基羰基(Fmoc)。例如，可以使用自动化肽合成 仪(例如，Model 430A，Applied Biosystems Inc.，Foster City，CA) 进行固相肽合成，使用NMP/HOBt(选项1)系统和tBoc或Fmoc化 学物质，使用加帽(参见，Applied Biosystems User’s Manual for the ABI 430A Peptide Synthesizer，1.3B版本，1988年7月1日，部分6：49- 70)。还可以使用Advanced ChemTech Synthesizer(Model MPS 350， Louisville，KY)装配肽。可以通过RP-HPLC(制备性和分析)纯化 肽，使用，例如，WatersDELTA-PREP^TM3000系统(Waters Corp.， Milford，MA)和C4、C8或C18制备性柱(10μ，2.2×25cm；Grace Vydac， Hesperia，CA)。肽可以容易地合成，然后在设计来鉴定具有特定活 性的肽的测试中筛选。合成和纯化肽的其他方法是本领域技术人员已 知的。

或者，可以通过本领域公知的重组技术来产生在此公开的肽。参 见，例如，Sambrook等(1989)Molecular Cloning：A Laboratory Manual (分子克隆：实验室手册)，第2版，Cold Spring Harbor，NY。通过 重组技术产生的肽可以从多核苷酸表达。本领域技术人员将认识到可 以从野生型cDNA获得编码这样的肽的各个片段多核苷酸，包括DNA 和RNA，考虑密码使用的简并性，或可以如所需的工程化。这些多核 苷酸序列可以引入有助于mRNA在微生物宿主中转录和翻译的密码 子。可以根据本领域公知的方法容易地构建这样的制造序列。以上的 多核苷酸还可以任选编码N-端甲二酰残基。以上的多核苷酸还任选编 码C-端甘氨酰残基，用于正确的酰胺形成。可以通过本领域已知的方 法来制备用于在此提供的组合物和方法中的非肽化合物。例如，可以 使用本领域已知的方法制备含磷酸盐的氨基酸和含有这样氨基酸的 肽。参见，例如，Bartlett等(1986)Bioorg.Chem.14：356-377。

各种细胞类型可以用于含有和表达肽编码序列，包括，例如，细 菌、酵母、藻类、昆虫细胞、植物细胞和动物细胞，如哺乳动物和鸟 类细胞。可以使用各种表达载体/宿主系统，包括，但不限于，微生物， 如用重组噬菌体、质粒或粘粒DNA表达载体转化的细菌；用酵母表 达载体转化的酵母；用病毒表达载体(例如，杆状病毒)转染的昆虫 细胞系统；用病毒表达载体(例如，花菜花叶病毒(CaMV)转染的 植物细胞系统；烟草花叶病毒(TMV)或用细菌表达载体(例如，Ti 或pBR322质粒)转化的；或动物细胞系统。用于重组蛋白产生的哺 乳动物细胞和细胞系包括，但不限于，VERO(非洲绿猴肾脏)细胞、 HeLa细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系、COS细胞(如COS-7)、 WI38(人肺成纤维细胞)、幼仓鼠肾脏(BHK)细胞、HepG2、3T3、 RIN、Madin-Darby犬肾脏上皮(MDCK)细胞、A549、PC12、K562 和293细胞。用于重组表达多肽的示例方案是本领域公知的。

可以选择宿主细胞株加工所表达的肽或产生特定用于提供肽活性 的翻译后修饰的特定能力。这样的多肽修饰包括，但不限于，乙酰化、 羧化、糖基化、磷酸化、脂化、酰化和酰胺化，例如，羧基-端酰胺化。 翻译后加工，其分裂多肽的“prepro”形式，对于正确的插入、折叠 和/或功能也是重要的。不同的宿主细胞，如CHO、HeLa、MDCK、293、 WI38等，具有特定的细胞机械和特征机制，用于这样的翻译后活性， 并可以选择来确保引入的外源蛋白的正确修饰和加工。

可以使用自动化肽合成和重组技术的结合来产生在此所述的肽。 例如，肽可以含有修饰的组合，包括删除、置换和通过PEG化的插入。 这样的肽可以分阶段产生。例如，在第一阶段中，可以通过如所述的 重组技术产生含有删除、置换、插入及其任意组合的中间产物肽。然 后，在任选纯化步骤后，通过化学修饰用合适的PEG化剂将中间产物 肽PEG化(例如，来自Nektar Therapeutics，San Carlos，CA)来产 生所需的肽。肽的酰胺化也可以分阶段进行。本领域技术人员将认识 到可以概括上述程序来运用至含有选自删除、置换、插入、衍化和本 领域公知的并在此考虑的其他修饰方式的修饰组合的肽。

还可以使用本领域已知的化学连接方案产生在此所述的肽，包括 那些描述于，例如，U.S.申请公开No.2003-0191291、2003-0208046 和2004-0115774。化学连接指的是涉及两个化学部分共价连接的化学 选择性反应，每个部分带有唯一地和另一个功能团能够形成不可逆共 价键的相互反应的官能团。第一和第二成分上存在的独特的、相互反 应的官能团可以用于呈现连接反应化学选择性。例如，肽和多肽的化 学连接涉及带有相容的独特的相互反应的C-端和N-端氨基酸残基的 肽或多肽片段的化学选择性反应。化学连接包括(1)带有独特反应 性C-端基团的第一个肽或多肽和(2)带有独特反应性N-端基团的第 二个肽或多肽的共价连接，其中C-端和N-端反应性基团在其中形成 不可逆的共价键。还可以包括N-端至N-端和C-端至C-端连接。特别 地，化学连接包括可以用于连接未保护肽片段的任何化学选择性反应 化学物质。几个不同化学物质已经用于该目的，其实例包括天然化学 连接、肟形成化学连接、硫酯形成连接(Schnolzer等(1992)Science 256：221-225；Gieselman等(2001)Org.Lett.3：1331-1334)、硫醚 形成连接(Englebretsen等(1995)Tot.Leffs.36：8871-8874)、腙形成 连接(Gaertner等(1994)Bioconj.Chem.5：333-338)以及噻唑烷形 成连接和呃唑烷形成连接(Zhang等(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95： 9184-9189；PCT公开No.WO95/00846；U.S.专利No.5,589,356)；和 Staudinger酰胺形成化学连接(Saxon等(2000)Org.Leff.2：2141-2143)。

通常选择用于给定连接化学物质的反应条件来维持用于连接的肽 或多肽片段所需的相互作用。例如，可以改变pH和温度、连接成分 的水溶性、第一个片段与第二个片段的比例、含水量和反应混合物的 组成来最佳化连接。溶解连接片段至不同程度的试剂的添加或排除可 以进一步用于控制所需连接反应的特异性和速率，即，通过维持肽或 多肽片段的稳定性来控制反应基团的暴露和保持。通过测试与一个或 多个内部和/或外部对照相比较的所需化学选择性反应产物容易地测定 反应条件。已经证明这些方法为用于在连接位点产生天然酰胺键的强 有力方法。

结合肽的设计，构建用于合成多肽主链的肽或多肽片段。用于肽 和多肽主链合成的方法描述于，例如，U.S.申请公开No.2004-0138412 (延伸的天然化学连接)，2003-0208046(假-天然化学连接)，2005- 0261473(用于化学连接中酸性C-端氨基酸的羧基保护策略来除去不 利副产物的形成)，2005-0064538和2005-0113563(具有提高的连接 效率的天然化学连接和具有三个或多个成分的化学连接)；PCT申请 公开No.WO2004/105685(使用可替换连接物的水-相容性固相化学连 接)和WO2004/060925(使用水溶性聚合保护基团的多元聚合物连接 以及用所需加合物的替代)；和U.S.专利No.6,307,018和6,184,344(天 然化学连接)，6,326,468(固相天然化学连接)，6,217,873(聚肟化合 物)，6,174,530(同源聚肟组合物)，6,001,364(杂-聚肟化合物)和 6,451,543(脂质-基质辅助合成)。通常，通过化学连接的肽或多肽主 链的合成涉及合适连接为点的选择，基于以下来选择：选择用于装配 各种多肽主链片段，选择用于目标肽的可逆(或可分裂)聚合物连接 化学物质，和特定的聚合物连接位点。使用天然化学连接时，通过扫 描目标多肽主链氨基酸序列测定半胱氨酸连接位点，用于合适的天然 产生半胱氨酸残基。使用“延伸的天然化学连接”时，可以通过扫描 目标多肽主链氨基酸序列选择连接位点，用于允许强有力连接的合适 天然产生连接位点汇合。因为延伸的天然化学连接不限于半胱氨酸残 基的连接，许多残基可以作为连接位点连接。在一些情况中，天然和 延伸的天然化学连接的组合可以是设计的一部分。

