防止用药过量或滥用的药物组合物

摘要

本发明涉及包含连接于活性物质的化学部分的药物组合物，它大大降低了活性物质引起用药过量或被滥用的可能性。当以合适的剂量递送时，该药物组合物所提供的治疗活性类似于母体活性物质的治疗活性。

说明书

                    发明领域

处方药和非处方药的意外和故意用药过量是一个严重的健康问题，其造成每年数千人死亡。本发明涉及药物组合物，该药物组合物包含以大大降低活性物质引起用药过量或被滥用的可能性的方式连接于该活性物质的化学部分。当以合适的剂量递送时，该药物组合物提供与母体活性物质类似的治疗活性。然而，当以较高剂量给予该组合物时，由于与作为游离药物递送的活性物质相比，该活性物质的生物利用度有限，因此其用药过量或滥用的可能性降低。

背景

药物用药过量是一个严重和日益增长的问题。它可能是意外发生的，如当儿童在不了解后果的情况下吞下药丸，或者是故意发生的，如自杀企图。此外，由违禁药物使用者异常服用有效批量的街头药物而引起的意外用药过量也非常普遍。在用药过量案例中常见的药物例子包括普遍使用的非处方镇痛药对乙酰氨基酚(扑热息痛)和阿司匹林。虽然前者是青少年故意让自身中毒的案例中的优选药物(Lifshitz等，Isr.Med.Assoc.J.，4(4)：252-4(2002))，但阿司匹林可能更危险，因为没有解毒剂(Jones，Am.J.Ther.9(3)：245-57(2002)。

在较年长的人群中，中毒最经常涉及的药物包括精神治疗药物、心血管药物、镇痛药和消炎药、口服降血糖药和茶碱(Klein-Schwartz等，Drugs Aging1(1)：67-89(1991)。重要的是认识到，在许多情况下，虽然防止了由于用药过量引起的死亡，但会出现与用药过量相关的高发病率(Warner-Smith等，Addition97(8)：963-7(2002)。

药物滥用警告网络(DAWN)在2003年6月报道了涉及药物滥用的急诊部(ED)就诊的最近趋势。数据显示了从1994年-2001年8年的趋势。提供了以下小结：

●2001年，在整个美国有超过638,000 ED就诊涉及药物滥用。这可转化成每100,000个人中有252次就诊或所有ED就诊的0.6％。

●在2001年七类药物导致85％的ED记录。涉及药物滥用的ED就诊最频繁涉及酒精(记录的34％)、大麻(17％)、苯并二氮杂类(16％)、麻醉性镇痛剂组合(16％)、海洛因(15％)、其它镇痛药/组合(12％)和抗抑郁药(10％)。

●苯并二氮杂类的ED记录从2000年到2001年提高了14％(从91,078到103,972)，前两位苯并二氮杂类是阿普唑仑(升高16％)和苯并二氮杂类-NOS(升高35％)。后者包括未确定命名的苯并二氮杂类。

●麻醉性镇痛药/组合的ED记录从2000年到2001年升高21％(从82,373到99,317)。

●最常见的是未确定命名的麻醉性镇痛药(麻醉性镇痛药-NOS，32,196个记录，从2000到2001年升高24％)，接下来是含有氢可酮(21,567)、羟考酮(18,409，升高70％)和美沙酮(10,725，升高37％)的麻醉性镇痛药。含有丙氧芬(5,361)、可待因(3,720，下降30％)和吗啡(3,403)的麻醉性镇痛药/组合的出现频率则低得多，且不升高。

从1994到2000年，许多药物的急诊部报道数量大大增加。这些药物包括：苯异丙胺(10,118至18,555，升高83.4％)，抗惊厥药包括氨甲酰氮(9,358至14,642，升高56.5％)，肌肉松弛药包括肌安宁(12,223至19,001，升高55.5％)，精神治疗药物包括SSRI抗抑郁药、三环抗抑郁药和其它抗抑郁药(190,467至220,289，升高15.7％)。抗焦虑药、镇静剂和催眠药，包括苯并二氮杂类(74,637至103,972，升高27.7％)和麻醉性镇痛药包括可待因、氢可酮、美沙酮、羟考酮、丙氧芬等(44,518至99,317，升高123.1％)。

ED记录数量未升高但仍然有10,000多次就诊的其它药物包括呼吸系统药包括抗组胺药(12,238)，抗精神病药包括利培酮(20,182)，非甾体消炎药包括布洛芬和萘普生(22,663)和对乙酰氨基酚(42,044)。2001年阿司匹林和水杨酸盐-NOS导致8,499次ED就诊。

2001年，商业药物苯并二氮杂类(16％)、除海洛因以外的麻醉性镇痛药(16％)、非麻醉性镇痛药(12％)和抗抑郁药(10％)导致54％的ED就诊。

常常以5-15mg的单一口服剂量给予苯异丙胺硫酸盐。当被滥用时，成瘾者通常通过口服或静脉内使用高达每天2000mg的苯异丙胺。苯异丙胺的正常剂量通常在单次口服10mg剂量2小时后提供35ng/mL的血液浓度峰值(半衰期11-13小时)。口服给予30mg苯异丙胺后，可在2.5小时观察到约为111ng/mL的平均峰值血浆水平。4.5小时后，该水平可降低到约84ng/mL。口服摄入苯异丙胺后，在4-6小时内完成吸收。由于分布容量大的缘故，给予治疗剂量后血液或血浆中的浓度低。相反，在平均每天口服1000mg苯异丙胺的成瘾者中曾观察到的稳态血液水平为2000-3000ng/mL。虽然有外部影响如在血液水平为20ng/mL时心律开始加快，但开始静脉内使用后会迅速耐受。

类似地，用2.5-15mg的单一口服剂量的甲基苯异丙胺治疗肥胖。给予单一剂量10mg甲基苯异丙胺1小时后，可观察到最大血液浓度为30ng/mL。给予12.5mg剂量2.5小时后可产生的平均峰值血液水平为约20ng/mL，6小时后约16ng/mL，24小时后约10ng/mL。给予10mg后的24小时期间，甲基苯异丙胺尿浓度一般为500-4,000ng/mL。有报道称，甲基苯异丙胺滥用者的甲基苯异丙胺浓度为2,400-33,300ng/mL(平均14,200ng/mL)，苯异丙胺浓度为1,000-9,000ng/mL(平均1,800ng/mL)。估计对儿童的致命剂量为100mg，对成人的致命剂量为1g。

羟考酮是Percodan、Percocet、Roxicet和Tylox的成分。它是半合成的麻醉性镇痛剂，衍生自蒂巴因。在口服剂型中常与阿司匹林、非那西丁和咖啡因联用。一般地，其盐酸盐或对苯二酸盐的成人剂量是每6小时2.5-5mg。虽然它一般用于缓解中度到中等重度疼痛，但它也可产生吗啡类型的药物依赖性。治疗性血浆浓度为10-100ng/mL，毒性血浆浓度大于200ng/mL。

氢可酮是阿片类镇痛剂和镇咳药，以细的白色晶体或结晶粉末存在。氢可酮是从可待因制得的半合成麻醉性镇痛剂，具有性质上类似于可待因的多种作用。主要以亚-镇痛剂剂量(2.5-5mg)用作咳嗽糖浆和片剂中的镇咳药。此外，它用于缓解中度至中等重度疼痛。以5-10mg剂量每日四次口服给予二氢吗啡酮。治疗性血浆浓度为1-30ng/mL，毒性血浆浓度大于100ng/mL。

其他人也寻找了通过各种剂型防止用药过量的潜在有害作用的方法。例如，将阿片类物质与拮抗剂混合在特定制剂中，该制剂被设计成如果该剂型在口服给药前被破坏或经胃肠道外给药就会抵消阿片类物质。将延迟释放的Concerta(哌醋甲酯)制成贴剂，以防止通过鼻吸或注射给药。用一定量的催吐剂包被组合物，以致如果以所需的适度量给予不会产生呕吐效应，然而，如果服用过量则会诱导呕吐，从而防止用药过量。这些方法以及常规的控释剂型还是不够的，而且可被容易地规避。因此，需要改进方法使用药过量不宜操作，从而使用药过量可能性降低。

附图简要说明

图1.氨基酸苯异丙胺偶联物的合成。

图2.赖氨酸苯异丙胺偶联物的合成。

图3.丝氨酸苯异丙胺偶联物的合成。

图4.苯丙氨酸苯异丙胺偶联物的合成。

图5.三甘氨酸苯异丙胺偶联物的合成。

图6.口服给予d-苯异丙胺或L-赖氨酸-d-苯异丙胺的各动物的d-苯异丙胺的血浆浓度。

图7.将d-苯异丙胺硫酸盐或L-赖氨酸-d-苯异丙胺(以d-苯异丙胺计1.5mg/kg)口服给予大鼠后d-苯异丙胺的血浆浓度(ELISA分析)。

图8.将d-苯异丙胺硫酸盐或L-赖氨酸-d-苯异丙胺(以d-苯异丙胺计3mg/kg)口服给予大鼠后d-苯异丙胺的血浆浓度(ELISA分析)。

图9.将d-苯异丙胺硫酸盐或L-赖氨酸-d-苯异丙胺(以d-苯异丙胺计6mg/kg)口服给予大鼠后d-苯异丙胺的血浆浓度(ELISA分析)。

图10.给予逐渐升高的L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐剂量30分钟后d-苯异丙胺的血浆浓度(ELISA分析)。

图11.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计60mg/kg)口服给予大鼠后d-苯异丙胺的血浆浓度(ELISA分析)。

图12.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计3mg/kg)鼻内给予大鼠后d-苯异丙胺的血浆浓度(ELISA分析)。

图13.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计1.5mg/kg)静脉内推注给予大鼠后d-苯异丙胺的血浆浓度(ELISA分析)。

图14.将地塞君缓释(Dexadrine Spansule)胶囊、碾碎的地塞君缓释胶囊或L-赖氨酸-d-苯异丙胺(3mg/kg以d-苯异丙胺计)口服给予大鼠后d-苯异丙胺的血浆浓度(ELISA分析)。

图15A-B.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计1.5mg/kg)口服给予大鼠后，以ng/mL表示的(图15A)和以μM表示的(图15B)d-苯异丙胺的血浆浓度(LC/MS/MS分析)。

图16A-B.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计3mg/kg)口服给予大鼠后，以ng/mL表示的(图16A)和以μM表示的(图16B)d-苯异丙胺的血浆浓度(LC/MS/MS分析)。

图17A-B.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计6mg/kg)口服给予大鼠后，以ng/mL表示的(图17A)和以μM表示的(图17B)d-苯异丙胺的血浆浓度(LC/MS/MS分析)。

图18A-B.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计12mg/kg)口服给予大鼠后，以ng/mL表示的(图18A)和以μM表示的(图18B)d-苯异丙胺的血浆浓度(LC/MS/MS分析)。

图19A-B.将d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计60mg/kg)口服给予大鼠后，以ng/mL表示的(图19A)和以μM表示的(图19B)d-苯异丙胺的血浆浓度(LC/MS/MS分析)。

图20.大鼠中与逐渐升高的人等效剂量成比例关系的L-赖氨酸-d-苯异丙胺和d-苯异丙胺的比较生物利用度(C_max)(以d-苯异丙胺计mg/kg)。

图21.大鼠中与逐渐升高的剂量成比例关系的L-赖氨酸-d-苯异丙胺和d-苯异丙胺的比较生物利用度(AUC_inf)(以d-苯异丙胺计mg/kg)。

图22.大鼠中与逐渐升高的人等效剂量成比例关系的L-赖氨酸-d-苯异丙胺和d-苯异丙胺的比较生物利用度(AUC_inf)(以d-苯异丙胺计mg/kg)。

图23.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计3mg/kg)鼻内给予大鼠后d-苯异丙胺的血浆浓度(LC/MS/MS分析)。

图24.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计3mg/kg)鼻内给予大鼠后，以ng/mL表示的(图24A)和以μM表示的(图24B)d-苯异丙胺和L-赖氨酸-d-苯异丙胺的血浆浓度(LC/MS/MS分析)。

图25.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计1.5mg/kg)静脉内推注给予大鼠后d-苯异丙胺的血浆浓度(LC/MS/MS分析)。

图26A-B.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计3mg/kg)鼻内给予大鼠后，以ng/mL表示的(图26A)和以μM表示的(图26B)d-苯异丙胺的血浆浓度(LC/MS/MS分析)。

图27.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺(2mg/kg)静脉灌输(2mg/kg)或口服给予有意识的雄性比克犬(n＝3)30分钟后，L-赖氨酸-d-苯异丙胺的平均血浆浓度时间曲线图。

图28.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺(2mg/kg)静脉内灌输或口服给予有意识的雄性比克犬(n＝3)30分钟后，d-苯异丙胺的血浆浓度时间曲线图。

图29A-B.静脉内灌输(2mg/kg)给有意识的雄性比克犬(n＝3)30分钟后，以ng/ml表示的(图29A)和以μM表示的(图29B)L-赖氨酸-d-苯异丙胺和d-苯异丙胺水平的平均血浆浓度时间曲线图。

图30A-B.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺(2mg/kg)口服给予有意识的雄性比克犬(n＝3)后，以ng/ml计(图30A)和以nM计(图30B)L-赖氨酸-d-苯异丙胺和d-苯异丙胺水平的平均血浆浓度时间曲线图。

图31A-B.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺静脉内给予(图31A)或口服给予(图31B)有意识的雄性比克犬后，各自的L-赖氨酸-d-苯异丙胺血浆浓度时间曲线图。所用口服剂型是溶液，并且是0.2mg/mL的水溶液。

图32A-B.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺静脉内给予(图32A)或口服给予(图32B)有意识的雄性比克犬后，各自的d-苯异丙胺血浆浓度时间曲线图。

图33.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计1.8mg/kg)口服给予雄性犬后，d-苯异丙胺的血浆浓度。

图34.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计1.8mg/kg)口服给予雌性犬后，d-苯异丙胺的血浆浓度。

图35.将量逐渐增加的L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺静脉内推注给雄性和雌性犬后的平均血压。

图36.将量逐渐增加的L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺静脉内推注给雄性和雌性犬后的左心室血压。

图37.口服给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺后大鼠的活动行为(locomoter activity)(5小时时程)。

图38.口服给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺后大鼠的活动行为(12小时时程)。

图39.鼻内给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺后大鼠的活动行为(1小时时程)。

图40.鼻内给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺(与羧甲基纤维素一起)后大鼠的活动行为(2小时时程)。

图41.静脉内给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺后大鼠的活动行为(3小时时程)。

图42.耐滥用的苯异丙胺氨基酸-、二肽-和三肽偶联物的鼻内生物利用度(ELISA分析)。

图43.耐滥用的苯异丙胺氨基酸-、二肽-和三肽偶联物的口服生物利用度(ELISA分析)。

图44.耐滥用的苯异丙胺三肽偶联物的静脉内生物利用度(ELISA分析)。

图45.耐滥用的苯异丙胺氨基酸偶联物的鼻内生物利用度(ELISA分析)。

图46.耐滥用的苯异丙胺氨基酸偶联物的口服生物利用度(ELISA分析)。

图47.耐滥用的苯异丙胺氨基酸-、二肽和三肽偶联物的静脉内生物利用度(ELISA分析)。

图48.耐滥用的苯异丙胺氨基三肽偶联物的鼻内生物利用度(ELISA分析)。

图49.耐滥用的苯异丙胺氨基酸-和二肽偶联物的鼻内生物利用度(ELISA分析)。

图50.含有D-和L-氨基酸异构体的耐滥用的苯异丙胺二肽偶联物的鼻内生物利用度(ELISA分析)。

图51A-B.将L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计5mg/kg)口服给予大鼠后，以ng/mL表示的d-苯异丙胺和L-赖氨酸-d-苯异丙胺在血清水平的血浆浓度(图51A)，和以ng/g表示的d-苯异丙胺和L-赖氨酸-d-苯异丙胺在脑组织中的血浆浓度(图51B)。用LC/MS/MS测量血清和脑组织d-苯异丙胺和L-赖氨酸-d-苯异丙胺浓度(括号中指出的化合物)。

图52.说明了半乳糖-氢可酮的制备。

图53.以游离氢可酮计(用ELISA测量的血浆水平)，耐滥用的氢可酮-碳水化合物偶联物的口服生物利用度。

图54.说明了核糖-氢可酮的制备。

图55.以游离氢可酮计(用ELISA测量的血浆水平)，耐滥用的氢可酮-碳水化合物偶联物的鼻内生物利用度。

图56.说明了Leu-氢可酮的制备。

图57.说明了Ala-Pro-氢可酮的制备。

图58.说明了Gly-Gly-Leu-氢可酮的制备。

图59.说明了Gly-Gly-Gly-Gly-Leu-氢可酮的制备。

图60.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮氨基酸、二肽和三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图61.以游离氢可酮计，鼻内给药后耐滥用的氢可酮三肽偶联物的镇痛效果。

图62.以游离氢可酮计，皮下给药后耐滥用的氢可酮-三肽和五肽偶联物的镇痛效果。

图63.以游离氢可酮计，鼻内给药后耐滥用的氢可酮五肽偶联物的镇痛效果。

图64.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮-三肽和五肽偶联物的鼻内生物利用度。

图65.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮-三肽和五肽偶联物的鼻内生物利用度。

图66.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮氨基酸-碳水化合物肽偶联物的鼻内生物利用度。

图67.以游离氢可酮计，静脉内给药后耐滥用的氢可酮五肽偶联物的镇痛效果。

图68.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图69.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮五肽偶联物的鼻内生物利用度。

图70.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图71.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮三-和五肽偶联物的鼻内生物利用度。

图72.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮五肽偶联物的鼻内生物利用度。

图73.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮五肽偶联物的鼻内生物利用度。

图74.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮三肽偶联物的静脉内生物利用度。

图75.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图76.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮五肽偶联物的口服生物利用度。

图77.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮三-五肽偶联物的鼻内生物利用度。

图78.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮五肽偶联物的鼻内生物利用度。

图79.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮五肽偶联物的鼻内生物利用度。

图80.以游离氢可酮计，含有D-和L-异构体的耐滥用的氢可酮三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图81.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮五肽偶联物的鼻内生物利用度。

图82.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮五肽偶联物的鼻内生物利用度。

图83.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮五肽偶联物的鼻内生物利用度。

图84.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮五肽偶联物的鼻内生物利用度。

图85.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮五肽偶联物的鼻内生物利用度。

图86.说明了1，2：3，4-二-O-异亚丙基-D-吡喃半乳糖的制备。

图87.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮糖-肽偶联物的口服生物利用度。

图88.以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮氨基酸-碳水化合物偶联物的口服生物利用度。

图89.说明了核苷和结合位点。

图90.以游离氢可酮计，在接近治疗性人等效剂量的剂量(1mg/kg)下大鼠对氢可酮与EEFFFI-HC的口服生物利用度。

图91.以游离氢可酮计，在接近治疗性人等效剂量的剂量(1mg/kg)下，大鼠对氢可酮与EEFFF-HC的口服生物利用度。

图92.以游离氢可酮计，在接近治疗性人等效剂量的剂量(1mg/kg)下，大鼠对氢可酮与YYI-HC的口服生物利用度。

图93.以游离氢可酮计，在接近治疗性人等效剂量的剂量(1mg/kg)下，大鼠对氢可酮与DDI-HC的口服生物利用度。

图94.以游离氢可酮计，在接近治疗性人等效剂量的剂量(1mg/kg)下，大鼠对氢可酮与YYFFI-HC的口服生物利用度。

图95.以游离氢可酮计，在接近相当于人用药过量的剂量(5mg/kg)下，大鼠对氢可酮与EEFFI-HC的口服生物利用度。

图96.以游离氢可酮计，在接近相当于人用药过量的剂量(5mg/kg)下，大鼠对氢可酮与YYI-HC的口服生物利用度。

图97.以游离氢可酮计，在接近相当于人用药过量的剂量(5mg/kg)下，大鼠对氢可酮与DDI-HC的口服生物利用度。

图98.以游离氢可酮计，在接近相当于人用药过量的剂量(5mg/kg)下，大鼠对氢可酮与YYFFI-HC的口服生物利用度。

图99.以游离氢可酮计，与鼻内途径给予的氢可酮相比EEFFF-HC的生物利用度下降。

图100.以游离氢可酮计，与鼻内途径给予的氢可酮相比YYI-HC的生物利用度下降。

图101.以游离氢可酮计，与鼻内途径给予的氢可酮相比DDI-HC的生物利用度下降。

图102.以游离氢可酮计，与鼻内途径给予的氢可酮相比YYFFI-HC的生物利用度下降。

图103.以游离氢可酮计，与静脉内途径给予的氢可酮相比EEFFI-HC的生物利用度下降。

图104.以游离氢可酮计，与静脉内途径给予的氢可酮相比EEFFF-HC的生物利用度下降。

图105.以游离氢可酮计，与静脉内途径给予的氢可酮相比YYI-HC的生物利用度下降。

图106.以游离氢可酮计，与静脉内途径给予的氢可酮相比YYFFI-HC的生物利用度下降。

图107.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮加二氢吗啡酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图108.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图109.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，二氢吗啡酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图110.以游离氢可酮计，将2mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮加二氢吗啡酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图111.以游离氢可酮计，将2mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图112.以游离氢可酮计，将2mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，二氢吗啡酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图113.以游离氢可酮计，将5mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮加二氢吗啡酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图114.以游离氢可酮计，将5mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图115.以游离氢可酮计，将5mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，二氢吗啡酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图116.以游离氢可酮计，将25mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮加二氢吗啡酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图117.以游离氢可酮计，将25mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图118.以游离氢可酮计，将25mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，二氢吗啡酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图119.以游离氢可酮计，以逐渐升高的剂量(1、2、5和25mg/kg-以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)将氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，与剂量成比例关系的氢可酮加二氢吗啡酮的口服生物利用度(AUC_0-4h)(浓度与剂量)。

图120.以游离氢可酮计，以逐渐升高的剂量(1、2、5和25mg/kg-以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)将氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，与人等效剂量(HED)成比例关系的氢可酮加二氢吗啡酮的口服生物利用度(AUC_0-4h)。

图121.以游离氢可酮计，以逐渐升高的剂量(1、2、5和25mg/kg-以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)将氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，与剂量成比例关系的氢可酮加二氢吗啡酮的口服生物利用度(C_max)(浓度与剂量)。

图122.以游离氢可酮计，以逐渐升高的剂量(1、2、5和25mg/kg-以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)将氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，与人等效剂量(HED)成比例关系的氢可酮加二氢吗啡酮的口服生物利用度(C_max)。

图123.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮加二氢吗啡酮和YYFFI-HC的静脉内生物利用度(浓度与时间)。

图124.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮的静脉内生物利用度(浓度与时间)。

图125.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，二氢吗啡酮的静脉内生物利用度(浓度与时间)。

图126.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮加二氢吗啡酮的鼻内生物利用度(浓度与时间)。

图127.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮的鼻内生物利用度(浓度与时间)。

图128.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，二氢吗啡酮的鼻内生物利用度(浓度与时间)。

图129.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮加二氢吗啡酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图130.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图131.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，二氢吗啡酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图132.以游离氢可酮计，将2mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮加二氢吗啡酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图133.以游离氢可酮计，将2mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图134.以游离氢可酮计，将2mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，二氢吗啡酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图135.以游离氢可酮计，将5mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮加二氢吗啡酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图136.以游离氢可酮计，将5mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图137.以游离氢可酮计，将5mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，二氢吗啡酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图138.以游离氢可酮计，将25mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮加二氢吗啡酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图139.以游离氢可酮计，将25mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图140.以游离氢可酮计，将25mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，二氢吗啡酮的口服生物利用度(浓度与时间)。

图141.以游离氢可酮计，以逐渐升高的剂量(1、2、5和25mg/kg-以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)将氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，与剂量成比例关系的氢可酮加二氢吗啡酮的口服生物利用度(AUC_0-4)(浓度与剂量)。

图142.以游离氢可酮计，以逐渐升高的剂量(1、2、5和25mg/kg-以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)将氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，与人等效剂量(HED)成比例关系的氢可酮加二氢吗啡酮的口服生物利用度(AUC_0-4)。

图143.以游离氢可酮计，以逐渐升高的剂量(1、2、5和25mg/kg-以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)将氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，与剂量成比例关系的氢可酮加二氢吗啡酮的口服生物利用度(C_max)(浓度与剂量)。

图144.以游离氢可酮计，以逐渐升高的剂量(1、2、5和25mg/kg-以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)将氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，与人等效剂量(HED)成比例关系氢可酮加二氢吗啡酮的口服生物利用度(C_max)。

图145.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮加二氢吗啡酮和YYFFI-HC的静脉内生物利用度(浓度与时间)。

图146.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮的静脉内生物利用度(浓度与时间)。

图147.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，二氢吗啡酮的静脉内生物利用度(浓度与时间)。

图148.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮加二氢吗啡酮的鼻内生物利用度(浓度与时间)。

图149.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，氢可酮的鼻内生物利用度(浓度与时间)。

图150.以游离氢可酮计，将1mg/kg(以氢可酮计具有相等含量氢可酮的等摩尔剂量)氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC给予大鼠后，二氢吗啡酮的鼻内生物利用度(浓度与时间)。

图151.是羟考酮。

图152.是具有赖氨酸分支肽的羟考酮。

图153.是糖基化的羟考酮。

图154.是与丝氨酸形成烯醇醚。

图155.是烟酸和生物素。

图156.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图157.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图158.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图159.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图160.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图161.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图162.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图163.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图164.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图165.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图166.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图167.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图168.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图169.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图170.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图171.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图172.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图173.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图174.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的口服生物利用度。

图175.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图176.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图177.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图178.静脉内生物利用度of耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物以游离羟考酮计，。

图179.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图180.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图181.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图182.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图183.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图184.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图185.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图186.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图187.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图188.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图189.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图190.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图191.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图192.以游离羟考酮计，耐滥用的羟考酮双取代的三肽偶联物的鼻内生物利用度。

图193.以游离羟考酮计，在(2.5mg/kg)接近治疗性人等效剂量的剂量下，大鼠对羟考酮与P2L₍₂₎-羟考酮的口服生物利用度。

图194.与鼻内途径给予的羟考酮-由游离羟考酮测量的剂量为2.5mg/kg相比，P2L₍₂₎-羟考酮的生物利用度下降。

图195.与静脉内途径给予的羟考酮-由游离羟考酮测量的剂量为0.5mg/kg相比，P2L₍₂₎-羟考酮的生物利用度下降。

                        发明详述

本发明涉及通过共价修饰改变活性物质的药代动力学特征和药理学特征。将一化学部分共价连接于活性物质可改变活性物质的吸收、代谢、分布和清除的速率和程度。当以正常治疗剂量给药时，活性物质的生物利用度(时间浓度曲线下面积；AUC)与母体活性物质化合物相似。然而，随着口服剂量增加，相对于母体活性物质，共价修饰的活性物质的生物利用度开始下降。在超药理剂量时，与母体活性物质相比，活性物质偶联物的生物利用度大大降低。在较高剂量时生物利用度的相对降低减少了在服用的活性物质偶联物剂量超过处方规定剂量时获得的欣快作用。这进而无意或有意地降低了滥用可能性。

