安息香属植物总苯并呋喃提取物及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种安息香属植物总苯并呋喃提取物及其制备方法和用途。本发明的技术方案是：提供一种安息香属植物总苯并呋喃提取物，其安息香属植物总苯并呋喃重量百分比为40～90％，可用于制备预防或治疗卵巢功能早衰、更年期综合征、骨质疏松以及青春期卵巢功能低下、多囊卵巢综合症、不孕症以及因雌激素缺乏或相对不足引起的疾病的药物制剂中的用途。由于安息香属植物总苯并呋喃提取物具有良好的促进雌激素合成的作用，可将其制成注射针剂、口服片剂、胶囊等多种剂型，适用于卵巢功能早衰、更年期综合征、骨质疏松以及青春期卵巢功能低下、多囊卵巢综合症、不孕症等疾病的预防和治疗，具有疗效显著、价格低廉、使用方便等优点。

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药提取物及其制备方法和用途，具体地说，涉及一种安息香属植物提取物及其制备方法和用途。

背景技术

雌激素(特别是雌激素E₂)是人及其它高等动物体内最重要的激素之一，具有广泛的生理功能。更年期前妇女90％的E₂、50％E₁分别来自卵巢和肾上腺，更年期后妇女，由于卵巢萎缩，卵巢功能显著降低，因而雌激素分泌大大减少，这时脂肪细胞产生的雌激素成为体内雌激素的主要来源，如果这个来源不足，血液中E₁、E₂仅相当于更年期前妇女早卵泡期的水平，易引起骨质密度降低，导致骨质疏松型骨折。假设妇女的平均寿命为80岁，那么妇女一生有1/3的时间处于更年期后，且约有1/4的人在65岁后会得骨质疏松症。随着人口老龄化的日趋严重，患更年期综合症和骨质疏松症的患者将越来越多。另外，一些非更年期女性可能出现卵巢功能早衰或卵巢功能低下，雌激素水平不足，一些疾病如多囊卵巢综合症、不孕症等疾病也与雌激素水平相对减少有关。因此，寻求改善卵巢功能、促进雌激素合成的药物有助于预防和治疗这些疾病。

安息香科(Styracaceae)又名野茉莉科、齐墩果科，约11属，180种。我国产9属，50种，9变种，分布很广。安息香属(Styrax Linn)又名野茉莉属，约130种，我国约有30种，7变种，主产于长江流域以南各省区。安息香科植物大部份可供观赏用，有的种类供材用或药用。其树脂含较多的香脂酸，称“安息香”，有开窃清神行气、活血、止痛的作用，是医药上的贵重药材；这种树脂还可用于制造高级芳香油。种子的药用价值方面，从越南安息香(即白花树)的种子中提取出的油就是著名的“白花油”，供药用，具有杀菌、止痛的作用。现代研究表明，安息香属植物种子主要含油、糖类、木质素以及新木质素(苯并呋喃类)。有研究报道了其苯并呋喃类成分具有一定的抗菌活性，尚无安息香属植物总苯并呋喃提取物及其治疗卵巢功能早衰、更年期综合征、骨质疏松以及青春期卵巢功能低下、多囊卵巢综合症、不孕症以及因雌激素缺乏或相对不足引起的疾病的有关文献记载或研究报道。

发明内容

本发明的技术方案是提供一种安息香属植物提取物及其制备方法，以及由该提取物加工成的药物制剂在预防或治疗卵巢功能早衰、更年期综合征、骨质疏松以及青春期卵巢功能低下、多囊卵巢综合症、不孕症以及因雌激素缺乏或相对不足引起的疾病的药物制剂中的用途。