在一个实施方案中，天然化学连接用于产生部分或全部全长多肽 链。天然产生肽主链中存在的半胱氨酸可以用作化学连接位点。或者， 其中所需连接汇合缺乏合适的半胱氨酸，可以用半胱氨酸替换该位置 的非-半胱氨酸氨基酸或可以插入半胱氨酸使得允许在该位点天然化学 连接。如果需要，新引入的半胱氨酸可以转化成对应于该位置最初氨 基酸的假氨基酸残基。通过天然化学连接位点的半胱氨酸转化的假氨 基酸形成称为“假天然化学连接”。或者，将半胱氨酸引入用于聚合 物保护基团修饰的位点时，可以开发侧链硫醇用于连接硫醇反应水溶 性聚合物构建体，只要保护不希望修饰的目标多肽中的所有其他半胱 氨酸。在另一个实施方案中，延伸的天然化学连接可以用于产生部分 或全部全长多肽。用于硫酯介导的连接如用于天然化学连接的肽，也 可以根据标准方案形成，例如参见U.S.专利No.6,307,018和6,184,344。

如在此所用的，术语“纯化的肽”确定指的是从其他成分分离的 组合物，其中肽纯化至相对于其天然获得状态的任何程度。因此纯化 的肽还指的是从其天然产生的环境中分离出来的肽。通常，“纯化的” 指的是已经接受分级来除去各种其他成分的肽组合物，并且该组合物 基本上保持生物活性。使用术语“基本上纯化的”时，该术语指的是 其中肽形成组合物的主要成分的组合物，如构成组合物中约50％，约 60％，约70％，约80％，约90％，约95％或更多的肽。

纯化通过在此所述的方法产生的肽是理想的。肽纯化技术也是本 领域技术人员公知的。这些技术涉及，在一个水平，细胞环境粗分级 至多肽和非多肽部分。已经从其他蛋白质分离多肽后，可以使用色谱 和电泳技术进一步纯化目标多肽来获得部分或完全纯化(或纯化至均 一)。纯化技术包括，例如，用硫酸铵、PEG、抗体等沉淀；热变性， 接着离心；色谱步骤，如离子交换，凝胶过滤，反相、羟磷灰石和亲 和色谱；等电点聚焦；凝胶电泳；以及这样的和其他技术的组合。特 别适于纯肽制备的分析方法是离子交换色谱、排阻色谱、聚丙烯酰胺 凝胶电泳和等电点聚焦。特别有效的纯化肽的方法是反相HPLC，接 着通过液相色谱/质谱(LC/MS)和基质辅助激光吸收离子化(MALDI) 质谱来表征纯化产物。通过测定氨基酸分析来获得纯度的其他证实。 如本领域通常所知的，认为进行各种纯化步骤的次序可以改变，或特 定步骤可以省略，并且仍然形成合适的用于制备基本上纯化的蛋白质 或肽的方法。

不存在通常以其最纯的状态提供肽的一般要求。实际上，考虑到 较少实质性纯化的产物在特定的实施方案中具有实用性。可以通过使 用较少纯化步骤结合或利用相同一般纯化方案的不同形式实现部分纯 化。例如，认识到使用HPLC装置进行阳离子交换柱色谱，通常比利 用低压色谱系统的相同技术形成更大“倍数”的纯化。呈现较低程度 相对纯化的方法在蛋白质产物的总回收或维持肽的活性中具有优势。 在一些实施方案中，阴离子交换和免疫亲和色谱的结合可以用于产生 在此所述的纯化肽组合物。

胰淀素、胰淀素激动剂、胰淀素类似物和胰淀素衍生物(在该部 分中在此称为“胰淀素”化合物“)可以单独或结合药物学上可接受 载体或赋形剂给药，以单剂量或多剂量。因此，提供的药物组合物包 括治疗或预防有效量的至少一种胰淀素化合物或其药物学上可接受的 盐，和药物学上可接受的稀释剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂、佐剂和/ 或用于胰淀素化合物传送的载体。可以用药物学上可接受的载体或稀 释剂以及任何其它已知佐剂和赋形剂根据常规技术来配制这些药物化 合物，如公开于Remington’s Pharmacutical Science E.W.Martin中的那 些技术.请参阅Wang等(1988)Journal of Parenteral Science and Technology Technical Report No.10，增补42；2S。用于胰淀素或胰淀 素激动剂的示例制剂可以在U.S专利No.6,410,511和U.S.专利申请公 开No.2003-0092606中找到，在此将其引入作为参考。

在此提供的一个示例用途是外周给药这样的胰淀素化合物，用于 治疗或预防暴食。在此提供的另一个示例用途是外周给药这样的胰淀 素化合物，用于改变偏食或食物渴求。在此提供的另一个示例用途是 外周给药这样的胰淀素化合物，用于改变患者的代谢速率。

通常，可以将化合物配制成稳定而安全的药物组合物，用于给药 于患者。考虑用于在此所述方法中的药物制剂可以包括大约0.01至 6.0％(w/v)，或0.05至1.0％的化合物；大约0.02至0.5％(w/v)的 醋酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐或谷氨酸盐缓冲剂，使最终组合物的pH 为约3.0至约7.0；大约1.0至10％(w/v)的碳酸盐或多羟基醇张力 剂(tonicifier)，任选，大约0.005至1.0％(w/v)选自间甲酚，苯甲 醇，甲基-、乙基-、丙基-和丁基-对羟基苯甲酸和苯酚的防腐剂。如果 配制的肽包括于多用途产物中，通常包括这样的防腐剂。

在特定的实施方案中，药物制剂可以含有各种浓度的化合物，例 如，该实施方案中约0.01％至约98％(w/v)，或约1至约98％(w/v)， 或80％至90％(w/v)，或约0.01至约50％(w/v)，或约10％至约25％ (w/v)。足量用于注射的水可以用来获得所需的溶液浓度。

如果需要，可以存在其它张力调节剂如氯化钠，以及其它已知的 赋形剂。在一些情况中，这样的赋形剂用于维持制剂的整体张力。赋 形剂可以以各种浓度包括在本发明所述的制剂中。例如，可以以约 0.02％至约20％(w/w)，约0.02至0.5％(w/w)，约0.02至约10％(w/w)， 或约1％至约20％(w/w)的浓度包括赋形剂。此外，与本发明制剂本 身相似，可以以固体(包括粉末状的)、液体、半固体或凝胶形式包 括赋形剂。

如在此所述的，各种液体载体适用于本发明的肽制剂中，例如， 水或水/有机溶剂混合物或悬浮液。药物制剂可以构成各种形式，例如， 固体、半固体或液体。术语“固体”，如在此所用的，意思是包括该 术语所有形式的用途，包括例如，粉末和冻干制剂。本发明描述的制 剂可以是冻干的。

术语缓冲剂、缓冲剂溶液和缓冲溶液，当关于氢离子浓度或pH 使用时，指的是系统特别是水溶液在添加酸或碱时或用溶剂稀释时抵 抗pH改变的能力。在添加酸或碱时经历小的pH改变的缓冲溶液的 特征，是弱酸和弱酸盐，或弱碱和弱碱盐的存在。上述系统的实例是 醋酸和醋酸钠。pH的改变是轻微的，只要添加的水合氢离子或羟基 离子含量没有超过缓冲系统中和它的能力。在一些实施方案中，胰淀 素化合物悬浮于含水载体中，例如，约3.0至约8.0的pH，约3.5至 约7.4pH，约3.5至约6.0pH，或约3.5至约5.0pH的等渗压缓冲溶 液。在特定的实施方案中，制剂的pH维持在约3.5至约5.0的范围内， 或约3.5至约6.5，或约3.7至约4.3，或约3.8至约4.2。特定的pH 可以为约4.0。尽管不希望受到理论的限制，在此理解为，在一些实 施方案中，其中药物制剂的pH超过5.5，可以加速肽的化学降低，使 得保质期低于约两年。

