一种党参药材的质量控制方法

摘要

本发明涉及一种中药材的质量控制方法，特别是涉及党参药材的质量控制方法，包括如下步骤：(a)党参对照指纹图谱的建立：首先制备党参药材对照样品溶液的制备，然后测定党参药材对照指纹图谱；(b)党参药材待测产品指纹图谱的测定：取党参药材待测产品，按照上述(a)中所述步骤及条件测定该待测产品的指纹图谱；(c)将所述党参药材待测产品指纹图谱与所述党参药材对照指纹图谱进行比较，识别二者所具有的共同的吸收峰的数量，以确定产品质量是否合格。

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药材的质量控制方法，特别是涉及党参药材的质量控制方法。

背景技术

党参(Codonopsis pilosula)，属桔梗科(Platycodon)植物，古代以产于中国上党郡的为最名贵，故称党参。几十年来，在原有研究基础上，国内外对党参化学成分进行了深入研究，从党参中分离鉴定了10种甾醇类，21种糖苷类，5种生物碱类及含氮成分，34种挥发油成分，13种三萜类及其他类成分，还有多种人体必需的无机元素和氨基酸。

中药指纹图谱是指某种中药材或中成药中所共有的、具有特征性的某类或数类成分的色谱或光谱的图谱。在现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确的情况下，中药指纹图谱对于有效控制中药材或中成药的质量具有重要的意义。日本汉方药主要生产企业在20世纪80年代就已经在企业内部采用高效液相指纹图谱控制质量。德国、法国在对银杏叶提取物联合开发的过程中，发现银杏叶提取物的医疗作用是提取物所得物质群的整体作用结果，而对这样一个整体的质量控制，亦采用高效液相指纹图谱方法。美国FDA最近几年制定的植物草药指南中已经明确把指纹图谱作为混合物质群的质量控制方法(FDA.Guidance of Industry：Botanical Drug(Draft).2000August)。随着研究的深入，人们发现，作为中医理论的实践产物，中药，尤其是复方中药，其中所含的任一成分都不能代表其整体疗效。人们逐渐认识到，现行的参照西药(合成药)质量控制模式的质量标准不能恰当地反映中药内在的质量。从发展趋势看，从现行的质量控制模式向一种综合的、宏观的、可量化的鉴别与主要有效成分含量测定结合已是发展的趋势。

中药质量评价的现行标准是利用光谱或色谱手段鉴别和测定某一种或几种有效成分、活性成分或指标成分，以及药典规定的常规检查项目。如中国药典2000年版[一部]共收载602种药材及成药品种。其中有992个薄层色谱鉴别，308个品种有含量测定〔容量法、光谱法、液相色谱法、气相色谱法及薄层色谱扫描法〕，大多数品种有一般的检查项目。显然.这些质量标准的设置是模仿了化学药品的模式。其它国家如英国、印度、美国草药典、日本药局方中的汉药及德国CommissionE编辑的德国草药专论等也采用了基本相同的内容。对于化学药品而言，其药效成分为结构清晰的单一化合物，构效关系明确，其含量和纯度直接表达其有效及安全性。然而，中医用药的特点是复方配伍，任何单一的有效或活性成分的含量高低均不能表达其整体的疗效。例如，黄芪所含的黄芪甲苷(aastraga losideIV)是当前被选择为质量标准的鉴别和含量测定的最为常见的目标，但并没有依据证明黄芪甲苷与黄芪的功能主治的明确联系。同样，黄连、黄柏、三棵针均含小梁碱，一般都以它作为检测的目标，但是三者的功能主治却截然不同。复方制剂的情况就更加复杂。中医这种不是一对一的非线性的理论和实践说明中药质量应该采用某种宏观的综合的质量评价手段。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够综合评价党参药材的质量控制方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种党参药材的质量控制方法，包括如下步骤：

(a).党参对照指纹图谱的建立

党参药材对照样品溶液的制备：

称取药材细粉，加入甲醇溶液，超声处理，放冷，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过；

党参药材对照指纹图谱的测定：

吸取上述对照样品溶液注入液相色谱仪，使用高效液相色谱法进行测定，得到党参药材对照指纹图谱，色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；采用梯度洗脱，流动相为乙腈磷酸水溶液；检测波长200～210nm；

(b).党参药材待测产品指纹图谱的测定：

取党参药材待测产品，按照上述(a)中所述步骤及条件测定该待测产品的指纹图谱；

(c).将所述党参药材待测产品指纹图谱与所述党参药材对照指纹图谱进行比较，识别二者所具有的共同的吸收峰的数量，以确定产品质量是否合格。

所述(a)步骤中优选的色谱条件是：流动相的流速0.500～1.500ml/min，检测波长200～205nm，柱温20～40℃。

优选的党参药材指纹图谱的建立采用如下方法：

(a).党参药材对照样品溶液的制备方法：精密称取药材细粉，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇溶液，精密称定，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