本发明提供安息香属植物提取物，含有安息香属植物总苯并呋喃，其重量百分比为40～90％。

其中，所述安息香属植物提取物由安息香属植物属Styrax植物提取获得。

具体地地说是从天然植物瓦山安息香[Styrax perkinsiae]，禄春安息香[S.macranthusPerk.]，楚雄安息香[S.limprichtii Lingelsh et Borza]，越南安息香[S.tonkinensis(Pierre)Craib et Hartw.]，浙江安息香[S.zhejiangensis S.M.Hwang et L.L.Yu]，芬芳安息香[S.odoratissimus Champ.]，中华安息香[S.chinehsis Hu et S.Y.Liang]，滇南安息香[S.benzoinoides Graib]中任意一种或几种中提取获得。优选从瓦山安息香种子中提取获得。

它的制备方法是将安息香属植物种子粉碎，水、醇或20-95％的含水醇为提取溶剂提取、精制，即得。

所述的安息香属植物总苯并呋喃提取物中，含有一种或几种具有以下化学结构的苯并呋喃衍生物单体：该提取物含有一种或几种具有以下化学结构的苯并呋喃衍生物单体：

5-(3-羟基)丙基-7-甲氧基2-(3，4-二氧亚甲基苯基)苯并呋喃

5-(3-羟基)丙基-2-(3，4-二氧亚甲基苯基)苯并呋喃(即去甲氧基齐墩果醇)

10齐墩果醇-龙胆双糖苷。

进一步地，该提取物还含有一种或几种具有以下化学结构的苯并呋喃衍生物单体：

5-(3-羟基)丙基-7-羟基-2-(3，4-二氧亚甲基苯基)苯并呋喃(即去甲基齐墩果醇)

4齐墩果醇乙酯

5去甲氧基齐墩果醇乙酯

6齐墩果醇丁酯

5-丙烯醛基-7-甲氧基-2-(3，4-亚甲基二氧苯基)苯并呋喃

(trans)-5-(3-羟基丙基)-7-甲氧基-2-(2，3-二氢-3-羟甲基-7-甲氧基-2-(3-甲氧基-4-羟基苯基)苯并呋喃基)苯并呋喃

9齐墩果醇-葡萄糖苷

11齐墩果醇-龙胆三糖苷

本发明提供的安息香属植物总苯并呋喃提取物，是由安息香属[styrax]植物提取获得的。更具体的，是从瓦山安息香[Styrax perkinsiae]，禄春安息香[S.macranthus Perk.]，楚雄安息香[S.limprichtii Lingelsh et Borza]，越南安息香[S.tonkinensis(Pierre)Craib etHartw.]，浙江安息香[S.zhejiangensis S.M.Hwang et L.L.Yu]，芬芳安息香[S.odoratissimus Champ.]，中华安息香[S.chinehsis Hu et S.Y.Liang]，滇南安息香[S.benzoinoides Graib]等中任意一种或几种中提取获得。通过TLC(薄层层析)、HPLC等方法对上述各种植物进行成分预试验显示，它们的化学成分种类和含量基本一致。

本发明还提供上述安息香属植物总苯并呋喃提取物的制备方法，包括以下步骤：

a、将安息香属植物种子经适当粉碎后，用水、醇(甲醇或乙醇)，或20-95％v/v含水醇类，室温或加热(包括回流)提取一定时间，可重复提取1～3次，然后滤去药渣，提取液液经减压浓缩得到总浸膏。

b、将上述提取浸膏用适量热水溶散后，用一定量的工业用石油醚萃取数次，以除掉其中的油性成分。

c、b步骤萃取后的水层用大孔树脂柱吸附后，用一定量的水洗脱以除去其中的糖成分，然后用30～95％乙醇洗脱柱子，洗脱液经减压浓缩后得浸膏，再经真空或冷冻干燥成安息香属植物总苯并呋喃提取物干粉。

其中，提取溶剂以50-90％乙醇溶液较好。乙醇溶液用量为药材重量的6-12倍，8倍为佳。大孔树脂柱的后一步洗脱液以95％乙醇为佳。以上制备的干粉，为浅棕色固体物质，味微苦。其中所含总苯并呋喃为总重量的40％-90％。