有用的缓冲剂包括柠檬酸钠/柠檬酸，和磷酸钠/磷酸以及醋酸钠/ 醋酸缓冲剂。在特定的实施方案中，和胰淀素化合物的缓冲剂是醋酸 盐缓冲剂(例如，约1-5mM的制剂终浓度，例如，1.5mM，至约60mM)、 磷酸盐缓冲剂(例如，约1-5mM的制剂终浓度，例如，1.5mM，至约 30mM)或谷氨酸盐缓冲剂(例如，约1-5mM的制剂终浓度，例如， 1.5mM，至约60mM)。在一些实施方案中，缓冲剂是醋酸盐(例如， 约5mM至约30mM的制剂终浓度)。

稳定剂可以包括于本发明的制剂中，但是重要地，不是必需的。 然而，如果包括，本发明制剂实践中有用的稳定剂是碳水化合物或多 元醇。本发明方法实践中有用的合适稳定剂是大约1.0至10％(w/v) 碳水化合物或多元醇。多元醇和碳水化合物在它们的主链中具有相同 的特征，即，-CHOH-CHOH-，这负责稳定蛋白质。多元醇包括这样 的化合物，如山梨糖醇、甘露醇、甘油和聚乙二醇(PEG)。这些化合 物是直链分子。碳水化合物，如甘露糖、核糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、 肌醇和乳糖，另一方面，是环状分子，可以含有酮或醛基。已经证明 这两类化合物在稳定蛋白质对抗由升高的温度和冻-融或冻干处理引起 的变性是有效的。在其中患者患有糖尿病的实施方案中，合适的碳水 化合物包括：半乳糖、阿拉伯糖、乳糖或对糖尿病患者不具有副作用 的任何其他碳水化合物，即，碳水化合物不代谢形成血液中不可接受 的大浓度葡萄糖。适用于糖尿病的合适碳水化合物是本领域公知的。 蔗糖和果糖适用于非糖尿病患者的化合物中。(例如，治疗肥胖或暴 食)。

在特定的实施方案中，如果包括稳定剂，用多元醇来稳定化合物， 如山梨糖醇、甘露醇、肌醇、甘油、木糖醇和聚丙二醇/乙二醇共聚物， 以及分子量200、400、1450、3350、4000、6000和8000的各种PEG。 甘露醇是特定多元醇的实例。在此所述的冻干制剂的另一种有用特征 是用用来维持稳定性的相同制剂成分来维持冻干制剂的张力。甘露醇 是用于该目的特定多元醇。

美国药典(USP)主张必须将杀细菌或杀真菌浓度的抗微生物剂 加入多剂量容器中含有的制剂中。它们在使用时必须以合适的浓度存 在以防止用皮下注射器针头和注射器或使用其他入侵传送方式如笔式 注射器取出部分内含物时不适当引入制剂中的微生物的繁殖。应当评 价抗微生物剂来确保与制剂的所有其他成分相容，以及应当评价它们 在全部制剂中的能力来确保在一种制剂中有效的特定物质在另一种中 不是无效的。特定抗微生物剂在一种制剂中有效而在另一种制剂中无 效是不常见的发现。

在常用的药物意义中，防腐剂是防止或抑制微生物生长并且为了 该目的加入药物制剂中来避免随后通过微生物的制剂变质的物质。尽 管防腐剂的含量不是很大，不管怎样可以影响肽的整体稳定性。可以 通过各种抗细菌和抗真菌剂，例如，对羟基甲苯、氯丁醇、苯酚、山 梨酸、水杨乙汞等。尽管用于药物组合物中的防腐剂可以为0.005至 1.0％(w/v)，每种防腐剂的常用范围，单独或结合其他的，为：苯甲 醇(0.1-1.0％)、orm-甲酚(0.1-6.0％)或苯酚(0.1-0.8％)或甲基- (0.05-0.25％)和乙基-或丙基-或丁基-(0.005％-0.03％)对羟基苯甲 酸酯的组合物。对羟基苯甲酸酯是对羟基苯甲酸的低级烷基酯。每种 防腐剂的详细描述列于“Remington’s Pharmaceutical Sciences”(雷明 顿药物科学)以及Pharmaceutical Dosage Forms：Parenteral Medication (药物剂型：非肠道药物)，Vol.1，第2版，Avis等编辑，Mercel Dekker， New York，N.Y.(1992)。

尽管不希望受到限制，普兰林肽，^25，28，29Pro-h-胰淀素，以液体形 式时不具有吸收至玻璃容器中玻璃上的趋势，因此，不需要表面活性 剂来进一步稳定药物制剂。然而，关于液体形式时具有该趋势的化合 物，在它们的制剂中应当使用表面活性剂。然后将这些制剂冻干。表 面活性剂通常引起蛋白质的变性，通过疏水性破坏和通过盐桥分离。 由于表面活性剂部分和蛋白质上的反应性位点之间强烈的相互作用， 相对低浓度的表面活性剂发挥有效的变性活性。然而，这种相互作用 的明智使用可以稳定蛋白质来对抗界面或表面变性。可以进一步稳定 肽的表面活性剂可以任选存在，以约0.001至0.3％(w/v)总制剂的 范围，并包括聚山梨酸酯80(即，聚氧乙烯(20)山梨聚糖单油酸酯)、 CHAPS(即，3-[(3-胆酰胺丙基)二甲氨基]1-丙磺酸内盐)、BRIJ(例 如，Bril35，其是(聚氧乙烯(23)月桂酰酯)、泊洛沙姆或另一种非 离子表面活性剂。

加入氯化钠或其他盐来调节药物制剂的张力也是理想的，取决于 选定的张力调节剂。然而，这是任选的并取决于选定的特定制剂。非 肠道制剂通常是等渗的或基本上等渗的。

用于非肠道产品的合适载体是水。通过渗滤或反相渗透来制备用 于非肠道给药的合适质量的水。注射用水是用于可注射药物制剂中的 优选含水载体。

可能的是其他成分可以存在于药物制剂中。这样的其他成分可以 包括，例如，润湿剂、乳化剂、油、抗氧化剂、填充剂、张力调节剂、 螯合剂、金属离子、油质载体、蛋白质(例如，人血清白蛋白、明胶 或蛋白质)和两性离子(例如，氨基酸，如甜菜碱、牛磺酸、精氨酸、 甘氨酸、赖氨酸和组氨酸)。此外，聚合物溶液，或与聚合物的混合 物提供了肽受控释放的机会。当然，这样的其他成分应当没有不利影 响在此提供的药物制剂的整体稳定性。

容器也是注射制剂的整体一部分并可以认为是一种成分，因为没 有容器是完全惰性的，或在某些方面没有影响其含有的液体，特别是 如果液体是含水的。因此，用于特定注射的容器的选择必须基于容器 以及溶液组成和待接受处理的考虑。如果需要，也可以使用硼硅酸盐 玻璃，例如，I型玻璃#33(Wheaton型1-33)或其等价物(Wheaton Glass Co.)来最小化肽至瓶子玻璃表面的吸收。相似的硼硅酸盐玻璃瓶和 针筒适于制造的其他厂商包括Kimbel Class Co.，West Co.，Bunder Glas GMBH和Forma Vitrum。可以通过在Wheaton型1-33硼硅酸盐血清 瓶中在5％甘露醇和0.02％吐温80存在下配制并冻干至0.1mg/ml和 10.0mg/ml终浓度的化合物来稳定化合物的生物和化学特征。

为了允许从皮下注射器将针引入多剂量小瓶中并在针取出时尽可 能快地提供再封死，每个小瓶的开口端通常用橡皮塞密封，在合适位 置通过铝带来保持。用于玻璃瓶的塞子，如，West 4416/50、4416/50 (特富龙表面的)和4406/40、Abbott 5139或任何等价的塞子可以用 作注射药物的密封。这些塞子与肽以及制剂的其他成分相容。使用患 者使用模式测试时，这些塞子通过塞子完整性测试，例如，塞子经得 住至少约100次注射。或者，肽在小瓶、注射器或针筒中可以是冻干 的，用于随后的重建。可以将在此提供的液体制剂填入一或两室针筒， 或一或两室注射器中。

上述药物制剂的每种成分是本领域已知的并描述于Pharmaceutical Dosage Forms：Parenteral Medication(药物剂型：非肠道给药)中， Vol.1，第2版，Avis等编辑，Mercel Dekker，New York，N.Y.1992， 在此以其整体引入作为参考。