处方药滥用者通常想要通过吸入或注射药物提高他们的欣快感。这些给药途径提高药物吸收的速率和程度，并提供更快、几乎是瞬时的作用。这增加了到达药物发挥作用的中枢神经系统的药量。在本发明的具体实施方式中，与母体活性物质相比，通过鼻内和静脉内途径给予的共价修饰的活性物质的生物利用度大大降低。因此，违禁实施吸入和注射药物失去了它的优势。

根据本发明和本文所述，除非另有说明，以下术语的定义如下。其它将活性物质与运载体连接的方法参见美国申请号10/156,527和/或PCT/US03/05524，和/或PCT/US03/05525和/或PCT/US04/17204，将其全文纳入本文作为参考。

本发明利用共价修饰活性物质来降低其引起用药过量或被滥用的可能性。共价修饰活性物质，以使在治疗剂量以上的剂量下，如与生产商说明书不一致的剂量，与未修饰活性物质相比，其药理活性降低。当以较低剂量，如治疗剂量给药时，共价修饰的活性物质的药理活性与未修饰活性物质相似。活性物质的共价修饰可包括通过常规化学方法连接任何化学部分。

本发明化合物、组合物和方法使用药过量可能性降低，滥用或成瘾可能性降低和/或在高毒性或不最理想的释放特性方面改进了活性物质的特性。不希望受限于以下理论，我们相信在一些情况下(如苯异丙胺的情况下)，在水解位点上限制活性物质以大于治疗性处方量从前药中释放的天然闸门机制产生了用药过量保护。因此，通过限制“快速”或“高度”从前药中释放活性物质和限制替代给药途径的有效性提供了耐滥用性。

“苯异丙胺”应指具有中枢神经系统兴奋活性的任何拟交感神经性苯乙胺衍生物，如但不限于：苯异丙胺、甲基苯异丙胺、对甲氧基苯异丙胺、亚甲基二氧苯异丙胺、2，5-二甲氧基-4-甲基苯异丙胺、2，4，5-三甲氧基苯异丙胺和3，4-亚甲基二氧甲基苯异丙胺。

           苯异丙胺                 哌醋甲酯

以下简写描述了苯异丙胺的其它实施方式。

L-赖氨酸-d-苯异丙胺＝Lys-Amp、Lys-Amph、赖氨酸-苯异丙胺、KAMP、K-苯异丙胺，或：

       ＝2，6-二氨基己酸-(1-甲基-2-苯乙基)-酰胺，

Phe-Amp＝苯丙氨酸-苯异丙胺，FAMP

       ＝2-氨基-3-苯基丙酸-(1-甲基-2-苯乙基)-酰胺，

Ser-Amp＝丝氨酸-苯异丙胺、SAMP

       ＝2-氨基-3-羟基丙酸-(1-甲基-2-苯乙基)-酰胺，

Gly₃-Amp＝GGG-苯异丙胺、GGGAMP

        ＝2-氨基-N-({[(1-甲基-2-苯基-乙基氨基甲酰基(carbomyl))-甲基]-氨

基甲酰基)-甲基)-乙酰胺

整个本申请中，“阿片类”包括激活发现于脑、脊髓和内脏的阿片类受体的任何药物。阿片类物质有三个大类：天然存在的阿片碱，如吗啡(阿片类物质原型)和可待因；通过修饰天然阿片碱生产并具有类似的化学结构的半合成物质如海洛因、羟考酮和氢可酮；和不是由鸦片生产并且化学结构与阿片碱可能很不相同的全合成物质如芬太尼和美沙酮。其它阿片类物质包括羟基吗啡酮(hydroxymorphone)、羟吗啡酮(oxymorphone)、美沙酮、羟甲左吗喃、二氢可待因、哌替啶、地芬诺酯、舒芬太尼、阿芬太尼、丙氧芬、喷他佐辛、纳布啡、布托啡诺、丁丙诺啡、美普他酚、地佐辛及其药学上可接受的盐。

整个本申请中，“羟考酮”包括麻醉性生物碱(化学式C₁₈H₂₁NO₄)及其衍生物如羟考酮盐酸盐。羟考酮与可待因相关，用作镇痛剂和/或镇静剂。羟考酮是合成自蒂巴因的强效和潜在地成瘾的阿片类镇痛剂。它类似于可待因，但更强效且依赖性更高。它口服有效，市场上常见的是与阿司匹林(Percodan^)或对乙酰氨基酚(Percocet^)联用，以缓解疼痛。它也以缓释形式出售，商品名为Oxycontin^。本发明包括所有这些羟考酮的衍生物或组合。

整个本申请中，“氢可酮”包括由可待因制备的半合成的麻醉性镇痛剂和镇咳药，具有性质上类似于可待因的多种作用。它常被用于缓解中度至中等重度疼痛。商品名包括Anexsia^、Hycodan^、Hycomine^、Lorcet^、Lortab、Norco^、Tussionex^、Tylox^和Vicodin^。本发明包括氢可酮的衍生物，如氢可酮酒石酸氢盐和氢可酮磺化二乙烯苯-乙烯苯共聚物。

整个本申请中，“肽”包括单个氨基酸、二肽、三肽、寡肽、多肽或运载体肽。寡肽包括2个氨基酸至70个氨基酸。还有，有时本发明描述连接氨基酸、二肽、三肽、寡肽或多肽的活性物质是为了说明活性物质偶联物的特定实施方式。本文描述了偶联物的优选长度和其它优选实施方式。

整个本申请中，“化学部分”旨在包括至少氨基酸、肽、糖肽、碳水化合物、脂质、核苷或维生素.

“碳水化合物”包括糖、淀粉、纤维素和相关化合物如(CH₂O)_n，其中n是大于2的整数或C_n(H₂O)_n-1，n大于5。更具体的例子包括例如，果糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、甘油醛、二羟丙酮、赤藓糖、核糖、核酮糖、木酮糖、半乳糖、甘露糖、景天庚酮糖、神经氨酸、糊精和糖原。

“糖蛋白”是含有共价连接于蛋白质的碳水化合物(或多糖)的化合物。碳水化合物可以是单糖、双糖、寡糖、多糖或其衍生物(如磺基-或二氧磷基取代的衍生物)形式。

“糖肽”是由与由L-和/或D-氨基酸组成的寡肽连接的碳水化合物组成的化合物。糖-氨基酸是通过任意种类的用共价键连接单个氨基酸的糖。糖基-氨基酸是由通过糖基连接(O-、N-或S-)与氨基酸连接的糖组成的化合物。

本文所用“组合物”广泛地指含有所述分子偶联物的任何组合物。该组合物可包含干制剂、水溶液或无菌组合物。含有本文所述分子的组合物可以冻干形式储存，可与稳定剂如碳水化合物联用。在应用中，可在含有盐如NaCl、去污剂如十二烷基硫酸钠(SDS)和其它成分的水溶液中配制该组合物。

“管制药物”是因为有滥用可能或证实的滥用证据；因为其可能造成精神或生理依赖；因为其构成了公共健康风险；因为其药理作用的科学证据；或因为其作为其它管制药物的前体的作用而由联邦政府管理其生产、销售或分配的药物。

关于立体化学的重要提示：本专利旨在覆盖所有讨论的化合物，无论其绝对构型如何。因此，虽然讨论的是天然、L-氨基酸，但也包括D-氨基酸的应用。

此申请中使用了以下简写：

BOC＝叔丁氧基羰基

CMC＝羧甲基纤维素

DIPEA＝二异丙基乙胺

mp＝熔点

NMR＝核磁共振

OSu＝羟基琥珀酰亚胺基酯

Nia＝烟酸

Bio＝生物素

连接的化学部分可以是降低药理活性直到活性物质被释放的任何化学物质。该化学部分优选单个氨基酸、二肽或三肽、四肽、五肽或六肽。活性物质结合于特定位点，产生各种作用(Hoebel等，1989)。因此，某些化学部分的连接可降低或防止与这些生物靶点结合。当通过口服给药以外的途径递送时，优选防止或大大降低和/或延迟该组合物吸收到脑中。

连接的化学部分还可包含天然存在或合成的物质。这可包括但不限于：使活性物质连接上一种或多种氨基酸、肽、脂类、碳水化合物、糖肽、核酸或维生素。预计这些化学部分会影响在胃肠道中的延迟释放并防止快速发生所需活性，尤其是当通过胃肠道外途径给药时。(Hoebel，B.G.，L Hernandez等(1989)。“在摄食行为期间脑内去甲肾上腺素、血清素和多巴胺释放的微量渗析研究。理论和临床意义”(Microdialysis studies of brain norepinephrine，serotonin，and dopaminerelease during ingestive behavior.Theoretical and clinical implications)Ann N Y Acad Sci 575：171-91)。

对于本文所述的各个实施方式而言，氨基酸或肽可包括一种或多种天然存在的(L-)氨基酸：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、色氨酸、苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸。在另一实施方式中，氨基酸或肽包括一种或多种天然存在的(D)氨基酸：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、色氨酸、苏氨酸、酪氨酸和缬氨酸。在另一实施方式中，氨基酸或肽包括一种或多种非天然、非标准或合成氨基酸，如氨基己酸、联苯丙氨酸、环己基丙氨酸、环己基甘氨酸、二乙基甘氨酸、二丙基甘氨酸、2，3-二氨基丙酸、高苯丙氨酸、高丝氨酸、高酪氨酸、萘基丙氨酸、正亮氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸(4-氟)、苯丙氨酸(2，3，4，5，6五氟)、苯丙氨酸(4-硝基)、苯基甘氨酸、哌可酸、肌氨酸、四氢异喹啉-3-羧酸和叔亮氨酸。在另一实施方式中，氨基酸或肽包括一种或多种氨基酸醇。在另一实施方式中，氨基酸或肽包括一种或多种N-甲基氨基酸。

在另一实施方式中，将特定运载体用作基本短链氨基酸序列，将其它氨基酸加在末端或侧链上。在另一实施方式中，上述氨基酸序列可多具有用20种天然存在的氨基酸之一取代的一个氨基酸。该取代氨基酸优选是与序列中的氨基酸相比，结构或电荷相似的氨基酸。例如，异亮氨酸(IIe)[I]与亮氨酸(Leu)[L]的结构非常相似，酪氨酸(Tyr)[Y]与苯丙氨酸(Phe)[F]相似，丝氨酸(Ser)[S]与苏氨酸(Thr)[T]相似，半胱氨酸(Cys)[C]与甲硫氨酸(Met)[M]相似，丙氨酸(Ala)[A]与缬氨酸(Val)[V]相似，赖氨酸(Lys)[K]与精氨酸(Arg)[R]相似，天冬酰胺(Asn)[N]与谷氨酰胺(Gln)[Q]相似，天冬氨酸(Asp)[D]与谷氨酸(Glu)[E]相似，组氨酸(His)[H]与脯氨酸(Pro)[P]相似，甘氨酸(Gly)[G]与色氨酸(Trp)[W]相似。在另一实施方式中，可根据亲水性(即极性)或与20种必需氨基酸相关的其它常见特征来选择优选的取代氨基酸。虽然优选实施方式利用20种天然氨基酸的GRAS特性，但应认识到，也可考虑在不影响该氨基核心特性的前提下沿氨基酸链进行少量取代。

在一个实施方式中，运载体范围是一个至12个化学部分，优选一个至8个部分。在另一实施方式中，连接的化学部分的数量选自1、2、3、4、5、6或7等。在本发明另一实施方式中，该偶联物的运载体部分的分子量小于2,500，更优选小于约1,000，最优选小于约500。

本发明组合物和方法可应用于各种有治疗价值的活性物质(如药物)，包括例如，兴奋剂如苯异丙胺、抗惊厥药、肌肉松弛药、抗抑郁药、抗焦虑药、苯并二氮杂类、镇静剂、催眠药、麻醉药、类固醇、呼吸系统药物包括抗组胺剂、抗精神病药包括利培酮和非甾体抗炎药。

示范性麻醉药包括阿片类物质、氢可酮、羟考酮、吗啡、可待因、羟基吗啡酮、羟吗啡酮、美沙酮、芬太尼、羟甲左吗喃、二氢可待因、哌替啶、地芬诺酯、舒芬太尼、阿芬太尼、丙氧芬、喷他佐辛、纳布啡、布托啡诺、丁丙诺啡、美普他酚、地佐辛或其药学上可接受的盐。

示范性苯并二氮杂类包括阿普唑仑、利眠宁、氯硝西泮、氯氮、氟西泮、艾司唑仑、氟西泮、哈拉西泮、劳拉西泮、咪达唑仑、奥沙西泮、夸西泮、替马西泮或三唑仑。

示范性非甾体抗炎药包括布洛芬、萘普生或吲哚美辛、阿司匹林或水杨酸衍生物或对乙酰氨基酚。

示范性抗抑郁药包括西酞普兰、氟西汀、诺氟西汀、氟伏沙明、帕罗西汀、舍曲林、阿米替林、地昔帕明、多塞平、丙米嗪、去甲替林(nortryiptyline)、丁氨苯丙酮、米氮平、奈法唑酮、曲唑酮或文拉法辛。

示范性抗精神病药包括氯氮平、氟哌啶醇、奥氮平、喹硫平或利培酮。

示范性苯异丙胺包括苯异丙胺、间甲基苯异丙胺、对甲氧基苯异丙胺、亚甲基二氧苯异丙胺、2，5-二甲氧基-4-甲基苯异丙胺、2，4，5-三甲氧基苯异丙胺和3，4-亚甲基二氧甲基苯异丙胺。

本发明组合物和方法提供活性物质，当它与化学部分结合时通过改善生物利用度曲线和/或更安全的C_max和/或减少生物利用度的曲线下面积提供上述活性物质类别的更安全和/或更有效的剂型，尤其用于通过服用治疗水平以上的剂量而滥用的药物。结果是，本发明组合物和方法可提供治疗注意力缺陷活动亢进症、注意缺陷活动亢进障碍(ADHD)、注意力缺陷障碍(ADD)、与获得性免疫缺陷综合征(AIDS)相关的或AIDS-相关复合征的认知下降、抑郁、焦虑和焦虑相关病症、精神病、尼古丁成瘾、麻醉药成瘾、酗酒、嗜眠和/或痛觉缺失的改进方法。

在一个实施方式中，化学部分包含氨基酸或多肽。优选的氨基酸和肽化学部分包括例如，Lys、Ser、Ala、Phe、Ile、Pro-Pro-Leu、Pro-Pro-Ile、Val-Val、Lys-Lys、Gly-Gly-Ile、Phe-Phe-Ile、Phe-Phe-Leu、Thr-Thr-Val、Tyr-Tyr-Val、Tyr-Tyr-Phe、Glu-Glu-Val、Asp-Asp-Val、Lys-Lys-Val、Glu-Glu-Phe-Phe-Ile、Glu-Glu-Phe-Phe-Phe、Tyr-Tyr-Ile、Asp-Asp-Ile、Tyr-Tyr-Phe-Phe-Ile、Tyr-Tyr-Lys-Tyr-Tyr、Phe-Phe-Lys-Phe-Phe、Glu-Glu-Phe-Phe-Ile、(Lys-Lys-Gly-Gly)₂和[(1)-Lys-(d)-Lys-Leu]₂。在一些实施方式中，

由一种或多种前述化学部分双取代活性物质。

本发明的另一实施方式是防止用药过量的组合物，它包含共价连接一化学部分的活性物质。

本发明的另一实施方式是安全递送活性物质的组合物，包括提供治疗有效量的与化学部分共价连接的所述活性物质，与递送未结合的活性物质相比，所述化学部分降低了活性物质的吸收速率。

本发明的另一实施方式是降低药物毒性的组合物，包括将与化学部分共价连接的活性物质提供给患者，当给药剂量超出所述活性物质的治疗剂量范围时，所述化学部分能增加活性物质的清除率。

本发明的另一实施方式是降低药物毒性的组合物，包括将与化学部分共价连接的活性物质提供给患者，当给药剂量超出所述活性物质的治疗剂量范围时，所述化学部分提供的血清释放曲线不会提高到所述活性物质毒性水平以上。

本发明的另一实施方式是包含与化学部分共价结合的活性物质、降低活性物质生物利用度的组合物，所述结合的活性物质维持提供治疗有效的生物利用度的稳态血清释放曲线，但与未结合活性物质相比，当给药剂量超出所述活性物质的治疗剂量范围时，能够防止形成血液血清浓度的峰值或血液血清浓度升高。

本发明的另一实施方式是包含与化学部分共价结合的活性物质、防止形成活性物质C_max峰值的组合物，但仍能提供治疗有效的生物利用度曲线。

本发明的另一实施方式是包含与化学部分共价结合的活性物质、防止在患者中毒性释放曲线(profile)的组合物，所述结合的活性物质维持提供治疗有效的生物利用度的稳态血清释放曲线，但与未结合活性物质相比，能够防止形成血液血清浓度的峰值或血液血清浓度升高。

本发明的另一实施方式是式I化合物：

                    A-X_n-Z_m

其中A是本文所定义的活性物质；X是本文所定义的化学部分，n在1和50及其增量之间；Z是不同于X的另一个化学部分，它起佐剂的作用，m在1和50及其增量之间。在另一实施方式中n在1和10之间，m是0。应该理解，此式的化合物可单独使用或与本发明实施方式所述的任何物质联用。

本发明的实施方式提供了组合物，该组合物使活性物质在以合适剂量递送时是治疗有效的，但当给药剂量超过活性物质的治疗范围内的剂量时，活性物质的吸收速率和生物利用度程度降低。本发明的实施方式还提供了组合物，当给药剂量超过活性物质的治疗范围内的剂量时，共价结合的化学部分提高了活性物质的清除率。

在另一实施方式中，与未结合的活性物质相比，该组合物的毒性显著降低。在另一实施方式中，该组合物减少或消除了通过口服给药用药过量的可能性。在另一实施方式中，该组合物减少或消除了通过鼻内给药用药过量的可能性。在另一实施方式中，该组合物减少或消除了通过注射用药过量的可能性。

在另一实施方式中，本发明偶联物还可包含聚合物混合物，其中含有至少一种亲水性聚合物和至少一种不溶于水的聚合物。可根据工业标准使用这些聚合物，以进一步提高活性物质偶联物的持续释放特性，而不降低其耐滥用性。例如，组合物可包括：约75重量％至约95重量％的活性物质偶联物，约0.5％至约10％的亲水性聚合物(如羟丙基甲基纤维素)，约0.5％至约2.5％的不溶于水的聚合物(如丙烯酸树脂)，约0.4％至约1.5％的添加剂(如硬脂酸镁)和约0.01重量％至约1重量％的着色剂。适用于持续释放剂型的亲水性聚合物包括：一种或多种天然或部分合成或全合成的亲水性树胶如阿拉伯树胶、黄芪胶、刺槐豆荚胶、瓜尔胶或刺梧桐树胶，改性纤维素物质如甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素；蛋白质类物质如琼脂、果胶、角叉菜和藻酸盐；和其它亲水性聚合物如羧基聚亚甲基、明胶、酪蛋白、玉米醇溶蛋白、膨润土、硅酸镁铝、多糖、改性淀粉衍生物和本领域技术人员已知的其它亲水性聚合物或这些聚合物的组合。

这些亲水性聚合物胶凝，并将在酸性含水介质中会缓慢溶解，使得活性物质偶联物在胃中从凝胶中扩散出来。当该凝胶到达小肠时，它会以控制量溶解于高pH介质，进行持续释放。优选的亲水性聚合物是羟丙基甲基纤维素，如The Dow ChemicalCompany所生产的羟丙基甲基纤维素，称为纤维甲醚，如Methocel E10M。

其它剂型还可包含药物添加剂，包括但不限于：润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、粉末化的硬脂酸、氢化植物油、滑石粉、聚乙二醇和矿物油；着色剂；粘合剂如蔗糖、乳糖、明胶、淀粉糊、阿拉伯树胶、黄芪胶、聚维酮聚乙二醇、支链淀粉和玉米糖浆；助流剂如胶体二氧化硅和滑石粉；表面活性剂如十二烷基硫酸钠、丁二酸二辛酯磺酸钠、三乙醇胺、聚氧乙烯山梨聚糖醇、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物和季铵盐；防腐剂和稳定剂；赋形剂如乳糖，甘露醇，葡萄糖，果糖，木糖，半乳糖，蔗糖，麦芽糖，木糖醇，山梨糖醇，钾、钠和镁的盐酸盐、硫酸盐和磷酸盐；和/或本领域技术人员已知的任何其它药物添加剂。着色剂包括但不限于，Emerald Green Lake，FD&C红40号，FD&C黄6号，D&C黄10号或FD&C蓝1号和其它各种经检定的颜色添加剂(参见21 CFR，第74节)。在一个优选实施方式中，持续释放剂型还包含硬脂酸镁和Emerald Green Lake。

可根据药物生产领域技术人员所知的任何合适方法制备活性物质偶联物，该活性偶联物还可与赋形剂一起配制。例如，可在混合器中将活性物质偶联物和亲水性聚合物与等份水混合，形成湿粒。可使该粒干燥，获得亲水性聚合物包裹的活性物质-偶联物粒剂。可将得到的粒剂磨碎、筛选，然后与各种药物添加剂、不溶于水的聚合物和其它亲水性聚合物混合。然后可将该制剂制片，并进一步涂上在胃液中迅速溶解或分散的保护性包衣。

然而应注意，活性物质偶联物在延长时间内控制活性物质在消化道中的释放，与立即释放的组合相比产生了改进的特性，并在不加入上述添加剂的情况下降低和/或防止滥用。在优选实施方式中，不需要更多的持续释放添加剂，就能在获得治疗有效量的活性物质释放时获得钝形或降低的药代动力学曲线(如欣快作用降低)。

本发明化合物可以各种剂型给药。考虑了本领域普通技术人员所知的任何生物可接受的剂型及其组合。这些剂型的例子包括但不限于：咀嚼片、快速溶解片剂、泡腾片、可重建粉剂、酏剂、液体、溶液、悬液、乳剂、片剂、多层片剂、双层片剂、胶囊、软明胶胶囊、硬明胶胶囊、胶囊形片剂、锭剂、咀嚼锭剂、珠剂、粉剂、粒剂、颗粒剂、微粒剂、可分散粒剂、扁囊剂、灌洗剂、栓剂、乳膏剂、局部剂型、吸入剂、气雾吸入剂、贴剂、颗粒吸入剂、植入物、长效植入物、摄取剂(ingestible)、注射剂(包括皮下、肌内、静脉内和皮内)、输注剂、健康棒(health bar)、糖果、动物饲料、谷类、酸奶、谷类包衣、食品、营养食品、功能性食品及其组合。

然而，本发明中递送耐滥用的化合物的最有效途径是口服，使活性物质释放最多，以在维持耐滥用性时提供治疗有效性和/或持续释放。当通过口服途径递送时，优选在与单独活性物质相比的延长时间内将活性物质释放到循环系统中。

适合于口服给药的本发明剂型可被制成离散单元，如胶囊、胶囊形片剂或片剂。这些口服剂型也可包括水性液体或非水性液体的溶液或悬液。该剂型可以是乳剂，如水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。可通过将纯化并杀菌的液体加入制备好的肠制剂中，然后将其放入不能吞咽的患者的摄食管中给予该油。

可通过例如将制剂分散于合适的介质(常用植物油)中形成高粘度混合物来制备软凝胶或软明胶胶囊。然后用软凝胶工业的普通技术人员已知的技术和机器，用明胶基膜将该混合物包入胶囊。然后将如此形成的工业单元干燥到恒重。

例如，可通过将该制剂与指定赋形剂混合形成相对软、有味道的旨在被咀嚼而非被吞咽的片剂剂型来制备咀嚼片。可采用常规制片机器和制片方法，即直接压制和粒化，或在压制前击压。参与药物固体剂型生产的技术人员精通所用的这些方法和机器，因为咀嚼剂型是药物工业中非常常见的剂型。

例如，可通过用技术如转盘式包衣法或空气悬液法将一层连续膜沉积在片剂上使片剂包衣来制备包膜片.

