灯盏花素葡萄糖注射液的制备方法

摘要

本发明公开了一种灯盏花素葡萄糖注射液的制备方法，该注射液含有从菊科植物短葶飞蓬中提取的黄酮类物质灯盏花素及金属离子鳌合剂乙二胺四乙酸二钠。制剂中灯盏花素经酸沉、冷藏、超滤技术处理，得到灯盏花素超滤液，与乙二胺四乙酸二钠共同配制，灌装，经过灭菌、灯检、包装后，制成成品。本工艺过程经过酸沉、冷藏、超滤技术处理，确保了大分子物质被完全去除，减少了制剂中有关物质。使制成的制剂稳定性好、刺激性小、疗效稳定，提高了澄明度，减少了临床上因异物微粒而造成局部循环障碍及血管栓塞、肉芽肿等。具有活血化淤，通络止痛的功效，用于中风后遗症，冠心病，心绞痛。

说明书

技术领域

本发明属医药技术领域，涉及一种注射剂，特别是涉及一种含有从中药灯盏细辛中提取的黄酮类物质灯盏花素和葡萄糖的注射剂。

背景技术

心脑血管疾病发病率一直居高不下，且呈上升的趋势，这已经成为一个世界性的问题。

灯盏细辛为菊科植物短葶飞蓬的干燥全草，主要含有黄酮、内酯、挥发油、氨基酸等。灯盏花素即为其中的黄酮类物质，它能使血栓中血小板含量减少，并减轻血小板的破坏与5-羟色胺释放反应，对血小板与血管内皮细胞的花生四烯酸代谢物TXB2与6-Keto-PEG1α的生成均具有抑制作用；灯盏花素还能明显降低脑血管阻力和外周血压；此外，灯盏花素还能增加冠脉流量，引起人体外血小板cAMP含量增高，提高血脑屏障通透性。临床上用于治疗心脑血管疾病，改善微循环。

目前拥有灯盏花素注射液批准文号的厂家有13个，但因原料处理不合格，真正上市的仅有3家。其一般工艺是加磷酸氢二钠溶液促进灯盏花素溶解再加入乙二胺四乙酸二钠等的制备工艺，但多数因制剂有关物质不合格而不能生产、上市。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灯盏花素葡萄糖注射液的制备方法。

本方面的制备方法包括：灯盏花素葡萄糖注射液中灯盏花素经酸沉、冷藏、超滤技术处理，得到灯盏花素超滤液，与乙二胺四乙酸二钠共同配制，灌装，经过灭菌、灯检、包装后，制成成品制剂。

本方面所述的制备方法具体过程如下：

优选的，本发明的灯盏花素葡萄糖注射液，按重量份计，其中含有：

(a)灯盏花素                            0.05-10重量份

(b)葡萄糖                              1-100重量份

(c)乙二胺四乙酸二钠                    0.2-2重量份

(d)处理葡萄糖用活性炭                  0.2-5重量份

(e)处理乙二胺四乙酸二钠用活性炭        0.2-5重量份。

更优选的，本发明的灯盏花素葡萄糖注射液，按重量份计，其中含有：

(a)灯盏花素                        0.1-5重量份

(b)葡萄糖                          20-60重量份

(c)乙二胺四乙酸二钠                0.2-1重量份

(d)处理葡萄糖用活性炭              1-5重量份

(e)处理乙二胺四乙酸二钠用活性炭    1-5重量份。

本发明提供的灯盏花素葡萄糖注射液，其制备方法包括以下步骤：

A)取100～400重量份40～90℃的新鲜注射用水，降温至30～40℃，加入灯盏花素，充分搅拌均匀，用10％～60％的磷酸氢二钠或磷酸二氢钠溶液调节至完全溶解，控制pH2.0～3.0，0～10℃冷藏12～48小时，用纸浆过滤，再先用截留分子量10万的超滤器超滤后，用截留分子量1万的poll型超滤器超滤，得灯盏花素超滤液；