上述液体制剂的制备过程通常包括混合、无菌过滤和装填步骤。 混合方法包括将成分以特定的次序溶解(例如，防腐剂，接着为稳定 剂/张力调节剂，缓冲剂和肽)或同时溶解。

可替换的制剂，例如，非肠道的，不需要灭菌。然而，如果灭菌 是理想的或必需的，任何合适的灭菌方法可以用于生产在此提供的肽 药物制剂。通常的灭菌方法包括过滤、蒸汽(湿热)、干热、气体(例 如，乙烯氧、甲醛、二氧化氯、环氧丙烷等)、暴露于辐射源和无菌 操作。过滤是用于在此所述的液体制剂的示例灭菌方法。无菌过滤包 括通过可以串连的0.45μm和0.22μm(1或2)的过滤。过滤后，将溶 液装入合适的小瓶或容器中。

在一个实施方案中，确定液体药物制剂用于非肠道给药。合适的 给药途径包括肌内、静脉内、皮下、皮内、动脉内、鞘内等。皮下给 药途径是一种特别的途径。粘膜传送也特别合适。这些粘膜途径包括， 但不限于，口、鼻、舌下、肺部和脸颊途径，其可以包括液体、半固 体或固体形式肽的给药。通过这些途径的给药基本上需要更多的肽来 获得所需的生物效果，由于与非肠道传送相比较降低的生物利用率。 此外，通过形成聚合的微胶囊、基质、溶液、植入物和装置并将它们 非肠道或通过外科手术方式给药可以获得非肠道受控释放传送。受控 释放制剂的实例描述于U.S.专利No.6,368,630、6,3 79,704和5,766,627 中，在此将其引入作为参考。由于一些肽捕获在聚合物基质或装置中， 这些剂型具有较低的生物利用率。参见，例如，U.S.专利No.6,379,704， 6,379,703和6,296,842。

可以以剂量单位形式提供胰淀素化合物，该剂量单位形式含有在 一个或多个治疗或帮助治疗需要的患者剂量中有效含量的化合物。可 以用最初弹丸接着连续灌输来维持药品的治疗循环水平来进行非肠道 给药。可以使用贮物器或“贮藏器”缓慢释放制剂形式，使得治疗有 效量的制剂在经皮注射或传送后很多小时或很多天内传送至血流。本 领域技术人员将容易地最佳化有效量和给药方案，如通过良好的医学 实践和个体患者的临床情况所测定，考虑，例如，患者的年龄和体重、 患者的身体状况和待治疗的病症。

通常，使用约0.001μg/kg体重/天至约1000μg/kg/体重/天的剂量， 但熟练的从业者将认识到可以使用更多或更少。通常的剂量含有每天 约0.5μg、1μg、5μg、10μg、50μg至100μg药物化合物的下限至约100μg、 500μg、1mg、5mg、10mg、50mg或100mg的上限。还考虑到其他剂 量范围，如每剂0.1μg至1mg化合物。因此，示例性剂量可以为每剂 30、60、120、240或360μg化合物。每天的剂量可以以分开的单位剂 量传送或在24小时阶段或24小时阶段的任何部分连续提供。每天的 剂量数量为1至约4剂量每天，尽管可以更多。剂量可以是每日一次 或多次，或更低频率，如一周一次或多次获每月一次或多次，并且可 以结合在此所述的其他组合物。应当注意到本发明的方法和组合物不 限于在此引用的剂量。

在一些实施方案中，对于50kg的患者，有效剂量通常为0.5至30μg 至约5mg/天，约10至30μg至约2mg/天，约5至100μg至约1mg/天， 或约5μg至约500μg/天，以单次或分开剂量给药。在一些实施方案中， 剂量为0.01至约100μg/kg/剂。其他实施方案中，组合物是使得传送 1μg/kg至100μg/kg体重/天剂量或0.1mg/kg至约50mg/kg体重/天剂量 胰淀素化合物的制剂。对于特定途径的剂量，例如口服，可以提高来 弥补降低的生物利用率，例如，提高约5-100倍。

连续传送可以是连续灌注的形式。示例剂量和灌输速率包括每个 分开的剂量0.005nmol/kg至约20nmol/kg或连续灌输中约 0.01/pmol/kg/min至约10pmol/kg/min。这些剂量和灌输可以通过静脉 内给药(i.v.)或皮下给药(s.c.)来传送。示例i.v.给予的药物组合物 总剂量/传送可以约2μg至约8mg每天，而s.c.给予的药物组合物总剂 量/传送可以约6μg至约16或24mg每天。

提供以下实施例来说明但非限制本发明。

实施例

实施例1.降低热量摄入的多肽的合成

可以使用标准多肽合成方法合成胰淀素和胰淀素肽激动剂。以下 和U.S.专利No.6,610,824和5,686,411中描述了这样的方法，在此将 其整体引入作为参考。

多肽是在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正 亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem.0.55mmole/g)上装配的，使用Fmoc- 保护的氨基酸(Applied Biosystems.Inc)。通常，在整个合成中使用 单-偶联循环，并使用Fast Moc(HBTU激活)化学物质。然而，在一 些位置偶联可能比比预期的效率低，并且需要双偶联。使用哌啶的生 长中肽链的去保护(Fmoc基团除去)通常同样不怎么有效，并需要 双去保护。使用三乙基硅烷(0.2mL)、乙烷二硫酚(0.2mL)、茴香醚 (0.2mL)、水(0.2mL)和三氟醋酸(15mL)的混合物根据标准方法 (Introduction to Cleavage Techiniques，Applied Biosystems，Inc.)实 现完成的肽树脂的最后去保护。在醚/水(50mL)中沉淀肽并离心。 将沉淀物在冰醋酸中重建并冻干。将冻干的肽溶解于水中，然后测定 粗略的纯度。在纯化和分析步骤中使用溶剂A(水中0.1％TFA)和溶 剂B(ACN中0.1％TFA)。将含有各种多肽的溶液施加至制备性C-18 柱并纯化(溶剂A中10％至40％的溶剂B，40分钟)。使用C-18分 析柱isocratically测定级分的纯度。收集提供以上鉴定的肽的纯级分。 冻干肽的分析RP-HPLC(溶剂A中梯度30％至60％的溶剂B，30分 钟)来测定保留时间。

例如，可以使用Rink酰胺树脂(Novabiochem)在Symphony肽 合成仪上(Protein Technologies，Inc.)装配胰淀素和胰淀素肽激动剂， 使用0.050-0.100mmol的0.43-0.49mmol/g的装载。以0.10M浓度将 Fmoc氨基酸(5.0eq，0.250-0.500mmol)残基溶解于1-甲基-2-吡咯烷 酮中。所有其他试剂(HBTU，1-羟基苯并三唑水合物和N，N-二异丙 基乙胺)制成0.55M二甲基甲酰胺溶液。然后使用HBTU(2.0eq， 0.100-0.200mmol)、1-羟基苯并三唑水合物(1.8eq，0.090-0.18mmol)、 N，N-二异丙基乙胺(2.4eq，0.120-0.240mmol)将Fmoc保护的氨基酸 连接结合树脂的氨基酸2小时。最后一个氨基酸结合后，使用二甲基 甲酰胺中20％(v/v)的哌啶去保护1小时。一但肽序列完成，将 Symphony肽合成仪编程来分离树脂。使用93％TFA、3％苯酚、3％水 和1％三异丙基硅烷进行肽从树脂的三氟醋酸(TFA)分离1小时。使 用叔-丁基甲基酯沉淀分裂的肽，通过离心沉淀并冻干。将沉淀物重新 溶解于水(10-15mL)中，过滤并通过反相HPLC使用C18柱和含有 0.1％TFA的乙腈/水梯度纯化。通过反相HPLC将所得到的肽纯化至 均一并通过LCMS来证实纯度。

使用脂肪酸(例如，辛酸和硬脂酸)用于本发明肽N-加帽的一般 程序如下：将rink酰胺树脂上的肽(0.1mmol)悬浮于NMP(5mL) 中。在分开的瓶中，将HBTU(0.3mmol)、HOBt(0.3mmol)溶解于 DMF(5mL)中，接着加入DIEA(0.6mmol)。将该溶液加入树脂中 并将该悬浮液震荡2小时。过滤溶剂并用NMP(5mL×4)和CH₂Cl₂(20mL)彻底洗涤，干燥并接受TFA分离1hr。分离和纯化后所需肽 的产量大约为40mg。可以在溶液中使用可购得的活化PEG酯对赖氨 酸的游离ε-氨基或纯化肽的末端氨基进行PEG修饰。通过反相HPLC 将所得到的PEG化衍生物纯化至均一并通过LC/MS和MALDI-MS来 证实纯度。