党参药材对照指纹图谱的测定：

色谱条件：流动相A为0.02％磷酸水溶液；流动相B为80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；

梯度洗脱程序如下表所示：

    时间    (min)    流速  (ml/min)  乙腈  (％)0.05％磷酸    (％)    0    30    45    65    100    1.0    1.0    1.0    1.0    1.0  15  25  40  80  80    85    75    60    20    20

(b).党参药材待测产品指纹图谱的测定：

取党参药材待测产品，按照上述(a)中所述步骤及条件测定该待测产品的指纹图谱；

(c).将所述党参药材待测产品指纹图谱与所述党参药材对照指纹图谱进行比较，识别二者所具有的共同的吸收峰的数量，以确定产品质量是否合格。

在对照指纹图谱的建立中，使用高效液相色谱法测定所获得的党参药材的对照指纹图谱中有11个吸收峰，其中单峰面积超过总峰面积10％的吸收峰有2个，分别为：

10号峰，平均保留时间RT为84.452min，RSD为0％，峰面积为1275.39，RSD为3％；

11号峰，平均保留时间RT为94.316min，RSD为0％，峰面积为3319.528，RSD为3.42％。

在对照指纹图谱的建立中，使用高效液相色谱法测定所获得的党参药材的对照指纹图谱中有11个吸收峰，其中单峰面积超过总峰面积5％的吸收峰有4个，分别为：

2号峰，平均保留时间RT为12.068min，RSD为0.53％，峰面积为381.699，RSD为11.9％；

3号峰，平均保留时间RT为12.711min，RSD为0.4％，峰面积为634.231，RSD为14.32％；

10号峰，平均保留时间RT为84.452min，RSD为0％，峰面积为1275.39，RSD为3％；

11号峰，平均保留时间RT为94.316min，RSD为0％，峰面积为3319.528，RSD为3.42％。在对照指纹图谱的建立中，使用高效液相色谱法测定所获得的党参药材的对照指纹图谱中有11个吸收峰，其中单峰面积超过总峰面积2％的吸收峰有11个，分别为：

1号峰，平均保留时间RT为7.308，RSD为0.34，峰面积为289.896，RSD为8.94

2号峰，平均保留时间RT为12.068，RSD为0.53，峰面积为381.699，RSD为11.9

3号峰，平均保留时间RT为12.711，RSD为0.4，峰面积为634.231，RSD为14.32

4号峰，平均保留时间RT为14.148，RSD为0.32，峰面积为355.482，RSD为2.2

5号峰，平均保留时间RT为21.677，RSD为0.35，峰面积为270.857，RSD为35.46

6号峰，平均保留时间RT为35.544，RSD为0.17，峰面积为227.295，RSD为25.29

7号峰，平均保留时间RT为36.097，RSD为0.21，峰面积为293.056，RSD为10.03

8号峰，平均保留时间RT为39.207，RSD为0.17，峰面积为228.713，RSD为2.74

9号峰，平均保留时间RT为45.348，RSD为0，峰面积为282.564，RSD为4.46

10号峰，平均保留时间RT为84.452，RSD为0，峰面积为1275.39，RSD为3

11号峰，平均保留时间RT为94.316，RSD为0，峰面积为3391.528，RSD为3.42。

本发明采用如下方法控制党参药材的质量，取待党参药材，采用与党参药材对照样品的制备方法、色谱条件、测定方法完全相同的方法进行测定，获取指纹图谱，将党参药材待测产品指纹图谱与党参药材照指纹图谱比较，二者指纹图谱有3个或3个以上相同的吸收峰时，便认为党参药材待测产品是合格产品。

优选地，党参药材待测产品指纹图谱与所述党参药材对照指纹图谱比较，二者指纹图谱有5个或5个以上相同的吸收峰时，认为所述党参药材待测产品的质量合格。

较为优选地，党参药材待测产品指纹图谱与所述党参药材对照指纹图谱比较，二者指纹图谱有7个或7个以上相同的吸收峰时，认为所述党参药材待测产品的质量合格。

最为优选地，被测的党参药材产品指纹图谱与对照党参药材指纹图谱比较，二者指纹图谱有8个相同的吸收峰时，认为所述党参药材待测产品的质量合格。

本发明把党参药材中的各种成分指纹图形作为一个整体看待，注重各个构成指纹特征峰的前后顺序和相互关系，注重整体面貌特征，避免了因只测定一、二个化学成分而判定复方丹参滴丸整体质量的片面性，为完整、准确评价党参药材的质量提供了新的对照标准。

本发明具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握的特点。

稳定性试验(S1～S5分别表示同一批次的样品5份)

相似度S1    S2    S3    S4    S5对照指纹图谱 S1 S2 S3 S410.9990.9980.996  0.999  1  0.999  0.996  0.998  0.999  1  0.996  0.996  0.996  0.996  1  0.992  0.991  0.992  0.994  0.998  0.999  0.999  0.997

