公开/公告号CN1903870A
专利类型发明专利
公开/公告日2007-01-31
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申请/专利权人 长春华普生物技术有限公司;
申请/专利号CN200510085562.1
申请日2005-07-28
分类号C07H21/04(20060101);A61K31/7088(20060101);A61K48/00(20060101);A61P31/12(20060101);A61P1/16(20060101);
代理机构
代理人
地址 130021 吉林省长春市新民大街4-28/1102-54号
入库时间 2023-12-17 18:12:30
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2022-11-25
专利权人的姓名或者名称、地址的变更 IPC(主分类):C07H21/04 专利号:ZL2005100855621 变更事项:专利权人 变更前:华普生物技术(江苏)股份有限公司 变更后:华普生物技术(河北)股份有限公司 变更事项:地址 变更前:214142 江苏省无锡市新吴区长江南路35-501号301室 变更后:051430 河北省石家庄市高新技术产业开发区太行南大街769号A2栋7-9层
专利权人的姓名或者名称、地址的变更
2022-03-04
专利权人的姓名或者名称、地址的变更 IPC(主分类):C07H21/04 专利号:ZL2005100855621 变更事项:专利权人 变更前:南京华普生物技术股份有限公司 变更后:华普生物技术(江苏)股份有限公司 变更事项:地址 变更前:210061 江苏省南京市高新技术产业开发区新锦湖路3-1号中丹生态生命科学产业园B座1208-1210室 变更后:214142 江苏省无锡市新吴区长江南路35-501号301室
专利权人的姓名或者名称、地址的变更
2016-11-09
专利权人的姓名或者名称、地址的变更 IPC(主分类):C07H21/04 变更前: 变更后: 申请日:20050728
专利权人的姓名或者名称、地址的变更
2012-03-14
授权
授权
2008-09-17
实质审查的生效
实质审查的生效
2007-01-31
公开
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发明领域
本发明提供一批对病毒感染性疾病包括但不限于对由乙型肝炎病毒感染引起的乙型肝炎有治疗作用的单链脱氧核苷酸(oligonucleotide，以下简称oligo)这些单链脱氧核苷酸能刺激人的细胞产生抗病毒的物质，这些抗病毒物质能够抑制病毒包括但不限于乙型肝炎病毒的复制，因而对病毒感染性疾病包括但不限于由乙型肝炎病毒引起的乙型肝炎有治疗作用。
发明背景
病毒是一类体积微小，结构相对简单，只能在活细胞内以复制方式增殖的非细胞型微生物。病毒的结构包括核酸、壳粒和包膜。病毒的核酸，即病毒的基因组是病毒的核心，决定病毒遗传、变异和复制。壳粒和胞膜起到保护病毒核心的作用，并具有抗原性。根据病毒核酸的类型，将病毒分为DNA病毒、RNA病毒。DNA病毒包括双链DNA病毒和单链DNA病毒；RNA病毒包括单正链RNA病毒、单负链RNA病毒和双链RNA病毒及逆转录病毒。DNA病毒包括但不限于：乙型肝炎病毒、TTV病毒、腺病毒、乳头瘤病毒、带状疱疹病毒、天花病毒和牛痘病毒等。RNA病毒包括但不限于：流感病毒、猪瘟病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、狂犬病毒、埃博拉病毒、肠道病毒和人免疫缺陷病毒等。
病毒性肝炎是由肝炎病毒(Hepatitis Virus)所引起的传染性肝脏炎症性疾病。引起病毒性肝炎的病毒有七种类型，即甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus，HAV)、乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)、丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)、丁型肝炎病毒(Hepatitis D virus，HDV)、戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus，HEV)、庚型肝炎病毒(Hepatitis G virus，HGV)以及TTV(即输血传播病毒性肝炎病毒)，它们能够分别引起甲型、乙型、丙型、丁型、戊型、庚型和TTV肝炎。
甲型肝炎病毒(HAV)为球形、无包膜、单链RNA病毒。甲型病毒性肝炎简称甲型肝炎，是由HAV引起的一种肠道传染病(Atmar，R.L.，et al.Detection of enteric viruses inoyster by using the polymerase chain reaction.Appl.Environ.Microbiol.1993，59：631-635.)。急性甲型肝炎发病的症状有发烧、食欲下降、无力、肝肿大及肝功能异常等。只有少数急性甲型肝炎患者出现黄疸。甲型病毒性肝炎一般不转为慢性和病原携带状态。甲型肝炎病人自潜伏末期至发病后10天内传染性最大。甲型肝炎一般发生于儿童和青少年，在成人中较少见，一般潜伏期为2～6周。冬春两季节是甲型肝炎发病的高峰期(JENNIFER A.CUTHBERT et al.Hepatitis A：Old and New.CLINICAL MICROBIOLOGY REVIEWS，Jan.2001，p.38-58)。
丙型肝炎病毒(HCV)是直径约50～60nm，有脂类包膜的黄病毒属，单股正链RNA病毒。丙型肝炎主要通过血液和血液制品传播。有资料表明，90％因输血而感染的肝炎都属丙型肝炎(JANICE M.MATTHEWS-GREER，et al.Comparison of Hepatitis C Viral Loads in Patientswith or without Human Immunodeficiency Virus.CLINICAL AND DIAGNOSTIC LABORATORYIMMUNOLOGY，July 2001，p.690-694；骆抗先等，丙型肝炎病毒的亚型及其可能的含义。临床肝胆病杂志，1994，10(2)：61-62。)丙型肝炎与肝硬化和肝细胞癌的发生密切相关(NIZARN.ZEIN.Clinical Significance of Hepatitis C Virus Genotypes.CLINICAL MICROBIOLOGYREVIEWS，2000，p.223-235；杨永平等，从中国病人克隆丙型肝炎病毒基因组C区基因及其在大肠杆菌中的表达。病毒学报，1994，10(2)：109-117)。