实施例2.胰淀素对蔗糖偏食的作用

在动物模型中检测胰淀素改变偏食的能力。将雄性Sprague- Dawley大鼠接受糖停止模式并观察应激对糖摄入的作用。简而言之， 给大鼠植入含有载体或大鼠胰淀素(300μg/kg/d)的ALZET渗透泵。 所有大鼠提供随机标准食物、水和30％蔗糖饮料。随后，除去蔗糖饮 料并将一半大鼠每日接受3h温和束缚应激，连续3天。3天后，提供 蔗糖并测量4天中的每日平均消耗。还在停止和应激的3天中以及蔗 糖再次引入的随后4天中测量了食物摄入。在蔗糖再次引入的4天过 程中没有使用束缚。该测试的结果显示与图1(A-D)中，其中通过 AVONA和Fisher LSD post-hoc分析，*是P＜0.05。

在该模型中，慢性应激刺激了作为糖的总热量摄入的比例(美味 进食)。如图1A中所示的，束缚诱导的应激显著提高平均蔗糖对食物 的消耗比例(作为基准的％)(盐水，R)超过没有应激诱导的对照消 耗(盐水，C)。图1A还显示了胰淀素给药防止了预期作为束缚诱导 应激结果的平均蔗糖对食物消耗比例的提高。比较给药胰淀素应激诱 导大鼠(胰淀素，R)和给药胰淀素无应激对照大鼠(胰淀素，C)之 间的蔗糖对食物的比例(表示为基准的百分比)。还比较了给药胰淀 素应激诱导大鼠(胰淀素，R)和给药对照载体(盐水)应激诱导大 鼠(盐水，R)之间蔗糖对食物的比例。如所示的，胰淀素给药降低 了这种应激诱导的美味进食应答。

图1B和1C描绘了各自来自食物消耗和总热量的不同观察的束缚 应激测试的相同结果。图1B和1C显示出食物摄入和总卡路里的整体 应激诱导的降低在治疗组中不太明确，与对照组相比较。图1D证明 了胰淀素降低应激和非应激条件下的蔗糖摄入，与载体处理的对照相 比较。总而言之，认为应激通常改变了富含单糖或美味的饮食与单糖 和脂肪相对低的饮食(例如，标准大鼠食物)之间的平衡。没有胰淀 素给药的应激显著降低经受束缚应激动物中的食物消耗(图1B)，一 种对应激的典型应答。然而，使用胰淀素给药的处理组似乎显示出应 激和非应激条件下的蔗糖特异性降低。

实施例3：胰淀素对高脂肪食物偏食的作用

在动物模型中检测了胰淀素改变偏食的能力。通过麻醉下在肩胛 间部位皮下植入的渗透泵(#2M14，Durect Corporation，Cupertino，CA) 用大鼠胰淀素(300μg/kg/d)将成年雄性大鼠(490g)处理11周。动 物进食低脂肪食物(6％脂肪kcal，54％玉米淀粉kcal；#7012，Harlan Teklad，Madison，WI)和高脂肪食物(“美味食物”)(58％脂肪kcal 和26％蔗糖kcal；#D12311，Research Diets，New Brunswick，NJ)。 每周测量食物摄入和体重。就在处理之前，和在处理结束时，通过MRI (用于大鼠的Echo MRI，EchoMRI，Houston，TX)测量脂肪和瘦组 织的含量(表示为每100g体重的组织g数)。

来自这些实验结果呈现于图2-5中，其中数据呈现为平均±SEM， 且每组中的患者数量显示于括号中。如图2中所示的，胰淀素处理的 大鼠在整个11周处理中消耗较比对照比例小的来自高脂肪食物的总 热量(载体＝6315±111kcal vs.胰淀素＝5309±202kcal(P’s＜0.05)。就总 食物摄入而言，胰淀素处理的大鼠从高脂肪食物获得较少的热量，更 多的热量来自低脂肪食物，与载体处理的大鼠相比较，如图3中所示 的。对于低脂肪食物的主要效果为载体＝271±42kcal vs.胰淀素 ＝633±145kcal，对于百分比总热量的主要效果为载体＝4.3±0.6％vs.胰 淀素＝12.2±3.2％(P’s＜0.05)。

在整个处理阶段，用胰淀素处理降低了体重增加，如图4中所示 的(载体＝126±10g vs.胰淀素＝50±11g(P’s＜0.05)。检测了处理前后脂 肪和瘦组织的改变。如图5中所示的，胰淀素给药降低了脂肪质量， 但是对瘦组织质量没有影响。对于脂肪质量，总质量百分比的改变为 使用载体3.7±0.9％，使用胰淀素-3.6±1.0％(P＜0.05)。对于瘦组织， 总质量百分比的改变为使用载体-0.53±0.21％，使用胰淀素0.08±0.23％ (不显著)。

胰淀素给药还提高了动物的能量消耗。使用Oxymax动物监控系 统(Columbus Instruments，Columbus，OH)测定能量消耗来测量随 着时间的氧消耗和二氧化碳产生。从这些测量看，计算热量(以kcal 计)并测定能量消耗。在11周时，胰淀素提高24h能量消耗(亮阶 段提高＝9.7％，暗阶段提高＝6.6％，P’s＜0.05)，与对照相比较。

用胰淀素激动剂进行的相同研究证明了胰淀素激动剂在总热量摄 入降低中比胰淀素更有效。用胰淀素激动剂的来自美味食物的热量摄 入与用胰淀素的大概相等，来自低脂肪食物的热量摄入低于用胰淀素 的。

就偏食而言，胰淀素处理的大鼠与对照相比较在整个研究中消耗 更多来自低脂肪食物的热量和更大百分比的总热量。这些结果表明降 低的热量摄入，对低脂肪食物vs.美味食物相对低的偏好和提高的能量 消耗有助于胰淀素的降低体重特征。

实施例4：胰淀素激动剂对饱食和暴食的效果

在人患者中检测了胰淀素激动剂普兰林肽控制或影响进食行为的 能力。为了测试，在单盲安慰剂对照的研究中测量24小时食物摄入 (FI，随机进食)、体重、饥饿和饱腹感以及暴食(暴食等级，BES)。 将没有暴食症的肥胖患者(50/50％女性/男性；BMI 35.61±3.98kg/m²， 平均±SD)随机接受六周普兰林肽或安慰剂处理。在进食之前每天皮 下给药三次(TID)Pranlintide(180μg)，持续6周，没有提供生活方 式干预(TID可评价N＝59，安慰剂可评价N＝25)。在研究的另一个 分支中，通过连续皮下灌输(CSI)以50μg/h给药普兰林肽，持续6 周，没有提供生活方式干预(CSI可评价N＝53，安慰剂可评价N＝22)。 在处理停止后进行患者的继续评价四周。处了食物摄入和体重的测 量，还测定患者处理前一天、处理的第一天和第43天的12-小时观察 阶段中的饥饿和饱腹感。在研究过程中，基于总BES分数通过轻微、 中度或严重的暴食严重程度将患者分类。

6周后，用普兰林肽TID处理的患者的24-小时食物摄入(- 489±183kcal；P＜0.01)和体重(2.2±0.5％；P＜0.0001)经历从基准的 显著安慰剂校正的降低。通常，每个处理组(普兰林肽TID，普兰林 肽CSI和集合的安慰剂)内在处理前一天、处理第一天和第43天的 平均饥饿和饱腹速率特征相似，在处理组之间也是相似的。饥饿和饱 腹速率相似，尽管存在以下事实：与集合的安慰剂组相比较，普兰林 肽TID患者的平均总热量摄入在处理第一天降低大约17％和在第43 天15％和普兰林肽CSI患者在处理第一天大约22％和在第43天7％。 因此，普兰林肽处理的患者需要较少的食物摄入来抑制与安慰剂处理 患者中那些相似的饥饿和诱导饱腹感水平。因此，普兰林肽提高了饮 食的饱足效果。