S5对照指纹图谱0.9920.998    0.991    0.999    0.992    0.999  0.994  0.997  1  0.993  0.993  1

精密度试验(S1～S5分别表示同一批次的样品5份)

S1  S2  S3  S4  S5  对照指纹图谱S1S2S3S4S5对照指纹图谱10.9990.9970.9950.9830.998 0.999 1 0.998 0.995 0.982 0.998 0.997 0.998 1 0.998 0.982 0.998 0.995 0.995 0.998 1 0.983 0.998 0.983 0.982 0.982 0.983 1 0.984 0.998 0.998 0.998 0.998 0.984 1

重现性试验(S1～S5分别表示同一批次的样品5份)

S1    S2    S3    S4    S5    对照指纹图谱S1S2S3S4S5对照指纹图谱10.9990.9980.9960.9920.998  0.999  1  0.999  0.996  0.991  0.999  0.998  0.999  1  0.996  0.992  0.999  0.996  0.996  0.996  1  0.994  0.997  0.992  0.991  0.992  0.994  1  0.993  0.998  0.999  0.999  0.997  0.993  1

对于本领域技术人员而言，根据本发明所公开的技术内容，本领域技术人员将很清楚本发明的其它实施方案，本发明实施例仅作为示例。在不违反本发明主旨及范围的情况下，可对本发明进行各种改变和改进。例如，使用不同的检测仪器所获得的测定结果可能有所不同，但只要使用本发明所述的质量控制方法，均在本发明保护范围之内。

附图说明

党参药材的指纹图谱

具体实施方式

(一)测定方法

照高效液相色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VID)，结合指纹图谱的要求进行测定。

仪器和试剂Waters 600E泵，Waters 996PDA检测器，M³²工作站，717自动进样器。超声波清洗仪(宁波科生仪器厂，功率250W)。

乙腈(色谱纯，美国产)；密里博超纯水；其它的溶剂为分析纯。

色谱条件和系统适用性试验Diamonsil C₁₈柱(迪马公司)，粒度5μm，体积250×4.6mm；流动相：乙腈-0.05％磷酸线性梯度洗脱(见下表)；柱温30℃；流速1.0ml/min；检测波长为203nm；记录时间：100分钟。理论板数按最大峰计算不低于3000。积分条件：最小峰高：0；最小峰面积：0；阈值：250；最小半峰宽：30。且7分钟之前禁止积分。

线性梯度洗脱流动相配比变化程序

    时间    (min)    流速  (ml/min)    乙腈    (％)  0.05％磷酸    (％)    0    30    45    65    100    1.0    1.0    1.0    1.0    1.0    15    25    40    80    80    85    75    60    20    20

测定法精密吸取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定。供试品指纹图谱与对照用指纹图谱比较，并经计算机模拟相似度计算软件“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(中国药典会出版，版本2004A)计算相似度。

检测波长的选择

照前述色谱条件，精密吸取供试品溶液进样，从200nm-400nm波长范围内测定，显示本品的203nm、210nm、220nm、230nm、250nm、270nm、290nm、310nm、330nm、360nm色谱图，220nm、230nm、250nm、270nm、290nm、310nm、330nm、360nm色谱图灵敏度低，峰数目少，指纹性差，  200nm～210nm波长下，色谱图的基线平，分离较好，峰形漂亮，相对来说，203nm更好。

指纹图谱从2小时色谱图可知，100分钟后已无色谱峰出现，因此100分钟的图谱已能反映本品的主要成分。

精密度试验取批次为040517-4的样品，按供试品溶液制备方法制备供试品，连续进样5次，检测指纹图，以第1张图作为参照模板，时间窗为1.0，以46、84、94分钟的几个峰作为多点校正峰，自动匹配后，处理结果表明各指纹图谱的相似度均大于0.90，符合指纹图的要求。

稳定性试验取批号为040517-4的样品，按供试品溶液制备方法制备供试品，分别在0，9，19，48，60小时检测指纹图，以第1张图作为参照模板，时间窗为1.0，以46、84、94分钟的几个峰作为多点校正峰，自动匹配后，处理结果表明各指纹图谱的相似度均大于0.90，符合指纹图的要求。

重现性试验取批次为040517-4的样品5份，按供试品溶液制备方法制备供试品，检测指纹图，以第1张图作为谱峰匹配的模板，时间窗为1.0，以46、84、94分钟的几个峰作为多点校正峰，自动匹配后，处理结果表明各指纹图谱的相似度均大于0.90，符合指纹图的要求。

五、色谱指纹图谱的建立和辨认

计算机模拟相似度计算软件“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”的选用：选用中国药典会的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”。

色谱指纹图谱的建立和辨认照前述方法，对本品十批药材的样品进行指纹图谱的测定，以第1批图谱作为参照模板，时间窗为1.0，以46、84、94分钟的几个峰作为多点校正峰，自动匹配后，处理结果表明各指纹图谱的相似度均在0.90-1.00之间，符合指纹图的要求。