例如，可通过将该制剂与旨在将粘合性能加入崩解性能的赋形剂混合来制备压缩片剂。可用本领域技术人员已知的方法和机器直接压缩该混合物或先粒化再压缩该混合物。然后根据市场需要包装得到的压缩片剂量单位，即单位剂、卷、散装瓶、起泡包装等。

本发明也考虑了采用可从各种物质制备的生物可接受的运载体。这些物质包括但不限于：稀释剂、粘合剂和胶粘剂、润滑剂、增塑剂、崩解剂、着色剂、填充物质、调味剂、甜味剂和其它物质如缓冲液和吸附剂，以制备具体的含药组合物。

粘合剂可选自各种材料，如羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素或其它合适的纤维素衍生物、聚维酮、丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、药物珐琅、树胶、牛奶衍生物如乳清、淀粉和衍生物，以及本领域技术人员已知的其它常规粘合剂。非限制性溶剂例子是水、乙醇、异丙醇、二氯甲烷或其混合物和组合。非限制性填充剂例子包括糖、乳糖、明胶、淀粉和二氧化硅。

优选的增塑剂可选自但不限于：邻苯二甲酸二乙酯、癸二酸二乙酯、柠檬酸三乙酯、巴豆酸(cronotic acid)、丙二醇、邻苯二甲酸丁酯、癸二酸二丁酯、蓖麻油及其混合物。明显的是，该增塑剂可以是疏水性和亲水性的。用不溶于水的疏水物质如邻苯二甲酸二乙酯、癸二酸二乙酯和蓖麻油来延迟水溶性维生素如维生素B6和维生素C的释放。相反，当采用不溶于水的维生素时用亲水性增塑剂促进胶囊包膜的溶解，使表面上出现通道，这可促进营养组合物释放。

应理解，除了上述具体成分以外，本发明剂型还可包括其它合适的物质，如调味剂、防腐剂和抗氧化剂。这种抗氧化剂应该是食品可接受的，可包括维生素E、胡萝卜素、BHT或本领域技术人员已知的其它抗氧化剂。

可通过混合而被包含的其它化合物是，例如，医学上惰性的成分，如用于片剂或胶囊固体和液体稀释剂，如乳糖、右旋糖、蔗糖、纤维素、淀粉或磷酸钙，用于软胶囊的橄榄油或油酸乙酯和用于悬液或乳剂的水或植物油；润滑剂如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁或硬脂酸钙和/或聚乙二醇；胶凝剂如胶质粘土；增稠剂如黄芪胶或藻酸钠，粘合剂如淀粉、阿拉伯树胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；崩解剂如淀粉、海藻酸、藻酸盐或淀粉乙醇酸钠；泡腾混合物；染料；甜味剂；湿润剂如卵磷脂、聚山梨醇酯或硫酸十二烷基酯；以及其它治疗上可接受的辅助成分，如湿润剂、防腐剂、缓冲液和抗氧化剂，它们是这些剂型的已知添加剂。

在口服给药中，含有稀释剂、分散剂和/或表面活性剂的细粉剂或粒剂可存在于饮剂(draught)、水或糖浆中、以干燥状态存在于胶囊或小药囊中、存在于可包括悬浮剂的非水性悬液中，或存在于水或糖浆的悬液中。当需要或必需时，可包括调味剂、防腐剂、悬浮剂、增稠剂或乳化剂。

用于口服给药的液体分散体可以是糖浆、乳剂或悬液。糖浆可含有例如蔗糖或蔗糖加甘油和/或甘露醇和/或山梨糖醇作为运载体。具体说，用于糖尿病患者的糖浆可仅含有仅作为运载体的产品，如山梨糖醇，它们不会代谢成葡萄糖或仅有非常少量代谢成葡萄糖。悬液和乳剂可含有运载体，例如天然树胶、琼脂、藻酸钠、果胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯醇。

成人的剂量范围将取决于许多因素，包括年龄、体重、患者情况和给药途径。离散单元中提供的片剂和其它递送形式方便地含有一种本发明化合物的一日剂量或其合适部分。例如，单元可含有5mg-500mg，但更通常是10mg-250mg的一种本发明化合物。

该剂型也可组合本领域普通技术人员已知的任何释放形式。这些包括立即释放、延长释放、脉冲释放、可变释放、控制释放、计时释放、持续释放、延迟释放、长效及其组合。本领域已知获得立即释放、延长释放、脉冲释放、可变释放、控制释放、计时释放、持续释放、延迟释放、长效特征及其组合的能力。

本发明组合物可在24小时期间给予一次或多次部分剂量，在24小时期间给予一次剂量，在24小时期间给予两次剂量或在24小时期间给予两次以上剂量。可在24小时期间同时或在不同时间服用部分、两次或其它多剂量。在不同给药时间时，这些剂量可以是互相不均匀或各成分不均匀的剂量。

类似地，可在起泡包装(blister pack)或其它这种药物包装中提供本发明组合物。而且，本发明主体组合物还可包括或伴有标记，使个体能够区分该组合物为处方治疗的产品。该标记还可包括上面规定的给予该组合物时间的说明。例如，该标记可以是时间标记，说明在每天的具体时间或通用时间给予该组合物，或者该标记可以是日标记，说明在每周的哪天给予该组合物。该起泡包装或其它组合包装也可包括第二种药物产品。

应理解，可用本领域已知的标准药理模型证明本发明组合物的药理活性。而且应理解，可将本发明组合物掺入或包入合适的聚合物基质或膜中，以进行位点特异性递送，或可用能够影响位点特异性递送的特定靶向试剂将其功能化。这些技术以及其它药物递送技术是本领域熟知的。

在本发明的另一实施方式中，在肠道中、粘膜表面上或血流中的生理情况下，该组合物的溶解性和溶出率显著改变。在另一实施方式中，溶解性和溶出率大大降低了所述药物的生物利用度，尤其在剂量大于治疗剂量时。在另一实施方式中，在口服给药后发生生物利用度的降低。在另一实施方式中，在鼻内给药后发生生物利用度的降低。在另一实施方式中，在静脉内给药后发生生物利用度的降低。

本发明的另一个具体实施方式提供了当提供口服给药形式(如片剂或胶囊)的共价修饰的活性物质时，难于操作。碾碎片剂或破坏胶囊不会大大提高摄入本发明组合物时吸收活性物质的速率和量。

对于各所述实施方式而言，可实现一种或多种以下特征。该化合物的毒性明显低于未结合的活性物质。该共价结合的化学部分降低或消除了通过口服给药用药过量的可能性。该共价结合的化学部分降低或消除了通过鼻内给药用药过量的可能性。该共价结合的化学部分降低或消除了通过注射用药过量的可能性。

本发明还提供了以降低其滥用可能性的方式改变活性物质的方法。本发明方法提供了通过将活性物质与不同化学部分连接来调节药物剂量的各种方法。一个实施方式提供了防止用药过量的方法，该方法包括将与化学部分共价结合的活性物质给予个体。

另一实施方式提供了安全递送活性物质的方法，该方法包括提供治疗有效量的与化学部分共价结合的活性物质，与递送未结合的活性物质相比，该化学部分降低了活性物质的吸收速率。

另一实施方式提供了降低药物毒性的方法，该法包括将与化学部分共价结合的活性物质提供给患者，当给药剂量超出所述活性物质的治疗剂量范围时，所述化学部分能提高具有药学活性的活性物质的清除率。

另一实施方式提供了降低药物毒性的方法，该方法包括将与化学部分共价结合的活性物质提供给患者，当给药剂量超过了未结合活性物质的治疗范围的剂量时，所述化学部分提供的血清释放曲线不会提高到所述活性物质毒性水平以上。

另一实施方式提供了降低活性物质生物利用度的方法，该方法包括提供与化学部分共价结合的活性物质，该结合的活性物质维持稳态血清释放曲线，提供治疗有效的生物利用度，但与未结合活性物质相比，当给药剂量超过了未结合的活性物质的治疗范围的剂量时，能够防止形成血液血清浓度的峰值或血液血清浓度升高。另一实施方式提供了在仍能提供治疗有效的生物利用度曲线时防止形成活性物质C_max峰值的方法，该方法包括提供与化学部分共价结合的活性物质。在另一实施方式中，本发明方法提供类似于图1-195的生物利用度曲线。

另一实施方式提供了防止在患者中毒性释放曲线(profile)的方法，该方法包括将与化学部分共价结合的活性物质给予患者，所述结合的活性物质维持稳态血清释放曲线，提供治疗有效的生物利用度，但与未结合活性物质相比，能够防止形成血液血清浓度的峰值或血液血清浓度升高。

本发明的另一实施方式是减少或防止滥用药物组合物的方法，该方法包括将所述组合物提供给、给予或开处方给需要它的人，其中所述组合物包含共价结合于活性物质的化学部分，以致以与生产商说明书不一致的方式使用该组合物时，活性物质的药理活性大大降低。本发明的另一实施方式是减少或防止滥用药物组合物的方法，该方法包括服用所述组合物，其中所述组合物包含共价结合于活性物质的化学部分，以致以与生产商说明书不一致的方式使用该组合物时，活性物质的药理活性大大降低。

本发明的另一实施方式是防止药物组合物的用药过量的方法，该方法包括将所述药物组合物提供给、给予或开处方给需要它的人，其中所述组合物包含以大大降低活性物质用药过量可能性的方式共价结合于活性物质的化学部分。本发明的另一实施方式是防止药物组合物用药过量的方法，该方法包括服用所述药物组合物，其中所述组合物包含以大大降低活性物质用药过量的可能性的方式共价结合于活性物质的化学部分。

本发明的另一实施方式是减少或防止药物组合物的欣快作用的方法，该方法包括将所述组合物提供给、给予或开处方给需要它的人，其中所述组合物包含共价结合于活性物质的化学部分，以致以与生产商说明书不一致的方式使用该组合物时，活性物质的药理活性大大降低。本发明的另一实施方式是减少或防止药物组合物的欣快作用的方法，该方法包括服用所述组合物，其中所述组合物包含共价结合于活性物质的化学部分，以致以与生产商说明书不一致的方式使用该组合物时，活性物质的药理活性大大降低。

本发明的另一实施方式是任何上述方法，其中所述药物组合物适合口服给药，当该组合物通过胃肠道外如鼻内或静脉内给药时所述活性物质难以从所述化学部分上释放。优选地，在胃、肠道或血液血清中存在的酸和/或酶的存在下，所述活性物质可从所述化学部分释放。任选地，所述组合物可以是片剂、胶囊、口服溶液或口服悬液的形式。

本发明的另一实施方式是任何上述方法，其中所述化学部分是氨基酸、寡肽、多肽、碳水化合物、糖肽、核酸或维生素。优选地，所述化学部分是氨基酸、寡肽或多肽。当该化学部分是多肽时，所述多肽优选含有少于70个氨基酸，少于50个氨基酸，少于10个氨基酸或少于6个氨基酸。

本发明的另一实施方式是任何上述方法，其中所述共价结合包括酯键或碳酸酯键。本发明的另一实施方式是任何上述方法，其中在药学上可接受的口服剂型中所述活性物质通过酮和/或羟基与化学部分共价连接。

本发明的另一实施方式是任何上述方法，其中所述组合物产生疗效，而不产生明显的欣快感。与单独的活性物质相比，所述活性物质优选提供治疗上生物等效的AUC，但不提供导致欣快感的C_max。

本发明的另一实施方式是减少或防止滥用药物组合物的方法，该方法包括将所述组合物口服给予需要它的人，其中所述组合物包含与活性物质共价连接的氨基酸或肽，以致以与生产商说明书不一致的方式使用该组合物时，活性物质的药理活性大大降低。

另一个实施方式是防止药物组合物用药过量的方法，该方法包括将所述药物组合物口服给予需要它的人，其中所述组合物包含与活性物质共价连接的氨基酸或肽，以致大大降低活性物质导致用药过量的可能性。

另一个实施方式是减少或防止药物组合物的欣快作用的方法，该方法包括将所述组合物口服给予需要它的人，其中所述组合物包含与活性物质共价连接的氨基酸或肽以致以与生产商说明书不一致的方式使用该组合物时，活性物质的药理活性大大降低。

对本发明各所述方法而言，可通过将化学部分与活性物质连接而实现以下特性。在一个实施方式中，当以其不结合状态或其盐递送时，该化合物的毒性明显低于活性物质。在另一实施方式中，降低或消除了口服给药用药过量的可能性。在另一实施方式中，降低或消除了鼻内给药用药过量的可能性。在另一实施方式中，降低或消除了注射给药用药过量的可能性。

本发明的另一个实施方式提供了治疗各种疾病或病症的方法，该方法包括给予本发明化合物或组合物，它们还包含常用于各疾病或病症的处方活性物质，其中苯异丙胺与化学部分共价连接。例如，本发明的一个实施方式包括治疗注意力缺陷活动亢进症的方法，该方法包括将与化学部分共价结合的苯异丙胺给予患者。另一实施方式提供了治疗注意缺陷活动亢进障碍(ADHD)的方法，该方法包括将本发明化合物或组合物，如与化学部分共价结合的苯异丙胺给予患者。另一实施方式提供了治疗注意力缺陷障碍(ADD)的方法，该方法包括将本发明化合物或组合物，与化学部分共价结合的苯异丙胺给予患者。

本发明的另一个实施方式提供了治疗与获得性免疫缺陷综合征(AIDS)或AIDS-相关复合征相关的认知下降的方法，该方法包括将本发明化合物或组合物给予患者。

本发明的另一个实施方式提供了治疗抑郁症的方法，该方法包括将本发明化合物或组合物给予患者。本发明的另一个实施方式提供了治疗焦虑症和焦虑相关病症的方法，该方法包括将本发明化合物或组合物给予患者。本发明的另一个实施方式提供了治疗精神病的方法，该方法包括将本发明化合物或组合物给予患者。

本发明的另一个实施方式提供了治疗尼古丁成瘾的方法，该方法包括将本发明化合物或组合物给予患者。本发明的另一个实施方式提供了治疗麻醉剂成瘾的方法，该方法包括将本发明化合物或组合物给予患者。本发明的另一个实施方式提供了治疗酗酒的方法，该方法包括将本发明化合物或组合物给予患者。

本发明的另一个实施方式提供了治疗嗜眠症的方法，该方法包括将本发明化合物或组合物给予患者。本发明的另一个实施方式提供了治疗痛觉缺失的方法，该方法包括将本发明化合物或组合物给予患者。

为了有助于更完整地理解本发明，下面提供了实施例。然而，本发明范围不限于这些实施例所公开的具体实施方式，它们的目的仅为说明。

实施例

通过连接各种部分如单个氨基酸、特定的短链氨基酸序列如二肽、三肽和五肽，或碳水化合物如核糖等共价修饰的苯异丙胺、氢可酮和羟考酮的药代动力学研究说明本发明。研究包括通过口服、鼻内和静脉内途径给予的各种药物偶联物的药代动力学评价。总的来说，这些化合物证明，可通过与各种部分共价连接来修饰活性物质，并且在防止通过口服给药用药过量的可能性和防止通过鼻内和静脉内给药滥用的情况下维持它们的治疗价值。

结合于运载体的苯异丙胺

实施例1至32证明了偶联于活性物质的化学部分在维持其治疗价值的情况下降低用药过量可能性中的用途和有效性，其中将氨基酸赖氨酸(K)偶联于活性物质苯异丙胺(K-苯异丙胺)。然而，该实施例举例说明了将任何各种化学部分连接于苯异丙胺。而且，苯异丙胺连接的例子包括例如实施例1-32和整个说明书中描述的类似方法，并可通过这些方法合成。

A.合成苯异丙胺组合物

实施例1.氨基酸-苯异丙胺偶联物的总合成

用图1-5所述通用方法合成氨基酸偶联物。

实施例2.合成L-赖氨酸-d-苯异丙胺

用以下方法合成L-赖氨酸-d-苯异丙胺(参见图2)：

a.偶联

  试剂  MW  重量  mmoles  摩尔当量  d-苯异丙胺游离碱  135.2  4.75g  35.13  1  Boc-Lys(Boc)-OSu  443.5  15.58g  35.13  1  Di-iPr-Et-胺  129  906mg  7.03  0.2，d＝0.74，1.22mL  1，4-二噁烷  -  100mL  -  -

在惰性气氛下，将d-苯异丙胺游离碱(4.75g，35.13mmol)和DiPEA(0.9g，1.22mL，7.03mmol)加入Boc-Lys(Boc)-OSu(15.58g，35.13mmol)的二噁烷(100mL)溶液中。在室温下将得到的混合物搅拌过夜。然后用减压蒸发去除溶剂和多余碱。将粗产物溶解于乙酸乙酯并加载到快速柱(7厘米宽，填充有24厘米的二氧化硅)上，用乙酸乙酯洗脱。分离产物，用旋转蒸发法减少溶剂，用高真空干燥纯化的保护胺，得到白色固体。¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.02-1.11(m，2H，Lys γ-CH₂)，δ1.04(d，3H，Amp α-CH₃)，δ1.22-1.43(m，4H，Lys-β和δ-CH₂)，δ1.37(18H，Boc，6x CH₃)，δ2.60-2.72(2H，Amp CH₂)，δ3.75-3.83，(m，1H，Lysα-H)δ3.9-4.1(m，1H，Ampα-H)，δ6.54-6.61(d，1H，酰胺NH)，δ6.7-6.77(m，1H，酰胺NH)，δ7.12-7.29(m，5H，ArH)，δ7.65-7.71(m，1，酰胺NH)；mp＝86-88℃。

b.去保护

  试剂  MW  重量  mmoles  摩尔当量  4M HCl的二噁烷溶液  4mmol/mL  50mL  200  6.25  Boc-Lys(Boc)-Amp  463.6  14.84g  32  1  1，4-二噁烷  -  50mL  -  -

将保护酰胺溶解于50mL无水二噁烷，搅拌时加入50mL(200mmol)4M HCl/二噁烷，在室温下搅拌过夜。然后用旋转蒸发法减少溶剂，得到粘性油状物。加入100mL MeOH后，旋转蒸发产生金黄色固体物质，在室温下通过高真空储存使其干燥。¹HNMR(DMSO-d₆)δ0.86-1.16(m，2H，Lys γ-CH₂)，δ1.1(d，3H，Amp α-CH₃)，δ1.40-1.56(m，4H，Lys-β和δ-CH₂)，δ2.54-2.78(m，2H，Amp CH₂，2H，Lys ε-CH₂)，3.63-3.74(m，1H，Lysα-H)，δ4.00-4.08(m，1H，Ampα-H)，δ7.12-7.31(m，5H，Amp ArH)，δ8.13-8.33(d，3H，Lys胺)δ8.70-8.78(d，1H，酰胺NH)；mp＝120-122℃。

实施例3.合成Ser-Amp

用类似方法合成Ser-Amp(参见图3)，除了氨基酸起始材料是Boc-Ser(O-tBu)-Osu，用三氟乙酸代替HCl完成去保护。

实施例4.合成Phe-Amp

用类似方法合成Phe-Amp(参见图4)，除了氨基酸起始材料是Boc-Phe-Osu。

实施例5.合成Gly₃-Amp

用类似方法合成Gly₃-Amp(参见图5)，除了氨基酸起始材料是Boc-GGG-Osu。

B.L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学特征

ELISA分析

实施例6.与d-苯异丙胺硫酸盐相比，L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学特征

随意地给雄性Sprague-Dawley大鼠提供水，禁食过夜，经口强饲法给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐。在所有研究中，剂量中含有等效量的d-苯异丙胺。用ELISA测量血浆d-苯异丙胺浓度(苯异丙胺Ultra，109319，Neogen，Corporation，Lexington，KY)。该测定是d-苯异丙胺特异的，具有最小的主要d-苯异丙胺代谢物(对羟基-d-苯异丙胺)的反应性(0.6％)。在ELISA中测定L-赖氨酸-d-苯异丙胺也基本无反应性(＜1％)。

d-苯异丙胺或L-赖氨酸-d-苯异丙胺的平均(n＝4)血浆浓度曲线见图6。全部四只给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺的动物中都观察到延长释放，与给予d-苯异丙胺硫酸盐的动物相比，C_max大大降低。给予d-苯异丙胺或L-赖氨酸-d-苯异丙胺后各动物的血浆d-苯异丙胺浓度见表1。d-苯异丙胺平均血浆浓度见表2。L-赖氨酸-d-苯异丙胺的至峰值浓度时间与d-苯异丙胺相似。表3中小结了口服给予d-苯异丙胺或L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学参数。

表1.口服给予d-苯异丙胺或L-赖氨酸-d-苯异丙胺(以d-苯异丙胺计3mg/kg)

                     的各动物的d-苯异丙胺的血浆浓度。

  时间  (小时)         d-苯异丙胺(ng/ml)        L-赖氨酸-d-苯异丙胺(ng/ml)  大鼠#1  大鼠#2  大鼠#3  大鼠#4  大鼠#1  大鼠#2  大鼠#3  大鼠#4  0.5  144  157  101  115  52  62  74  44  1  152  78  115  78  48  72  79  57  1.5  85  97  117  95  42  62  76  53  3  34  45  72  38  61  60  71  43  5  20  14  12  15  49  33  44  22  8  3  3  2  2  15  14  12  8

       表2.口服给予d-苯异丙胺或L-赖氨酸-d-苯异丙胺后

              d-苯异丙胺的平均血浆浓度。

  小时                  血浆d-苯异丙胺浓度(ng/ml)         d-苯异丙胺  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  平均值  +/-SD  CV  平均值  +/-SD  CV  0.5  129  25  20  58  13  22  1  106  35  33  64  14  22  1.5  99  13  14  58  14  25  3  47  17  36  59  11  19  5  15  4  24  37  12  32  8  2  1  35  12  3  24

                表3.口服给予d-苯异丙胺或L-赖氨酸-d-苯异丙胺后

                          d-苯异丙胺的药代动力学参数。

  药物  AUC(0-8小时)  ng/ml h  苯异丙胺  百分数  Cmax  (ng/ml)  苯异丙胺  百分数  平均峰值  (ng/ml)  苯异丙胺  百分数  苯异丙胺  341+/-35  100  111+/-27  100  129  100  Lys-Amp  333+/-66  98  61+/-13  55  64  50

实施例6说明，当赖氨酸偶联于活性物质苯异丙胺时，苯异丙胺峰值水平降低，而维持其生物利用度使其约与苯异丙胺相等。释放自L-赖氨酸-d-苯异丙胺的苯异丙胺的生物利用度与剂量相等的苯异丙胺硫酸盐相似，因此L-赖氨酸-d-苯异丙胺维持了它的治疗价值。从L-赖氨酸-d-苯异丙胺逐渐释放苯异丙胺和峰值水平的降低降低了用药过量的可能性。

实施例7.接近治疗性人剂量范围的各种剂量的L-赖氨酸-d-苯异丙胺的口服生物利用度

图7、8和9中分别显示了口服给予1.5、3和6mg/kg d-苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的大鼠的平均(n＝4)血浆浓度曲线。在给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺的动物中，在所有三个剂量下都观察到延长释放。表4、5和6中分别显示了给予1.5、3和6mg/kg的平均血浆浓度。表7小结了口服给予各种剂量的d-苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学参数。

表4.口服给药(1.5mg/kg)后d-苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的平均血浆浓度

  小时                 血浆苯异丙胺浓度(ng/ml)        d-苯异丙胺     L-赖氨酸-d-苯异丙胺  平均值  +/-SD  CV  平均值  +/-SD  CV  0  0  0  0  0  0  0  0.25  103  22  21  31  11  37  0.5  126  20  16  51  23  45  1  101  27  27  68  23  34  1.5  116  28  24  72  10  14  3  66  13  20  91  5  5  5  40  7  18  75  16  22  8  17  2  15  39  13  34

表5.口服给药(3mg/kg)后d-苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的平均血浆浓度

  小时                 血浆苯异丙胺浓度(ng/ml)         d-苯异丙胺     L-赖氨酸-d-苯异丙胺  平均值  +/-SD  CV  平均值  +/-SD  CV  0  0  0  0.25  96  41  43  51  49  97  0.5  107  49  46  36  35  96  1  121  17  14  81  44  54  1.5  120  33  27  97  32  33  3  91  30  33  88  13  15  5  62  22  36  91  21  23  8  19  6  33  46  16  34

表6.口服给药(6mg/kg)后d-苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的平均血浆浓度。

  小时                   血浆苯异丙胺浓度(ng/ml)          d-苯异丙胺      L-赖氨酸-d-苯异丙胺  平均值  +/-SD  CV  平均值  +/-SD  CV  0  0  0  0.25  204  14  7  74  38  51  0.5  186  9  5  106  39  37  1  167  12  7  133  33  24  1.5  161  24  15  152  22  15  3  111  29  26  157  15  10  5  78  9  11  134  18  13  8  35  5  15  79  12  15

                   表7.口服给予d-苯异丙胺或L-赖氨酸-d-苯异丙胺后

                                d-苯异丙胺的药代动力学参数。

  参数      1.5mg/kg          3mg/kg         6mg/kg  d-苯异  丙胺  L-赖氨酸-d-  苯异丙胺  d-苯异  丙胺  L-赖氨酸-d-  苯异丙胺  d-苯异  丙胺  L-赖氨酸-d-  苯异丙胺  AUC(ng/ml h)  481  538  587  614  807  1005  百分数  100  112  100  105  100  125  Cmax(ng/ml)  133  93  587  614  807  1005  百分数  100  70  100  105  100  125  Tmax(小时)  0.938  3.5  1  1.56  0.563  2.625  百分数  100  373  100  156  100  466

实施例8.与超药理剂量相比，接近治疗性人剂量范围的各种剂量的L-赖氨酸-d-苯异丙胺的口服生物利用度。

随意地给雄性Sprague-Dawley大鼠提供水，禁食过夜，经口强饲法给予1.5、3、6、12和60mg/kg含有等效量d-苯异丙胺的苯异丙胺硫酸盐或L-赖氨酸-d-苯异丙胺。用ELISA测量d-苯异丙胺浓度。

已证明，当赖氨酸偶联于活性物质d-苯异丙胺时，给药后30分钟时，在1.5-12mg/kg的剂量范围内，d-苯异丙胺水平下降约50％。然而，当给予超药理剂量(60mg/kg)时，来自L-赖氨酸-d-苯异丙胺的d-苯异丙胺水平仅达到d-苯异丙胺硫酸盐的8％(表8和9，图10)。在高剂量下口服生物利用度显著降低能够大大降低滥用L-赖氨酸-d-苯异丙胺的可能性。

       表8.给予d-苯异丙胺硫酸盐0.5小时后的d-苯异丙胺水平与剂量。

  剂量mg/kg  1.5  3  6  12  60  ng/ml 0.5小时  109+/-59  196+/-72  294+/-202  344+/-126  3239+/-73  百分数  100  100  100  100  100

表9.给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺0.5小时后的d-苯异丙胺水平与剂量。

  剂量mg/kg  1.5  3  6  12  60  ng/ml 0.5小时  45+/-10  86+/-26  129+/-46  172+/-113  266+/-18  百分数  41  44  44  50  8

实施例9.在高剂量下L-赖氨酸-d-苯异丙胺的口服生物利用度降低

图11中说明的其它口服PK研究显示了在8小时时程中60mg/kg剂量的d-苯异丙胺的血液水平。在d-苯异丙胺的情况下，血液水平迅速达到非常高的水平，12只动物中8只由于急性毒性症状死亡或被处死。另一方面，给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺的动物的血液水平(表10-11)5小时后才达到峰值，而且只达到接受苯异丙胺的动物的水平的一部分(注：由于动物死亡和处死，3小时后就不能测定d-苯异丙胺的有效数据)。

               表10.高剂量(60mg/kg)口服给药后

     d-苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的平均血浆浓度。

  小时                  血浆苯异丙胺浓度(ng/ml)           d-苯异丙胺       L-赖氨酸-d-苯异丙胺  平均值  +/-SD  CV  平均值  +/-SD  CV  0  NA  NA  NA  NA  NA  NA  0.25  2174  907  42  35  17  48  0.5  2643  578  22  81  33  41  1  2828  1319  47  212  30  14  1.5  2973  863  29  200  79  40  3  2944  95  3  440  133  30  5  NA  NA  NA  565  100  18  8  NA  NA  NA  410  206  50

表11.d-苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学参数

  药物  AUC  ng/ml h  百分数  d-苯异丙胺  Cmax  (ng/ml)  百分数  d-苯异丙胺  平均峰值  (ng/ml)百分数d-苯异丙胺  d-苯异丙胺  8,130  100  3623  100  2973100  L-赖氨酸-  d-苯异丙胺  3,143  39  582  16  56519

实施例10.给予延长释放剂型(完整或碾碎)或L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的口服生物利用度

以完整胶囊或碾碎胶囊将一定剂量的d-苯异丙胺硫酸盐延长释放剂型(地塞君缓释胶囊)口服给予大鼠，含有等效量d-苯异丙胺(图14)的L-赖氨酸-d-苯异丙胺剂量作比较。与完整胶囊相比，碾碎胶囊显示出C_max和AUC_inf分别增加了84％和13％(表12-13)。相反，给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺后，d-苯异丙胺的C_max和AUC_inf与完整胶囊相似，这说明延长释放是化合物本身的属性，通过简单操作不能避免。