普兰林肽处理的患者还经历了平均总BES分数从基准的降低和显 著安慰剂校正的降低，以平均BES分数表示(-45±13％；P＜0.01)，如 图6和7中所示的。存在暴食严重程度的显著改变(P＜0.05)，比安慰 剂处理患者比例更大的普兰林肽-处理患者改变成较低暴食严重程度类 别(24.6％ vs.12.5％)。TID处理6周后，83.1％的普兰林肽-处理的患 者和56.0％安慰剂处理的患者分类为轻微(各自与基准的64.4％和 52.0％相比较)。参见表1对于暴食等级严重程度分类，基于研究的TID 和CSI分支的总分数。普兰林肽处理停止后四周，总BES分数从基准 的降低不再是统计学差异(图7)。这些结果表明胰淀素激动剂提供了 提高的暴食行为的控制，特别是进食行为的compulsatory方面。

表1.暴食等级严重程度分类

调查 总BES分数     所有安慰剂     (N＝53)    普兰林肽TID    (N＝59)     普兰林肽CSI     (N＝47) 基准(第1天) ≤17(轻微) ＞17至＜27(中度) ≥27(严重) n     n(％)     33(62.3)     16(30.2)     3(5.7)     52    n(％)    38(64.4)    14(23.7)    5(8.5)    57     n(％)     24(51.1)     16(36.2)     6(12.8)     47 第42天 ≤17(轻微) ＞17至＜27(中度) ≥27(严重) n     35(66.0)     13(24.5)     4(7.5)     52    49(83.1)    7(11.9)    3(5.1)    52     35(74.5)     8(17.0)     4(8.5)     52 第72天 ≤17(轻微) ＞17至＜27(中度) ≥27(严重) n     36(67 9)     11(20.8)     4(7.5)     51    45(76.3)    8(13.6)    3(5.1)    56     30(63.8)     7(14.9)     4(8.5)     41

百分比是基于每个处理中可评价患者的数量。

实施例5.胰淀素对人体测量参数的作用

在人患者中检测了胰淀素激动剂普兰林肽影响体重和人体测量参 数如腰围和臀围的能力。在随机的双盲安慰剂对照研究中，测定了应 答肥胖(BMI≥30kg/m²至≤50kg/m²)非糖尿病患者和非胰岛素治疗的 2型糖尿病肥胖个体的普兰林肽给药的体重和人体测量参数的改变， 以及glycemic对照的指示剂(例如，HbAlc)，血清脂质和葡萄糖耐 受性。该研究包括204名患者，120μg、180μg或240μg普兰林肽TID 的普兰林肽剂量，1周安慰剂引入(lead-in)阶段，16周药物阶段， 和8周没有药物的继续阶段的研究阶段。

总而言之，处理16周后，统计学显著性，经历了安慰剂校正的 最初体重3.52kg(3.6％)的平均体重减轻(p＜0.0001，可评价人群)， 和31％患者失去≥5％体重，与用安慰剂处理那些的只有2％相比较 (p＜0.0001，可评价人群)。体重减轻在非糖尿病患者和患有2型糖尿 病患者中是明显的。在所有肥胖类别的患者中获得显著的体重减轻， 最显著体重减轻在患有I型肥胖患者中(BMI＜35kg/m²)。肥胖分类患 者中安慰剂校正的体重减轻如下：对于具有BMI＜35kg/m²的那些为 4.24±0.91kg(4.78±1.0％，p＜0.0001)，对于BMI≥35kg/m²至＜40kg/m²的那些为2.84±1.45(2.63±1.39％，p＜0.05)，对于BMI≥40kg/m²的那 些为1.36±1.30(1.29±1.09％，p＜0.05)。通过基准BMI阶层获得＞5％ 基准体重减轻的患者百分比(可评价人群N＝145)显示于表2中。

表2

基准BMI类别     安慰剂     (N＝48)     普兰林肽     (N＝97) I类(BM1＜35kg/m²) n 百分比     18     0％     43     39.5％ II类 (BMI≥35kg/m²至＜40kg/m²) n 百分比     10     0％     25     28.0％ II类(BMI≥40kg/m²) n 百分比     20     5.0％     29     20.7％

普兰林肽组中观察到的渐进性体重减轻伴随腰围的渐进性减小， 腰围是腹部肥胖的一种测量。16周治疗后，普兰林肽组具有安慰剂校 正的腰围减小2.69±1.08cm(p＜0.01)，和安慰剂校正的臀围减小 2.69±0.82cm(p＜0.01)(最小的方块平均±SE)。因此，用普兰林肽处 理获得肥胖个体的显著体重减轻和腰围和臀围的显著降低。

实施例6：胰淀素对身体组成的作用

Sprague-Dawley大鼠中的饮食诱导肥胖(DIO)是用于肥胖研究 和调节能量体内平衡的有价值的模型。来自Charles River Laboratoris， Inc.(Wilmington，MA)(n＝6/组)的近交DIO(Levin)Prone大鼠 用于研究胰淀素给药的效果。在药物处理之前用中度高脂肪饮食 (32％kcal来自脂肪；Research Diets D1226B)将大鼠随意饲养大约6 周。在养肥阶段结束时，它们具有～550g的平均体重。将所有大鼠单 独图养在鞋盒笼中，22℃，12/12-小时亮暗循环。通过皮下渗透迷你 泵(Durect Corp，CA)来给药胰淀素。将大鼠胰淀素(Peptisyntha， Torrance，CA)溶解于50％DMSO无菌水中并以100μg/kg/d的速率 灌输(～23nmol/kg/d)。在第1 4天，取出迷你泵并替换含有载体的泵。 对于身体组成，在药物处理之前和实验结束时在专门的啮齿动物NMR 机器中(Echo Medical Systems)扫描大鼠，其能够计算脂肪和瘦肉组 成的百分比改变(例如，处理后的％身体脂肪-％身体脂肪基准＝以％身 体脂肪计的改变)。

如图8和9中所示的，在药物处理的过程中，胰淀素显著降低了 累积食物摄入和体重(2-14天；p＜0.05 vs.载体对照)。用只含有载体 的泵冲洗阶段的过程中，食物摄入和体重快速恢复至载体对照水平。 研究结束时的身体组成的分析揭示尽管相似的体重(在第28天)，已 经用胰淀素处理的动物(1-14天)仍然比那些没有接受胰淀素的动物 具有较低百分比的身体脂肪(图10A)。此外，用胰淀素处理的动物 比那些只接受载体的动物还具有较高比例的瘦身体质量(图10B)。

实施例7.胰淀素对食物渴求的作用

可以如下研究胰淀素和胰淀素激动剂对食物渴求的作用。使用随 机的盲安慰剂对照的研究设计。在研究中登记了大约180名肥胖人患 者，三分之一随机接受安慰剂，三分之二随机接受胰淀素类似物激动 剂，如普兰林肽。研究包括最初一周患者内(in-patient)阶段来评价 基准食物摄入、进餐模式、饱腹感/饥饿感、食物享乐、食物渴求、体 重、身体组成等。然后研究转向五周患者外(out-patient)阶段，在该 时间过程中，体重、身体组成和进食控制的调查问卷可以用于测定各 种参数。然后结束研究的活动处理阶段，用2-3天的患者内(in-patient) 阶段来评价继续食物摄入、进餐模式、饱腹感/饥饿感、食物享乐、食 物渴求、暴食、体重、身体组成等。通常，在整个研究中，没有诱导 应激条件，且没有进行生活方式和/或饮食改变或束缚。待监控的研究 终点可以包括体重、身体组成(例如，腰围、脂肪质量、无脂肪质量)、 食物摄入、饥饿/饱腹感、食物渴求、饱腹效率、暴食等。

在这样的研究中，令人惊讶地发现，研究患者在通过注射和灌输 的整个给药过程中经历了食物渴求的频率和强度的降低。还发现患者 报告在通过注射和灌输的整个给药过程中抵抗食物渴求难度以及应答 食物渴求的进食频率的降低。研究患者还报告在通过注射和灌输的整 个给药过程中渴求咸食的降低，尽管至较低的程度。这些研究结果证 明了令人惊讶的发现：胰淀素和胰淀素激动剂改变偏食，特别是对甜 食、巧克力和咸食的偏食。

实施例8.受体结合测试

最初，多肽可以用于测试中来测定与胰淀素、降钙素和CGRP受 体的结合能力。用于测定与胰淀素-受体、降钙素-受体和CGRP受体 相互作用的结合测试描述于例如U.S.专利No.5,264,372中，在此将其 整体引入作为参考。