本发明还提供上述的安息香属植物苯并呋喃衍生物单体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

a、将安息香属植物种子经适当粉碎后，用水、甲醇或乙醇，或20-95％v/v含水醇类，室温或加热(包括回流)提取一定时间，可重复提取1～3次，然后滤去药渣，滤液经减压浓缩得到总浸膏。

b、将上述提取浸膏用适量热水溶散后，依次用一定量的石油醚、氯仿和正丁醇各萃取数次，浓缩后得各部分萃取物，石油醚部分弃去。

c、氯仿部分上硅胶层析柱，先用石油醚/丙酮体系进行梯度洗脱(依次以石油醚∶丙酮＝10∶1，5∶1，0∶1洗脱较好)，得到化合物1、2、4、5、6、7，再用氯仿/甲醇体系洗脱(以CHCl₃∶MeOH＝50∶1洗脱较好)，得到化合物3和8。

正丁醇部分先在大孔树脂上用水洗脱掉糖，然后上硅胶层析柱，用氯仿/甲醇体系进行梯度洗脱(依次用CHCl₃∶MeOH＝20∶1，10∶1，5∶1，0∶1洗脱较好)，得到化合物9、10和11。

本发明还提供安息香属植物在制备预防或治疗卵巢功能早衰、更年期综合征、骨质疏松以及青春期卵巢功能低下、多囊卵巢综合症、不孕症以及因雌激素缺乏或相对不足引起的疾病的药物中的用途。

其中，上述的安息香属植物为瓦山安息香[Styrax perkinsiae]，禄春安息香[S.macranthus Perk.]，楚雄安息香[S.limprichtii Lingelsh et Borza]，越南安息香[S.tonkinensis(Pierre)Craib et Hartw.]，浙江安息香[S.zhejiangensis S.M.Hwang et L.L.Yu]，芬芳安息香[S.odoratissimus Champ.]，中华安息香[S.chinehsis Hu et S.Y.Liang]，滇南安息香[S.benzoinoides Graib]中任意一种或几种。

更进一步，上述的安息香属植物为瓦山安息香[Styrax perkinsiae]、尤其为瓦山安息香的种子。

上述安息香属植物或其总苯并呋喃提取物，用于制备治疗或预防卵巢功能早衰、更年期综合征、骨质疏松以及青春期卵巢功能低下、多囊卵巢综合症、不孕症以及因雌激素缺乏或相对不足引起的疾病的药物制剂中的用途，该药物制剂中含有上述安息香属植物或其总苯并呋喃或为含有安息香属植物或其总苯并呋喃的复方，即配伍有其它促进雌激素合成的西药或中药活性成分。所述制剂是口服片剂、胶囊、口服液或注射液。

①片剂：包括普通片、薄膜片、肠溶片等。用上述总苯并呋喃提取物干粉，加入适量稀释剂如淀粉、糊精、甘露醉、微晶纤维等，适量的粘合剂如水、乙醇、淀粉浆、明胶、纤维素等，适量的崩解剂如干淀粉、援甲基淀粉钠、海藻酸钠等，以及适量的润滑剂如硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇等，按常规湿法制粒，干燥后整粒或干法制粒后压片。如是包薄膜衣片，可用成膜材料如纤维素类、聚乙二醇类等，按常规包衣，分装入密闭瓶或铝塑板中。

②胶囊剂：包括普通胶囊剂、肠溶胶囊剂等。将上述总苯并呋喃提取物干粉加入适量辅料如淀粉、碳酸钙、甘露醇、氧化镁、微粉硅胶等，适量润滑剂如滑石粉、硬脂酸镁、乙二醇酯，聚硅酮类等，以及适量的黏合剂如矿物油、食用油等，混合成干粉或制成颗粒，填充入胶套，分装如密闭铝塑包装中。以上各剂型可加入适量甜味剂，如D-木糖、木糖醇、麦芽糖醇、甜叶菊素、天冬甜母等。