表12.口服给予延长释放的地塞君缓释胶囊或碾碎的延长释放地塞君缓释胶囊或含有以d-苯异丙胺计为3mg/kg剂量的L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的时程浓度

  小时                      血浆浓度(ng/ml)  完整的缓释胶囊  碾碎的缓释胶囊  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  0  0  0  0  0.25  32  46  3  0.5  33  85  5  1  80  147  34  1.5  61  101  60  3  64  66  76  5  46  39  66  8  34  12  38

表13.口服给予延长释放的塞君缓释胶囊或碾碎的延长释放地塞君缓释胶囊或含有以d-苯异丙胺计为3mg/kg剂量的L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的时程浓度。

  参数  完整的缓释胶囊  碾碎的缓释胶囊  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  AUC_0-8h(ng.h/ml)  399  449  434  百分数  100  113  109  C_max(ng/ml)  80  147  76  百分数  100  184  95  T_max(小时)  1  1  3  百分数  100  100  300

实施例10说明，本发明比传统的d-苯异丙胺控释剂型有优势。

实施例11.L-赖氨酸-d-苯异丙胺与苯异丙胺的鼻内生物利用度降低

将3mg/kg苯异丙胺硫酸盐或含有等效量d-苯异丙胺的L-赖氨酸-d-苯异丙胺盐酸盐鼻内给予雄性Sprague-Dawley大鼠。通过IN给予的L-赖氨酸-d-苯异丙胺没有将大量d-苯异丙胺释放到循环系统中。苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的苯异丙胺平均(n＝4)血浆浓度曲线见图12。表14中小结了IN给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学参数。

表14.通过IN给予的苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学参数。

  药物  AUC(0-1.5小  时)ng/ml h  百分数  d-苯异丙胺  Cmax  (ng/ml)  百分数  d-苯异丙胺  苯异丙胺  727  100  1,377  100  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  4  0.5  7  0.5

实施例11说明当赖氨酸偶联于活性物质d-苯异丙胺时，鼻内途径的生物利用度大大降低，从而降低了通过此途径滥用该药物的可能性。

实施例12.苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的静脉内生物利用度

通过静脉内尾静脉注射将1.5mg/kgd-苯异丙胺或含有等效量苯异丙胺的L-赖氨酸-d-苯异丙胺给予雄性Sprague-Dawley大鼠。在IN给药中发现，该偶联物没有释放大量d-苯异丙胺。苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的平均(n＝4)血浆浓度曲线见图13。表15中小结了IV给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学参数。

表15.通过IV给药的d-苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学参数。

  药物  AUG(0-1.5小时)  ng/ml h  ％苯异丙胺  Cmax(ng/ml)  ％苯异丙胺  苯异丙胺  190  100  169  100  K-苯异丙胺  6  3  5  3

实施例12说明当赖氨酸偶联于活性物质苯异丙胺时，通过静脉内途径给予苯异丙胺的生物利用度大大降低，从而降低了通过此途径滥用该药物的可能性。

LC/MS/MS分析

实施例13.与d-苯异丙胺相比，剂量逐渐提高的L-赖氨酸-d-苯异丙胺的口服生物利用度。

如图15-19所示，口服给予大鼠后，随着剂量从1.5到12mg/kg(d-苯异丙胺基)逐渐提高，完整L-赖氨酸-d-苯异丙胺的吸收分数非线性地升高。1.5mg/kg的吸收分数仅为2.6％，而12mg/kg的吸收分数升高到24.6％。在60mg/kg的高浓度下吸收分数下降到9.3％。T_max的范围是0.25-3小时，在给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺的大鼠中，峰值浓度出现得比给予d-苯异丙胺的大鼠早。L-赖氨酸-d-苯异丙胺的清除比d-苯异丙胺更快，在最低剂量给药8小时后几乎检测不到浓度。

从L-赖氨酸-d-苯异丙胺释放d-苯异丙胺的T_max的范围是1.5至5小时，相比而言，给予d-苯异丙胺硫酸盐后是0.5至1.5小时。剂量越高，达到最大浓度的时间差越大。以1.5至6mg/kg剂量〔接近治疗范围(HED d-苯异丙胺硫酸盐；19.9至39.9mg)的人等效剂量(HED)〕给予d-苯异丙胺硫酸盐后的C_max相比，口服递送L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的C_max降低了大约一半。HED定义为根据动物模型的体表面积等效于60kg人的剂量。大鼠的调节因数是6.2。例如，1.5mg/kg d-苯异丙胺的大鼠剂量的HED等于1.5/6.2×60＝14.52 d-苯异丙胺基；当调整为盐物质时，等于14.52/.7284＝19.9mg d-苯异丙胺硫酸盐。

与d-苯异丙胺硫酸盐相比，在目标治疗范围(12和60mg/kg；HED d-苯异丙胺硫酸盐79.8和399mg)中HED以上的剂量下，C_max分别降低了73％和84％。口服给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的AUC与较低剂量的d-苯异丙胺硫酸盐相似。然而，如观察C_max那样，与较高剂量苯异丙胺硫酸盐相比，来自L-赖氨酸-d-苯异丙胺的d-苯异丙胺AUC显著降低，在最高剂量(60mg/kg；HED 399mg d-苯异丙胺硫酸盐)时AUC_inf降低了76％。

总之，以较高剂量给予大鼠时，来自L-赖氨酸-d-苯异丙胺的d-苯异丙胺的口服生物利用度降低到某种程度。然而，剂量为1.5-60mg/kg(HED d-苯异丙胺硫酸盐；19.9-797.2mg)的L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学特征与剂量几乎呈线性，吸收分数的范围是52％-81％(外推1.5mg/kg剂量)。在1.5-6mg/kg(HED；19.9 to 79.7)的较低剂量情况下，d-苯异丙胺硫酸盐的药代动力学特征也几乎呈线性，吸收分数的范围是62-84。然而，与L-赖氨酸-d-苯异丙胺不同的是，在d-苯异丙胺硫酸盐剂量较高时该参数不成比例地增加，为超药理剂量12和60mg/kg(HED d-苯异丙胺硫酸盐；159.4和797.2mg)计算的吸收分数分别是101％和223％(外推1.5mg/kg剂量)。

结果说明，当以硫酸盐递送时较高剂量的d-苯异丙胺的清除容量变得饱和，而L-赖氨酸-d-苯异丙胺的逐渐水解防止了在较高剂量下d-苯异丙胺消除的饱和。图20-22说明了d-苯异丙胺和L-赖氨酸-d-苯异丙胺的剂量与生物利用度(Cmax和AUC)比例关系的不同。与d-苯异丙胺相比，较高剂量的L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学特性降低了逐渐升高的剂量的能力。作为用于治疗ADHD或其它所述病症的d-苯异丙胺递送方法，这提高了L-赖氨酸-d-苯异丙胺的安全性并降低了它的滥用倾向。

实施例14.与d-苯异丙胺相比，L-赖氨酸-d-苯异丙胺的鼻内生物利用度

如图23-24所示，鼻内推注(bolus intranasal)给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的生物利用度约为等效的d-苯异丙胺硫酸盐剂量的5％，AUC_inf值分别为56和1032。通过鼻内途径给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的C_max也约为等效量的d-苯异丙胺硫酸盐的5％，值分别为78.6ng/mL和1962.9ng/mL。采用静脉内给药时，与d-苯异丙胺硫酸盐的T_max(5分钟)相比，L-赖氨酸-d-苯异丙胺产生的d-苯异丙胺浓度的T_max被明显延迟(60分钟)，再一次反映出L-赖氨酸-d-苯异丙胺的逐渐水解。鼻内给药后检测到高浓度的完整L-赖氨酸-d-苯异丙胺说明，d-苯异丙胺的生物利用度大大降低是由于通过该途径递送的L-赖氨酸-d-苯异丙胺水解最少所致。似乎通过鼻内给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺仅可递送最少量的d-苯异丙胺。

实施例15.与d-苯异丙胺相比，L-赖氨酸-d-苯异丙胺的静脉内生物利用度

如图25-26所示，静脉内推注给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的生物利用度约为等效的d-苯异丙胺硫酸盐剂量的一半，AUC_inf值分别为237.8和420.2。给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的C_max仅约为等效量的d-苯异丙胺的四分之一，值分别为99.5和420.2。与d-苯异丙胺硫酸盐的T_max(5分钟)相比，L-赖氨酸-d-苯异丙胺产生的d-苯异丙胺浓度的T_max被明显延迟(60分钟)，这反映出L-赖氨酸-d-苯异丙胺的逐渐水解。总之，静脉内途径给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺时，d-苯异丙胺的生物利用度大大降低并被延迟。而且，该生物利用度小于通过口服给予等效剂量的L-赖氨酸-d-苯异丙胺获得的生物利用度。

大鼠的LC/MS/MS生物利用度数据小结

下表小结了从实施例13-15中讨论的实验中收集的生物利用度数据。表15-17小结了口服、鼻内或静脉内推注给予d-苯异丙胺或L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的药代动力学参数。

     表15.以逐渐升高的剂量口服给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺后

                     d-苯异丙胺的药代动力学参数。

  途径  药物  剂量  (mg/kg)  Cmax  (ng/mL)  Tmax  (小时)  AUC(0-8)  (ng·mL/h)  AUC(inf)  (ng·mL/h)  F  (％)  AUC/剂量  (ng.h.kg/mL/mg)  Cmax/剂量  ng.kg/mL/mg  口服  L-赖氨酸-  d-苯异丙胺  1.5  59.6  3  308  331  61  220.7  39.7  口服  d-苯异丙胺  1.5  142.2  0.5  446  461  84  307.3  94.8  口服  L-赖氨酸-  d-苯异丙胺  3  126.9  1.5  721  784  72  261.3  42.3  口服  d-苯异丙胺  3  217.2  1.5  885  921  84  307.0  72.4  口服  L-赖氨酸-  d-苯异丙胺  6  310.8  3  1,680  1,797  82  299.5  51.8  口服  d-苯异丙胺  6  815.3  0.25  1,319  1,362  62  227.0  135.9  口服  L-赖氨酸-  d-苯异丙胺  12  412.6  5  2,426  2,701  62  225.1  34.4  口服  d-苯异丙胺  12  1,533.1  0.25  4,252  4,428  101  369.0  127.8  口服  L-赖氨酸-  d-苯异丙胺  60  2,164.3  5  9995.1  11,478  52  191.3  36.1  口服  d-苯异丙胺  60  13,735  1  32,323  48,707  223  811.8  228.9

表16.静脉内推注给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的药代动力学参数。

  途径  药物  剂量  (mg/kg)  Cmax  (ng/mL)  Tmax  (小时)  AUC(0-24)  (ng·mL/h)  AUC(inf)  (ng·mL/h)  IV  L-赖氨酸-  d-苯异丙胺  1.5  99.5  0.5  237.8  237.9  IV  d-苯异丙胺  1.5  420.2  0.083  546.7  546.9

表17.鼻内给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的药代动力学参数。

  途径  药物  剂量  (mg/kg)  Cmax  (ng/mL)  Tmax  (小时)  AUC(0-1)  (ng·mL/h)  AUC(inf)  (ng·mL/h)  IN  L-赖氨酸-d-  苯异丙胺  10.16  78.6  1  56  91  IN  d-苯异丙胺  4.12  1962.9  0.083  1032  7291

表18-20小结了口服、静脉内推注或鼻内给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺后L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学参数。

                   表18.以逐渐升高的剂量口服给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺后

                          L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学参数。

  途径  药物  剂量  (mg/kg)  Cmax  (ng/ml)  Tmax  (ng/ml)  AUC(0-8)  (ng·ml/h)  AUC(inf)  (ng·ml/h)  F  (％)  口服  L-赖氨酸-  d-苯异丙胺  1.5  36.5  0.25  59.4  60  2.6  口服  L-赖氨酸-  d-苯异丙胺  3  135.4  1.5  329.7  332.1  7.2  口服  L-赖氨酸-  d-苯异丙胺  6  676.8  0.25  1156.8  1170.8  12.8  口服  L-赖氨酸-  d-苯异丙胺  12  855.9  1  4238.6  4510.4  24.6  口服  L-赖氨酸-  d-苯异丙胺  60  1870.3  3  8234.3  8499.9  9.3

             表19.静脉内推注给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺后

               L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学参数。

  途径  药物  剂量  (mg/kg)  Cmax  (ng/mL)  Tmax  (小时)  AUC(0-24)  (ng·mL/h)  AUC(inf)  (ng·mL/h)  IV  L-赖氨酸-  d-苯异丙胺  1.5  4513.1  0.083  2,282  2,293

     表20.鼻内给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺后L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学

  途径  药物  剂量  (mg/kg)  Cmax  (ng/mL)  Tmax  (小时)  AUC(0-1)  (ng·mL/h)  AUC(inf)  (ng·mL/h)  IN  L-赖氨酸-  d-苯异丙胺  3  3345.1  0.25  2,580  9,139

表21和22小结了与d-苯异丙胺硫酸盐相比，口服、鼻内或静脉内给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的生物利用度百分数。

  表21.与给予d-苯异丙胺硫酸盐后的生物利用度相比，通过各种途径给予

    L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的生物利用度(AUC_inf)百分数。

  剂量(mg/kg)  以d-苯异丙胺计  1.5  3  6  12  60  HED  19.9  39.9  79.7  159.4  797.2  口服  72  85  132  61  24  IV  43  NA  NA  NA  NA  IN  NA  1  NA  NA  NA

        表22.与给予d-苯异丙胺硫酸盐后的生物利用度相比，通过各种途径给予

          L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的生物利用度(C_max)百分数。

  剂量(mg/kg)  以d-苯异丙胺计  1.5  3  6  12  60  HED  19.9  39.9  79.7  159.4  797.2  口服  42  58  38  27  16  IV  24  NA  NA  NA  NA  IN  NA  4  NA  NA  NA

表23-28小结了口服、鼻内或静脉内给予d-苯异丙胺或L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺和L-赖氨酸-d-苯异丙胺的时程浓度。

表23.以含有以d-苯异丙胺计1.5mg/kg的剂量静脉内推注给予

L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐后d-苯异丙胺的时程浓度。

  时间  (小时)               浓度(ng/ml)  L-赖氨酸-d-苯异丙胺d-苯异丙胺硫酸盐  0  00  0.083  52.8420.2  0.5  99.5249.5  1.5  47.197.9  3  21.038.3  5  9.013.2  8  3.74.3  24  0.10.2

表24.以含有以d-苯异丙胺计1.5mg/kg的剂量静脉内推注给予

L-赖氨酸-d-苯异丙胺后L-赖氨酸-d-苯异丙胺的时程浓度。

  时间  (小时)  浓度(ng/ml)  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  0  0  0.083  4513.1  0.5  1038.7  1.5  131.4  3  19.3  5  17.9  8  8.7  24  11.5

               表25.以各种剂量(以d-苯异丙胺计mg/kg)口服给予

                L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的时程浓度。

  时间  (小时)                                   浓度(ng/ml)  1.5mg/kg  3mg/kg  6mg/kg  12mg/kg  60mg/kg  0  0  0  0  0  0  0.25  20.5  25.3  96  54.3  90.9  0.5  34  40.9  140.2  96  175.1  1  46.7  95.1  225.9  233.3  418.8  1.5  40.7  126.9  268.4  266  440.7  3  59.6  105  310.8  356.8  1145.5  5  38.6  107.6  219.5  412.6  2164.3  8  17.1  48  86  225.1  1227.5

                  表26.以各种剂量(以d-苯异丙胺计mg/kg)口服给予

                    d-苯异丙胺硫酸盐后d-苯异丙胺的时程浓度。

  时间  (小时)                              浓度(ng/ml)  1.5mg/kg  3mg/kg  6mg/kg  12mg/kg  60mg/kg  0  0  0  0  0  0  0.25  107.1  152.6  815.3  1533.1  6243.6  0.5  142.2  198.4  462.7  1216  7931.6  1  105.7  191.3  301.3  828.8  13735.2  1.5  129.5  217.2  314  904.8  11514.9  3  52.6  135.3  134.6  519.9  NA  5  29.5  73.5  77.4  404.3  NA  8  11.5  25.7  31.8  115.4  NA

表27.以含有以d-苯异丙胺计3mg/kg的剂量鼻内给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐后d-苯异丙胺的时程浓度。

  时间  (小时)               浓度(ng/ml)  L-赖氨酸-d-苯异丙胺d-苯异丙胺硫酸盐  0  00  0.083  31.21962.9  0.25  45.31497.3  0.5  61.3996.2  1  78.6404.6  AUC  561032.3

表28.以含有以d-苯异丙胺计3mg/kg的剂量鼻内给予

L-赖氨酸-d-苯异丙胺后L-赖氨酸-d-苯异丙胺的时程浓度。

  时间(小时)  浓度(ng/ml)  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  0  0  0.083  3345.1  0.25  3369.7  0.5  2985.8  1  1359.3

实施例19.在犬中用LC/MS/MS分析生物利用度

实施例实验设计：

这是非随机性、两个治疗交叉的研究。用正常饮食饲养所有动物，在各剂量给药之前禁食过夜。L-赖氨酸-d-苯异丙胺剂量基于在给药各日早晨测量的体重。实际递送的试剂剂量基于给药前后的注射器重量。通过直接静脉穿刺颈静脉用含有肝素钠作为抗凝剂的真空容纳管获得各动物的连续血样。冷冻储存获得的血浆样品，直到运输到Quest Pharmaceut ical Services，Inc.(Newark，DE)。由Calvert对血浆测定结果进行药代动力学分析。如下处理动物：

  犬编号/性别  给药途径  处理  剂量浓度  (mg/mL)  剂量体积  (mL/kg)  剂量水平  (mg/kg)  3M  PO  1  0.2  10  2  3M  IV  2  1  2  2

在剂量浓度和剂量水平中mg单位指测试物质的游离碱形式。

给予测试物质：

口服：通过一次经口强饲法将测试物质给予各动物。第1天，用连接有注射器的食道管通过强饲法使动物接受口服剂量。用约20mL自来水冲洗给药管，以保证递送了所需剂量的溶液。

静脉内：第8天，用一次30分钟的头静脉静脉内输注使动物接受L-赖氨酸-d-苯异丙胺。

样品收集：

剂量制剂：给药后，保留并冻存剩下的剂量制剂。

血液：用含有肝素钠的静脉穿刺管收集连续血样(2mL)。在口服给药0、0.25、0.5、1、2、4、8、12、24、48和72小时后收集血样。在静脉内输注开始0、0.167、0.33、0.49(停止输注前)、0.583、0.667、0.75、1、2、3、4、8、12和23小时后收集血样。立即冷冻收集的血样。

血浆：通过离心血样获得血浆样品。将双份血浆样品(各约0.2mL)转移到预先标记的塑料小管中，在约-70℃下冻存。

样品测定：

用确证的LC-MS/MS方法，分析血浆样品中的L-赖氨酸-d-苯异丙胺和d-苯异丙胺，两种分析物都用1ng/mL的LLOQ。

用Microsoft Excel(版本6，Microsoft Corp.，Redmond，WA)计算平均血浆浓度并根据血浆浓度-时间数据作图。用WinNonlin软件程序(版本4.1，Pharsight，Inc.Mountain View，CA)进行药代动力学分析(非间隔)。最大浓度C_max和至C_max时间T_max是观察值。用线性-对数梯形法则测定血浆浓度-时间曲线下面积(AUC)。用线性最小平方回归法，目测数据以确定合适的数据点数(最少3个数据点)来获得表观末期速率常数(λz)，从而计算λz。AUC(0-inf)计算为AUC(0-t)和Cpred/λz的和，其中Cpred是在最后可计量浓度时间的预计浓度。由剂量/AUC(0-inf)的比值来确定血浆清除率(CL/F)。平均滞留时间(MRT)计算为AUMC(0-inf)/AUC(0-inf)的比值，其中AUMC(0-inf)是从时间零点到无限时间的一阶矩曲线下面积。稳态分布容积(V_ss)估算为CL*MRT。半衰期计算为ln2/λz。口服生物利用度(F)计算为口服给药后AUC(0-inf)与静脉内给药后AUC(0-inf)的比值。用Microsoft Excel计算药代动力学参数描述统计(平均值和标准差)。

此研究的目的是表征将L-赖氨酸-d-苯异丙胺给予雄性比克犬(beagle dog)后L-赖氨酸-d-苯异丙胺和d-苯异丙胺的药代动力学特征。如图27所示，在交叉设计中，将L-赖氨酸-d-苯异丙胺口服给予(2mg/kg)和静脉内给予(2mg/kg，30分钟输注)3只雄性比克犬。静脉内和口服给药24小时和72小时后，分别收集血样。用LC-MS/MS测定分析血浆样品，该测定为两种分析物提供1ng/mL的LLOQ。

静脉内或口服给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺后L-赖氨酸-d-苯异丙胺和d-苯异丙胺的平均血浆浓度-时间曲线分别见图29和30。两种途径给药后L-赖氨酸-d-苯异丙胺与d-苯异丙胺的对比曲线见图27-28。个体曲线见图31-32。表29-37中小结了药代动力学参数。

静脉内输注L-赖氨酸-d-苯异丙胺30分钟后，血浆浓度在输注停止时达到峰值。输注后，L-赖氨酸-d-苯异丙胺浓度以二次指数的方式迅速下降，给药约8小时后下降到可计量限度(1ng/mL)以下。非间隔药代动力学分析的结果说明L-赖氨酸-d-苯异丙胺是清除率高的化合物，分布容积中等(Vss)，接近总体内水分(0.7L/kg)。平均清除率是2087mL/h·kg(34.8mL/min·kg)，与犬的肝脏血流相似(40mL/min·kg)。因此，口服给药后，L-赖氨酸-d-苯异丙胺是被肝脏中度至高度提取的化合物，具有明显的首关效应(包括转化成d-苯异丙胺)。

在所有三只犬中，口服给药后L-赖氨酸-d-苯异丙胺被迅速吸收，T_max为0.5小时。平均绝对口服生物利用度是33％。因为预计L-赖氨酸-d-苯异丙胺有显著的首关效应，33％生物利用度说明犬对L-赖氨酸-d-苯异丙胺的吸收非常良好。静脉内给药后观察到的表观末期半衰期是0.39小时，说明快速清除。

静脉内或口服给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺后d-苯异丙胺的血浆浓度-时间曲线非常相似，两种途径的C_max、T_max和AUC值基本相同。以2mg/kg口服给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺时，d-苯异丙胺的平均C_max是104.3ng/mL。d-苯异丙胺的半衰期是3.1-3.5小时，比L-赖氨酸-d-苯异丙胺长得多。

本研究中，用30分钟输注L-赖氨酸-d-苯异丙胺。由于L-赖氨酸-d-苯异丙胺的快速清除，如果通过静脉内推注给予相似剂量，可能来自L-赖氨酸-d-苯异丙胺的d-苯异丙胺的生物利用度会降低。甚至当通过输注给药时，来自L-赖氨酸-d-苯异丙胺的d-苯异丙胺的生物利用度也不超过口服给予相似剂量的生物利用度，至峰值浓度时间被大大延迟。此数据进一步支持了L-赖氨酸-d-苯异丙胺能使通过静脉内注射滥用d-苯异丙胺的倾向降低。

表29.口服或静脉内给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺(以d-苯异丙胺计1mg/kg)后

         雄性比克犬对L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学参数。

  途径  剂量  (mg/kg)  C_max  (ng/mL)  T_max^a  (小时)  AUC(inf)  (ng·h/mL)  t_1/2  (小时)  MRT  (小时)  CL/F  (mL/h·kg)  V_ss  (mL/kg)  F  (％)  IV  1  1650  0.49  964  0.88  0.33  2087  689  NA  (0.00)  (178)  (0.49-0.49)  (97.1)  (0.2)  (0.03)  (199)  (105.9)  口服  1  328.2  0.5  319  0.39  0.81  6351  NA  33  (0.00)  (91.9)  (0.5-0.5)  (46.3)  (0.1)  (0.19)  (898.3)  (1.9)

^a：中值(范围)

        表30.口服或静脉内给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺(以d-苯异丙胺计1mg/kg)后

                  雄性比克犬对d-苯异丙胺的药代动力学参数。

  途径  剂量  (mg/kg)  C_max  (ng/mL)  T_max^a  (小时)  AUC(inf)  (ng·h/mL)  t_1/2  (小时)  IV  2  113.2  1.0  672.5  3.14  (0.00)  (3.2)  (0.67-2.0)  (85.7)  (0.4)  口服  2  104.3  2.0  728.0  3.48  (0.00)  (21.8)  (2-2)  (204.9)  (0.4)

^a：中值(范围)

      表31.静脉内给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺(以d-苯异丙胺计1mg/kg)后

             雄性比克犬对L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学特征。

       给药途径：30分钟静脉内输注                                                剂量：2mg/kg/h(游离形式)

  犬编号  C_max  (ng/mL)  T_max^a  (小时)  AUC(0-t)  (ng·h/mL)  AUC(inf)  (ng·h/mL)  t_1/2  (小时)  CL  (mL/h/kg)  Vss  (mL/kg)  MRT  (小时)  1  1470.3  0.49  898.2  900.2  0.72  2222  807.4  0.36  2  1826.4  0.49  1072.3  1076.1  ND^b  1859  603.4  0.32  3  1654.2  0.49  914.1  916.9  1.05  2181  656.0  0.30  平均值  1650  0.49  961.5  964.4  0.88  2087  689.0  0.33  SD  178  0.49-0.49  96.0  97.1  0.2  199  105.9  0.03

^a：中值(范围)；^b：未测定

药代动力学参数的简写如下：C_max，观察到的最大血浆浓度；AUC(0-t)，从0至最后一个数据点的血浆浓度与时间曲线的曲线下总面积；AUC(0-inf)，血浆浓度与时间曲线的曲线下总面积；t_1/2，表观末期半衰期；CL，静脉内给药后清除率；MRT，平均滞留时间；Vss，稳态分布容积。

      表32.口服给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺(以d-苯异丙胺计1mg/kg)后

          雄性比克犬对L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学参数。

        给药途径：口服                     剂量：2mg/kg(游离形式)

  犬编号  C_max  (ng/mL)  T_max^a  (小时)  AUC(0-t)  (ng·h/mL)  AUC(inf)  (ng·h/mL)  t_1/2  (小时)  CL/F  (mL/h/kg)  MRT  (小时)  F  (％)  1  350.2  0.5  275.3  277.1  0.24  7218  0.68  30.8  2  407.2  0.5  367.8  368.7  0.48  5424  0.74  34.3  3  227.4  0.5  310.8  312.0  0.45  6410  1.03  34.0  平均值  328.2  0.5  318.0  319.3  0.39  6351  0.81  33.0  SD  91.9  0.0  46.7  46.3  0.1  898.3  0.19  1.9