丁型肝炎病毒(HDV)是一种缺陷病毒，其核酸为单负链环状RNA(Theo Heller and Jay H.Hoofnagle.Denying the wolf access to sheep’s clothing.J.Clin.Invest.2003.112：319-321)。HDV作为一种缺陷病毒需要嗜肝DNA病毒(如HBV)的帮助才能完成其生活周期。丁型肝炎病毒的传播方式与乙型肝炎病毒相似，以垂直传播、性接触和体液传播等为主要的传播方式(Rizzetto，M.，et al.1980.Transmission of the hepatitis B virus-associated deltaantigen to chimpanzees.J.Infect.Dis.141：590-602)。感染HDV能够加重HBV感染者的临床症状(Hadler，S.C.et al．Delta virus infection and severe hepatitis.An epidemicin the Yucpa Indians of Venezuela.Ann.Intern.Med.1984.100：339-344.)。
戊型肝炎病毒(HEV)是球形无包膜病毒，直径为32-34nm，其核酸为单正链RNA，含有3个阅读框架(Reyes，G.R.，et al.Isolation of a cDNA from the virus responsible forenterically transmitted non-A，non-B hepatitis.Science.1990，247：1335-1339；Reyes，G.R.，et al.Hepatitis E virus(HEV)：the novel agent responsible for entericallytransmitted non-A，non-B hepatitis.Gastroenterol.Jpn.1991，26(Suppl.3)：142-147.)。戊型肝炎与甲型肝炎一样，都是通过粪口途径传播，因为水源被污染而引起大型爆发及流行。戊型肝炎产生的病理损害比甲型肝炎明显，恢复缓慢。
庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C)是黄病毒科有包膜的、单股正链RNA病毒，主要在肝内复制，主要通过血液制品、静脉注射毒品、性接触及母婴垂直传播，庚型肝炎病毒能够引起急慢性肝炎，甚至与肝癌和肝硬化的发生密切相关(Schmidt，B.，K.Korn，and B.Fleckenstein.Molecular evidence for transmission of hepatitis G virus by blood transfusion.Lancet.1996，347：909；Iban~ez，A.，M.Gime′nez-Barcons，et al.Prevalence and genotypes ofGB virus C/hepatitis G virus(GBV-C/HGV)and hepatitis C virus(HCV)among humanimmunodeficiency virus(HIV)infected patients：evidence of GBV-C/HGV sexualtransmission.J.Med.Virol.1998，55：293-299；王咏梅，庚型肝炎的研究现状。预防医学情报杂志，2001，17(4)：257-258；孙柯儿等，庚型病毒肝炎研究近况。国外医学病毒学分册，1997，4(2)：33-36.)。
病毒性肝炎输血传播病毒(transfusion transmitted virus，TTV)是无包膜的、单链的DNA病毒(C.-L.lin，et al.Fecal Excretion of a Novel Human Circovirus，TT Virus，inHealthy Children.Clinical and diagnostic laboratory immunology，2000，p.960-963)。TTV病毒的基因组为环状的DNA(Isa k.Mushahwar，et al.Molecular and biophysicalcharacterization of TT virus：Evidence for a new virus family infecting humans.Proc.Natl.Acad.Sci.USA Vol.96，pp.3177-3182，March 1999.Microbiology)。TTV病毒可以通过性接触、垂直传播等方式进行传播，TTV感染者的临床症状较轻(Claudia Fornai，et al.High Prevalence of TT Virus(TTV)and TTV-Like Minivirus in Cervical Swabs.JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY，2001，p.2022-2024)。
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)属嗜肝DNA病毒科的一种DNA病毒。完整的HBV由包膜与核心两部分组成。乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是包膜的主要成分。HBsAg在肝细胞内合成，大量释放入血液循环中，本身并无传染性。核心部分含有不完全环状双股的DNA、DNA聚合酶、核心抗原(HBcAg)和e抗原(HBeAg)，具有传染性。乙型病毒肝炎是由乙型肝炎病毒引起的严重威胁人类健康的、肝脏炎性损害疾病。截止到2004年，全球范围内已经有4亿人感染了乙型肝炎病毒(Lin KW，Kirchner JT.Hepatitis B.Am FamPhysician，2004 Jan 1，69(1)：75-82.)，其中，亚洲人占多数。
为了在细胞水平研制对乙型肝炎病毒感染有治疗作用的药物，Mary ann sells等人构建了HepG2.2.15细胞。HepG2.2.15细胞是稳定转染了HBV基因组的肝癌细胞(HepG2细胞)，能够稳定分泌HBsAg、HBeAg及Dane颗粒。HepG2细胞在长期的传代培养过程中，仍能较好地保持了正常肝细胞的许多功能，如能够保证HBV在其中的正常复制，表达干扰素、Toll样受体等多种受体(Volker Mersch-Sundermann.Use of a human-derived liver cell line for thedetection of cytoprotective，antigenotoxic and cogenotoxic agents.Toxicology，2004，198：329-340；Mary ann sells，Mei-long chen，and George_acs.Production of hepatitisB virus particles in Hep G2 cells transfected with cloned hepatitis B virus DNA.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1987，84：1005-1009)。研究表明，抗病毒物质包括但不限于干扰素能够与HepG2.2.15细胞的相应受体结合，进而发挥抗病毒的作用。