③口服液：口服液制备过程中，用上述总苯并呋喃提取物干粉加入药用添加剂，如悬浮剂(如山梨醇糖浆、纤维素衍生物、葡萄糖/蔗糖糖浆、明胶、硬脂酸铝胶或氢化食用脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂、阿拉伯胶或失水山梨醇-油酸酯)；非水载体(例如杏仁油、油状酯、乙醇或精炼植物油)；以及防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)。根据需要，液体制剂还可以含有已知的缓冲剂、矫味剂和芳香成分、染料和甜味剂。

④注射液：用上述总苯并呋喃提取物干粉，加入药用辅剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂和/或调节溶液渗透压的试剂，可配制成注射剂，优选肌肉、静脉注射液。

本发明还提供一种药物组合物，其含有权利要求1至5所述的安息香属植物总苯并呋喃提取物，或者含有权利要求1至5所述的安息香属植物总苯并呋喃提取物与其它促进雌激素合成的西药或中药活性成分配伍成的复方。

按照本发明，可以将上述安息香属植物总苯并呋喃提取物与其它中药和/或其它化学药物共同组成中药复方或中西药复方制剂，并按照常规方法制成口服片剂、胶囊、口服液、注射液等多种剂型。

经体外活性测试发现安息香属植物总苯并呋喃提取物具有良好的促进雌激素合成的作用，可将其制成口服片剂、胶囊等多种剂型，适用于卵巢功能早衰、更年期综合征、骨质疏松以及青春期卵巢功能低下、多囊卵巢综合症、不孕症以及因雌激素缺乏或相对不足引起的疾病的治疗，具有疗效显著、价格低廉、使用方便等特点。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

实施例1  瓦山安息香提取物1的制备

瓦山安息香干燥种子1000g，粉碎后加80％乙醇溶液8L，加热回流提取1.5小时，滤渣再加80％乙醇溶液6L，加热回流提取1小时，过滤。合并两次滤液，经减压浓缩得到总浸膏248g。将总浸膏用2L热水溶散；取D101大孔树脂2.5kg装柱，将热水溶散的浸膏用大孔树脂吸附后，用20L水洗脱，洗脱液弃去，然后用95％乙醇洗脱柱子，洗脱液经减压浓缩后得浸膏，再经真空或冷冻干燥得干粉226g，采用HPLC分析并测定其总苯并呋喃含量约为总重量的40％。

实施例2  瓦山安息香提取物2的制备

瓦山安息香干燥种子1000g，粉碎后加80％乙醇溶液8L，加热回流提取1.5小时，滤渣再加75％乙醇溶液6L，加热回流提取1小时，过滤。合并两次滤液，经减压浓缩得到总浸膏250g。将总浸膏用2L热水溶散后，用3L工业用石油醚萃取5次。取D101大孔树脂2kg装柱，水层用大孔树脂吸附后，用15L水洗脱，洗脱液弃去，然后用75％乙醇洗脱柱子，洗脱液经减压浓缩后得浸膏，再经真空或冷冻干燥得干粉106g，采用HPLC分析并测定其总苯并呋喃含量为总重量的90％。

实施例3  禄春安息香提取物的制备

禄春安息香干燥种子1000g，粉碎后加80％乙醇溶液8L，加热回流提取1.5小时，滤渣再加50％乙醇溶液6L，加热回流提取1小时，过滤。合并两次滤液，经减压浓缩得到总浸膏203g。将总浸膏用2L热水溶散；取D101大孔树脂2.5kg装柱，将热水溶散的浸膏用大孔树脂吸附后，用20L水洗脱，洗脱液弃去，然后用20％乙醇洗脱柱子，洗脱液经减压浓缩后得浸膏，再经真空或冷冻干燥得干粉196g，采用HPLC分析并测定其总苯并呋喃含量约为总重量的45％。