^a：中值(范围)

药代动力学参数的简写如下：C_max，观察到的最大血浆浓度；T_max，观察到C_max时的时间；AUC(0-t)，从0至最后一个数据点的血浆浓度与时间曲线的曲线下总面积；AUC(0-inf)，血浆浓度与时间曲线的曲线下总面积；t_1/2，表观末期半衰期；CL/F，口服清除率；MRT，平均滞留时间；F，生物利用度。

           表33.静脉内给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺(以d-苯异丙胺计1mg/kg)后

                雄性比克犬对L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学参数。

    给药途径：30分钟静脉内输注      剂量：2mg/kg L-赖氨酸-d-苯异丙胺(游离形式)

  犬编号  C_max  (ng/mL)  T_max^a  (小时)  AUC(0-t)  (ng·h/mL)  AUC(inf)  (ng·h/mL)  t_1/2  (小时)  1  111.2  2.0  751.9  757.6  3.35  2  116.8  0.67  668.5  673.7  3.43  3  111.4  1.0  557.8  586.1  2.65  平均值  113.2  1.00  659.4  672.5  3.14  SD  3.2  0.67-2.0  97  85.7  0.4

^a：中值(范围)

药代动力学参数的简写如下：C_max，观察到的最大血浆浓度；T_max，观察到C_max时的时间；AUC(0-t)，从0至最后一个数据点的血浆浓度与时间曲线的曲线下总面积；AUC(0-inf)，血浆浓度与时间曲线的曲线下总面积；t_1/2，表观末期半衰期；CL/F，口服清除率；MRT，平均滞留时间；F，生物利用度。

         表34.口服给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺(以d-苯异丙胺计1mg/kg)后

              雄性比克犬对L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药代动力学参数。

    给药途径：口服     剂量：2mg/kg L-赖氨酸-d-苯异丙胺(游离形式)

  犬编号  C_max  (ng/mL)  T_max^a  (小时)  AUC(0-t)  (ng·h/mL)  AUC(inf)  (ng·h/mL)  t_1/2  (小时)  1  102.1  2.0  686.34  696.89  3.93  2  127.2  2.0  937.57  946.62  3.44  3  83.7  2.0  494.61  540.38  3.06  平均值  104.3  2.0  706.2  728.0  3.48  SD  21.8  2.0-2.0  222.1  204.9  0.4

^a：中值(范围)

药代动力学参数的简写如下：C_max，观察到的最大血浆浓度；T_max，观察到C_max时的时间；AUC(0-t)，从0至最后一个数据点的血浆浓度与时间曲线的曲线下总面积；AUC(0-inf)，血浆浓度与时间曲线的曲线下总面积；t_1/2，表观末期半衰期；CL/F，口服清除率；MRT，平均滞留时间；F，生物利用度。

                                表35.口服给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计1.8

                                           mg/kg)后雄性比克犬对d-苯异丙胺的药代动力学参数。

  时间  (小时)        平均血浆浓度           标准差(SD)         变动系数(CV)  d-苯异丙胺  L-赖氨酸-d-苯异丙胺d-苯异丙胺  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  d-苯异丙胺  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  0  0  00  0  0  0  1  431.4  223.7140.7  95.9  32.6  42.9  2  360  291.887.6  93.6  24.3  32.1  4  277.7  247.568.1  66  24.5  26.7  6  224.1  214.759.3  62.1  26.5  28.9  8  175.4  15066.7  40.1  38.0  26.7  12  81.4  47.658.7  19  72.1  39.9  16  33  19.628.1  9  85.2  45.9  24  7.2  4.54.5  1.7  62.5  37.8

                表36.口服给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计1.8

                     mg/kg)后雌性比克犬对d-苯异丙胺的药代动力学特征。

  时间  (小时)       平均血浆浓度         标准差(SD)        变动系数(CV)  d-苯异丙胺  L-赖氨酸-d-  苯异丙胺  d-苯异丙胺  L-赖氨酸-d-  苯异丙胺  d-苯异丙胺  L-赖氨酸-d-  苯异丙胺  0  0  0  0  0  0  0  1  217.8  308.8  141.7  40.7  65.1  13.2  2  273.5  308  113.7  29.6  41.6  9.6  4  266  260.9  132.7  37.3  49.9  14.3  6  204.7  212.1  84.5  38.7  41.3  18.2  8  160.1  164.3  72.7  43.5  45.4  26.5  12  79.4  68.7  41.3  31  52.0  45.1  16  25.5  22.3  13.4  4.7  52.5  21.1  24  5.6  5.4  4.1  1.9  73.2  35.2

表37.口服给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐(以d-苯异丙胺计1.8

          mg/kg)后雄性和雌性比克犬对d-苯异丙胺的药代动力学参数。

  参数             雄性              雌性            化合物              化合物  d-苯异丙胺  L-赖氨酸-d-苯异丙胺d-苯异丙胺  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  AUCinf  3088.9  2382.22664.5  2569.9  百分数  100  77100  96  Cmax  431.4  291.8308.8  273.5  百分数  100  67100  89  Tmax(小时)  1  21  2  百分数  100  200100  200

实施例20.静脉内输注后与d-苯异丙胺相比L-赖氨酸-d-苯异丙胺的心血管作用延迟

即使在治疗剂量下，d-苯异丙胺会提高心脏收缩压和舒张压(BP)。因为预计在全身代谢的作用下L-赖氨酸-d-苯异丙胺会释放d-苯异丙胺(虽然很慢)，通过将等摩尔剂量的d-苯异丙胺或L-赖氨酸-d-苯异丙胺给予4只犬(2雄2雌)来进行初步研究。结果说明，酰胺前药是无活性的，在第一次给药20分钟后开始缓慢释放一些d-苯异丙胺。然而，d-苯异丙胺的作用差强人意。例如，平均血压见图35。与以前发表的数据(Kohli和Goldberg，1982)一致的是，观察到小剂量d-苯异丙胺能够快速影响血压。最低剂量(0.202mg/kg，与0.5mg/kg L-赖氨酸-d-苯异丙胺摩尔量相等)导致平均BP迅速加倍，然后经30分钟缓慢恢复。

相反，L-赖氨酸-d-苯异丙胺几乎不改变平均BP，直到注射后约30分钟。此时，血压增加约20-50％。连续释放的d-苯异丙胺可能使血压在实验剩余阶段中缓慢和稳定地增加。继续注射后，发现d-苯异丙胺以非剂量依赖的方式重复其作用。即，把剂量从第一次注射提高10倍产生的最大血压相同。这可反映d-苯异丙胺推注连续刺激后神经终端中儿茶酚胺水平状态。需要注意，连续给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺(图35)后产生的平均血压升高是较逐步和不怎么强烈的作用。观察到对左心室压的作用相似(图36)。这些结果进一步证实通过静脉内途径给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺时d-苯异丙胺生物利用度明显降低。结果是，消除了药物注射者所寻求的迅速开始的d-苯异丙胺的药理作用。

                  表38.L-赖氨酸-d-苯异丙胺对麻醉犬的心血管参数的作用—平均值(n＝2)

  治疗  时间  SAP  ％变化  DAP  ％变化  MAP  ％变化  LVP  ％变化  0.9％生理盐水  0  81  0  48  0  61  0  87  0  1ml/kg  30  87  7  54  11  67  10  87  0  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  0  84  0  51  0  64  0  86  0  0.5mg/kg  5  87  4  52  3  66  3  87  2  15  93  11  51  1  67  5  95  11  25  104  25  55  8  73  15  105  22  30  107  28  58  14  77  21  108  26  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  0  105  0  55  0  74  0  108  0  1.0mg/kg  5  121  15  63  15  85  15  120  11  15  142  35  73  33  100  35  140  29  25  163  55  97  75  124  68  162  50  30  134  28  73  32  98  32  144  33  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  0  132  0  71  0  95  0  144  0  5.0mg/kg  5  142  7  71  0  99  4  151  5  15  176  33  98  39  130  37  184  28  25  126  -5  69  -3  96  1  160  11  30  132  0  70  -1  99  4  163  13

SAP-动脉收缩压(mmHg)MAP-平均动脉压(mmHg)

DAP-动脉舒张压(mmHg)LVP-左心室压(mmHg)

％变化-与时间0时相比的变化百分数。

                           表39.d-苯异丙胺对麻醉犬的心血管参数的作用-平均值(n＝2)

  治疗  时间  SAP  ％变化  DAP  ％变化  MAP  ％变化  LVP  ％变化  0.9％生理盐水  0  110  0  67  0  84  0  105  0  1ml/kg  30  108  -2  65  -3  82  -2  101  -3  d-苯异丙胺  0  111  0  67  0  84  0  104  0  0.202mg/kg  5  218  97  145  117  176  109  214  107  15  168  52  97  45  125  49  157  52  25  148  34  87  30  110  31  142  37  30  140  26  80  20  103  23  135  30  d-苯异丙胺  0  139  0  78  0  101  0  133  0  0.404mg/kg  5  240  73  147  88  187  85  238  79  15  193  39  112  44  145  43  191  43  25  166  19  92  17  122  20  168  26  30  160  16  87  11  117  16  163  22  d-苯异丙胺  0  158  0  87  0  115  0  162  0  2.02mg/kg  5  228  44  128  48  169  47  227  40  15  196  24  107  23  142  23  200  24  25  189  20  102  17  135  17  192  19  30  183  16  98  13  129  12  187  16

SAP-动脉收缩压(mmHg)MAP-平均动脉压(mmHg)

DAP-动脉舒张压(mmHg)LVP-左心室压(mmHg)

％变化-与时间0时相比的变化百分数。

实施例21.口服给予苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药效学(动态)反应

随意地给雄性Sprague-Dawley大鼠提供水，禁食过夜，经口强饲法给予6mg/kg的苯异丙胺或含有等效量d-苯异丙胺的L-赖氨酸-d-苯异丙胺。在生命周期中用光电管活性室(San Diego Instruments)记录水平活动行为(HLA)。在测试期间每12分钟记录一次总计数。在三个单独实验中分别监测大鼠5、8和12小时。d-苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的时间与HLA计数见图37-38。在各实验中，与d-苯异丙胺相比，L-赖氨酸-d-苯异丙胺的至峰值行为时间延迟且在延长时间中具有明显药效。在所有三次实验中，给予Lys-Amp的大鼠中HLA总行为计数比d-苯异丙胺诱导的计数有所提高(11-41％)(表40和41)。

             表40.口服给予d-苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的大鼠的活动行为(5小时)

  测试材料  总行为  计数  基线以上的  总行为计数  峰值行为  (每0.2小  时计数)  峰值时间  (每0.2小  时计数)  最后一次计数  (每0.2小时)在  100以上的时间  载体  4689  4174  80  1.4  -  L-赖氨酸-d-  苯异丙胺  6417  5902  318  1.8  5小时  d-苯异丙胺  515  0  291  0.6  2.6小时

          表41.口服给予苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的大鼠的活动行为(12小时)

  测试材料  总行为  计数  基线以上的  总行为计数  峰值行为(每  0.2小时计数) 峰值时间(每 0.2小时计 数)  最后一次计数  (每0.2小时)在  100以上的时间  载体  936  0  81 7.2  -  L-赖氨酸-d-  苯异丙胺  8423  7487  256 1.8  8.6h  d-苯异丙胺  6622  5686  223 0.6  6.4h

实施例22.通过鼻内给予的苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药效学反应

将1.0mg/kg的苯异丙胺或含有等效量d-苯异丙胺的L-赖氨酸-d-苯异丙胺鼻内给予雄性Sprague-Dawley大鼠。在第二组给药剂量类似的动物中，将羧甲基纤维素(CMC)加入药物溶液中，浓度为62.6mg/ml(比L-赖氨酸-d-苯异丙胺浓度高约2倍和比d-苯异丙胺含量高约5倍)。使CMC药物混合物彻底悬浮，然后递送各剂量。用标题为实施例7的部分中所述的方法监测活动行为。图39-40所示显示了苯异丙胺/CMC与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的活性与时间(1小时或2小时)的关系，并将其与苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺CMC的活性与时间关系进行了比较。如图39所示，将CMC加入L-赖氨酸-d-苯异丙胺会将IN给药的大鼠的活性反应降低到类似于水/CMC对照的水平，而没有观察到加入CMC对苯异丙胺活性有任何影响。当与给予d-苯异丙胺的动物相比时，高出L-赖氨酸-D-苯异丙胺与CMC的基线的活性仅增加了9％，而无CMC的Lys-Amp为34％(表42)。没有观察到CMC对IN给药诱导的d-苯异丙胺活性有任何影响。

    表42.与和不与CMC一起鼻内给予d-苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的活动行为

  药物  n  总行为计数  (1小时)  基线以上的  总行为计数d-苯异丙胺百分数  d-苯异丙胺  3  858  686100  d-苯异丙胺CMC  3  829  657100  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  4  408  23735  L-赖氨酸-d-苯异丙胺CMC  4  232  609  水  1  172  00  水CMC  1  172  00

实施例23.静脉内(IV)给予苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药效学反应

将1.0mg/kg的d-苯异丙胺或含有等效量苯异丙胺的L-赖氨酸-d-苯异丙胺静脉内给予雄性Sprague-Dawley大鼠。图41显示了d-苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺的行为与时间(3小时)的关系。L-赖氨酸-d-苯异丙胺诱导的行为大大降低，至峰值行为时间延迟。在3小时中以总行为计数表示的行为见图41。当与给予d-苯异丙胺的动物相比时，高出L-赖氨酸-d-苯异丙胺的基线的行为提高了34％(表43)。

  表43.静脉内(IV)给予d-苯异丙胺与L-赖氨酸-d-苯异丙胺后总行为计数。

  药物  n  总行为计数  3小时  基线以上  d-苯异丙胺百分数  d-苯异丙胺  3  1659  1355  100  L-赖氨酸-d-  苯异丙胺  4  767  463  34  水  1  304  0  0

实施例24.口服给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺的毒性降低

以0.1、1.0、10、60、100或1000mg/kg将L-赖氨酸-d-苯异丙胺一次口服给予每组三只雄性和三只雌性Sprague Dawley大鼠(表44)。在第1-7天观察各动物的毒性症状和死亡(在第1天给药)，死亡(计划或非计划)后按一只大鼠/性别/组验尸。

           表44.口服给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺毒性测试的剂量表。

  组    动物数         测试物质  剂量(mg/kg)  浓度(mg/mL)  雄性  雌性  1  3  3  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  0.1  0.01  2  3  3  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  1.0  0.1  3  3  3  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  10  1.0  4  3  3  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  60  6.0  5  3  3  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  100  10  6  3  3  L-赖氨酸-d-苯异丙胺  1000  100

该研究的关键观察结果包括：

●在整个研究进行过程中，第1-3组的所有动物中未出现症状。

●第4-6组的所有动物在给药后2小时出现活动行为提高，并持续到第2天。

●发现给药剂量为1000mg/kg的一只雌性大鼠在第二天死亡。验尸揭示出染色性泪溢(chromodacryorrhea)，染色性鼻漏(chromorhinorrhea)，胃扩张(气体)，肾上腺扩大以及肠水肿和扩张。

●在第3天，共4只大鼠发生各种严重程度的皮肤损伤。

●由于颈部腹侧的开放性皮肤损伤，在第3天对给药剂量为1000mg/kg的一只雄性大鼠施安乐死。

●其余所有动物在第4天至第7天表现正常。

在给药1、2和4小时后，给药后每天一次共7天观察动物的毒性症状，记录笼侧的观察结果。发现死亡的动物或处死的垂死动物被验尸，然后丢弃。计划或非计划死亡后按共一个动物/性别/组验尸。

表5中小结了笼侧的观察结果和总验尸结果。数据不足以建立致死剂量，然而，该研究说明L-赖氨酸-d-苯异丙胺的致死口服剂量是大于1000mg/kg，因为在一组六只动物仅有一只死亡。虽然在第3天对该剂量组的第二只动物实施安乐死，但是这样做只是处于人道原因的考虑，感觉到该动物已完全恢复。观察说明在第4-6组中药物诱导的应激反应的特征是苯异丙胺毒性(NTP，1990；NIOSH REGISTRY NUMBER：S11750000；Goodman等，1985)。在第4-7天所有动物都没有出现异常病症，这说明各治疗水平的动物都已完全恢复。

据信缺少数据支持建立的致死剂量是由于将苯异丙胺与赖氨酸偶联的推定的保护作用的缘故。完整的L-赖氨酸-d-苯异丙胺是无活性的，但经代谢变成非偶联形式(d-苯异丙胺)后具有活性。因此，在高剂量下，L-赖氨酸-d-苯异丙胺代谢成非偶联形式的饱和可解释缺少观察到的毒性的原因，预计在高于100mg/kg的剂量下可观察到这种毒性，这与d-苯异丙胺硫酸盐一致(NTP，1990)。d-苯异丙胺的形成速率和苯异丙胺的形成程度都可使毒性降低。或者，在这种高浓度下，也可使L-赖氨酸-d-苯异丙胺的口服吸收饱和，这提示，低毒性可能是由于L-赖氨酸-d-苯异丙胺的生物利用度有限。

实施例25.体外评价L-赖氨酸-d-苯异丙胺的药效学活性。

预计如氨基酸偶联物中所讨论的苯异丙胺的酰化可明显降低母体药物的兴奋活性。例如，Marvola(1976)指出，苯异丙胺的N-乙酰化完全消除了它在小鼠中引起活动行为提高的作用。为证实该偶联物不直接起兴奋剂的作用，我们用标准放射性配体结合测定测试了(Novascreen，Hanover，MD)Lys-Amp与人重组多巴胺和去甲肾上腺素转运结合位点的特异性结合(10-9-10-5M)。结果(参见表45)说明，Lys-Amp不与这些位点结合。根据这些结果，似乎该偶联物不大可能维持兴奋活性。(Marvola，M.(1976).“一些拟交感胺的乙酰化衍生物在小鼠中对急性毒性、活动行为和巴比妥酸盐麻醉时间的影响”(Effect of acetylated derivatives of somesympathomimetic amines on the acute toxicity，locomotor activity andbarbiturate anesthesia time in mice)Acta Pharmacol Toxicol(Copenh)38(5)：474-89)。

      表45.用L-赖氨酸-d-苯异丙胺进行放射性配体结合实验的结果

  测定  放射性配体  参比化合物 参比化合物的Ki(M) 活性*  NE转运蛋白 [3H]-尼索西汀  地昔帕明 4.1×10^-9 无  DA转运蛋白 [3H]-WIN35428  GBR-12909 7.7×10^-9 无

*无活性定义为放射性配体结合抑制率在-20％和20％之间所产生的活性(Novascreen)。

实施例26.体外评价释放苯异丙胺的“厨房测试”(Kitchen Test)。

预计违禁化学家尝试用各种容易获得的从偶联物上释放游离苯异丙胺的物理和化学方法来处理化合物。耐滥用的制剂具有当暴露于水、酸(醋)、碱(发酵粉和焙苏打)和加热时不会释放d-苯异丙胺的额外特征。在用L-赖氨酸-d-苯异丙胺和GGG-Amp进行的几项测试中，处理后没有检测到苯异丙胺：

  醋  自来水  发酵粉  焙苏打  L-赖氨酸-d-苯  异丙胺  0％  0％  0％  0％  Gly₃-Amp  0％  0％  0％  0％

在各测试中，将样品加热到沸腾20-60分钟。

实施例27.经口服、鼻内和静脉内途径给予的各种氨基酸-苯异丙胺化合物的生物利用度。

口服给药：随意地给雄性Sprague-Dawley大鼠提供水，禁食过夜，经口强饲法给予含有等效量苯异丙胺的苯异丙胺或氨基酸-苯异丙胺偶联物。

鼻内给药：将1.8mg/kg的苯异丙胺或含有等效量苯异丙胺的赖氨酸-苯异丙胺鼻内给予雄性Sprague-Dawley大鼠。

各种氨基酸-苯异丙胺化合物的相对体内性能如图42-50所示，小结见表46。来自Ser-Amp的苯异丙胺的鼻内生物利用度相对于游离苯异丙胺下降到某种程度。然而，通过口服途径给予的此化合物不与苯异丙胺生物等效。然而，通过口服途径给予的苯丙氨酸与苯异丙胺生物等效，通过胃肠道外途径给药时，观察到生物利用度下降很少或没有下降。通过口服途径给予的Gly₃-Amp的生物利用度几乎相等(90％)，并伴有Cmax下降(74％)。此外，与通过鼻内和静脉内途径给予苯异丙胺相比，Gly₃-Amp的生物利用度下降。

                      表46.通过口服、鼻内或静脉内途径给予的

                      氨基酸苯异丙胺化合物的生物利用度百分数

  药物        口服          鼻内         静脉内 AUC百分数  Cmax百分数 AUC百分数  Cmax百分数 AUC百分数  Cmax百分数  苯异丙胺 100  100 100  100 100  100  E-Amp 73  95 NA  NA NA  NA  EE-Amp 26  74 NA  NA NA  NA  L-Amp 65  81 NA  NA NA  NA  S-Amp 79/55  62/75 76  65 NA  NA  GG-Amp 79  88 88  85 NA  NA  GGG-Amp 111/68  74/73 32  38 45  46  F-Amp 95  91 97  95 87  89  EEF-Amp 42  73 39  29 NA  NA  FF-Amp 27  64 NA  NA NA  NA  古洛糖酸-Amp 1  1 0.4  0.5 3  5  K-Amp 98  55 0.5  0.5 3  3  KG-Amp 69  71 13  12 NA  NA  dK IK-Amp 16  7 2  2 NA  NA  LE-Amp 40  28 6  6 NA  NA  H-Amp 16  21 22  42 NA  NA

C.耐滥用的苯异丙胺偶联物的体内测试方法

实施例28.d-苯异丙胺偶联物的口服C_max降低。

随意地给雄性Sprague-Dawley大鼠提供水，禁食过夜，经口强饲法给予苯异丙胺偶联物或d-苯异丙胺硫酸盐。所有剂量含有等效量的d-苯异丙胺基(d-amphetamine base)。用ELISA(苯异丙胺Ultra，109319，Neogen，Corporation，Lexington，KY)测量血浆d-苯异丙胺浓度。该测定是d-苯异丙胺特异性的，主要d-苯异丙胺代谢物(对羟基-d-苯异丙胺)仅具有最少反应性(0.6％)。如实施例所示，用LC/MS/MS测量血浆d-苯异丙胺和L-赖氨酸-d-苯异丙胺浓度。

实施例29.d-苯异丙胺偶联物的鼻内生物利用度(AUC和C_max)降低。

随意地给雄性Sprague-Dawley大鼠提供水，通过将0.02ml含有苯异丙胺偶联物或d-苯异丙胺硫酸盐的水放入鼻孔(nasal flare)给予药物剂量。所有剂量含有等效量的d-苯异丙胺基。用ELISA(苯异丙胺Ultra，109319，Neogen，Corporation，Lexington，KY)测量血浆d-苯异丙胺浓度。该测定是d-苯异丙胺特异性的，主要d-苯异丙胺代谢物(对羟基-d-苯异丙胺)仅具有最少反应性(0.6％)。如实施例所示，用LC/MS/MS测量血浆d-苯异丙胺和L-赖氨酸-d-苯异丙胺浓度。

实施例30.d-苯异丙胺偶联物的静脉内生物利用度(AUC和C_max)下降。

随意地给雄性Sprague-Dawley大鼠提供水，通过尾静脉注射0.1ml含有苯异丙胺偶联物或d-苯异丙胺硫酸盐的水给予药物剂量。所有剂量含有等效量的d-苯异丙胺基。用ELISA(苯异丙胺Ultra，109319，Neogen，Corporation，Lexington，KY)测量血浆d-苯异丙胺浓度。该测定是d-苯异丙胺特异性的，主要d-苯异丙胺代谢物(对羟基-d-苯异丙胺)仅具有最少反应性(0.6％)。如实施例所示，用LC/MS/MS测量血浆d-苯异丙胺和L-赖氨酸-d-苯异丙胺浓度。

实施例31.将苯异丙胺与各种化学部分连接

上述实施例证明了与化学部分如氨基酸偶联的苯异丙胺的用途，它可用于在维持治疗价值的情况下降低用药过量的可能性。通过苯异丙胺与赖氨酸(K)的连接证明了苯异丙胺与化学部分结合的有效性，然而，上述实施例仅旨在说明。可通过整个实施例中所述的类似方法来完成苯异丙胺与任何类型的化学部分(即肽、糖肽、碳水化合物、核苷或维生素)的连接。例如，可用类似于实施例2所述的方法将以下部分与苯异丙胺连接。

苯异丙胺合成实施例

合成Gly₂-Amp

用类似方法合成Gly₂-Amp，除了氨基酸起始材料是Boc-Gly-Gly-Osu。

合成Glu₂-Phe-Amp

用类似方法合成Glu₂-Phe-Amp，除了氨基酸起始材料是Boc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Osu，起始药物偶联物是Phe-Amp(参见Phe-Amp合成)。

合成His-Amp

用类似方法合成His-Amp，除了氨基酸起始材料是Boc-His(Trt)-Osu。

合成Lys-Gly-Amp

用类似方法合成Lys-Gly-Amp，除了氨基酸起始材料是Boc-Lys(Boc)-OSu，起始药物偶联物是Gly-Amp(参见Gly-Amp合成)。

合成Lys-Glu-Amp

用类似方法合成Lys-Glu-Amp，除了氨基酸起始材料是Boc-Lys(Boc)-OSu，起始药物偶联物是Glu-Amp。

合成Glu-Amp

用类似方法合成Glu-Amp，除了氨基酸起始材料是Boc-Glu(OtBu)-Osu。

合成(d)-Lys-(1)-Lys-Amp

用类似方法合成(d)-Lys-(1)-Lys-Amp，除了氨基酸起始材料是Boc-(d)-Lys(Boc)-(1)-Lys(Boc)-Osu。

合成古洛糖酸-Amp

用类似方法合成Gul-Amp，除了碳水化合物起始材料是古洛糖酸-Osu。

实施例32.口服给药后在脑组织中缺少检测到的L-赖氨酸-d-苯异丙胺

随意地给雄性Sprague-Dawley大鼠提供水，禁食过夜，经口强饲法给予L-赖氨酸-d-苯异丙胺或d-苯异丙胺硫酸盐。所有剂量含有等效量的d-苯异丙胺基。如图51A-B所示，给予d-苯异丙胺硫酸盐或L-赖氨酸-d-苯异丙胺后在血清中和脑组织中检测到的d-苯异丙胺水平相似。然而，在血清中存在可检测量的偶联物L-赖氨酸-d-苯异丙胺，但在脑组织中检测不到，这说明该偶联物不能穿过血脑屏障进入中枢神经系统作用位点。