干扰素在作用于HepG2.2.15细胞表面的相应受体后可通过复杂的细胞内信号转导诱导细胞产生干扰素调节因子1(IFNregulatory factor 1，IFN-1)、RNA酶L(RNase L)和双链RNA激活的蛋白激酶(double-strandedRNA activated protein kinase，PKR)等的表达来发挥抗病毒包括但不限于HBV的活性(Bachmaier，K.et al.IiNOS expression and nitrotyrosine formation in the myocardiumin response to inflammation is controlled by the interferon regulatory transcriptionfactor 1.Circula tion，1997，96：585-591；Pitha，P.M.，et al.Role of the interferonregulatory factors in virus-mediated signaling and regulation of cell growth.Biochimie，1998，80：651-658；Zhou，A.et al.Expression cloning of2-5A-dependentRNAase：uniquely regulated mediator of interferon action.Cell，1993，72：753-765)。采用HepG2.2.15细胞做体外实验，抗病毒物质的活性可表现为细胞培养上清中的HBsAg、HBeAg及HBV核酸的含量下降。因此，HepG2.2.15细胞是一种研究抗HBV药物、制剂的较好的细胞模型。在本发明中，我们采用单链脱氧核苷酸诱导的人外周血单个核细胞(PBMC)培养上清和HepG2.2.15细胞作用，根据在上清中检测到的HBsAg、HbeAg和HBV核酸的含量来判定单链脱氧核苷酸的抗肝炎病毒的的生物学作用。
本发明中所述的单链脱氧核苷酸可经多种化学修饰。这些化学修饰包括但不限于磷酸骨架修饰、糖环修饰和碱基修饰。磷酸骨架的修饰可以是硫代修饰。硫代修饰是指核苷酸片段中磷酸二酯键中的非桥氧原子被硫原子取代(Ekambar R.Kandimalla et al.Mixed backboneantisense oligonucleotides：design，biochemical and biological properties ofoligonucleotides containing 2-5-ribo-and3-5-deoxyribonucleotide segments.Nucleic Acids Research，1997，25(2)：370-378)，这种取代可发生脱氧核苷酸部分或全部的磷酸二酯键。磷酸骨架的修饰可以是通过形成其它类型的磷酸脂键实现，这些磷酸脂包括但不限于甲基磷酸酯、硒代磷酸酯、甲硼基磷酸酯和双硫代磷酸酯。糖环修饰可以是对戊糖的2′位进行修饰。戊糖的2′位修饰包括但不限于甲氧基、甲氧乙氧基、丙烯氧基和氟代修饰(Ernst Urban，Christian R.Noe.Structural modifications of antisenseoligonucleotides.Il Farmaco.2003，58：243_258)。碱基修饰主要指单链脱氧核苷酸中包含稀有碱基(Xiaolan Chen，Nancy Dudgeon，Long Shen and Jui H.Wang.Drug DiscoveryTarget，2005，10(8)：587-593)，稀有碱基是指除A、G、C、U外的一些碱基，包括双氢尿嘧啶(DHU)、假尿嘧啶(Ψ，pseudouridine)和甲基化的嘌呤(mG，mA)等。一般的嘧啶核苷以杂环上N-1与糖环的C-1’连成糖苷键，假尿嘧啶核苷则用杂环上的C-5与糖环的C-1’相连。
单链脱氧核苷酸碱基的添加是指在本发明所提供的单链脱氧核苷酸的一端或两端添加了1到10个碱基所形成的单链脱氧核苷酸。两端的删切是指在本发明所提供的单链脱氧核苷酸的一端或两端删切一个或数个碱基所形成的单链脱氧核苷酸。
单链脱氧核苷酸碱基的改变是指将本发明所提供的单链脱氧核苷酸的碱基改变形成的单链脱氧核苷酸。
单链脱氧核苷酸包括但不限于附序列表所示的序列和实施例2所出示的序列及其根据实施例2所示公式所能推出的序列。
本研究证明：单链核苷酸刺激人PBMC的培养上清能够抑制HepG2.2.15细胞产生HBsAg，HBeAg和HBV的核酸。因而本发明提供的结果表明，单链核苷酸可抑制病毒的复制，对病毒感染有治疗作用，这些病毒包括但不限于HBV。
本发明的单链脱氧核苷酸可用于病毒感染性疾病的治疗，引起这些病毒感染性疾病的病毒包括但不限于乙型肝炎病毒、TTV病毒、腺病毒、乳头瘤病毒、带状疱疹病毒、天花病毒和牛痘病毒、流感病毒、猪瘟病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、狂犬病毒、埃博拉病毒、肠道病毒和人免疫缺陷病毒。
发明内容
本发明的目的之一是提供人工合成的单链脱氧核苷酸，这些单链脱氧核苷酸可用于治疗病毒感染性疾病，引起这类病毒感染的病毒包括但不限于乙型肝炎病毒。
本发明的目的之二是提供用任何单链脱氧核苷酸治疗治疗病毒感染性疾病的技术方法和技术设想，引起这类病毒感染的病毒包括但不限于乙型肝炎病毒。
本发明的目的之三是提供用对病毒感染性疾病有治疗作用的单链脱氧核苷酸序列，病毒感染性疾病包括但不限于乙型肝炎病毒引起的病毒感染性疾病，这些序列是可经化学修饰的核心序列，这些化学修饰包括但不限于磷酸骨架修饰、糖环修饰和碱基修饰。这些单链脱氧核苷酸是两端和中间可加上/入或改动碱基所产生的单链脱氧核苷酸的核心结构。
下面结合具体的制备实施例和生物学效果实施例，并参照附图进一步详细地描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
实施例
在如下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法，例如合成采用固相亚磷酰胺三酯法。
在如下实施例中，所用试剂的来源、商品名和/或有必要列出其组成成分者，均只标明一次。在其后所用相同试剂如无特殊说明，不在赘述上述内容。
实施例1、单链脱氧核苷酸的合成
采用固相亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，此方法具有高效、快速等优点，已在DNA化学合成中广泛使用。
DNA化学合成不同于酶促的DNA合成，酶促的DNA合成过程是从5’→3’方向延伸，而DNA化学合成是由3’端开始。具体的反应步骤如下：
一、脱保护基
用三氯乙酸脱去连结在CPG(Controlled Pore Glass)上的核苷酸的保护基团DMT(二甲氧基三苯甲基)，获得游离的5’-羟基端，以供下一步缩合反应使用。
二、活化
将亚磷酰胺保护的核苷酸单体与四氮唑活化剂混合并进入合成柱，形成亚磷酰胺四唑活性中间体(其3’-端已被活化，但5’-端仍受DMT保护)，此中间体将与GPG上的已脱保护基的核苷酸发生缩合反应。
三、连接
亚磷酰胺四唑活性中间体遇到CPG上已脱保护基的核苷酸时，将与其5’-羟基发生亲合反应，缩合并脱去四唑，此时合成的寡核苷酸链向前延长一个碱基。
四、封闭
缩合反应后为了防止连在CPG上的未参与反应的5’-羟基在随后的循环反应中被延伸，常通过乙酰化来封闭此端羟基，一般乙酰化试剂是用乙酸酐和N-甲基咪唑等混合形成的。
五、氧化