更详细地，可以如下进行本发明的化合物与胰淀素受体的结合评 价。¹²⁵I-大鼠胰淀素(在N-端赖氨酸标记的Bolton-Hunte)购自Amersham Corpration(Arlington Heights，IL)。未标记的肽获自BACHEM Inc. (Torrance，CA)和Peninsula Laboratories(Belmont，CA)。

通过断头来牺牲雄性Spargue-Dawley大鼠(200-250)克。取出 大脑至冷的磷酸盐-缓冲盐水中(PBS)。从腹部表面，从吻骨至下丘 脑形成切口，通过嗅束横向结合并从这些束45角中间延伸。将该含 有伏隔核和周围部分的基础前脑组织称重，并在冰冷的20mM HEPES 缓冲剂(20mM HEPES酸，用23℃NaOH将pH调节至7.4)中均质。 通过在48000xg离心15分钟将膜在新鲜缓冲剂中洗涤三次。将最终 的膜沉淀物重悬浮于含有0.2mM苯甲基磺酰氟化物(PMSF)的20mM HEPES缓冲剂中。

为了测量¹²⁵I-胰淀素结合，用含有05mg/ml杆菌肽、05mg/ml牛 血清白蛋白和02mMPMSF的20mMHEPES缓冲剂中的12-16pM的¹²⁵I- 胰淀素孵育来自4mg最初湿重组织的膜。将溶液在2C孵育60分钟。 通过GF/B玻璃纤维滤器过滤(Whatman Inc.，Clifton，N.J.)来终止 孵育，为了降低放射性标记的肽的非特异性结合，已经在0.3％聚乙撑 亚胺中预浸4小时。在过滤之前立刻用5ml冷的PBS洗涤滤器，过滤 后立即用15ml冷的PBS洗涤滤器。除去滤器并在77％计数效率的γ- 计数器中测定放射性。通过测量10^-12至10^-6M未标记的测试化合物存 在下的结合来产生竞争曲线并使用4-参数逻辑等式(Inplot program； GraphP AD Software，San Diego，CA)通过非线性回归来分析。

在该测试中，纯化的人胰淀素在测量的约50pM的IC₅₀结合其受 体。本发明测试化合物的结果列于表3中，显示出每种化合物具有显 著的受体结合活性。

本发明的化合物与CGRP受体的结合的评价实质上和对于胰淀素 所述的一样，除了使用125I hCGRP和从已知表达CGRP受体的SK- N-MC细胞制得的膜(Muff等(1992)Ann N Y Acad Sci.657：106-116)。 如对于胰淀素所述的进行结合测试，除了使用13,500cpm 125I-hCGRP/ 孔或21.7pM/孔。

可以使用也表达降钙素受体的CHO细胞或T47D细胞研究与降钙 素受体的结合(Muff等(1992)Ann N Y Acad Sci.657：106-116和 Kuestner等(1994)Mol.Pharmacol.46：246-255)，如本领域所知的。

表3.多肽的EC50值(nM)

    化合物     胰淀素     降钙素     CGRP     1(3236)     0.028     0.029     2.342     2(3235)     0.047     0.052     33.988     3(3150)     0.023     0.020     0.490     4(164161)     0.035     0.019     8.500     5(164163)     0.022     0.018     2.600     6(1166)     0.030     nt     nt     7(2749)     0.057     nt     7.540     8(3318)     8.070     0.478     175.665     9(164370)     0.043     0.014     1.600

nt表示未测试

实施例9  多肽对食物摄入的活性

将雌性NIH/Swiss小鼠(8-14周大)成组圈养，用12∶12小时 亮∶暗循环。水和标准丸状小鼠食物饮食随意可获得，除非标出。在 大约1500hr，实验前1天，使动物开始禁食。

在时间＝0min，所有动物以200uL/小鼠的体积给予腹膜内注射载 体或多肽并立即给予预先称重含量(10-15g)的标准食物。除去食物 并在30、60、120和180分钟称重来测定所消耗的食物含量。处理对 食物摄入的效果表示为相对于对照的％改变。

如图11中所示的，化合物2，以25-300nmol/kg的剂量，剂量依 赖性地降低注射后30分钟的食物摄入。表4描述了以25nmol/kg的剂 量外周给药(腹膜内注射)多肽降低的食物摄入。时间点30、60、120 和180分钟的数据表示与载体相比较累积食物摄入的百分比降低。

表4.累积食物摄入

    化合物     30min     60min     120min     180min     1(3236)     -58     -46     -33     -22     2(3235)     -58     -54     -52     nt     3(3150)     -58     -52     -37     -33     4(164161)     -42     -31     -35     -30     5(164163)     -66     -53     -29     -27     6(1166)     -48     -45     -23     nt

    化合物     30min     60min     120min     180min     7(2749)     -60     -52     -23     nt     8(3318)     -6     -15     -25     -28     9(164370)     -80     -64     -43     nt     10(999)     -19     -20     -35     nt     11(164161)     -52     -47     -38     -35     12(164162)     -43     -39     -37     -32     13(164164)     -40     -33     -25     -24     14(164166)     -52     -36     -28     -33     15(164174)     -67     -59     -37     -30     16(164175)     -26     -29     -30     -27     17(164176)     -42     -30     -30     -25     18(164177)     -2     -7     -16     -21     19(167178)     -25     -25     -35     -31     20(164179)     -9     -21     -30     -31     21(164188)     9     -5     -18     -18     22(164189)     -11     -20     -31     -30     23(164190)     8     0     -19     -12     24(164191)     -40     -34     -35     -35     25(164205)     -29     -34     -45     nt     26(164283)     -29     -36     -47     nt     27(164284)     -12     -11     -32     nt     28(164285)     -8     -16     -28     nt     29(164286)     4     -1     -25     nt     30(164287)     -1     -2     -19     nt     31(164289)     -11     -18     -23     nt     32(164289)     -15     -21     -31     nt     33(164290)     -7     -10     -15     nt     34(164291)     -11     -6     -16     nt     35(164307)     -20     -16     -18     nt     36(164308)     -34     -22     -24     -25     37(164309)     -3     -2     -16     nt     38(164331)     -24     -13     -8     nt     39(164346)     7     -14     -23     nt     40(164352)     -11     -5     -2     nt     41(164353)     -4     -9     -12     nt     42(164354)     -11     -18     -32     nt     43(164355)     -4     -7     -18     nt

    化合物     30min     60min     120min     180min     44(164356)     -6     -13     -25     nt     45(164366)     -13     -7     -3     nt     46(164368)     -6     -11     -16     nt     47(164369)     -5     -13     -27     nt     48(164371)     -54     -51     -36     nt     49(164393)     -33     -26     -25     nt     50(164394)     -70     -62     -48     nt     51(164395)     -44     -39     -35     nt     52(164396)     -29     -24     -23     nt     53(164397)     -92     -89     -36     nt     54(164410)     1     -4     -10     nt     55(164411)     9     -5     -12     nt     56(164412)     4     -13     -16     nt     57(164427)     -18     -24     -23     nt     58(164428)     -62     -51     -29     nt     59(164429)     -81     -77     -50     nt     60(164430)     -43     -40     -26     nt     61(164468)     -23     -27     -32     nt     62(164469)     -14     -22     -38     nt     63(164482)     -19     -22     -28     nt     64(164486)     -65     -58     -44     nt     65(164491)     -33     -29     -32     nt     66(164493)     -13     -15     -28     nt     67(164494)     -10     -11     -12     nt     68(164496)     -10     -13     -21     nt     69(164497)     -29     -31     -45     nt     70(164523)     -76     -64     -47     nt     71(164531)     -7     -13     -22     -18     72(164532)     0     -8     -13     -19     73(164533)     -51     -31     -23     -28     74(164552)     -42     -32     -31     nt     75(164563)     -60     -52     -38     nt     76(164569)     -25     -29     -40     nt     77(164570)     -46     -43     -44     nt     78(164571)     -57     -44     -44     nt     79(164586)     -49     -40     -33     nt     80(164587)     -32     -28     -22     nt