结合于运载体的麻醉药

实施例33-83氢可酮

通过使用氢可酮证明麻醉性镇痛药的耐滥用性的实用性。

实施例33-83说明了许多肽-活性物质组合物在保持其治疗价值的情况下降低用药过量可能性方面的实用性，其中将肽偶联于活性物质氢可酮(HC)。在氢可酮6位上取代的示范性化合物称为EEFFI-HC、EEFFF-HC、YYI-HC、DDI-HC和YYFFI-HC。

在雄性Sprague-Dawley大鼠中进行氢可酮和氢可酮偶联物的口服、鼻内和静脉内生物利用度研究。给予含有等效量氢可酮的氢可酮酒石酸氢盐和氢可酮偶联物剂量的去离子水溶液。用强饲法针头进行0.5毫升口服给药(除了YYI-HC，它作为明胶胶囊中的固体递送)。鼻内剂量通过将20微升放入用异氟烷麻醉的大鼠鼻孔给予。通过尾静脉注射0.1ml进行静脉内给药。在异氟烷麻醉下通过眼窝后穿刺收集血浆。用LC/MS/MS测定氢可酮和二氢吗啡酮(主要活性代谢物)浓度。

以下实施例仅为说明性，连接于氢可酮的以下氨基酸序列不旨在限制。同样，例如，可根据以下示范性方法完成氢可酮的合成和连接。

氢可酮合成实施例 碳水化合物

实施例33.半乳糖-氢可酮

图52说明了半乳糖-氢可酮的制备。

  试剂  MW  重量  mmoles  摩尔当量  1.氢可酮  299  0.223g  0.75  1.0  1.LiN(TMS)₂的THF溶液  1M  1.13ml  1.13  1.5  1.DMF  -  5ml  -  -  2.半乳糖氯甲酸酯  -  -  1.49  2.0  2.DMF  -  3ml  -  -  3.1M HCl  1M  30ml  -  -  3.丙酮  -  20ml  -  -

半乳糖-氢可酮

通过注射器将LiN(TMS)₂的THF溶液加入氢可酮的DMF溶液。在室温下搅拌该溶液5分钟，然后通过注射器加入半乳糖氯甲酸酯的DMF溶液。将得到的溶液在室温下搅拌2小时。进行TLC(CHCl₃∶MeOH 9∶1；UV和5％H₂SO₄的MeOH溶液；R_f(产物)≈0.5)。用6M HCl将反应中和到pH 7。去除溶剂。用制备型TLC(0-10％MeOH的CHCl₃溶液)纯化最终产物。收集固体，为白色粉末(0.180g，产率41％)：¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.28(2s，6H)，1.37(s，3H)，1.44(3，3H)，1.49(m，2H)，1.88(dt，1H)，2.08(m，2H)，2.29(s，4H)，2.40(m，2H)，2.90(d，1H)，3.09(s，1H)，3.73(s，3H)，3.99(dd，1H)，4.14(t，1H)，4.26(dt，2H)，4.39(d，1H)，4.63(d，1H)，4.95(s，1H)，5.48(d，1H)，5.68(d，1H)，6.65(d，1H)，6.74(d，1H)；MS计算质量＝585.6测定值＝586.4(M+H)。

将30ml 1M HCl和20ml丙酮加入保护的半乳糖中间体。将得到的溶液在室温下搅拌3小时。去除溶剂并在真空下使最终产物干燥。收集固体，为白色固体：MS计算质量＝505.5测定值＝506.4(M+H)。

图53描述了以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮碳水化合物偶联物的口服生物利用度(用ELISA测量的血浆水平)。

实施例34.核糖-氢可酮

图54说明核糖-氢可酮的制备。

  试剂  MW  重量  mmoles  摩尔当量  1.氢可酮  299  0.733g  2.45  1.0  1.LiN(TMS)₂的THF溶液  1M  3.68ml  3.68  1.5  1.DMF  -  8ml  -  -  2.核糖氯甲酸酯  -  -  4.90  2.0  2.DMF  -  3ml  -  -  3.1M HCl  1M  10ml  -  -

核糖-氢可酮

通过注射器将LiN(TMS)₂的THF溶液加入氢可酮的DMF溶液。在室温下搅拌该溶液5分钟，然后通过注射器加入核糖氯甲酸酯的DMF溶液。在室温下搅拌得到的溶液2小时。进行TLC(CHCl₃∶MeOH 9∶1；UV和5％H₂SO₄的MeOH溶液；R_f(产物)≈0.5)。用1M HCl将反应中和到pH 7。去除溶剂。从CHCl₃(50ml)获取粗产物，用水洗涤(3×50ml)，用MgSO₄干燥，过滤并去除溶剂。用制备型HPLC纯化最终产物(10mMCH₃COONH₄/MeCN；0-20分钟：80/20→0/100)。收集固体，为清澈、无色玻璃(0.095g，产率7％)：¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.26(s，3H)，1.39(s，3H)，1.50(m，2H)，1.89(s，4H)，2.08(m，2H)，2.29(s，4H)，2.40(m，2H)，2.88(d，1H)，3.08(m，1H)，3.25(s，3H)，3.73(s，3H)，4.12(m，2H)，4.28(t，1H)，4.58(d，1H)，4.72(d，1H)，4.97(s，1H)，4.98(s，1H)，5.70(s，1H)，6.66(d，1H)，6.75(d，1H)。MS计算质量＝529.2测定值＝530.4(M+H)。

将10ml 1M HCl加入保护的核糖中间体。在室温下搅拌得到的溶液2小时。去除溶剂，在真空下干燥最终产物。收集固体，为蜡状、淡黄色固体(0.092g，定量)：¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.51(t，1H)，1.83(d，1H)，2.41(dt，1H)，2.27(t，1H)，2.63(dd，1H)，2.80(s，3H)，2.96(m，2H)，3.20(m，1H)，3.75(s，3H)，3.82-4.34(br m，12H)，5.15(s，1H)，5.72(s，1H)，6.75(d，1H)，6.88(d，1H)，11.37(br s，1H)。

图55说明了以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮碳水化合物偶联物的鼻内生物利用度(用ELISA测量的血浆水平)。

单氨基酸

实施例35.Leu-氢可酮

图56说明了Leu-氢可酮的制备。

  试剂  MW  重量  mmoles  摩尔当量  1.氢可酮  299  1.00g  3.34  1.0  1.LiN(TMS)₂的THF溶液  1M  10.5ml  10.5  3.15  1.THF  -  25ml  -  -  2.Boc-Leu-OSu  328  3.28g  10.0  3.0

Leu-氢可酮

通过注射器将LiN(TMS)₂的THF溶液加入氢可酮的THF溶液。在室温下搅拌该溶液5分钟，然后加入Boc-Leu-OSu。在室温下搅拌得到的反应混合物18小时。用6MHCl将反应中和到pH 7。去除溶剂。从CHCl₃(100ml)中获取粗产物，用NaHCO₃饱和溶液洗涤(3×100ml)，用MgSO₄干燥，过滤并去除溶剂。收集固体，为黄色粉末(1.98g，产率95％)：¹H NMR(DMSO-d₆)δ0.86(dd，6H)，1.31(s，9H)，1.46(s，2H)，1.55(m，2H)，1.69(m，1H)，1.87(dt，1H)，2.07(dt，2H)，2.29(s，3H)，2.43(m，2H)，2.93(d，1H)，3.11(s，1H)，3.72(s，3H)，3.88(dt，1H)，4.03(dt，1H)，4.87(s，1H)，5.51(d，1H)，6.65(d，1H)，6.73(d，1H)，6.90(s，1H)。

将25ml 4N HCl的二噁烷溶液加入Boc-Leu-氢可酮。在室温下搅拌得到的混合物18小时。去除溶剂，在真空下干燥最终产物。收集固体，为淡黄色固体(1.96g，产率97％)：¹H NMR(DMSO-d₆)δ0.94(d，6H)，1.52(m，1H)，1.75-1.90(m，4H)，2.22(dt，1H)，2.34(dt，1H)，2.64(q，1H)，2.75(s，3H)，2.95-3.23(m，4H)，3.74(s，3H)，3.91(d，1H)，4.07(s，1H)，5.10(s，1H)，5.72(d，1H)，6.76(d，1H)，6.86(d，1H)，8.73br s，3H)。

实施例36.Glu-氢可酮

合成Glu-氢可酮

用类似于实施例35的方法制备Glu-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Glu(OtBu)-Osu。

实施例37.Ile-氢可酮

合成Ile-氢可酮

用类似于实施例35的方法制备Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Ile-Osu。

二肽

图57说明了Ala-Pro-氢可酮的制备。

实施例38.Ala-Pro-氢可酮

  试剂  MW  重量  mmoles  摩尔当量  Pro-氢可酮  468  0.25g  0.53  1.0  Boc-Ala-OSu  286  0.33g  1.2  2.26  NMM  101  0.50ml  5.38  10.2  DMF  -  10ml  -  -

Ala-Pro-氢可酮

将NMM加入Pro-氢可酮的DMF溶液，然后加入Boc-Ala-OSu。在室温下搅拌该溶液18hours。去除溶剂。用制备级HPLC(Phenomenex Luna C18，30×250mm，5μM，100；梯度：100水/00.1％TFA-MeCN→0/100；30毫升/分钟)纯化粗产物。收集固体，为淡黄色粉末(0.307g，产率85％)：¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.16(d，3H)，1.35(s，9H)，1.51(m，2H)，1.86-2.10(m，6H)，2.50(m，1H)，2.54(m，1H)，2.69(m，1H)，2.88(s，3H)，3.02(dd，1H)，3.26(d，1H)，3.55(m，1H)，3.67(m，1H)，3.72(s，3H)，3.80(s，1H)，4.25(m，1H)，4.43(d，1H)，5.01(s，1H)，5.59(d，1H)，6.75(d，1H)，6.88(d，1H)，6.99(t，1H)，9.91(br s，1H)。

将10ml 4N HCl的二噁烷溶液加入Boc-Ala-Pro-氢可酮(0.100g)。在室温下搅拌得到的混合物18小时。去除溶剂，在真空下干燥最终产物。收集固体，为淡黄色固体(0.56g，71％产率)：¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.38(s，3H)，1.48(t，1H)，1.80-2.29(m，8H)，2.65(m，1H)，2.80(s，3H)，2.96(m，3H)，3.23(m，2H)，3.76(s，3H)，3.92(s，1H)，4.22(s，1H)，4.53(s，1H)，5.00(s，1H)，5.84(d，1H)，6.77(d，1H)，6.86(d，1H)，8.25(br s，3H)。

实施例39.Glu-Glu-氢可酮

合成Glu-Glu-氢可酮

用类似于实施例38的方法制备Glu-Glu-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Glu(OtBu)-OSu，偶联物起始材料是Glu-氢可酮。

实施例40.(焦)Glu-Glu-氢可酮

合成(焦)Glu-Glu-氢可酮

化合物(焦)Glu-Glu-氢可酮用类似于实施例38的方法制备，除了氨基酸起始材料是Boc-焦谷氨酸-OSu，偶联物起始材料是Glu-氢可酮。

三肽

图58说明了Gly-Gly-Leu-氢可酮的制备。

实施例41.Gly-Gly-Leu-氢可酮

  试剂  MW  重量  mmoles  摩尔当量  Leu-氢可酮  484  2.21g  4.56  1.0  Boc-Gly-Gly-OSu  329  3.00g  9.12  2.0  NMM  101  5.0ml  45.6  10  DMF  -  100ml  -  -

Gly-Gly-Leu-氢可酮

将NMM加入Leu-氢可酮的DMF溶液，然后加入Boc-Gly-Gly-OSu。在室温下搅拌该溶液18小时。去除溶剂。用制备型HPLC(Phenomenex Luna C18，30×250mm，5μM，100；梯度：90水/100.1％TFA-MeCN→0/100；30毫升/分钟)纯化粗产物。收集固体，为淡黄色粉末(2.08g，产率73％)：¹H NMR(DMSO-d₆)δ0.88(dd，6H)，1.38(s，9H)，1.53-1.72(m，5H)，1.89(d，1H)，2.15(m，1H)，2.67(m，2H)，2.94(s，3H)，3.05(m，2H)，3.25(m，2H)，3.56(d，3H)，3.76(s，6H)，3.98(s，1H)，4.35(q，1H)，5.04(s，1H)，5.59(d，1H)，6.77(d，1H)，6.85(d，1H)，7.04(t，1H)，8.01(t，1H)，8.30(d，1H)，9.99(br s，1H)。

将50ml 4N HCl的二噁烷溶液加入Boc-Gly-Gly-Leu-氢可酮(2.08g)。在室温下搅拌得到的混合物18小时。去除溶剂，在真空下干燥最终产物。收集固体，为淡黄色固体(1.72g，产率86％)：¹H NMR(DMSO-d₆)δ0.89(dd，6H)，1.50-1.87(m，5H)，2.26(m，2H)，2.66(m，2H)，2.82-2.97(m，5H)，3.21(m，2H)，3.60(m，4H)，3.88(m，5H)，4.37(m，1H)，5.04(s，1H)，5.60(s，1H)，6.79(d，2H)，8.07(br s，3H)，8.54(br s，1H)，8.66(br s，1H)，11.29(br s，1H)。

实施例42.Glu-Glu-Glu-氢可酮

合成Glu-Glu-Glu-氢可酮

用类似于实施例41的方法制备Glu-Glu-Glu-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OSu，偶联物起始材料是Glu-氢可酮。

实施例43.Pro-Pro-Leu-氢可酮

合成Pro-Pro-Leu-氢可酮

用类似于实施例41的方法制备Pro-Pro-Leu-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Pro-Pro-Osu。

实施例44.Leu-Leu-Leu-氢可酮

合成Leu-Leu-Leu-氢可酮

用类似于实施例41的方法制备Leu-Leu-Leu-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Leu-Leu-Osu。

实施例45.Pro-Pro-Ile-氢可酮

合成Pro-Pro-Ile-氢可酮

用类似于实施例41的方法制备Pro-Pro-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Pro-Pro-OSu，偶联物起始材料是Ile-氢可酮。

实施例46.Leu-Pro-Leu-氢可酮

合成Leu-Pro-Leu-氢可酮

用类似方法制备Leu-Pro-Leu-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Leu-Pro-Osu。

实施例47.Lys-Lys-Ile-氢可酮

合成Lys-Lys-Ile-氢可酮

用类似方法制备Lys-Lys-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OSu，偶联物起始材料是Ile-氢可酮。

实施例48.Glu-Glu-Ile-氢可酮

合成Glu-Glu-Ile-氢可酮

用类似方法制备Glu-Glu-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OSu，偶联物起始材料是Ile-氢可酮。

实施例49.Tyr-Tyr-Ile-氢可酮

合成Tyr-Tyr-Ile-氢可酮

用类似方法制备Tyr-Tyr-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-OSu，偶联物起始材料是Ile-氢可酮。

五肽

实施例50.Gly-Gly-Gly-Gly-Leu-氢可酮

图59说明了Gly-Gly-Gly-Gly-Leu-氢可酮的制备。

  试剂  MW  重量  mmoles  摩尔当量  Gly-Gly-Leu-氢可酮  599  0.580g  0.970  1.0  Boc-Gly-Gly-OSu  329  0.638g  1.94  2.0  NMM  101  1.06ml  9.70  10  DMF  -  20ml  -  -

Gly-Gly-Gly-Gly-Leu-氢可酮

将NMM加入Gly-Gly-Leu-氢可酮的DMF溶液，然后加入Boc-Gly-Gly-OSu。在室温下搅拌该溶液18小时。去除溶剂。用制备型HPLC(Phenomenex Luna C18，30×250mm，5μM，100；梯度：85水/150.1％TFA-MeCN→50/50；30毫升/分钟)纯化粗产物。收集固体，为淡黄色粉末(0.304g，37％产率)。

将25ml 4N HCl的二噁烷溶液加入Boc-Gly-Gly-Gly-Gly-Leu-氢可酮(0.304g)。在室温下搅拌得到的混合物18小时。去除溶剂，在真空下干燥最终产物。收集固体，为淡黄色固体(0.247g，97％产率)：¹H NMR(DMSO-d₆)δ0.87(m，6H)，1.23(s，1H)，1.51-1.86(m，4H)，2.18(m，1H)，2.71(m，2H)，2.77(s，3H)，2.96(m，2H)，3.17(m，2H)，3.61(s，3H)，3.81-3.84(m，10H)，4.22(m，1H)，4.36(m，1H)，5.09(m，1H)，5.59(d，1H)，6.74(dd，2H)，8.16(br s，4H)，8.38(br s，1H)，8.74(br s，1H)，11.42(br s，1H)。

实施例51.Glu₅-氢可酮

合成Glu₅-氢可酮

用类似于实施例50的方法制备Glu₅-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OSu，偶联物起始材料是Glu₃-氢可酮。

实施例52.Glu₂-Gly₂-Ile-氢可酮

合成Glu₂-Gly₂-Ile-氢可酮

用类似于实施例50的方法制备Glu₂-Gly₂-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OSu，偶联物起始材料是Gly₂-Ile-氢可酮。

实施例53.Glu₂-Gly₂-Leu-氢可酮

合成Glu₂-Gly₂-Leu-氢可酮

用类似于实施例50的方法制备Glu₂-Gly₂-Leu-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OSu，偶联物起始材料是Gly₂-Leu-氢可酮。

实施例54.Gly₄-Ile-氢可酮

合成Gly₄-Ile-氢可酮

用类似于实施例50的方法制备Glu₄-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Gly-Gly-OSu，偶联物起始材料是Gly₂-Ile-氢可酮。

实施例55.Glu₂-Phe₃-氢可酮

合成Glu₂-Phe₃-氢可酮

用类似于实施例50的方法制备Glu₂-Phe₃-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OSu，偶联物起始材料是Phe₃-氢可酮。

实施例56.Lys₂-Gly₂-Ile-氢可酮

合成Lys₂-Gly₂-Ile-氢可酮

用类似于实施例50的方法制备Lys₂-Gly₂-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OSu，偶联物起始材料是Gly₂-Ile-氢可酮。

实施例57.Lys₂-Gly₂-Ile-氢可酮

合成Lys₂-Pro₂-Ile-氢可酮

用类似于实施例50的方法制备Lys₂-Pro₂-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OSu，偶联物起始材料是Pro₂-Ile-氢可酮。

实施例58.Tyr₂-Gly₂-Ile-氢可酮

合成Tyr₂-Gly₂-Ile-氢可酮

用类似于实施例50的方法制备Tyr₂-Gly₂-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-OSu，偶联物起始材料是Gly₂-Ile-氢可酮。

实施例59.Gly₂-Pro₂-Ile-氢可酮

合成Gly₂-Pro₂-Ile-氢可酮

用类似于实施例50的方法制备Gly₂-Pro₂-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Gly₂-OSu，偶联物起始材料是Pro₂-Ile-氢可酮。

实施例60.Asp₂-Phe₂-Ile-氢可酮

合成Asp₂-Phe₂-Ile-氢可酮

用类似于实施例50的方法制备Asp₂-Phe₂-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-OSu，偶联物起始材料是Phe₂-Ile-氢可酮。

实施例61.Glu₂-Asp₂-Ile-氢可酮

合成Glu₂-Asp₂-Ile-氢可酮

Glu₂-Asp₂-Ile-氢可酮用类似于实施例50的方法制备，除了氨基酸起始材料是Boc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OSu，偶联物起始材料是Asp₂-Ile-氢可酮。

实施例62.Lys₂-Asp₂-Ile-氢可酮

合成Lys₂-Asp₂-Ile-氢可酮

用类似于实施例50的方法制备Lys₂-Asp₂-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OSu，偶联物起始材料是Asp₂-Ile-氢可酮。

实施例63.Tyr₂-Glu₂-Ile-氢可酮

合成Tyr₂-Glu₂-Ile-氢可酮

用类似于实施例50的方法制备Tyr₂-Glu₂-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-OSu，偶联物起始材料是Glu₂-Ile-氢可酮。

实施例64.Asp₄-Ile-氢可酮

合成Asp₄-Ile-氢可酮

用类似于实施例50的方法制备Asp₄-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Asp(OtBu)-Asp(OtBu)-OSu，偶联物起始材料是Asp₂-Ile-氢可酮。

实施例65.Glu₂-Phe₂-Ile-氢可酮

合成Glu₂-Phe₂-Ile-氢可酮

用类似于实施例50的方法制备Glu₂-Phe₂-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OSu，偶联物起始材料是Phe₂-Ile-氢可酮。

实施例66.Lys₂-Glu₂-Ile-氢可酮

合成Lys₂-Glu₂-Ile-氢可酮

用类似于实施例50的方法制备Lys₂-Glu₂-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OSu，偶联物起始材料是Glu₂-Ile-氢可酮。

实施例67.Tyr₂-Phe-Pro-Ile-氢可酮

合成Tyr₂-Phe-Pro-Ile-氢可酮

用类似于实施例50的方法制备Tyr₂-Phe-Pro-Ile-氢可酮，除了氨基酸起始材料是Boc-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-OSu，偶联物起始材料是Phe-Pro-Ile-氢可酮。

YYFFI-HC

实施例68.Tyr-Tyr-Phe-Phe-Ile-(6-O)-氢可酮

制备Tyr-Tyr-Phe-Phe-Ile-(6-O)-氢可酮

在500ml 1N NaOH中搅拌氢可酮酒石酸氢盐(48.38g)5分钟。将悬液分成2批，用CHCl₃萃取(2×250ml)，用MgSO₄干燥有机相并过滤。去除溶剂，获得产物，为白色粉末(29.05g)。

通过注射器将LiN(TMS)₂的THF溶液(1M，36.0ml)加入氢可酮游离碱(7.12g)的四氢呋喃(THF)溶液(300ml)。在室温下搅拌该溶液10分钟，然后加入Boc-Ile-OSu(11.7g)。在室温下搅拌得到的反应混合物3小时。用1M HCl将反应中和到pH 7，搅拌10分钟。去除溶剂。将粗产物溶解于乙醚(100ml)，用NaHCO₃饱和溶液洗涤(3×100ml)，用MgSO₄干燥，过滤并去除溶剂。收集固体，为黄色粉末粉剂(11.1g)。

将125ml 4N HCl的二噁烷溶液加入Boc-Ile-氢可酮(11.1g)。在室温下搅拌得到的混合物1小时。去除溶剂，在真空下干燥最终产物。收集固体，为淡黄色粉末(10.43g)。

将二环己基碳二亚胺(DCC)(4.99g)加入Boc-Phe-Phe-OH(10.0g)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)(3.06g)的丙酮(300ml)悬液。在室温、氩气下搅拌该溶液18小时。将固体二环己基脲(DCU)滤除，用丙酮洗涤。从滤出液中去除溶剂。用丙酮和己烷体系使粗产物再结晶。滤除溶剂，收集固体，为白色粉末(12.2g)。

将4-甲基吗啉(NMM)(6.79ml)加入Ile-HC·2HCl(6.00g)的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液(150ml)，然后加入Boc-Phe-Phe-OSu(6.93g)。在室温下搅拌该溶液18小时。将溶剂减少到约1/4总体积，加入NaHCO₃饱和溶液(～100ml)，搅拌30分钟。过滤沉淀，用水彻底洗涤。在真空中干燥固体物质，溶解于少量乙酸乙酯，过滤。获得产物，为淡黄色粉末(8.39g)。

将50ml 4N HCl的二噁烷溶液加入Boc-Phe-Phe-Ile-HC(2.99g)。在室温下搅拌得到的悬液1小时。去除溶剂，干燥产物。获得产物，为黄色固体(2.60g)。

将O(N-琥珀酰亚胺基)-1，1，3，3-四甲基四氟硼酸脲(TSTU)(0.892g)和NMM(0.65ml)加入Boc-Tyr(tBu)-OH(1.00g)的15ml DMF溶液中。活化10分钟后，加入H-Tyr(tBu)-OH(0.844g)的40ml DMF∶二噁烷∶水(2∶2∶1)溶液。在室温下搅拌得到的悬液4小时。然后，加入水(15ml)，在室温下搅拌得到的悬液30分钟。将溶剂体积减少到1/4，用乙酸乙酯(250ml)萃取，用5％乙酸水溶液(2×150ml)，水(3×150ml)和盐水(150ml)洗涤。用MgSO₄干燥有机层，过滤并去除溶剂。用IPAC/己烷溶剂体系再结晶来纯化粗产物。分离最终产物，为白色固体(1.025g)。

将DCC(2.51g)加入Boc-Tyr(tBu)-Tyr(OtBu)-OH(7.32g)和NHS(1.54g)的丙酮悬液(150ml)。在室温、氩气下搅拌该溶液18小时。滤除固体DCU，用丙酮洗涤。从滤出液中去除溶剂。用热己烷洗涤粗产物。收集固体，为白色粉末(6.65g)。

将NMM(3.70ml)加入Phe-Phe-Ile-HC·2HCl(2.63g)的DMF溶液(100ml)，然后加入Boc-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-OSu(4.41g)。在室温下搅拌该溶液18小时。将溶剂减少到约1/4总体积，加入NaHCO₃饱和溶液(～100ml)，搅拌30分钟。过滤沉淀，用水彻底洗涤。在真空中干燥固体物质，并用反相HPLC纯化(2.77g)。用4N HCl的二噁烷溶液(～50ml)使产物去保护。

将NMM(3.52ml)加入Phe-Phe-Ile-HC·2HCl(5.00g)的DMF溶液(250ml)，然后加入Boc-Tyr(tBu)-Tyr(tBu)-OSu(4.61g)。在室温下搅拌该溶液6小时。将溶剂减少到约1/4总体积，加入NaHCO₃饱和溶液(～500ml)，搅拌30分钟。过滤沉淀，用水彻底洗涤。在真空中过夜干燥固体物质，溶解于甲醇，过滤任何剩余固体。从滤出液中蒸发溶剂，用乙醇(～60ml)使产物再结晶。过滤沉淀，在真空中干燥过夜。收集产物，为灰棕色粉末(4.57g)。

用4N HCl的二噁烷溶液(～100ml)使Boc-Tyr(OtBu)-Tyr(OtBu)-Phe-Phe-Ile-HC(3.53g)去保护。在室温下搅拌此物质～1小时。蒸发溶剂，收集产物，为淡黄色粉末(3.64g)。

图60至85说明了用ELISA测量的实施例35至68所述各种化合物的血浆水平。

糖肽

图86说明了1，2：3，4-二-O-异亚丙基-D-吡喃半乳糖的制备。

                    试剂 MW  重量  mmoles  摩尔当量 1，2：3，4-二-O-异亚丙基-D-吡喃半乳糖 260  1.00g  3.85  1 20％碳酰氯的甲苯溶液 -  20ml  -  -