B)取100～200重量份20～90℃的新鲜注射用水，加入乙二胺四乙酸二钠，充分搅拌使完全溶解，加入活性炭加热煮沸15～30分钟，将药液循环降温至40～50℃，脱炭过滤，滤材孔径为0.45μm-0.65μm；

C)取100～200重量份20～90℃的新鲜注射用水，加入葡萄糖，充分搅拌使完全溶解，加入活性炭加热煮沸15～30分钟，将药液循环降温至40～50℃，脱炭过滤，滤材孔径为0.45μm-0.65μm；

D)合并药液，调节pH6.3～8.3，将药液定容，将药液经终端滤膜孔径为0.22μm的滤膜过滤，灌装于安瓿中，100～121℃，15～40分钟条件下在水浴灭菌柜、蒸汽灭菌柜中灭菌，灯检，包装，即得成品制剂。

经上述方法制成的灯盏花素葡萄糖注射液，性状为黄色的澄明液体，规格可以为1ml、2ml、4ml、5ml、10ml、15ml、20ml，最优选的规格为2ml、10ml，每ml含灯盏花素2.5mg、4mg。

本发明所述的灯盏花素葡萄糖注射液临床应用，肌内注射，一次5mg(灯盏花素)，一日2次。静脉滴注，一次10～20mg(灯盏花素)，一日1次。

本发明所述的灯盏花素葡萄糖注射液具有活血化淤，通络止痛的功效。用于中风后遗症，冠心病，心绞痛。

灯盏花素为灯盏细辛中提取的黄酮类物质，它能使血栓中血小板含量减少，并减轻血小板的破坏与5-羟色胺释放反应，对血小板与血管内皮细胞的花生四烯酸代谢物TXB2与6-Keto-PEG1α的生成均具有抑制作用；灯盏花素还能明显降低脑血管阻力和外周血压；此外，灯盏花素还能增加冠脉流量，引起人体外血小板cAMP含量增高，提高血脑屏障通透性。

本工艺过程经过酸沉、冷藏、超滤技术处理，确保了大分子物质被完全去除，减少了制剂中有关物质。本发明的突出特点在于，使制成的制剂稳定性好、刺激性小、疗效稳定，提高了澄明度，减少了临床上因异物微粒而造成局部循环障碍及血管栓塞、肉芽肿等。具有活血化淤，通络止痛的功效，用于中风后遗症，冠心病，心绞痛。

具体实施方式

下面实施例进一步描述本发明，但所述实施例仅用于说明本发明而不是限制本发明。

                实施例1-灯盏花素葡萄糖注射液的制备

处方：

(a)灯盏花素                            2.5g

(b)葡萄糖                              45g

(c)乙二胺四乙酸二钠                    0.5g

(d)处理葡萄糖用活性炭                  3g

(e)处理乙二胺四乙酸二钠用活性炭        1g

(f)新鲜注射用水                        加至1000ml

A)取200ml，80℃的新鲜注射用水，降温至30℃，加入灯盏花素，充分搅拌均匀，用20％的磷酸氢二钠溶液调节至完全溶解，控制pH到2.0，4℃冷藏12小时，用纸浆过滤，再先用截留分子量10万的超滤器超滤后，用截留分子量1万的poll型超滤器超滤，得灯盏花素超滤液。

B)取200ml，80℃的新鲜注射用水，加入乙二胺四乙酸二钠，充分搅拌使完全溶解，加入活性炭加热煮沸15分钟，将药液循环降温至40℃，脱炭过滤，滤材孔径为0.45μm。

C)取200ml，20℃的新鲜注射用水，加入葡萄糖，充分搅拌使完全溶解，加入3g的活性炭加热煮沸15～30分钟，将药液循环降温至40～50℃，脱炭过滤，滤材孔径为0.45μm。