缩合反应时核苷酸单体是通过亚磷酯键与连在CPG上的寡核苷酸连接，而亚磷酯键不稳定，易被酸、碱水解，此时常用碘的四氢呋喃溶液将亚磷酰转化为磷酸三酯，从而得到稳定的寡核苷酸。
经过以上五个步骤后，一个脱氧核苷酸就被连到CPG的核苷酸上，同样再用三氯乙酸脱去新连上的脱氧核苷酸5’-羟基上的保护基团DMT后，重复以上的活化、连接、封闭、氧化过程即可得到一个DNA片段粗品。最后对其进行切割、脱保护基(一般对A、C碱基采用苯甲酰基保护；G碱基用异丁酰基保护；T碱基不必保护；亚磷酸用腈乙基保护)、纯化(常用的有HAP，PAGE，HPLC，C18，OPC等方法)、定量等合成后处理即可得到符合实验要求的寡核苷酸片段。
实施例2、程序设计
设计序列如下：
1、符合(G)n(L)n X1X2CGY1Y2(M)n(G)N公式的人工合成的单链脱氧核苷酸(X1＝A，T，G；X2＝A，T；Y1＝A，T；Y2＝A，T，C；L，M＝A，T，C，G；n为0-6)
1. 5’-ggggTCgTTCgTCgTTgggggg-3’
2. 5’-ggggATAACgTTgCgggggg-3’
3. 5’-ggggTgCAACgTTCAgggggg-3’
4. 5’-ggggTCCTACgTAggAgggggg-3’
5. 5’-ggggTCCATgACgTTCCTgAAgggggg-3’
6. 5’-gggggACgTCgCCggggggg-3’
7. 5’-ggATCCgTACgCATgggggg-3’
8. 5′-gggggAATCgATTCgggggg-3′
9. 5′-gggATgCATCgATgCATCgggggg-3′
10. 5′-ggTgCgACgTCgCAgggggg-3′
11. 5′-gggACgTACgTCgggggg-3′
12. 5′-gggggATCgACgTCgATCgggggg-3’
13. 5′-ggCgATCgATCgATCggggggg-3′
14. 5’-ggggTCgATCgATCgAgggggg-3′
15. 5’-ggTCgCgATCgCgAgggggg-3’
16. 5’-ggGGTCAACGTTGAgggggG-3’
17. 5’-gTCgTTTTCgTCgACgAATTgggggggg-3’
18. 5’-gTCgTTATCgTTTTTTCgTAgggggg-3’
19. 5’-ggCgTTAACgACgggggg-3’
20. 5’-gTCggCACgCgACgggggg-3’
21. 5’-ggTgCgACgTCgCAgggggg-3’
22. 5’-gTCTATTTTgTACgTACgTgggg-3’
23. 5’-gACgTCgACgTCgACgTCAggggg-3’
24. 5’-ggggTCgATCgTTgCTAgCgggggg-3’
25. 5’-gggggACgTTATCgTATTggggggg-3’
26. 5’-ggggTCgTCgTTTgTCgTgTgTCgTTgggggg-3’
27. 5’-ACgATCgATCgATCgggggg-3’
28. 5’-AgACgTCTAACgTCggggg-3’
29. 5’-ggggTgCTggCCgTCgTTgggggg-3’
30. 5’-ggggTCgTTgCCgTCgggggg-3’
31. 5’-ACCggTATCgATgCCggTgggggg-3’
32. 5’-TTCgTTgCATCgATgCATCgTTgggggg-3’
2、符合(G)n(L)nCG(XY)nCG(M)n(G)n公式的人工合成的单链脱氧核苷酸(X＝A，T；Y＝A，T；L，M＝A，T，C，G；n为0-6)
33. 5’-ggggACgATACgTCggggggg-3’
34. 5’-ggggACgATATCgATgggggg-3’
35. 5′-ggACgATCgATCgTgggggg-3′
36. 5′-TCggggACgATCgTCgggggg-3′
37. 5′-gggggATCgATATCgATCgggggg-3′
38. 5′-ggATCgATCgATCgATgggggg-3′
39. 5′-ggTgCATCgATCgATgCAgggggg-3′
40. 5′-ggTgCATCgTACgATgCAgggggg-3′
41. 5’-ggTgCgATCgATCgCAgggggg-3′
42. 5’-gggggggTCgATCgATgggggg-3’
43. 5’-ggggTCgTCgAACgTTgggggg-3’
44. 5’-TgTCgTTCCTTgTCgTT-3’
45. 5’-TTCgCTTCgCTTTTCgCTTCgCTT-3’-3’
46. 5’-ACCgCCAAggAgAAgCCgCAggAggg-3’
47. 5’-TACAACggCgAggAATACC-3’
48. 5’-gTACAACggCgAggAATACCT-3’
49. 5’-ACCgTCgTTgCCgTCggCCC-3’
50. 5’-TgCTggCCgTCgTT-3’
51. 5’-gTCggCACgCgACg-3’
52. 5’-gTCggCACgCgACgCCCCCC-3’
53. 5’-TCCCgCTggACgTT-3’
54. 5’-TTACCggTTAACgTTggCCggCC-3’
55. 5’-ACCggTTAACgTTgTCCCCgggg-3’
56. 5’-CgTTgACgATCgTCCCATggCggg-3’
57. 5’-TCTgCggCCTTCgTCg-3’
58. 5’-TAgTAACCggTCCggCgCCCCC-3’
59. 5’-TTgCAgCgCTgCCggTggg-3’
60. 5’-CggCCCATCgAgggCgACggC-3’
61. 5’-TCATCgACTCTCgAgCgTTC-3’
62. 5’-ATCgTCgACTCTCgTgTTCTC-3’
63. 5’-TgCAgCTTgCTgCTTgCTgCTTC-3’
64. 5’-ggTgCgACgTCgCAgATgAT-3’
65. 5’-ggTCgAACgTTCgAgATgAT-3’
66. 5’-gggggCgTCgTTTTCgTCgACgAATT-3’
67. 5’-actcgagacgcccgttgatagctt-3’
68. 5’-AACgTTggCgTCgACgTCAgCgCC-3’
69. 5’-gACgTCgACgTTgACgCT-3’
70. 5’-ggCgTTAACgTTAgCgCT-3’
71. 5’-AgCgCTAgCgCTgACgTT-3’
72. 5’-CTAgACgTTCAAgCgTT-3’
73. 5’-gACgATCgTCgACgATCgTC-3’
74. 5’-gTCgTTCgTAgTCgACTACgAgTT-3’
75. 5’-AAAAgACgTCgACgTCgACgTCTTTT-3’
76. 5’-TgCgACgATCgTCgCACgATCggAT-3’
77. 5’-TgCgACgTCgCACAgCgT-3’
3、符合(TCG)n(L)nCG(M)n(G)n公式的人工合成的单链脱氧核苷酸(L，M＝A，T，C，G；n为0-6)
78. 5’-TCgTTgCCgTCgg-3’
79. 5’-TCgTTgCCgTCggg-3’
80. 5’-TCgTTgCCgTCgggg-3’
81. 5’-TCgTTgCCgTCggggg-3’