1，2：3，4-二-O-异亚丙基-D-吡喃半乳糖的氯甲酸酯

在惰性气体气氛下，通过注射器将1，2：3，4-di-O-异亚丙基-D-吡喃半乳糖加入搅拌的20％光气的甲苯溶液。在室温下搅拌得到的清澈、无色溶液30分钟。搅拌后，将Ar(气)鼓入溶液约20分钟，以去除过量光气。然后去除溶剂，在真空下干燥产物18小时。无需进一步纯化或表征鉴定即可使用产物。

实施例69.半乳糖-CO-Leu-氢可酮

合成半乳糖-CO-Leu-氢可酮

将Leu-氢可酮(1当量)和4-甲基吗啉(NMM)(6当量)加入半乳糖氯甲酸酯(1.5当量)的二甲基甲酰胺(DMF)(2ml/mmol)溶液。在室温下搅拌该反应18小时。通过加入水使反应终止，去除溶剂，用反相HPLC纯化来分离粗产物。

用1∶1 1M HCl∶THF(1ml/0.1mmol)处理3小时使产物去保护。用反相HPLC再次纯化产物。

实施例70.半乳糖-CO-Pro2-Ile-氢可酮

合成半乳糖-CO-Pro₂-Ile-氢可酮

用类似于实施例69的方式制备半乳糖-CO-Pro₂-Ile-氢可酮，除了Pro₂-Ile-氢可酮用作偶联的起始材料。

实施例71.半乳糖-CO-Pro2-Leu-氢可酮

合成半乳糖-CO-Pro₂-Leu-氢可酮

用类似于实施例69的方式制备半乳糖-CO-Pro₂-Leu-氢可酮，Pro₂-Leu-氢可酮用作偶联的起始材料。

图87说明了以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮糖-肽偶联物的口服生物利用度。

实施例72.古洛糖酸-Ile-氢可酮

合成古洛糖酸-Ile-氢可酮

用类似于实施例69的方式制备古洛糖酸-Ile-氢可酮，除了用Ile-氢可酮作为偶联的起始材料，用古洛糖酸-Osu作为碳水化合物起始材料。

图88说明了以游离氢可酮计，耐滥用的氢可酮氨基酸-碳水化合物偶联物的口服生物利用度。

D-氨基酸

实施例73.(d)-Lys-(1)-Lys-Ile-氢可酮

制备(d)-Lys-(1)-Lys-Ile-氢可酮

将NMM加入Ile-氢可酮的DMF溶液，然后加入Boc-(d)-Lys(Boc)-(1)-Lys(Boc)-OSu。在室温下搅拌该溶液18小时。去除溶剂。用制备型HPLC(Phenomenex Luna C18，30×250mm，5μM，100；梯度：90水/100.1％TFA-MeCN→0/100；30毫升/分钟)纯化粗产物。收集固体，为淡黄色粉末。将4N HCl的二噁烷溶液加入Boc-(d)-Lys(Boc)-(1)-Lys(Boc)-氢可酮。在室温下搅拌得到的混合物18小时。去除溶剂，在真空下干燥最终产物。收集固体，为淡黄色固体。

核苷

图89说明了核苷和偶联位点。也通过图90至128来描述实施例74至83(血浆水平由LC/MS/MS测量)。

实施例74.在接近治疗性人剂量的剂量(1mg/kg)和提高剂量下肽-氢可酮偶联物的口服生物利用度

实施例74说明当肽EEFFI(表46，图90)、EEFFF(表47，图91)、YYI(表48，图92)、DDI(表49，图93)和YYFFI(表50，图94)偶联于活性物质氢可酮时，当给药剂量为1mg/kg时，能维持口服生物利用度或口服生物利用度高于等效氢可酮剂量。根据Chou等，该剂量相当于给予70千克(148磅)体重人个体10-14mg的人剂量。然而，当口服给予5mg/kg时，EEFFI-HC(表51，图95)、YYI-HC(表52，图96)、DDI-HC(表53，图97)和YYFFI-HC(表54，图98)的峰值水平和生物利用度大大降低。在大鼠中5mg/kg剂量接近80mg的人等效剂量(HED)的氢可酮酒石酸氢盐；这是以立即释放形式可能对无知患者有害的剂量，具有用药过量致死的可能性。人等效剂量的定义为根据动物模型体表面积调整的60千克人的等效剂量。大鼠的调节因数是6.2。例如，以氢可酮计，5mg/kg的大鼠剂量的HED等于48.39毫克(5/6.2×60)氢可酮；当调整为盐物质时，等于79.98(48.39/.605)毫克氢可酮酒石酸氢盐。

因此，肽-氢可酮偶联物在较低剂量(1mg/kg)下保持其治疗价值，而当给药剂量超过安全水平(5mg/kg)时，生物利用度与氢可酮相比降低，从而降低了口服摄取时用药过量的可能性。相对于氢可酮，得自肽氢可酮偶联物的氢可酮的生物利用度降低范围是9％-70％(表55)。

              表46.氢可酮与EEFFI-HC(剂量1mg/kg)的口服药代动力学特征。

  药物              小时  AUC(ng/ml h)  百分数  Cmax  百分数  0.5  1.5  3 5  8  0-8h  HC  ng/ml  HC  氢可酮酒石酸氢盐  9.5  4.5  1.9 0  2  19.1  100  9.5  100  EEFFI-HC  12.9  5.2  4.2 0  1.6  25.8  135  12.9  136

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

                       表47.氢可酮与EEFFF-HC(剂量1mg/kg)的口服药代动力学特征。

  药物               小时  AUC(ng/ml h)  0-8h  百分数  HC  Cmax  ng/ml  百分数  HC  0.5  1.5  3  5  8  氢可酮酒石酸氢盐  9.5  4.5  1.9  0  2  19.1  100  9.5  100  EEFFF-HC  11.3  4.1  1.2  1.2  1.2  20.7  108  11.3  119

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

                    表48.氢可酮与YYI-HC(剂量1mg/kg)的口服药代动力学特征。

  药物                     小时  AUC(ng/ml h)  0-8h  百分数  HC  Cmax  ng/ml  百分数  HC  0.5  1.5  3  5  8  氢可酮酒石酸氢盐  9.2  5.9  2.3  1.9  2  26.1  100  9.2  100  YYI-HC  9.2  4.3  1.5  1.1  1.8  20.4  78  9.2  100

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

                        表49.氢可酮与DDI-HC(剂量1mg/kg)的口服药代动力学特征。

  药物                小时  AUC(ng/ml h)  0-8h  百分数  HC  Cmax  ng/ml  百分数  HC  0.5  1.5  3 5  8  氢可酮酒石酸氢盐  8.6  3  1.1 0  1.4  14  100  8.6  100  DDI-HC  14.9  5  0 0  0  17.4  124  14.9  173

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

                        表50.氢可酮与YYFFI-HC(剂量1mg/kg)的口服药代动力学特征。

  药物                    小时  AUC(ng/ml h)  0-8h  百分数  HC  Cmax  ng/ml  百分数  HC  0.5  1.0  1.5  3  5  8  氢可酮酒石酸氢盐  8.6  4.5  3  1.1  0  1.4  13.6  100  8.6  100  YYFFI-HC  7  3.7  4.3  1.4  1.1  0  14.9  110  7  81

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

                         表51.氢可酮与EEFFI-HC(剂量5mg/kg)的口服药代动力学特征。

  药物                 小时  AUC(ng/ml h)  0-8h  百分数  HC  Cmax  ng/ml  百分数  HC  0.5  1.5  3  5  8  氢可酮酒石酸氢盐  93  5.3  39  5  6.5  167  100  93  100  EEFFI-HC  44  6.5  5.7  4.2  4.5  68  41  44  47

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

                           表52.氢可酮与YYI-HC(剂量5mg/kg)的口服药代动力学特征。

  药物                    小时  AUC(ng/ml h)  0-8h  百分数  HC  Cmax  ng/ml  百分数  HC  0.5  1.5  3  5  8  氢可酮酒石酸氢盐  37  13  12  3  0  71  100  37  100  YYI-HC  15  6.3  3.3  1.6  2.7  33  46  15  41

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

                          表53.氢可酮与DDI-HC(剂量5mg/kg)的口服药代动力学特征。

  药物                    小时  AUC(ng/ml h)  0-8h  百分数  HC  Cmax  ng/ml  百分数  HC  0.5  1.5  3  5  8  氢可酮酒石酸氢盐  73  42  6.7  1.2  3.8  128  100  73  100  DDI-HC  115  19  11  4  3.1  145  113  115  158

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

                          表54.氢可酮与YYFFI-HC(剂量5mg/kg)的口服药代动力学特征。

  药物                     小时  AUC(ng/ml h)  0-8h  百分数  HC  Cmax  ng/ml  百分数  HC  0.5  1.0  1.5  3  5  8  氢可酮酒石酸氢盐  73  62  42  6.7  1.2  3.8  123  100  73  100  YYFFI-HC  46  33  34  13  8.3  4.5  105  86  46  63

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

        表55.5mg/kg与治疗剂量1mg/kg相比口服生物利用度降低。

  药物     生物利用度     1mg/kg      生物利用度      5mg/kg    百分数降低    1mg/kg与5mg/kg  AUC  Cmax  AUC  Cmax  AUC  Cmax  YYI-HC  78  100  46  40  41  60  DDI-HC  124  174  113  158  9  9  YYFFI-HC  109  81  86  62  15  23  EEFFI-HC  135  136  41  47  70  65

实施例75.鼻内途径给予肽-HC偶联物的生物利用度

实施例75说明当肽EEFFF(表56，图99)、YYI(表57，图100)、DDI(表58，图101)和YYFFI(表59，图102)偶联于活性物质氢可酮时，静脉内途径的生物利用度大大降低，从而降低了通过鼻吸给药时用药过量的可能性。

                     表56.氢可酮与EEFFF-HC(剂量1mg/kg)的鼻内药代动力学特征。

  药物              分钟  AUC(ng/ml h)  0-1h  百分数  HC  Cmax  ng/ml  百分数  HC  5  15  30  60  氢可酮酒石酸氢盐  262  259  142  47  152  100  262  100  EEFFF-HC  34  21  24  15  21  14  34  13

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

                  表57.氢可酮与YYI-HC(剂量1mg/kg)的鼻内药代动力学特征。

  药物             分钟  AUC(ng/ml h)  0-1h  百分数  HC  Cmax  ng/ml  百分数  HC  5  15  30  60  氢可酮酒石酸氢盐  446  553  244  103  288  100  553  100  YYI-HC  31  17  12  2  12  4  31  6

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

                   表58.氢可酮与DDI-HC(剂量1mg/kg)的鼻内药代动力学特征。

  药物            分钟  AUC(ng/ml h)  0-1h  百分数  HC  Cmax  ng/ml  百分数  HC  5  15  30  60  氢可酮酒石酸氢盐  446  553  244  103  288  100  553  100  DDI-HC  281  121  64  16  88  31  281  51

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

                        表59.氢可酮与YYFFI-HC(剂量1mg/kg)的鼻内药代动力学特征。

  药物                 分钟  AUC(ng/ml h)  0-1h  百分数  HC  Cmax  ng/ml  百分数  HC  5  15  30  60  氢可酮酒石酸氢盐  446  553  244  103  288  100  553  100  YYFFI-HC  28  27  16  21  20  100  28  5

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

实施例76：静脉内途径给予肽-HC偶联物的生物利用度

实施例76说明当肽EEFFI(表60，图103)、EEFFF(表61，图104)、YYI(表62，图105)和YYFFI(表63，图106)偶联于活性物质氢可酮时，静脉内途径的生物利用度大大降低，从而降低了通过这种非故意途径给药时用药过量的可能性。

                        表60.氢可酮与EEFFI-HC(剂量1mg/kg)的静脉内药代动力学特征。

  药物                  分钟  AUC(ng/ml h)  0-1h  百分数  HC  Cmax  ng/ml  百分数  HC  5  15  30  60  氢可酮酒石酸氢盐  179  204  201  132  173  100  179  100  EEFFI-HC  89  76  78  66  66  38  89  44

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

                 表61.氢可酮与EEFFF-HC(剂量1mg/kg)的静脉内药代动力学特征。

  药物                 分钟  AUC(ng/ml h)  0-1h  百分数  HC  Cmax  ng/ml  百分数  HC  5  15  30  60  氢可酮酒石酸氢盐  179  204  201  132  173  100  179  100  EEFFF-HC  135  77  140  85  107  62  135  75

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

                  表62.氢可酮与YYI-HC(剂量1mg/kg)的静脉内药代动力学特征。

  药物                分钟  AUG(ng/ml h)  0-1h  百分数  HC  Cmax  ng/ml  百分数  HC  5  15  30  60  氢可酮酒石酸氢盐  238  182  136  77  138  100  238  100  YYI-HC  9  13  13  3  10  7  13  6

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

                          表63.氢可酮与YYFFI-HC(剂量1mg/kg)的静脉内药代动力学特征。

  药物                分钟  AUC(ng/ml h)  百分数  Cmax  百分数  5  15  30  60  0-1h  HC  ng/ml  HC  氢可酮酒石酸氢盐  238  182  136  77  138  100  238  100  YYFFI-HC  171  28  22  18  40  29  171  72

氢可酮加二氢吗啡酮(ng/ml)

实施例77.氢可酮偶联物。

相对于氢可酮酒石酸氢盐的各种肽-氢可酮偶联物的生物利用度(AUC和Cmax)见表64。通过YYFFI-HC的体内性能(图107至128)很好地说明了本发明。在1和2mg/kg(人等效剂量(HED)为16和32mg氢可酮酒石酸氢盐)YYFFI-HC的相对低剂量下，其生物利用度与氢可酮酒石酸氢盐相当(表65，图129至134)。在5和25mg/kg高剂量下，与氢可酮相比，氢可酮和二氢吗啡酮的生物利用度大大降低(表66，图135至150)。这些剂量(HED为80和400mg氢可酮酒石酸氢盐)等效于高于氢可酮酒石酸氢盐可用处方剂量(范围是2.5-10mg)的量。当通过静脉内和鼻内等胃肠道外途径给药时，观察到与氢可酮酒石酸氢盐相比，来自YYFFI-HC的氢可酮和二氢吗啡酮的生物利用度大大降低。这些实施例确证，通过连接肽共价修饰阿片类物质能够提供当给药剂量接近正常处方剂量时递送生物等效剂量的方法。当通过胃肠道外途径给药或口服剂量超过所述处方剂量时，生物利用度大大降低。总之，这些实施例清楚地说明本发明在降低阿片类物质滥用可能性方面的用途。

            表64.以逐渐升高的剂量口服给予氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC后氢可酮平均浓度。

  小时                                       剂量¹/浓度(ng/ml)        1mg/kg       2mg/kg       5mg/kg       25mg/kg  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  0  0  0  0  0  0  0  0  0  0.1  114.0  20.3  60.3  35.2  628.7  26.6  408.9  41.4  0.5  14.3  17.9  15.6  23  74.3  22.5  153.9  23.3  1.0  7.0  10.4  12.9  14.4  80.8  15.1  86.2  31.0  2.0  2.6  2.8  3.4  9.8  18.4  10.3  83.3  43.9  4.0  1.0  1.2  1.3  3.3  4.9  3.6  57.8  25.0

1-以氢可酮计含量

2-氢可酮酒石酸氢盐

3-YYFFI-HC HCl

                    表65.以逐步升高的剂量口服给予氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC后

                                    氢可酮药代动力学参数。

  参数                                 剂量¹/浓度(ng/ml)        1mg/kg      2mg/kg       5mg/kg      25mg/kg  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  AUC  45.1  26.3  38.2  48  234  47  419.0  135.0  HC+HM⁴百分数  100  58  100  126  100  20  100  32  Cmax  114.0  20.3  60.3  35.2  628.7  26.6  408.9  41.4  HC+HM⁴百分数  100  18  100  58  100  4  100  10

1-以氢可酮计含量

2-氢可酮酒石酸氢盐

3-YYFFI-HC HCl

4-相对于给予氢可酮酒石酸氢盐后的参数的百分数

                   表66.以逐渐升高的剂量口服给予氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC后

                                  二氢吗啡酮的平均浓度。

  小时                                 剂量1/浓度(ng/ml)        1mg/kg       2mg/kg      5mg/kg       25mg/kg  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  0  0  0  0  0  0  0  0  0  0.1  1.95  0.27  7.61  1.13  9.03  0.49  44.36  8.00  0.5  3.22  2.87  18.10  8.74  13.46  10.41  62.24  10.35  1.0  2.69  2.39  9.23  3.63  10.36  4.82  29.89  12.70  2.0  2.11  2.24  2.31  3.41  6.68  3.17  31.62  16.22  4.0  0.64  1.02  0.59  0.88  2.00  1.07  40.86  8.98

1-以氢可酮计含量

2-氢可酮酒石酸氢盐

3-YYFFI-HC HCl

                     表67.以逐渐升高的剂量口服给予氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC后

                                  二氢吗啡酮的药代动力学参数。

 参数                              剂量¹/浓度(ng/ml)       1mg/kg       2mg/kg       5mg/kg       25mg/kg  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³ AUC  7.8  7.5  21.0  12.9  28.1  14.3  149  49 HM⁴百分数  100  97  100  61  100  51  100  33 Cmax  3.2  2.9  18.1  8.7  13.5  10.4  44.4  16.2 HM⁴百分数  100  89  100  48  100  77  100  37

1-以氢可酮计含量

2-氢可酮酒石酸氢盐

3-YYFFI-HC HCl

4-相对于给予氢可酮酒石酸氢盐后的参数的百分数

                 表68.以逐渐升高的剂量口服给予氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC后

                              氢可酮加二氢吗啡酮的平均浓度。

  小时                                    剂量¹/浓度(ng/ml)       1mg/kg     2mg/kg      5mg/kg       25mg/kg  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  0  0  0  0  0  0  0  0  0  0.1  116  20.6  67.9  36.3  637.7  27.1  453.3  49.4  0.5  17.5  20.8  33.7  31.7  87.8  32.9  216.1  33.7  1.0  9.7  12.8  22.1  18.0  91.2  19.9  116.1  43.7  2.0  4.7  5.0  5.7  13.2  25.1  13.5  114.9  60.1  4.0  1.6  2.2  1.9  4.2  6.9  4.7  98.7  34.0

1-以氢可酮计含量

2-氢可酮酒石酸氢盐

3-YYFFI-HC HCl

                        表69.以逐渐升高的剂量口服给予氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC后

                                 氢可酮加二氢吗啡酮的药代动力学参数。

  参数                                  剂量¹/浓度(ng/ml)       1mg/kg        2mg/kg        5mg/kg        25mg/kg  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  HC²  YYFFI-HC³  AUC  53  34  59  61  312  62  569  193  HC⁴百分数  100  64  100  103  100  20  100  34  Cmax  116  20.8  67.9  36.3  638  32.9  453  49.4  HC⁴百分数  100  18  100  53  100  5  100  11

1-以氢可酮计含量

2-氢可酮酒石酸氢盐

3-YYFFI-HC HCl

4-相对于给予氢可酮酒石酸氢盐后的参数的百分数

      表70.静脉内给予1mg/kg的氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC(以氢可酮计含量)后

                氢可酮加二氢吗啡酮、氢可酮和二氢吗啡酮的平均浓度。

  小时                          浓度(ng/ml)  HC+HM  HC  HM  HC¹  YYFFI-HC²  HC¹  YYFFI-HC²  HC¹  YYFFI-HC²  0  0  0  0  0  0  0  0.1  208.9  22.6  42.97  8.75  251.9  31.3  0.5  83.7  13.5  16.09  1.44  99.8  14.9  1.0  38.4  13.0  3.65  0.92  42.1  13.9  2.0  12.4  13.1  1.77  0.41  14.2  13.5  4.0  2.9  8.5  0.70  0.33  3.6  8.8

1-氢可酮酒石酸氢盐

2-YYFFI-HC HCl

       表71.静脉内给予1mg/kg的氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC(以氢可酮计含量)后氢

                     可酮加二氢吗啡酮、氢可酮和二氢吗啡酮的药代动力学参数。

  参数                               浓度(ng/ml)  HC+HM  HC  HM  HC¹  YYFFI-HC²  HC¹  YYFFI-HC²  HC¹  YYFFI-HC²  AUC  140.0  50.0  24.10  4.50  164  54  百分数¹  100  36  100  19  100  33  Cmax  208.9  22.6  43.0  8.7  252  31.3  百分数¹  100  10.8  100  20.2  100  12.4

1-氢可酮酒石酸氢盐

2-YYFFI-HC HCl

3-相对于给予氢可酮酒石酸氢盐后的参数的百分数

                    表72.鼻内给予1mg/kg的氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC后

                     氢可酮加二氢吗啡酮、氢可酮和二氢吗啡酮的平均浓度。

  分钟                                浓度(ng/ml)  HC+HM  HC  HM  HC¹  YYFFI-HC²  HC¹  YYFFI-HC²  HC¹  YYFFI-HC²  0  0  0  0  0  0  0  5  446  28  441  28  4.4  bql³  15  553  27  543  27  10.6  bql⁴  30  244  16  227  16  17.1  bql⁵  60  103  21  96  21  7.2  bql⁶

1氢可酮酒石酸氢盐

2-YYFFI-HC HCl

           表73.静脉内给予1mg/kg的氢可酮酒石酸氢盐或YYFFI-HC(以氢可酮计含量)后

                  氢可酮加二氢吗啡酮、氢可酮和二氢吗啡酮的药代动力学参数。

  参数                               浓度(ng/ml)  HC+HM  HC  HM  HC¹  YYFFI-HC²  HC¹  YYFFI-HC²  HC¹  YYFFI-HC²  AUC  288.0  20.0  74.70  10.30  7.0  NA  百分数³  100  6.9  100  13.8  100  NA  Cmax  553.0  28.0  543.0  28.0  17  NA  百分数³  100  5.1  100  5.2  100  NA

1-氢可酮酒石酸氢盐

2-YYFFI-HC HCl

3-相对于给予氢可酮酒石酸氢盐后的参数的百分数

耐滥用的氢可酮偶联物的体内测试的小结。氢可酮偶联物的体内测试证明，例如氢可酮偶联物的鼻内镇痛反应降低、静脉内镇痛反应降低、皮下镇痛反应降低、口服C_max降低、鼻内生物利用度(AUC和C_max)降低和静脉内生物利用度(AUC和C_max)降低，在下面进行进一步详述。

实施例78.氢可酮偶联物的鼻内镇痛反应降低

通过将0.02ml含有氢可酮偶联物或氢可酮酒石酸氢盐的水放入鼻孔对雄性Sprague-Dawley大鼠给药。所有剂量含有等效量的氢可酮基(hydrocodone base)。用至舔爪(paw lick)潜伏期的时间(秒)作为镇痛效果的量度。饲养大鼠以确定基线反应。在55℃进行热板试验。在所有试验中以45秒为限，以免损伤组织。在测试结束时人道地处死所有动物。图112和114所示的舔爪潜伏期(镇痛效果)-时间曲线说明，与等摩尔(以氢可酮计)剂量的氢可酮酒石酸氢盐相比，氢可酮偶联物产生的镇痛效果降低。热板试验测定的镇痛反应是氢可酮的药理作用的药效学量度。这些实施例说明与氢可酮酒石酸氢盐相比，氢可酮偶联物降低了鼻内途径给药的镇痛效果。

实施例79.氢可酮偶联物的静脉内镇痛反应降低

通过尾静脉注射0.1ml含有氢可酮偶联物或氢可酮酒石酸氢盐的水对雄性Sprague-Dawley大鼠给药。所有剂量含有等效量的氢可酮基。用至舔爪潜伏期的时间(秒)作为镇痛效果的量度。饲养大鼠以确定基线反应。在55℃进行热板试验。在所有试验中以45秒为限，以免损伤组织。在测试结束时人道地处死所有动物。图67显示的舔爪潜伏期(镇痛效果)-时间曲线说明，与等摩尔(以氢可酮计)剂量的氢可酮酒石酸氢盐相比，氢可酮偶联物产生的镇痛效果降低。热板试验测定的镇痛反应是氢可酮的药理作用的药效学量度。此实施例说明，与氢可酮酒石酸氢盐相比，氢可酮偶联物降低了静脉内途径给药的镇痛效果。

实施例80.氢可酮偶联物的皮下镇痛反应降低

通过皮下注射0.1ml含有氢可酮偶联物或氢可酮酒石酸氢盐的水对雄性Sprague-Dawley大鼠给药。所有剂量含有等效量的氢可酮基。用至舔爪潜伏期的时间(秒)作为镇痛效果的量度。饲养大鼠以确定基线反应。在55℃进行热板试验。在所有试验中以45秒为限，以免损伤组织。在测试结束时人道地处死所有动物。图62显示的舔爪潜伏期(镇痛效果)-时间曲线说明，与等摩尔(氢可酮基)剂量的氢可酮酒石酸氢盐相比，氢可酮偶联物产生的镇痛效果降低。热板试验测定的镇痛反应是氢可酮的药理作用的药效学量度。此实施例说明与氢可酮酒石酸氢盐相比，氢可酮偶联物降低了皮下途径给药的镇痛效果。

实施例81.氢可酮偶联物的口服C_max降低

随意地给雄性Sprague-Dawley大鼠提供水，禁食过夜，经口强饲法给予氢可酮偶联物或氢可酮酒石酸氢盐。所有剂量含有等效量的氢可酮基。用ELISA(二氢吗啡酮，106619-1，Neogen，Corporation，Lexington，KY)测量血浆氢可酮浓度。该测定是二氢吗啡酮(主要的氢可酮代谢物，反应性100％)和氢可酮(反应性62.5％)特异性的。各种氢可酮偶联物与氢可酮酒石酸氢盐的血浆浓度-时间曲线见图53、76、84和85。这些例子说明，当通过口服途径给药时，与等摩尔(以氢可酮计)剂量的氢可酮酒石酸氢盐产生的峰值水平(C_max)相比，氢可酮偶联物降低了氢可酮加二氢吗啡酮的峰值水平(C_max)。

实施例82.氢可酮偶联物的鼻内生物利用度(AUC和C_max)降低

随意地给雄性Sprague-Dawley大鼠提供水，通过将0.02ml含有氢可酮偶联物或氢可酮酒石酸氢盐的水放入鼻孔给药。所有剂量含有等效量的氢可酮基。用ELISA(二氢吗啡酮，106619-1，Neogen，Corporation，Lexington，KY)测量血浆氢可酮浓度。该测定是二氢吗啡酮(主要的氢可酮代谢物，反应性100％)和氢可酮(反应性62.5％)特异性的。各种氢可酮偶联物与氢可酮酒石酸氢盐的血浆浓度-时间曲线见图55、60、64-66、69-73、75、77-85。这些实施例说明，当通过鼻内途径给药时，与等摩尔(以氢可酮计)剂量的氢可酮酒石酸氢盐产生的峰值水平(C_max)和总吸收(AUC)相比，氢可酮偶联物降低了氢可酮加二氢吗啡酮的峰值水平(C_max)和总吸收(AUC)。