实施例4：楚雄安息香提取物的制备

楚雄安息香干燥种子1000g，粉碎后加80％乙醇溶液8L，加热回流提取1.5小时，滤渣再加75％乙醇溶液6L，加热回流提取1小时，过滤。合并两次滤液，经减压浓缩得到总浸膏253g。将总浸膏用2L热水溶散；取D101大孔树脂2.5kg装柱，将热水溶散的浸膏用大孔树脂吸附后，用20L水洗脱，洗脱液弃去，然后用75％乙醇洗脱柱子，洗脱液经减压浓缩后上1.5kg聚酰胺柱，用95％乙醇洗脱柱子，洗脱液经减压浓缩后得浸膏，再经真空或冷冻干燥得干粉98g，采用HPLC分析并测定其总苯并呋喃含量约为总重量的60％。

实施例5  滇南安息香提取物的制备

滇南安息香干燥种子1000g，粉碎后加80％乙醇溶液8L，加热回流提取1.5小时，滤渣再加80％乙醇溶液6L，加热回流提取1小时，过滤。合并两次滤液，经减压浓缩得到总浸膏253g。将总浸膏用2L热水溶散；取D101大孔树脂2.5kg装柱，将热水溶散的浸膏用大孔树脂吸附后，用20L水洗脱，洗脱液弃去，然后用95％乙醇洗脱柱子，洗脱液经减压浓缩后上1.5kg聚酰胺柱，用95％乙醇洗脱柱子，洗脱液经减压浓缩后得浸膏，再经真空或冷冻干燥得干粉98g，采用HPLC分析并测定其总苯并呋喃含量约为总重量的90％。

实施例6  瓦山安息香植物苯并呋喃衍生物单体的制备

瓦山安息香的种子2.2kg(干重)，粉碎后用80-90％工业酒精25L在室温下浸提3次，每次7天。浸提液经真空浓缩后得总浸膏550g，将其悬浮于5L热水中，依次用石油醚、氯仿和正丁醇各萃取5次，每次5L溶剂，分别浓缩萃取液得浸膏：石油醚部分16g，氯仿部分200g，正丁醇部分120g。取样进行体外活性筛选，氯仿和正丁醇部分均显示具有促进雌激素E₂生成活性。将氯仿部分上硅胶层析柱，依次用石油醚∶丙酮＝10∶1，5∶1，0∶1洗脱，将其分为三段Fr.1-3。Fr.1(30g)上硅胶柱，用石油醚∶丙酮＝10∶1洗脱，得到化合物6(60mg)、4(30mg)和5(20mg)。Fr.2(150g)上硅胶柱，用石油醚∶丙酮＝5∶1洗脱，得到化合物1(95g)、2(5g)和7(60mg)。Fr.3(15g)上硅胶柱，用CHCl₃∶MeOH＝50∶1洗脱，得到化合物3(45mg)和8(15mg)。正丁醇部分先用D101大孔树脂脱糖后得55g浸膏，上硅胶层析柱，依次用CHCl₃∶MeOH＝20∶1，10∶1，5∶1，0∶1洗脱，得到化合物9(4.2g)、10(33g)和11(2.8g)。

化合物的结构鉴定

化合物3 5-(3-羟基)丙基-7-羟基-2-(3，4-二氧亚甲基苯基)苯并呋喃，即去甲基齐墩果醇：

颜色和形状：白色无定形粉末；熔点：196-199℃；

红外光谱：主要的特征谱带位于3456，2946，2919，1600，1504，1482，1459，1236，1042，928cm^-1；

紫外光谱(MeOH)：λ_max(logε)＝204(4.69)，302(4.47)，317(4.54)nm；

质谱(HRESIMS)：m/z＝335.0886[M+Na]⁺(calcd.：335.0890)；

核磁共振氢谱(600MHz，DMSO-d₆)：δ6.83(1H，s，H-3)，7.45(1H，d，J＝1.6Hz，H-4)，6.57(1H，d，J＝1.6Hz，H-6)，9.88(1H，s，H-7-OH)，7.17(1H，d，J＝1.6Hz，H-2′)，7.05(1H，d，J＝8.0Hz，H-5′)，7.42(1H，dd，J＝8.0，1.6Hz，H-6′)，2.60(2H，t，J＝7.4Hz，H-1″)，1.72(2H，m，H-2″)，3.42(2H，m，H-3″)，4.46(1H，t，J＝5.0Hz，H-3″-OH)，6.10(2H，s，H-(-O-CH₂-O-))；