82. 5’-TCgTTgCCgTCgggggg-3’
83. 5’-TCgTTgCCgTCggggggg-3’
84. 5’-TCgTTgCCgTCgggggggg-3’
85. 5’-TCgTTgCCgTCggggggggg-3’
86. 5′-TCgTCgggTgCATCgATgCAgggggg-3′
87. 5’-TCgTCgggTgCAACgTTgCAgggggg-3’
88. 5’-TCgTCgggTgCgTCgACgCAgggggg-3’
89. 5’-TCgTCgggTgCgATCgCAgggggg-3’
90. 5’-TCgTCgggTgCgACgATCgTCgCAgggggg-3’
91. 5’-TCgTCgTgCgACgTCgCAgggggg-3’
92. 5’-TCgTCgCAgAACgTTCTgggggg-3’
93. 5’-TCgTgCgACgTCgCAgggggg-3’
94. 5’-TCgTgCgACgATCgTCgCAgggggg-3’
95. 5’-TCgTATgCATCgATgCATAgggAgg-3’
96. 5’-TCgTgCATCgATgCAgggggg-3’
97. 5’-TCgAAACgTTTCgggggg-3’
98. 5’-TCggACgATCgTCgggggg-3’
99. 5’-TCgAgCgATCgCTCgAgggggg-3’
100. 5’-TCgTCgCTTTgTCgTTgggg-3’
101. 5’-TCgTCgTTTTgTCgTTgggg-3’
102. 5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAg-3’
103. 5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAgg-3’
104. 5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAggg-3’
105. 5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAgggg-3’
106. 5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAggggg-3’
107. 5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAgggggg-3’
108. 5’-TCgTCgggTgCgACgATCgTCgggggg-3’
109. 5’-TCgTCgTTTgCATCgATgCAggggggg-3’
110. 5’-TCgTCgTTTTgACgATCgTCgggggg-3’
111. 5’-TCgTTCggggTgCCg-3’
112. 5’-TCgTTCggggTACCgATgggg-3’
113. 5’-TCgTTgCgCTCCCATgCCgggggg-3’
114. 5’-TCgTCgTTTCgTCgTTgggg-3’
115. 5’-TCgTTgTCgTTTCgCTgCCggCggggg-3’
116. 5’-TgCTTgggTggCAgCTgCCAgggggg-3’
117. 5’-TgCTgCTTTgCTgCTTgggg-3’
118. 5’-AACgTTCgACgTCgAACggggggg-3’
119. 5’-AACgACgACgTTggggg-3’
4、符合(TCG)n(L)nX1X2CG(M)n公式的人工合成的单链脱氧核苷酸(X1＝A，T，G；X2＝A，T；L，M＝A，T，C，G；n为0-6)
120. 5’-TCgTAACgTTgTTTTTAACgTT-3’
121. 5’-TCgTCgTATACgACgATCgTT-3’
122. 5’-TCgTCgTTTgCgTTgTCgTT-3’
123. 5’-TCCTgTCgTTTTgTCgTT-3’
124. 5’-TCgTCgTTgTCgTTCgCT-3’
125. 5’-TCgTCgTTACCgATgACgTCgCCgT-3’
126. 5’-TCgTCgTTTgCATCgATgCAgTCgTCgTT-3’
127. 5’-TCgCCTCgTCgCCTTCgAgC-3’g-3’
128. 5’-TCgTgTgCgTgCCgTTggg-3’T-3’
129. 5’-TCgTCgAgggCgCCggTgAC-3’
130. 5’-TCgTCgCCggTgggggTgTg-3’
131. 5’-TCgTCgTACgCAATTgTCTT-3’
132. 5’-TCgCCCACCggTgggggggg-3’
133. 5’-TCgTCgCAgACCggTCTgggg-3’
134. 5’-TCgTCgCggCCggCgCCCCC-3’
135. 5’-TCgTCgCggCCgCgAggggg-3’
136. 5’-TCgAggACAAgATTCTCgTgC-3’
137. 5’-TCgAggACAAgATTCTCgTgCAggCC-3’
138. 5’-TCgTgCAggCCAACgAggCCg-3’
139. 5’-TCgTTgCCgTCggCCC-3’
140. 5’-TCggCACgCgACgTgCTggCCgTCgTTTCC-3’
141. 5’-TCgTTgCCgTCggCCCCCCCCC-3’
142. 5’-TCgTTgCCgTCggCCCCCC-3’
143. 5’-TCgTTgCCgTCggCCCCC-3’
144. 5’-TCgTTgCCgTCggCCCC-3’
145. 5’-TCgTTgCCgTCggCCCCCCC-3’
146. 5’-TCgAggACAAgATTCTCgT-3’
147. 5’-TCggCACgCgACgTgCTggCCgTCgTT-3’
148. 5’-TCgTCgCgCCgTCACgggggg-3’
149. 5’-TCgTgTgCgTgCCgTTggg-3’
150. 5’-TCgTCgCCgTTgggCggg-3’
151. 5’-TCgTCgACgTCgTTgggCggg-3’
152. 5’-TCgCAgTTgTCgTAACgTTgggCggg-3’
153. 5’-TCgTCgTTggTATgTT-3’
154. 5’-TCgTCgTCgTCgTTgTCgTT-3’
155. 5’-TCgTCgTCgTCgTTgTCgTTgggg-3’
156. 5’-TCgTTCggggTgCCg-3’
157. 5’-TCgTTCggggTAACgATT-3’
158. 5’-TCgTTCggggTAACgTT-3’
159. 5’-TCgTTCggggTACCgAT-3’
160. 5’-TCgTACggCCgCCgTACggCggg-3’
161. 5’-TCgCgTCgACTCCCCTCgAgggg-3’
162. 5’-TCgTCgTCgACTCgTggTCggggg-3’
163. 5’-TCgggCgCCCgATCgggggg-3’
164. 5’-TCgTCggTCTTTCgAAATT-3’
165. 5’-TCgTgACgTCCTCgAgTT-3’
166. 5’-TCgTCTTTCgACTCgTTCTC-3’
167. 5’-TCgTCgTTTTgCgTTCTC-3’