D)合并药液，调节pH到6.5，将药液定容到1000ml，将药液经终端过滤灌装于安瓿中，100℃，30分钟灭菌，灯检，包装，即得成品制剂。

                实施例2-灯盏花素葡萄糖注射液的制备

处方：

(a)灯盏花素                            4g

(b)葡萄糖                              45g

(c)乙二胺四乙酸二钠                    0.5g

(d)处理葡萄糖用活性炭                  3g

(e)处理乙二胺四乙酸二钠用活性炭        1g

(f)新鲜注射用水                        加至1000ml

A)取200ml，85℃的新鲜注射用水，降温至30℃，加入灯盏花素，充分搅拌均匀，用20％的磷酸氢二钠溶液调节至完全溶解，控制pH到2.0，4℃冷藏12小时，用纸浆过滤，再先用截留分子量10万的超滤器超滤后，用截留分子量1万的poll型超滤器超滤，得灯盏花素超滤液。

B)取200ml，80℃的新鲜注射用水，加入乙二胺四乙酸二钠，充分搅拌使完全溶解，加入活性炭加热煮沸15分钟，将药液循环降温至40℃，脱炭过滤，滤材孔径为0.45μm。

C)取200ml，20℃的新鲜注射用水，加入葡萄糖，充分搅拌使完全溶解，加入3g的活性炭加热煮沸15～30分钟，将药液循环降温至40～50℃，脱炭过滤，滤材孔径为0.45μm。

D)合并药液，调节pH到6.5，将药液定容到1000ml，将药液经终端过滤灌装于安瓿中，100℃，30分钟灭菌，灯检，包装，即得成品制剂。

               实施例3-灯盏花素葡萄糖注射液的制备

处方：

(a)灯盏花素                            2.5g

(b)葡萄糖                              40g

(c)乙二胺四乙酸二钠                    0.5g

(d)处理葡萄糖用活性炭                  3g

(e)处理乙二胺四乙酸二钠用活性炭        1g

(f)新鲜注射用水                        加至1000ml

A)取200ml，80℃的新鲜注射用水，降温至30℃，加入灯盏花素，充分搅拌均匀，用20％的磷酸氢二钠溶液调节至完全溶解，控制pH到2.0，4℃冷藏12小时，用纸浆过滤，再先用截留分子量10万的超滤器超滤后，用截留分子量1万的poll型超滤器超滤，得灯盏花素超滤液。

B)取200ml，80℃的新鲜注射用水，加入乙二胺四乙酸二钠，充分搅拌使完全溶解，加入活性炭加热煮沸15分钟，将药液循环降温至40℃，脱炭过滤，滤材孔径为0.45μm。

C)取200ml，20℃的新鲜注射用水，加入葡萄糖，充分搅拌使完全溶解，加入3g的活性炭加热煮沸15～30分钟，将药液循环降温至40～50℃，脱炭过滤，滤材孔径为0.45μm。

D)合并药液，调节pH到6.8，将药液定容到1000ml，将药液经终端过滤灌装于安瓿中，105℃，30分钟灭菌，灯检，包装，即得成品制剂。

               实施例4-灯盏花素葡萄糖注射液的制备

处方：

(a)灯盏花素                            4g

(b)葡萄糖                              40g

(c)乙二胺四乙酸二钠                    0.5g

(d)处理葡萄糖用活性炭                  3g

(e)处理乙二胺四乙酸二钠用活性炭        1g

(f)新鲜注射用水                        加至1000ml

A)取200ml，80℃的新鲜注射用水，降温至30℃，加入灯盏花素，充分搅拌均匀，用20％的磷酸氢二钠溶液调节至完全溶解，控制pH到2.0，4℃冷藏12小时，用纸浆过滤，再先用截留分子量10万的超滤器超滤后，用截留分子量1万的poll型超滤器超滤，得灯盏花素超滤液。

B)取200ml，80℃的新鲜注射用水，加入乙二胺四乙酸二钠，充分搅拌使完全溶解，加入活性炭加热煮沸15分钟，将药液循环降温至40℃，脱炭过滤，滤材孔径为0.45μm。

C)取200ml，20℃的新鲜注射用水，加入葡萄糖，充分搅拌使完全溶解，加入3g的活性炭加热煮沸15～30分钟，将药液循环降温至40～50℃，脱炭过滤，滤材孔径为0.45μm。