实施例83.氢可酮偶联物的静脉内生物利用度(AUC和C_max)降低

随意地给雄性Sprague-Dawley大鼠提供水，通过静脉内尾静脉注射0.1ml含有氢可酮偶联物或氢可酮酒石酸氢盐的水给药。所有剂量含有等效量的d-苯异丙胺基。用ELISA(二氢吗啡酮，106619-1，Neogen，Corporation，Lexington，KY)测量血浆氢可酮浓度。该测定是二氢吗啡酮(主要的氢可酮代谢物，反应性100％)和氢可酮(反应性62.5％)特异性的。氢可酮偶联物与氢可酮酒石酸氢盐的血浆浓度-时间曲线见图74。该实施例说明，当通过鼻内途径给药时，与等摩尔(以氢可酮计)剂量的氢可酮酒石酸氢盐产生的峰值水平(C_max)和总吸收(AUC)相比，氢可酮偶联物降低了氢可酮加二氢吗啡酮的峰值水平(C_max)和总吸收(AUC)。

实施例84至118羟考酮

实施例84至118说明了在保持治疗价值的同时降低用药过量和滥用的可能性的化合物和组合物，其中活性物质羟考酮(OC)与-化学部分共价连接。在羟考酮6位和14位双取代的化合物称为PPL(2)-OC。

在雄性Sprague-Dawley大鼠中进行羟考酮和羟考酮偶联物的口服、鼻内和静脉内生物利用度研究。以去离子水给予将含有等效量羟考酮的羟考酮盐酸盐和羟考酮偶联物剂量。用强饲法针头进行0.5毫升口服给药。通过将20微升放入用异氟烷麻醉的大鼠鼻孔进行鼻内剂量给药。通过尾静脉注射0.1ml进行静脉内给药。在异氟烷麻醉下通过眼窝后穿刺收集血浆。用LC/MS/MS测定羟考酮和羟吗啡酮(主要活性代谢物)浓度。

以下实施例仅为说明性，PPL(2)-OC不旨在限制。同样，例如，可根据以下示范性方法完成羟考酮的合成和连接。此外，实施例84至96描述了将氨基酸或各种长度的肽连接于羟考酮的方法。

羟考酮合成实施例

实施例84：合成[Boc-X]₂-羟考酮

将LiN(TMS)₂(19.41ml，19.41mmol)加入羟考酮游离碱(2.04g，6.47mmol)的THF溶液(～35ml)，搅拌～30分钟。一次性向其中加入固体Boc-X-OSu(X＝氨基酸，21mmol)，在室温下搅拌该反应混合物过夜。用1N HCl中和该溶液，减压去除THF。用EtOAc(200mL)稀释残留物，加入NaHCO₃饱和溶液(150mL)，搅拌1小时。用NaHCO₃和盐水洗涤EtOAc部分。用Na₂SO₄干燥，并蒸发干燥。通过硅胶柱纯化(30％EtOAc/己烷)获得化合物。

[Boc-X]₂-羟考酮的去保护：

去保护的总方法：将上述化合物与4N HCl/二噁烷(25mL/gm)在室温下反应4小时。蒸发溶剂，真空下干燥，产生X₂-羟考酮·3HCl。

例子：

(Val)₂-羟考酮

(Ile)₂-羟考酮

(Leu)₂-羟考酮

(Lys)₂-羟考酮

(Phe)₂-羟考酮

(Glu)₂-羟考酮

实施例85.合成[Boc-Z-Y-X]₂-羟考酮[X、Y和Z是氨基酸]

将NMM(10-12当量)和Boc-Z-Y-OSu(2.6当量)加入X₂-羟考酮·3HCl(1mmol)的DMF溶液(15-20mL)中。在室温下搅拌该反应混合物过夜。减压蒸发溶剂。将NaHCO₃饱和溶液(～30mL)加入残留物，搅拌1-2小时。过滤白色/浅黄色残留物，用水彻底洗涤，在真空炉中、室温下干燥。

[Boc-X-Y-Z]₂-羟考酮的去保护：

去保护与上述总方法相同。对100-200mg三肽衍生物而言，采用10-15ml 4NHCl/二噁烷。过夜进行去保护，产生[X-Y-Z]₂-羟考酮·3HCl。

含有苏氨酸和丝氨酸的三肽衍生物的去保护：

首先将三肽衍生物溶解于95％TFA(5％水)中，在室温下搅拌4小时。蒸发溶剂，将残留物与甲苯共蒸发两次，真空下干燥。加入4N HCl/二噁烷，搅拌过夜。将残留物蒸发干燥，然后真空下干燥。

例子：

(Glu-Asp-Val)₂-羟考酮

(Ile-Tyr-Val)₂-羟考酮

(Tyr-Pro-Val)₂-羟考酮

(Gly-Leu-Val)₂-羟考酮

(Phe-Val-Val)₂-羟考酮

(Ser-Thr-Val)₂-羟考酮

(Lys-Ser-Val)₂-羟考酮

实施例86.合成[Boc-X]-O⁶-羟考酮：

在0℃下将LiN(TMS)₂(10.5mmol)加入羟考酮(10mmol)的THF溶液(50mL)。20分钟后，加入Boc-X-OSu(11mmol)，然后在室温下搅拌该反应混合物过夜。将该溶液冷却到0℃，用1N HCl中和。蒸发有机溶剂，将EtOAc(200mL)和NaHCO₃饱和水溶液(150mL)加入残留物，搅拌1小时。用水、盐水洗涤EtOAc部分，用Na₂SO₄干燥，蒸发干燥。在硅胶(70％EtOAc-己烷)上纯化残留物，产生标题化合物。

Boc-X-O⁶-羟考酮的去保护：

在室温下搅拌[Boc-X]-羟考酮的4N HCl/二噁烷(10ml/mmol)溶液4小时。减压蒸发溶剂，在真空下干燥残留物，产生X-O⁶-羟考酮·2HCl。

例子：

Val-羟考酮

Ile-羟考酮

Leu-羟考酮

实施例87.合成Boc-Z-Y-X-O6-羟考酮

将NMM(10mmol)和Boc-Z-Y-OSu(1.2mmol)加入X-O⁶-羟考酮·2HCl(1mmol)的DMF溶液。在室温下搅拌该反应混合物过夜。蒸发溶剂，将NaHCO₃饱和溶液加入残留物，搅拌1小时。过滤沉淀，用水彻底洗涤，干燥产生标题化合物。

Boc-Z-Y-X-O⁶-羟考酮的去保护：

去保护与上述总方法相同，产生Z-Y-X-O⁶-羟考酮·2HCl。

例子：

Pro-Glu-Val-羟考酮

Glu-Leu-Val-羟考酮

Glu-Tyr-Val-羟考酮

实施例88.合成Boc-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Ac：

将DMAP(75mg)、三乙胺(1.5mmol)和Ac₂O(8mmol)加入[Boc-X]-O⁶-羟考酮(1mmol)的吡啶溶液(15mL)中。将该反应混合物在65℃下加热3天。将暗褐色溶液冷却到室温，加入MeOH(5mL)，搅拌1小时。蒸发溶剂，与甲苯共同蒸发。将残留物溶解于EtOAc(50mL)，用NaHCO₃饱和溶液、盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，蒸发干燥。用硅胶纯化残留物，产生标题化合物。

实施例89.合成Boc-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-CO₂Et：

在0℃下将LiN(TMS)₂(1.05mmol)加入[Boc-X]-O⁶-羟考酮(1mmol)的THF溶液(10mL)。20分钟后，加入氯甲酸乙酯(1.1mmol)，让反应混合物的温度缓慢升高到室温，在室温下搅拌1小时。将该溶液倾入2％乙酸水溶液(冰冷)中，用EtOAc萃取。用水、NaHCO₃水溶液、盐水洗涤EtOAc部分，用Na₂SO₄干燥，蒸发干燥。在硅胶上纯化残留物，产生标题化合物。

Boc-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-R(R＝Ac，CO₂Et)的去保护：

去保护与上述总方法相同，产生X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-R·2HCl(R＝Ac，CO₂Et)。

例子：

(Val)-羟考酮-(CO₂Et)

(Val)-羟考酮-(OAc)

实施例90.合成Boc-Z-Y-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-R(R＝Ac，CO₂Et)：

将NMM(10mmol)和Boc-Z-Y-OSu(1.2mmol)加入X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-R·2HCl(1mmol，R＝Ac，CO₂Et)的DMF溶液。在室温下搅拌该反应混合物过夜。蒸发溶剂将NaHCO₃饱和溶液加入残余物，搅拌1小时。过滤沉淀，用水彻底洗涤，干燥产生标题化合物。

Boc-Z-Y-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-R(R＝Ac，CO₂Et)的去保护：

去保护与上述总方法相同。过夜进行去保护，产生Z-Y-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-R·2HCl。

例子：

(Ile-Tyr-Val)-羟考酮-(CO₂Et)

(Ile-Tyr-Val)-羟考酮-(OAc)

实施例91.合成Boc-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-Boc：

在0℃下将LiN(TMS)₂(1.1mmol)加入Boc-X-羟考酮(1mmol)的THF溶液(10mL)中，搅拌该溶液30分钟，然后加入Boc-Y-OSu(1.25mmol)。在室温下搅拌该反应混合物过夜。将该溶液冷却到0℃，用1N HCl中和，蒸发有机部分。将EtOAc(50mL)和NaHCO₃饱和溶液(50ml)加入残余物，搅拌1小时。用水、盐水洗涤有机部分，用Na₂SO₄干燥，蒸发干燥。在硅胶上纯化残余物，产生标题化合物。

Boc-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-Boc的去保护：

根据上述去保护总方法使Boc-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-Boc去保护，产生X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y·3HCl。

例子：

Val-羟考酮-Gly

实施例92.合成Boc-A-B-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-B-A-Boc(A，B，X，Y＝氨墓酸)：

将Boc-A-B-OSu(2.5mmol)加入X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y·3HCl(1mmol)和NMM(10mmol)的DMF溶液(10mL)，在室温下搅拌该反应混合物过夜。减压蒸发溶剂，将NaHCO₃饱和溶液(15mL)加入残留物中，搅拌1小时。过滤掉沉淀，用水彻底洗涤残留物，干燥。

Boc-A-B-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-B-A-Boc的去保护：

去保护与上述总方法相同。过夜进行去保护，产生A-B-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-B-A·3HCl。

例子：

(Ile-Tyr-Val)-羟考酮-(Gly-Tyr-Ile)

(Leu-Tyr-Val)-羟考酮-(Gly-Tyr-Leu)

实施例93.合成Boc-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-Cbz：

在0℃下将LiN(TMS)₂(1.1mmol)加入Boc-X-羟考酮(1mmol)的THF溶液(10mL)，搅拌该溶液30分钟，然后加入Cbz-Y-OSu(1.25mmol)。在室温下搅拌该反应混合物过夜。将该溶液冷却到0℃，用1N HCl中和，蒸发有机部分。将EtOAc(50mL)和NaHCO₃饱和溶液(50ml)加入残留物，搅拌1小时。用水、盐水洗涤有机部分，用Na₂SO₄干燥，蒸发干燥。在硅胶上纯化残留物，产生标题化合物。

Boc-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-Cbz·2HCl的去保护：

根据上述去保护总方法使Boc-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-Cbz去保护，产生X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-Cbz·2HCl。

实施例94.合成Boc-A-B-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-Cbz：

将Boc-A-B-OSu(1.1mmol)加入X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-Cbz·2HCl(1mmol)和NMM(10mmol)的DMF溶液(10mL)，在室温下搅拌该反应混合物过夜。减压蒸发溶剂，将NaHCO₃饱和溶液(20mL)加入残留物，剧烈搅拌2-3小时。过滤掉沉淀，用水彻底洗涤残留物，干燥。

实施例95.合成Boc-A-B-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-NH2：

将Boc-A-B-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-Cbz和Pd/C(25重量％)的EtOH(20ml/gm)和己烷(10ml/gm)悬液加热回流30分钟。将该反应混合物冷却到室温并过滤。蒸发滤出液至干燥，产生标题化合物。

实施例96.合成Boc-A-B-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-C-D-Boc(A，B，C，D，X，Y＝氨基酸)：

将NMM(5mmol)和Boc-D-C-OSu(1.1mmol)加入Boc-A-B-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-NH₂(1mmol)的DMF溶液(10mL)，在室温下搅拌该反应混合物过夜。减压蒸发溶剂，将NaHCO₃饱和溶液加入残留物中，搅拌1小时。过滤白色沉淀，用水洗涤并干燥。

Boc-A-B-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-C-D-Boc的去保护：

去保护与上述总方法相同。过夜进行去保护，产生A-B-X-O⁶-羟考酮-O¹⁴-Y-C-D·3HCl。

例子：

(Ile-Tyr-Val)-羟考酮-(Val-Glu-Gly)

(Leu-Tyr-Val)-羟考酮-(Val-Glu-Gly)

单取代的单个氨基酸(烯醇酯)

图151描述了羟考酮。

实施例97.Phe-羟考酮

将LiN(TMS)₂(3.5当量)加入羟考酮-游离碱(1.0当量)的四氢呋喃(THF)溶液(10ml/mmol)中。5分钟后，加入Boc-Phe-OSu(3.5当量)。在室温下搅拌该反应18小时，用水终止反应，去除溶剂。用反相HPLC纯化保护的粗产物。用4N HCl的二噁烷溶液(20ml/mmol)进行去保护，得到Phe-羟考酮。

实施例98.合成Ile-羟考酮

以类似于实施例97的方式制备Ile-羟考酮，除了用Boc-Ile-Osu作为氨基酸起始材料。

单取代的三肽(烯醇酯)

实施例99.Pro₂-Leu-羟考酮

将4-甲基吗啉(10eq)和Boc-Pro-Pro-OSu(2当量)加入Leu-羟考酮(1.0当量)的二甲基甲酰胺(10ml/0.1mmol)溶液。在室温下搅拌该反应18小时，用水终止反应，去除溶剂。用反相HPLC纯化保护的粗产物。用4N HCl的二噁烷溶液(20ml/mmol)进行去保护，得到Pro₂-Leu-羟考酮.

实施例100.合成Pro₂-Ile-羟考酮

以类似于实施例99的方式制备Pro₂-Ile-羟考酮，除了用Ile-羟考酮作为偶联的起始材料。

实施例101.羟考酮双取代的三肽

总合成方法

合成[Boc-Val]₂-OC：

将LiN(TMS)₂(19.41ml，19.41mmol)加入OC(2.04g，6.47mmol)的四氢呋喃(THF)溶液(～35ml)中，搅拌～30分钟。向其中一次性加入固体Boc-Val-OSu(6.72g，21mmol)，在室温下搅拌该反应混合物过夜。用1N HCl中和该溶液和减压去除THF。用乙酸乙酯(EtOAc)(200mL)稀释残留物，加入NaHCO₃饱和溶液(150mL)，搅拌1小时。用NaHCO₃和盐水洗涤EtOAc部分。用Na₂SO₄干燥，蒸发干燥。用硅胶柱(30％EtOAc/己烷)纯化粗产物。

去保护：对2.5克[Boc-Val]₂-OC的去保护而言，采用75-80mL 4N HCl/二噁烷。在3-4小时内完成反应。蒸发二噁烷，真空下干燥至少24小时。

偶联：将NMM(10-12当量)和Boc-X-Y-OSu(2.6当量)加入Val₂-OC·3HCl(250mg，0.4mmol)的DMF溶液(10-12mL)。在室温下搅拌该反应混合物过夜。减压蒸发溶剂。将NaHCO₃饱和溶液(～30mL)加入残留物，搅拌1小时。过滤白色/浅黄色残留物，用水彻底洗涤，在真空炉中、室温下干燥。

去保护：去保护方法如上。对于100-200mg三肽衍生物而言，采用10-15ml 4NHCl/二噁烷。去保护持续18小时。

含有苏氨酸和丝氨酸的三肽衍生物的去保护：将三肽衍生物溶解于95％TFA(5％水)中，在室温下搅拌4小时。蒸发溶剂，将残留物与甲苯共同蒸发两次，在真空下干燥。加入4N HCl/二噁烷，搅拌过夜。将产物蒸发到干燥，在真空下干燥。

实施例102.羟考酮分支的氨基酸链

总合成

图152描述了具有赖氨酸支链肽的羟考酮。

实施例103.(Lys)₂-羟考酮

方法类似于其它单个氨基酸衍生物，除了用Boc-Lys(Boc)-Osu作为氨基酸起始材料。

实施例104.XX-Lys(XX)-羟考酮

将4-甲基吗啉(5.5当量)加入(Lys)₂-羟考酮(1.0当量)的二甲基甲酰胺(1ml/mmol)溶液，然后加入Boc-XX₂-OSu(4.1)。在室温下搅拌反应24小时。去除溶剂，用反相HPLC纯化粗产物。

实施例105.合成[Gly₂-Lys(-Gly₂)]₂-羟考酮

以类似于实施例104的方式制备[Gly₂-Lys(-Gly₂)]₂-羟考酮，除了用Boc-Gly₂-Osu作为氨基酸起始材料。

实施例106.羟考酮D-氨基酸

总合成

以类似于双取代的三肽偶联物的方式制备双取代的D-氨基酸三肽，除了氨基酸起始材料用非天然D-氨基酸。

[(1)-Lys-(d)-Lys-Leu]₂-羟考酮

将4-甲基吗啉(10当量)加入(Leu)₂-羟考酮(1.0当量)的二甲基甲酰胺(1ml/mmol)溶液中，然后加入Boc-(1)-Lys(Boc)-(d)-Lys(Boc)-OSu(3当量)。在室温下搅拌反应24小时。去除溶剂，用反相HPLC纯化粗产物。

实施例107.合成的氨基酸

合成[Boc-Z]₂-OC[其中Z可等于环己基丙氨酸(Cha)、二丙基甘氨酸(Dpg)、叔亮氨酸(Tle)或任何其它合成氨基酸]

将LiN(TMS)₂(19.41mmol)加入OC(6.47mmol)的THF溶液，搅拌～30分钟。向其中一次性加入固体Boc-Z-OSu(21mmol)，在室温下搅拌该反应混合物过夜。用1NHCl中和该溶液，减压去除THF。用乙酸乙酯(EtOAc)稀释残留物，加入NaHCO₃饱和溶液，搅拌1小时。用NaHCO₃和盐水洗涤EtOAc部分。用Na₂SO₄干燥，蒸发干燥。用硅胶柱(30％EtOAc/己烷)纯化粗产物。

实施例108.非标准氨基酸(天然存在的，非标准20个氨基酸)

合成[Boc-N]₂-OC[其中N可等于正亮氨酸(Nle)、高苯丙氨酸(hPhe)或任何其它非标准氨基酸]

将LiN(TMS)₂(19.41mmol)加入OC(6.47mmol)的THF溶液中，搅拌～30分钟。向其中一次性加入固体Boc-N-OSu(21mmol)，在室温下搅拌该反应混合物过夜。用1N HCl中和该溶液，减压去除THF。用乙酸乙酯(EtOAc)稀释残留物，加入NaHCO₃饱和溶液，搅拌1小时。用NaHCO₃和盐水洗涤EtOAc部分。用Na₂SO₄干燥，蒸发干燥。用硅胶柱(30％EtOAc/己烷)纯化粗产物。

其它羟考酮偶联物

实施例109.糖肽

用半乳糖和多种三肽，将产生糖肽。

产生的起始糖肽

(Gal-Gly₂-Ile)₂-OC

(Gal-Pro₂-Ile)₂-OC

(Gal-Gly₂-Leu)₂-OC

(Gal-Pro₂-Leu)₂-OC

实施例110.羟考酮的糖基化

图153描述了糖基化的羟考酮。

尝试进行羟考酮与碳水化合物的糖基化反应。产生的连接主要是难以进行化学切割的烯醇醚，但在体内糖苷键通常会断裂。可以在一个位点或两个位点上偶联。

实施例111.与丝氨酸形成烯醇醚

图154描述了与丝氨酸形成的烯醇醚。

用丝氨酸和OC，将产生烯醇醚偶联物。此偶联物在大部分水解条件下稳定。在此反应中仅形成烯醇醚。

实施例112.维生素

图155描述了烟酸和生物素。

维生素可用于给肽链加帽或使肽链进一步功能化。可将烟酸和生物素偶联于四种不同的二肽。

制备的偶联物

(Nia-Gly₂-Ile)₂-OC

(Nia-Gly₂-Leu)₂-OC

(Bio-Gly₂-Ile)₂-OC

(Bio-Gly₂-Leu)₂-OC

图156-192说明了ELISA测定的羟考酮的血浆水平。

实施例113.羟考酮偶联物的口服C_max降低

随意地给雄性Sprague-Dawley大鼠提供水，禁食过夜，经口强饲法给予羟考酮偶联物或羟考酮盐酸盐。所有剂量含有等效量的羟考酮基。用ELISA(羟吗啡酮，102919，Neogen，Corporation，Lexington，KY)测定血浆羟考酮浓度。该测定是羟吗啡酮(主要的羟考酮代谢物)和羟考酮特异性的。血浆浓度-时间曲线见图156-174。这些实施例说明，当通过口服途径给药时，与等摩尔(以羟考酮计)剂量的羟考酮盐酸盐产生的峰值水平(C_max)相比，这些羟考酮偶联物剂量降低了羟考酮加羟吗啡酮的峰值水平(C_max)。

实施例114.接近治疗性人剂量(2.5mg/kg)的肽-羟考酮偶联物的口服生物利用度

此实施例说明当肽PPL(表74，图193)偶联于(在6和14位双取代)活性物质羟考酮，给药剂量是1mg/kg时，与等摩尔羟考酮剂量相比能保持口服生物利用度。根据Chou等，此剂量等效于25-35mg的人(体重70千克(148磅)的个体)剂量。

               表74.羟考酮与P2L₍₂₎-OC(剂量2.5mg/kg)的口服药代动力学特征。

  药物  小时  AUC(ng/ml h)  0-8h  百分数  OC  Cmax  ng/ml  百分数  OC  0.5  1.5  3  5  8  羟考酮酒石酸氢盐  145  27  11  2  1  168  100  145  100  PPL(2)-OC  124  78  46  1  3  278  165  124  86

羟考酮加羟吗啡酮

实施例115.鼻内途径给予的P2L₍₂₎-羟考酮的生物利用度

此实施例说明，当PPL(2)偶联于活性物质羟考酮时，鼻内途径的生物利用度大大降低，从而降低了用药过量的可能性(表75，图194)。

                         表75.羟考酮与P2L₍₂₎-OC(剂量1mg/kg)的鼻内药代动力学特征。

  药物  分钟  AUC(ng/ml h)  0-1h  百分数  OC  Cmax  ng/ml  百分数  OC  5  15  30  60  羟考酮酒石酸氢盐  2128  1003  688  278  428  100  2128  100  PPL(2)-OC  1380  499  390  98  261  61  1380  65

羟考酮加羟吗啡酮

实施例116.静脉内途径给予的P2L₍₂₎-羟考酮的生物利用度

此实施例说明，当P2L₍₂₎偶联于活性物质羟考酮时，静脉内途径的生物利用度大大降低，从而降低了用药过量的可能性(表76，图195)。

                   表76.羟考酮与P2L₍₂₎-OC(剂量1mg/kg)的静脉内药代动力学特征。

  药物  分钟  AUC(ng/ml h)  0-1h  百分数  OC  Cmax  ng/ml  百分数  OC  5  15  30  60  羟考酮酒石酸氢盐  99  104  94  51  82  100  99  100  PPL(2)-OC  22  19  19  43  24  29  43  43

羟考酮加羟吗啡酮

耐滥用的羟考酮偶联物的体内测试小结。

羟考酮偶联物的体内测试证明，例如，口服C_max降低、鼻内生物利用度(AUC和C_max)降低和静脉内生物利用度(AUC和C_max)降低，下文进一步详述如下。

实施例117.羟考酮偶联物的鼻内生物利用度(AUC和C_max)降低

随意地给雄性Sprague-Dawley大鼠提供水，通过将0.02ml含有羟考酮偶联物或羟考酮酒石酸氢盐的水放入鼻孔给药。所有剂量含有等效量的羟考酮基。用ELISA(羟吗啡酮，102919，Neogen，Corporation，Lexington，KY)测定血浆羟考酮浓度。该测定是羟吗啡酮(主要的羟考酮代谢物)和羟考酮特异性的。各种羟考酮偶联物与羟考酮盐酸盐的血浆浓度-时间曲线见图175-192。这些实施例说明，当通过鼻内途径给药时，与等摩尔(以羟考酮计)剂量的羟考酮盐酸盐产生的峰值水平(C_max)和总吸收(AUC)相比，羟考酮偶联物降低了羟考酮加羟吗啡酮的峰值水平(C_max)和总吸收(AUC)。

实施例118.羟考酮偶联物的静脉内生物利用度(AUC和C_max)降低

随意地给雄性Sprague-Dawley大鼠提供水，通过静脉内尾静脉注射0.1ml含有羟考酮偶联物或羟考酮盐酸盐的水给药。所有剂量含有等效量的羟考酮基。用ELISA(羟吗啡酮，102919，Neogen，Corporation，Lexington，KY)测定血浆羟考酮浓度。该测定是羟吗啡酮(主要的羟考酮代谢物)和羟考酮特异性的。羟考酮偶联物与羟考酮盐酸盐的血浆浓度-时间曲线见图195。该实施例说明，当通过静脉内途径给药时，与等摩尔(以羟考酮计)剂量的羟考酮盐酸盐产生的峰值水平(C_max)和总吸收(AUC)相比，羟考酮偶联物降低了羟考酮加羟吗啡酮的峰值水平(C_max)和总吸收(AUC)。

  口服2mg/kg  鼻内2mg/kg  ％AUC  ％Cmax  ％AUC  ％Cmax  [Gly-Glu-Val]₂-OC  93  61  29  48  [Pro-Glu-Val]₂-OC  90  82  34  46  [Glu-Pro-Val]₂-OC  142  134  56  65  [Ser-Gly-Val]₂-OC  90  92  64  73  [Glu-Tyr-Val]₂-OC  115  103  18  20  [Gly-Tyr-Val]₂-OC  92  99  56  54  [Ile-Tyr-Val]₂-OC  71  82  3  4  [Leu-Tyr-Val]₂-OC  131  120  4  5

OC＝羟考酮

总而言之，实施例33至118说明应用本发明来降低麻醉性镇痛药的用药过量可能性。这些实施例确定，活性物质可通过连接化学部分而被共价修饰，以在大大降低或清除通过口服、鼻内、或静脉内途径给予活性物质的用药过量可能性的情况下，在正常的剂量范围中维持治疗值。