168. 5’-TCgACTTTCgTCgTTCTgTT-3’
169. 5’-TCgTCgTTTCgTCgTTCTC-3’
170. 5’-tcgtcgggtgcgacgtcgca-3’
171. 5’-TCgTTCTCgACTCgTTCTC-3’
172. 5’-TCgACgTTCgTCgTTCgTCgTTC-3’
173. 5’-TCgTCgACgTCgTTCgTTCTC-3’
174. 5’-TCgTgCgACgTCgCAgATgAT-3’
175. 5’-TCgTCgAgCgCTCgATCggAT-3’
176. 5’-TCgTCgTTTCgTAgTCgTTgACgTCggg-3’
177. 5’-TCgTCggACgTTTTCCgACgTTCT-3’
178. 5’-TCgTCgTTTTCgTCgTTTTCgTCgTT-3’
179. 5’-TCgTCgTTTgTCgTgTgTCgTT-3；
180. 5’-TCgTCgTTggTCggggTCgTTggggTCgTT-3’
181. 5’-TCgTCgTTTCgTCTCTCgTT-3’
182. 5’-TCgTCgTTTTgCTgCgTCgTT-3’
183. 5’-TCgAgCgTTTTCgCTCgAATT-3’
4、包含TTCGTCG的序列公式的人工合成的单链脱氧核苷酸
184. 5’-TTCgTCgTTTgATCgATgTTCgTTgggggg-3’
185. 5’-TTCgTCgTTgTgATCgATgggggg-3’-3’
186. 5’-TATCgATgTTTTCgTCgTCgTTgggggg-3’
187. 5’-TCgACTTTCgTCgTTCTgTT-3’
188. 5’-TCgTCgTTTCgTCgTTCTC-3’
189. 5’-TCgACgTTCgTCgTTCgTCgTTC-3’
190. 5’-TCgTCgTTTTCgTCgTTTTCgTCgTT-3’
在实施例3，4，5中应用的单链脱氧核苷酸(Oligo)的序列如下所示：
Oligo1 Seq No 89：5’-TCgTCgggTgCgATCgCAgggggg-3’
Oligo2 seq No 92：5’-TCgTCgCAgAACgTTCTgggggg-3’
Oligo4 seq No 95：5’-TCgTATgCATCgATgCATAgggAgg-3’
Oligo3 seq No 174：5’-TCgTgCgACgTCgCAgATgAT-3’
Oligo5 seq No 164：5’-TCgTCggTCTTTCgAAATT-3’
Oligo6 seq No 36：5′-TCggggACgATCgTCgggggg-3′
Oligo7 seq No 172：5’-TCgACgTTCgTCgTTCgTCgTTC-3’
Oligo8 seq No 173：5’-TCgTCgACgTCgTTCgTTCTC-3’
Oligo9 seq No 98：5’-TCggACgATCgTCgggggg-3’
Oligo10 seq No 99：5’-TCgAgCgATCgCTCgAgggggg-3’
Oligo11 seq No 107：5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAgggggg-3’
Oligo12 seq No 170：5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCA-3’
Oligo13 seq No 102：5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAg-3’
Oligo14 seq No 103：5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAgg-3’
Oligo15 seq No 104：5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAggg-3’
Oligo16 seq No 105：5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAgggg-3’
Oligo17 seq No 106：5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAggggg-3’
Oligo18 seq No 3：5’-ggggTgCAACgTTCAgggggg-3’
Oligo19 seq No 1：5’-ggggTCgTTCgTCgTTgggggg-3’
Oligo20 seq No 66：5’-gggggCgTCgTTTTCgTCgACgAATT-3’
实施例3、单链脱氧核苷酸刺激人PBMC培养上清对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的抑制作用
1.人外周血单个核细胞的分离
1)仪器设备和器材：低温冰箱、二氧化碳孵箱、超净工作台、倒置显微镜、液氮罐、蒸馏水器、真空泵、细胞培养瓶、滤菌器、滤过瓶、各种规格的吸管、加样器、滴管、血球计数板、水平式离心机等。
2)试剂和材料：肝素抗凝的人全血购自长春市中心血站。聚蔗糖-泛影葡胺：比重1.077±0.001，购自北京鼎国生物技术有限公司。RPMI1640培养液：L-谷氨酰胺的RPMI1640(GIBCOBRL)10.4克，碳酸氢钠2.0克，庆大霉素10万单位，加三蒸水至1000毫升，0.22微米的滤膜抽滤除菌、分装。
3)方法：用聚蔗糖-泛影葡胺淋巴细胞分层液分离人外周血的单个核细胞。分层液与肝素抗凝外周血的体积比约为1∶2。水平离心(1,000×g，20min)。用吸管吸取含单个核细胞的细胞层，置入另离心管中。加入等体积的无血清培养液。1,000×g离心15min，弃上清。重复洗涤两次。弃上清，用2ml培养液重悬细胞，并进行细胞计数。
2.单链脱氧核苷酸刺激人PBMC培养上清的收集
用10％FBS IMDM稀释分离的PBMC(淋巴细胞)至终浓度3×106个/ml，往12孔板中每孔加入2ml，即6×106个/2ml/孔；加入各单链脱氧核苷酸至终浓度6μg/ml，设3个复孔。将12孔板置于37℃5％CO2孵箱内培养48h，收集培养上清，3个复孔收集的培养上清混合到一起，分装，-20℃贮存。
3.单链脱氧核苷酸刺激的人PBMC培养上清对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的抑制作用
1)将1×105个/ml HepG2.2.15细胞接种于24孔细胞培养板，每孔1ml，37℃5％CO2培养，在培养后的第24h，加入单链脱氧核苷酸刺激的人PBMC培养上清使其稀释倍数为1∶64。
2)在培养后的48h、72h、96h，分别收集培养上清，用试剂盒(苏州新波生物技术有限公司)检测HBsAg的含量，HBsAg含量的测定按照试剂盒提供的说明书进行操作。
3)计算HBsAg分泌抑制率：抑制率＝(对照孔浓度-实验孔浓度)/对照孔浓度×100％
4.结果
单链脱氧核苷酸刺激的人PBMC培养上清能够有效地抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg(表1)。