D)合并药液，调节pH到7.0，将药液定容到1000ml，将药液经终端过滤灌装于安瓿中，105℃，30分钟灭菌，灯检，包装，即得成品制剂。

               实施例5-灯盏花素葡萄糖注射液的制备

处方：

(a)灯盏花素                            10g

(b)葡萄糖                              45g

(c)乙二胺四乙酸二钠                    0.5g

(d)处理葡萄糖用活性炭                  3g

(e)处理乙二胺四乙酸二钠用活性炭        1g

(f)新鲜注射用水                        加至1000ml

A)取250ml，80℃的新鲜注射用水，降温至30℃，加入灯盏花素，充分搅拌均匀，用20％的磷酸氢二钠溶液调节至完全溶解，控制pH到2.0，4℃冷藏12小时，用纸浆过滤，再先用截留分子量10万的超滤器超滤后，用截留分子量1万的poll型超滤器超滤，得灯盏花素超滤液。

B)取200ml，80℃的新鲜注射用水，加入乙二胺四乙酸二钠，充分搅拌使完全溶解，加入活性炭加热煮沸15分钟，将药液循环降温40℃，脱炭过滤，滤材孔径为0.45μm。

C)取200ml，20℃的新鲜注射用水，加入葡萄糖，充分搅拌使完全溶解，加入3g的活性炭加热煮沸15～30分钟，将药液循环降温至40～50℃，脱炭过滤，滤材孔径为0.45μm。

D)合并药液，调节pH到6.5，将药液定容到1000ml，将药液经终端过滤灌装于安瓿中，100℃，30分钟灭菌，灯检，包装，即得成品制剂。

                           实验例1

本实验例为本发明实施例1-4的注射剂的外观、pH值、注射剂项下有关的各项规定项目的检测。

性状：实施例1-4的注射剂为黄色的澄明液体。

pH值：按照中国药典2000年版一部附录VII G测定，实施例1-4的注射剂pH值为6.3-8.3，符合质量标准。

热原：取实施例1-4的注射剂，依法检查(中国药典2000年版一部附录VIII A测定)剂量按家兔体重每kg缓慢注射2.5ml，符合规定。

无菌：取实施例1-4的注射剂，依法检查(中国药典2000年版一部附录VIII B测定)，本品符合规定。

澄明度：取实施例1-4的注射剂，依《澄明度检查细则和判断标准》检查，本品符合规定。

                           实验例2

本实验例为本发明实施例1-4的注射剂中成分的定性测定。

(1)分别取实施例1-4的适量(约相当于灯盏花素5mg)，加稀盐酸数滴，酸化后，置水浴上蒸干，加甲醇3ml使溶解。取上述溶液1ml，加少许镁粉及数滴盐酸，水浴中微加热，显澄红色。

(2)分别取实施例1-4含量测定项下的溶液，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录V A)测定，在284nm和335nm波长处有最大吸收。

(3)分别取实施例1-4适量(约相当于灯盏花素15mg)，拌入适量硅藻土，置水浴上蒸干，加甲醇20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取灯盏花素对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水(16∶1∶2)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

本发明注射液以上项目的检查均符合规定。

                           实验例3

实验例为分别取实施例1-4中有关物质的测定。

1)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸(30∶70∶1)为流动相；检测波长为335nm。理论板数按灯盏花素峰计算应不低于1000。

2)测定法：取分别取实施例1-4适量，加水制成每1ml中含25μg的溶液。取20μl注入液相色谱仪，记录2倍于主成分峰保留时间的色谱图，按归一化法计算除主成分峰及首峰以外的其他峰面积之和。其他峰面积之和不得大于总峰面积(除首峰外)的10％。

本发明注射液经过三批的测定，有关物质项目符合规定。

                               实验例4

实验例为分别取实施例1-4中灯盏花素的定量测定。

□精密量取分别取实施例1-4适量，置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，照分光光度法(中国药典2000年版一部附录V A)，在335nm波长处测定吸收度，按灯盏花素(C₂₁H₁₈O₁₂)的吸收系数(E_1cm^1％)为570计算。即得。