    化合物     30min     60min     120min     180min     81(164590)     -28     -24     -33     nt     82(164594)     -7     -13     -16     -19     83(164595)     -7     -13     -22     -12     84(164644)     -53     -40     -20     nt     85(164645)     3     -16     -16     nt     86(164646)     -44     -26     -16     nt     87(164647)     -43     -32     -21     nt     88(164648)     -64     -61     -39     -22     89(164666)     -6     -13     -22     -20     90(164671)     -55     -41     -24     -15     91(164689)     -59     -47     -26     -24     92(164690)     -31     -29     -30     -27     93(164698)     -43     -30     -27     -29     94(164704)     -62     -42     -36     -31     95(164705)     -81     -69     -34     -31     96(164706)     -49     -38     -19     -23     97(164713)     -78     -76     -60     -40     98(164721)     -18     -13     -5     -1     99(164726)     -57     -55     -50     nt     100(164727)     -60     -52     -41     nt     101(164728)     -52     -48     -35     nt     102(164731)     -58     -53     -45     nt     103(164739)     -50     -44     -30     nt     104(164772)     -69     -67     -54     nt     105(164773)     -83     -82     -52     nt     106(164774)     -58     -54     -39     nt     107(164776)     -84     -78     -47     nt     108(164777)     -70     -66     -38     nt     109(164778)     -61     -54     -43     nt     110(164779)     -80     -72     -59     nt     111(164780)     -39     -37     -32     nt     112(164781)     -62     -65     -50     nt     113(164792)     -79     -86     -55     nt     114(164793)     -17     -20     -25     nt     115(2604)     6     -3     -25     -25     116(2621)     5     5     3     nt     117(2725)     -13     -11     -3     nt

    化合物     30min     60min     120min     180min     118(2744)     -4     0     13     nt     119(3234)     6     -8     -11     nt     120(3319)     -3     1     -6     -7     121(3358)     5     2     -1     3     122(3536)     -6     -12     -23     -21     123(3894)     1     -13     -17     -13     124(3909)     4     -4     -15     -16     125(3981)     10     -1     -6     nt     126(4000)     5     -10     -20     nt     127(4027)     -5     -14     -12     -12

nt＝未进行

实施例10.本发明的化合物对体重减轻和热量摄入的活性

用高脂肪饮食(58％kcal来自脂肪)将单独圈养的雄性Spargue- Dawley大鼠(350g；12-h亮/暗循环)饲养4周。在养肥阶段结束时， 在麻醉下将14-天渗透泵(Durect Corp.)在肩胛间植入。大鼠接受连 续传送载体(50％DMSO)或2.9nmol/kg/天剂量的多肽的泵。每周获 得食物摄入和体重测量。图12A和12B各自显示出多肽化合物3、化 合物4或化合物5在整个14-天测试阶段中产生热量摄入和体重增加 的降低(与各自的载体-高脂肪组相比较，^*P＜0.05)。表5表示1和2 周时对于几种化合物的百分比体重减轻。

表5.给药本发明的示例化合物后的体重减轻

    化合物     1周     2周     1(3236)     8.3^*    10.5^*    2(3235)     9.8^*    9.4^*    3(3150)     5.9^*    6.7^*    4(164161)     6.8^*    9.2^*    5(164163)     8.6^*    11.3^*    6(1166)     2.9^*    3.8^*    7(2749)     10.0^*    11.4^*    8(3318)     2.3     2.5     9(164370)     4.9^*    4.9^*

^*P＜0.05，与对照相比较

实施例11.身体组成

用高脂肪饮食(58％kcal来自脂肪)将单独圈养的雄性Spargue- Dawley大鼠(420g；12-h亮/暗循环)饲养4周。在养肥阶段结束时， 在麻醉下将14-天渗透泵(Durect Corp.)在肩胛间植入。大鼠接受连 续传送载体(50％DMSO)或70nmol/kg/天剂量的化合物1的泵。在 第12天将动物牺牲。将尸体立即冷冻并通过化学分析(Covance Laboratories，Madison，WI)测量身体组成(脂肪和蛋白质)。图13 显示，作为总身体质量的百分比，用化合物1处理的大鼠中，与对照 相比较，脂肪含量降低。此外，化合物1提高了瘦肉质量的百分比。

实施例12.胃排空和离子钙

通过测量管饲滴定葡萄糖血浆中的现象来监控胃排空。患者是有 意识的雄性Spargue-Dawley大鼠(7-9周大，12∶12h 亮∶暗循环)， 随意进食和饮水直至实验开始。在给药前，移去食物和水。在t＝-5min， 皮下给药肽或载体(200μl盐水)。在t＝0min，通过口咽管给予1ml含 有5μCi D-[3-3H]葡萄糖(Dupont，Wilmington，DE)的无菌水溶液。 在t＝20min，对尾尖实行局部麻醉(Hurricaine，20％苯坐卡因液体)。 在t＝40min，用解剖刀将尾尖结扎并将～250μl血液至肝素化试管中。 然后使用Ciba/Coring 634Ca/pH分析仪(Ciba/Coring，Inc.，Medfield， MA)立即测试血浆的离子化钙。将10μl血浆样品移至预备的闪烁瓶 中(0.5ml水+2ml闪烁混合物(Ecolite scintillation cocktailICN，Costa Mesa，CA))，涡旋和在β-计数器(1209Rack-beta；LKB-Wallac， Caithersbrug，MD)对1分钟/小瓶计数。

在图14A中，点表示6只大鼠(喂养，有意识的)的平均±sd。 在t＝0皮下注射所示剂量的肽。35分钟后收集血液用于cpm分析。^*所有点p＜0.001vs.盐水对照；ANOVA，Dunnet’s测试。从非线性回归 看：ED50＝2.3μg/kg。底部＝25cpm/10μl；顶端＝328cpm/10μl。血浆cpm 的最大降低：-92％。适合度：r2＝0.9992。

在图14B中，点表示6只大鼠(喂养的，有意识的)的平均±sd。 在t＝0皮下注射所示剂量的肽。35分钟后收集血液用于cpm分析。^*p＜0.001vs.盐水对照；ANOVA，Dunnet’s测试。从非线性回归看： ED50＝1.1μg/kg。底部＝1.2cpm/10μl；顶端＝1.3cpm/10μl。血浆iCa的 最大降低：-14％。适合度：r2＝0.9936。

实施例13.联合治疗：胰淀素+西布茶明

从Charles Rivers Labs获得近交DIO倾向大鼠。这些大鼠产自食 用相对高脂肪和能量的饮食时倾向变成肥胖的Crl:CD(SD)BR大鼠 系(Levin，1997)。将大鼠单独圈养在鞋盒笼里，22℃，12/12-小时 亮暗循环。在药物处理之前用中等高脂肪饮食(32％kcal来自脂肪； Rearch Diets D1226B)将大鼠随意饲养6周。在养肥阶段结束时，它 们通常具有平均体重500g。然后将大鼠分成几个处理组并植入两个皮 下迷你泵(Durect Corp)。一个泵含有载体(水中50％DMSO)或胰淀 素(100μg/kg/天)，而另一个泵含有无菌水或西布茶明(3mg/kg/天)。

如图15中所示的，观察到用胰淀素单独或西布茶明单独的体重 大约改变5％(载体校正的)，而胰淀素和西布茶明的组合产生大约12％ 的体重改变(载体校正的)。用胰淀素单独或西布茶明单独处理的脂 肪质量减轻也是明显的，胰淀素和两者结合给药时获得协同效果(图 16A)。胰淀素单独给药时，瘦肉(蛋白质)质量增加，同时西布茶明 单独给药或结合胰淀素给药时(图16B)，瘦肉(蛋白质)质量相对未 改变。

实施例14.联合治疗：胰淀素+CB-1拮抗剂

将DIO倾向大鼠(从Charles Rivers Labs获得)单独圈养在鞋盒 笼里，22℃，12/12-小时亮暗循环。在药物处理之前用中等高脂肪饮 食(32％kcal来自脂肪；Rearch Diets D1226B)随意饲养大鼠6周。 在养肥阶段结束时，它们通常具有500g的平均体重。然后将大鼠分 成几个处理组，植入一个皮下迷你泵(Durect Corp)并插入口服管饲。 迷你泵含有载体(水中50％DMSO)或胰淀素(100μg/kg/天)，而口 服管饲给药无菌水或各种剂量的CB-1拮抗剂(0.1、0.3、1.0、3.0、 10.0mg/kg/天)。2周后的体重改变描绘于图17中，且这些组合中的两 种(环状)在更详细的图18A和18B中高亮显示。

尽管之前的描述公开了本发明，以及为说明的目的提供的实施 例，可以理解本发明的实践包括在所要求的发明范围内的所有常规变 化、改进或修饰。因此，描述和实施例不应当认为是限制本发明的范 围。