5.结论
单链脱氧核苷酸刺激的人PBMC培养上清能够抑制HBV的复制，因而本发明提供的单链脱氧核苷酸具有抗病毒的生物学活性。
实施例4、单链脱氧核苷酸刺激人PBMC培养上清对HepG2.2.15细胞分泌HBeAg的抑制作用
1.人外周血单个核细胞的分离
1)仪器设备和器材：低温冰箱、二氧化碳孵箱、超净工作台、倒置显微镜、液氮罐、蒸馏水器、真空泵、细胞培养瓶、滤菌器、滤过瓶、各种规格的吸管、加样器、滴管、血球计数板、水平式离心机等。
2)试剂和材料：肝素抗凝的人全血购自长春市中心血站。聚蔗糖-泛影葡胺：比重1.077±0.001，购自北京鼎国生物技术有限公司。RPMI1640培养液：L-谷氨酰胺的RPMI1640(GIBCOBRL)10.4克，碳酸氢钠2.0克，庆大霉素10万单位，加三蒸水至1000毫升，0.22微米的滤膜抽滤除菌、分装。
3)方法：用聚蔗糖-泛影葡胺淋巴细胞分层液分离人外周血的单个核细胞。分层液与肝素抗凝外周血的体积比约为1∶2。水平离心(1,000×g，20min)。用吸管吸取含单个核细胞的细胞层，置入另离心管中。加入等体积的无血清培养液。1,000×g离心15min，弃上清。重复洗涤两次。弃上清，用2ml培养液重悬细胞，并进行细胞计数。
2.单链脱氧核苷酸刺激人PBMC培养上清的收集
用10％FBS IMDM稀释分离的PBMC(淋巴细胞)至终浓度3×106个/ml，往12孔板中每孔加入2ml，即6×106个/2ml/孔；加入各单链脱氧核苷酸至终浓度6μg/ml，设3个复孔。将12孔板置于37℃5％CO2孵箱内培养48h，收集培养上清，3个复孔收集的培养上清混合到一起，分装，-20℃贮存。
3.单链脱氧核苷酸刺激的人PBMC培养上清对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的抑制作用
1)将1×105个/ml HepG2.2.15细胞接种于24孔细胞培养板，每孔1ml，37℃5％CO2培养，在培养后的第24h，加入单链脱氧核苷酸刺激人PBMC培养上清使其稀释倍数为1∶64。
2)在培养后的48h、72h、96h，分别收集不同时间段的各组的培养上清，用试剂盒(苏州新波生物技术有限公司)检测HBeAg的含量，HbeAg含量的测定按照试剂盒提供的说明书进行操作。
3)计算HBeAg分泌抑制率：抑制率＝(对照孔浓度-实验孔浓度)/对照孔浓度×100％
4.结果
各种单链脱氧核苷酸刺激人PBMC培养上清在1∶64稀释度下，能够有效地抑制HepG2.2.15细胞分泌HBeAg(表2)。
5.结论：单链脱氧核苷酸刺激人PBMC培养上清能够抑制HBV的复制，因而本发明提供的单链脱氧核苷酸具有抗病毒的生物学活性。
实施例5、单链脱氧核苷酸刺激人PBMC培养上清对HepG2.2.15细胞分泌HBV DNA的抑制作用
1.人外周血单个核细胞的分离
1)仪器设备和器材：低温冰箱、二氧化碳孵箱、超净工作台、倒置显微镜、液氮罐、蒸馏水器、真空泵、细胞培养瓶、滤菌器、滤过瓶、各种规格的吸管、加样器、滴管、血球计数板、水平式离心机等。
2)试剂和材料：肝素抗凝的人全血购自长春市中心血站。聚蔗糖-泛影葡胺：比重1.077±0.001，购自北京鼎国生物技术有限公司。RPMI1640培养液：L-谷氨酰胺的RPMI1640(GIBCOBRL)10.4克，碳酸氢钠2.0克，庆大霉素10万单位，加三蒸水至1000毫升，0.22微米的滤膜抽滤除菌、分装。
3)方法：用聚蔗糖-泛影葡胺淋巴细胞分层液分离人外周血的单个核细胞。分层液与肝素抗凝外周血的体积比约为1∶2。水平离心(1,000×g，20min)。用吸管吸取含单个核细胞的细胞层，置入另离心管中。加入等体积的无血清培养液。1,000×g离心15min，弃上清。重复洗涤两次。弃上清，用2ml培养液重悬细胞，并进行细胞计数。
2.单链脱氧核苷酸刺激人PBMC培养上清的收集
用10％FBS IMDM稀释分离的PBMC(淋巴细胞)至终浓度3×106个/ml，往12孔板中每孔加入2ml，即6×106个/2ml/孔；加入各单链脱氧核苷酸至终浓度6μg/ml，设3个复孔。将12孔板置于37℃5％CO2孵箱内培养48h，收集培养上清，3个复孔收集的培养上清混合到一起，分装，-20℃贮存。
3.单链脱氧核苷酸刺激的人PBMC培养上清对HepG2.2.15细胞分泌HBV DNA的抑制作用
1)将1×105个/ml HepG2.2.15细胞接种于24孔细胞培养板，每孔1ml，在培养后的第24h，加入单链脱氧核苷酸刺激人PBMC培养上清使其稀释倍数为1∶64。
2)在培养后的48h、72h、96h，分别收集不同时间段的各组的培养上清，用HBV DNA荧光定量PCR试剂盒(上海申友生物技术有限公司)检测HBV DNA的含量，HBV DNA含量的测定按照试剂盒提供的说明书进行操作。
3)计算HBV DNA分泌抑制率：抑制率＝(对照孔log(拷贝数)-实验孔log(拷贝数))/对照孔log(拷贝数)×100％
4.结果
各单链脱氧核苷酸刺激人PBMC培养上清在1∶64稀释度能够有效地抑制HepG2.2.15细胞分泌HBV DNA(表3)。
5.结论
单链脱氧核苷酸刺激人PBMC培养上清能够抑制HBV的复制，因而本发明提供的单链脱氧核苷酸具有抗病毒的生物学活性。
表1单链脱氧核苷酸刺激的人PBMC上清对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg的抑制作用
表2单链脱氧核苷酸刺激的人PBMC上清对HepG2.2.15细胞分泌HBeAg的抑制作用
表3单链脱氧核苷酸刺激的人PBMC上清对HepG2.2.15细胞分泌HBV DNA的抑制作用
序列表
<110>OrganizationName：长春华普生物技术有限公司
<120>Title：对病毒感染性疾病有治疗作用的单链脱氧核苷酸
<210>1
<211>22
<212>DNA
<213>Artificial
<400>1
ggggtcgttc gtcgttgggg gg 22
<210>2
<211>20
<212>DNA
<213>Artificial
<400>2
ggggataacg ttgcgggggg 20
<210>3
<211>21
<212>DNA
<213>Artificial
<400>3
ggggtgcaac gttcaggggg g 21
<210>4
<211>22
<212>DNA
<213>Artificial
<400>4
ggggtcctac gtaggagggg gg 22
<210>5
<211>27
<212>DNA
<213>Artificial
<400>5
ggggtccatg acgttcctga agggggg 27
<210>6
<211>20
<212>DNA
<213>Artificial
<400>6
gggggacgtc gccggggggg 20
<210>7
<211>20
<212>DNA
<213>Artificial
<400>7
ggatccgtac gcatgggggg 20
<210>8
<211>20
<212>DNA
<213>Artificial
<400>8
gggggaatcg attcgggggg 20
<210>9
<211>24
<212>DNA
<213>Artificial
<400>9