□本发明注射液两种规格各经过三批的含量测定，结果如下(见表1)：

表1：灯盏花素含量测定结果

  规格  批号  占标示量％  实施例1和3  20040501  98.7  20040502  101.0  20040503  100.6  实施例2和4  20040501  99.6  20040502  100.8  20040503  100.1

                            比较例1

本比较例说明用本发明工艺采用酸沉、冷藏、超滤处理所生产的灯盏花素葡萄糖注射液澄明度优于用常规配制方法生产的。

  一采用酸沉、冷藏、超滤的工艺  二常规工艺  处方  同实施例1  灯盏花素     4g  20％的磷酸氢二钠溶液    适量  EDTA-2Na     1g 活性炭       4g  制成         1000ml  制法  同实施例1   A)取配制量20℃的新鲜注射用水，  加入0.02％乙二胺四乙酸二钠，充  分搅拌使完全溶解，加入处方中的  灯盏花素，充分搅拌均匀，用50％  的磷酸氢二钠溶液调节至完全溶  解。调节pH到值7.3，加入0.1％  的活性炭加热煮沸20分钟，将药液  循环降温至45℃，脱炭过滤。  B)将药液定容，调节pH到7.3，将  药液经终端过滤灌装于安瓿中，115  ℃25分钟灭菌，灯检，包装，即得  成品制剂。  澄明度 200支均无白点、白块、沉淀等  200支中136支合格，其他64支均  白点、白块、沉淀等现象。

                            比较例2

因灯盏花素属于黄酮类物质，在临床上有过发痒、胸闷、乏力、皮疹、心悸等现象不良反应的报道。本比较例说明用本发明的灯盏花素葡萄糖注射液在临床上应用时刺激性小，不良反应少。

  药品名称  按照实施例1制备的注射剂 常规工艺灯盏花素注射液  用法用量  肌内注射，一次5mg(实施例1，  2ml)，一日2次。静脉滴注，一  次10～20mg(实施例1，4-8ml)，  一日1次。 肌内注射，一次5mg(灯盏花素)， 一日2次。静脉滴注，一次10～20mg (灯盏花素)，用500ml10％氯化钠注 射液稀释后使用，一日1次。  临床使用  治疗82例冠心病患者 治疗90例冠心病患者  不良反应  观察  无全身发痒、胸闷、乏力、皮疹、  心悸等现象。 有3例心悸现象，1例发痒现象  刺激性观  察  3例有轻微疼痛现象 16例有疼痛现象，3例注射部位有 压迫感

                            比较例3

本比较例说明本发明灯盏花素葡萄糖注射液与常规工艺灯盏花素注射液通过6个月加速的稳定性比较

  实施例1  常规工艺灯盏花素注射液  标准规定  灯盏花素含量95.0％～105.0％  澄明度：符合规定  有关物质：小于10％  pH值：6.3～6.8  灯盏花素含量95.0％～  105.0％  澄明度：符合规定  有关物质：小于10％  pH值：6.3～6.8  0个月  灯盏花素含量：100.4％  澄明度：符合规定  有关物质：8.0％  pH值：7.3  灯盏花素含量98.2％  有关物质：8.1％  澄明度：符合规定  pH值：6.8  1个月  灯盏花素含量：98.6％  澄明度：符合规定  灯盏花素含量97.5％  有关物质：8.5％  有关物质：8.1％  pH值：7.3  澄明度：符合规定  pH值：6.7  2个月  灯盏花素含量：98.7％  澄明度：符合规定  有关物质：8.1％  pH值：7.3  灯盏花素含量95.3％  有关物质：8.7％  澄明度：符合规定  pH值：6.6  3个月  灯盏花素含量：97.9％  澄明度：符合规定  有关物质：8.1％  pH值：7.3  灯盏花素含量95.0％  有关物质：8.9％  澄明度：符合规定  pH值：6.5  6个月  灯盏花素含量：98.1％  澄明度：符合规定  有关物质：8.2％  pH值：7.3  灯盏花素含量95.0％  有关物质：9.0％  澄明度：不符合规定  pH值：6.3

通过以上数据表明，本发明灯盏花素葡萄糖注射液的质量稳定性优于常规工艺灯盏花素注射液。