一株指示牛泡沫病毒感染的细胞系及其应用

摘要

一株指示牛泡沫病毒感染的细胞系及其应用。该细胞系可以在BFV感染的特定条件下表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)，从而通过检测该蛋白的表达来间接指示牛泡沫病毒的感染。该细胞系(其保藏号为CGMCC No.1989)的构建过程：首先将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的全长基因插入到一种特异应答牛泡沫病毒反式激活因子的应答元件下游，构建成一个可以应答牛泡沫病毒感染的报告质粒；之后，采用脂质体的方法将该质粒转染BHK－21细胞，转染后第二天，细胞进行1∶5传代，并加入G418进行筛选，一星期后细胞开始大量死亡，至20天，细胞开始成簇生长，经过初筛后，将细胞利用1/2有限稀释法进行单克隆化操作，最终筛选到无本底表达但经过病毒攻击后EGFP表达量高的阳性克隆即为BFV的指示细胞系。