gggatgcatc gatgcatcgg gggg 24
<210>10
<211>20
<212>DNA
<213>Artificial
<400>10
ggtgcgacgt cgcagggggg 20
<210>11
<211>18
<212>DNA
<213>Artificial
<400>11
gggacgtacg tcgggggg 18
<210>12
<211>24
<212>DNA
<213>Artificial
<400>12
gggggatcga cgtcgatcgg gggg 24
<210>13
<211>22
<212>DNA
<213>Artificial
<400>13
ggcgatcgat cgatcggggg gg 22
<210>14
<211>22
<212>DNA
<213>Artificial
<400>14
ggggtcgatc gatcgagggg gg 22
<210>15
<211>20
<212>DNA
<213>Artificial
<400>15
ggtcgcgatc gcgagggggg 20
<210>16
<211>20
<212>DNA
<213>Artificial
<400>16
ggggtcaacg ttgagggggg 20
<210>17
<211>28
<212>DNA
<213>Artificial
<400>17
gtcgttttcg tcgacgaatt gggggggg 28
<210>18
<211>26
<212>DNA
<213>Artificial
<400>18
gtcgttatcg ttttttcgta gggggg 26
<210>19
<211>18
<212>DNA
<213>Artificial
<400>19
ggcgttaacg acgggggg 18
<210>20
<211>19
<212>DNA
<213>Artificial
<400>20
gtcggcacgc gacgggggg 19
<210>21
<211>20
<212>DNA
<213>Artificial
<400>21
ggtgcgacgt cgcagggggg 20
<210>22
<211>23
<212>DNA
<213>Artificial
<400>22
gtctattttg tacgtacgtg ggg 23
<210>23
<211>24
<212>DNA
<213>Artificial
<400>23
gacgtcgacg tcgacgtcag gggg 24
<210>24
<211>25
<212>DNA
<213>Artificial
<400>24
ggggtcgatc gttgctagcg ggggg 25
<210>25
<211>25
<212>DNA
<213>Artificial
<400>25
gggggacgtt atcgtattgg ggggg 25
<210>26
<211>32
<212>DNA
<213>Artificial
<400>26
ggggtcgtcg tttgtcgtgt gtcgttgggg gg 32
<210>27
<211>20
<212>DNA
<213>Artificial
<400>27
acgatcgatc gatcgggggg 20
<210>28
<211>19
<212>DNA
<213>Artificial
<400>28
agacgtctaa cgtcggggg 19
<210>29
<211>24
<212>DNA
<213>Artificial
<400>29
ggggtgctgg ccgtcgttgg gggg 24
<210>30
<211>21
<212>DNA
<213>Artificial
<400>30
ggggtcgttg ccgtcggggg g 21
<210>31
<211>24
<212>DNA
<213>Artificial
<400>31
accggtatcg atgccggtgg gggg 24
<210>32
<211>28
<212>DNA
<213>Artificial
<400>32
ttcgttgcat cgatgcatcg ttgggggg 28
<210>33
<211>21
<212>DNA
<213>Artificial
<400>33
ggggacgata cgtcgggggg g 21
<210>34
<211>21
<212>DNA
<213>Artificial
<400>34
ggggacgata tcgatggggg g 21
<210>35
<211>20
<212>DNA
<213>Artificial
<400>35
ggacgatcga tcgtgggggg 20
<210>36
<211>21
<212>DNA
<213>Artificial
<400>36
tcggggacga tcgtcggggg g 21
<210>37
<211>24
<212>DNA
<213>Artificial
<400>37
gggggatcga tatcgatcgg gggg 24
<210>38
<211>22
<212>DNA
<213>Artificial
<400>38
ggatcgatcg atcgatgggg gg 22
<210>39
<211>24
<212>DNA
<213>Artificial
<400>39
ggtgcatcga tcgatgcagg gggg 24
<210>40
<211>24
<212>DNA
<213>Artificial
<400>40
ggtgcatcgt acgatgcagg gggg 24
<210>41
<211>22
<212>DNA
<213>Artificial
<400>41
ggtgcgatcg atcgcagggg gg 22
<210>42
<211>22
<212>DNA
<213>Artificial
<400>42
gggggggtcg atcgatgggg gg 22
<210>43
<211>22
<212>DNA
<213>Artificial
<400>43
ggggtcgtcg aacgttgggg gg 22
<210>44
<211>17
<212>DNA
<213>Artificial
<400>44
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<211>20
<212>DNA
<213>Artificial
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<212>DNA
<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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<213>Artificial
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机译： 抗基因组寡脱氧核苷酸用于治疗负链非节段性rna病毒感染
机译： 单链反义寡核苷酸在预防或治疗涉及三核苷酸重复的遗传性疾病中的应用
机译： 单链反义寡核苷酸在预防或治疗涉及三核苷酸重复的遗传性疾病中的应用
