筛选耐盐碱杨树突变体的组织培养方法

摘要

一种筛选耐盐碱杨树突变体的组织培养方法，为将胚性细胞经低盐—高盐—低盐条件继代筛选的组织培养方法，将杨树胚性细胞在含盐培养基中继代培养，包括盐性分化培养、继代培养和生根培养，其中，含盐量(按质量体积比计)为2～10‰，含盐量≤6‰定义为低盐条件，反之为高盐条件，继代培养包括高盐继代、低盐继代。本发明的优点是：便于操作和控制，且成本低，周期短，获得耐盐碱性良好的杨树突变体。

说明书

技术领域

本发明涉及一种筛选耐盐碱杨树突变体的组织培养方法，尤其是一种将胚性细胞经低盐-高盐-低盐条件继代筛选从而得到耐盐碱突变体的组织培养方法。

背景技术

杨树是世界上分布最广、适应性最强的树种，具有速生、优质、适应性强等特点。但随着地球人口的不断增长，对资源的需求也日益增大，由于一些不合理开垦，致使土壤逐渐盐碱化、沙化、贫瘠化。利用组织培养方法筛选耐盐突变体研究技术具有便于操作控制，成本低，周期短等优点，因此该方法已受到国内外学者的广泛重视。

发明内容

本发明筛选耐盐碱杨树突变体的组织培养方法的目的在于提供一种获得耐盐碱杨树突变体的方法。

为达上述目的，本发明提供一种筛选耐盐碱杨树突变体的组织培养方法，将杨树胚性细胞在含盐培养基中继代培养，包括盐性分化培养、继代培养和生根培养，其中，含盐量(按质量体积比计)为2～10‰，含盐量≤6‰定义为低盐条件，反之为高盐条件，继代培养包括高盐继代、低盐继代。

所述的盐性分化培养是指胚性细胞置于含NaCl 2～5‰的Y-2培养基上，在温度25℃±2℃，光照时间为每天14h的条件下培养25～45天，使其充分分化。

所述的Y-2培养基为：MS+6-BA 0-0.4mg/L+KT 0.05-0.4mg/L+IAA0.05-0.2mg/L+蔗糖20-30g/L+琼脂4-8g/L。

所述的高盐继代是将盐性分化好的幼芽转入含高盐的Y-2培养基上继代2～3次，周期为14～21天。

所述的低盐继代是将高盐继代好的幼芽转入低盐培养基M4上继代2～3次，周期为20～40天。

所述M4培养基为：MS+6-BA 0.05-0.3mg/L+蔗糖20-30g/L+琼脂3-8g/L。

所述的生根培养是将低盐继代好的幼芽转入含NaCl 2～6‰、pH值8.0～9.5的M5培养基上生根，培养天数为20～50天。

所述的M5培养基为：1/2MS+IBA 0.1-1.0mg/L+蔗糖20-30g/L+琼脂3-8g/L。

本发明的优点是：

便于操作和控制，且成本低，周期短，获得耐盐碱性良好的杨树突变体。

具体实施方式

一种筛选耐盐碱杨树突变体的组织培养方法，将欧美杨(黑杨派)胚性细胞在含盐培养基中继代培养，包括盐性分化培养、继代培养和生根培养，其中，含盐量(按质量体积比计)为2～10‰，含盐量≤6‰定义为低盐条件，反之为高盐条件，继代培养包括高盐继代、低盐继代。

第一步：将胚性细胞置于含NaCl 3‰的Y-2培养基上盐性分化培养，温度25℃±2℃，光照时间为每天14h的条件下培养30天，使其充分分化。

所述的Y-2培养基为：MS+6-BA 0.2mg/L+KT 0.2mg/L+IAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L。

第二步：将盐性分化好的幼芽转入含NaCl 7‰的Y-2培养基上高盐继代，继代2次，周期为21天。

第三步：将高盐继代好的幼芽转入含NaCl 4‰，pH值为8.0的低盐培养基M4上低盐继代，继代2次，周期为30天。

所述M4培养基为：MS+6-BA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂3.5g/L。

第四步：将低盐继代好的幼芽转入含NaCl 4‰、pH值为8.0的M5培养基上生根培养，培养天数为35天。

所述的M5培养基为：1/2MS+IBA 0.4mg/L+蔗糖20/L+琼脂3.5g/L。