核磁共振碳谱(150MHz，DMSO-d₆)：δ32.2(C-2″)，35.2(C-1″)，60.6(C-3″)，101.9(-O-CH₂-O-)，105.4(C-2′)，111.0(C-5′)，119.1(C-6′)，124.8(C-1′)，148.2(C-4′)，148.4(C-3′)，101.5(C-3)，109.3(C-6)，111.6(C-4)，131.1(C-9)，138.4(C-5)，141.8(C-8)；142.3(C-7)，155.3(C-2)。

从化合物3的高分辨质谱准分子离子峰m/z＝335.0886[M+Na]⁺推算出其分子式为C₁₈H₁₆O₅；紫外光谱在λ_max＝204，302and 317nm处出现最大吸收峰，与齐墩果醇(egonol)的紫外吸收光谱相似，提示为苯并呋喃衍生物。化合物3的¹H-NMR信号也与齐墩果醇的相似，只是比齐墩果醇多一个酚羟基信号δ9.88(1H，s，H-7-OH)，而少一个甲基信号。化合物3的甲基化反应(KOH-(CH₃)₂SO₄)得到了齐墩果醇，表明其酚羟基在C-7位。因此化合物3为5-(3-羟基)丙基-7-羟基-2-(3，4-二氧亚甲基苯基)苯并呋喃，即去甲基齐墩果醇。

化合物6  齐墩果醇丁酯：

颜色和形状：浅黄色固体；熔点：76-79℃；

红外光谱：主要的特征谱带位于2959，1729，1599，1504，1477，1449，1236，1186，1042，930cm^-1；

紫外光谱(MeOH)：λ_max(logε)＝220(3.97)，300(3.86)，315(4.01)nm；

质谱(HRESIMS)：m/z＝419.1459[M+Na]⁺(calcd.：419.1465)；

核磁共振氢谱(600MHz，CDCl₃)：δ6.74(1H，s，H-3)，7.28(1H，d，J＝1.2Hz，H-4)，6.55(1H，d，J＝1.2Hz，H-6)，6.90(1H，d，J＝1.6Hz，H-2′)，6.82(1H，d，J＝8.2Hz，H-5′)，7.35(1H，dd，J＝8.2，1.6Hz，H-6′)，2.70(2H，t，J＝7.4Hz，H-1″)，1.95(2H，m，H-2″)，4.07(2H，t，J＝6.5Hz，H-3″)，5.96(2H，s，H-(-O-CH₂-O-))，3.98(3H，s，H-7-OMe)，2.26(2H，t，J＝7.8Hz，H-2)，1.62(2H，m，H-3)，0.92(3H，t，J＝8.5Hz，H-4)；

核磁共振碳谱(150MHz，CDCl₃)：δ13.9(C-4)，18.7(C-3)，36.5(C-2)，31.0(C-2″)，32.7(C-1″)，63.8(C-3″)，56.4(OMe-7)，101.5(-O-CH₂-O-)，105.8(C-2′)，108.8(C-5′)，119.4(C-6′)，124.9(C-1′)，148.2(C-4′)，148.3(C-3′)，100.6(C-3)，107.6(C-6)，112.6(C-4)，131.3(C-9)，137.2(C-5)，142.7(C-8)；145.0(C-7)，156.3(C-2)，174.0(C-1)。

化合物6的紫外光谱在λ_max＝220，300，315nm处出现最大吸收峰，与齐墩果醇的紫外吸收光谱相似，提示为苯并呋喃衍生物。化合物6的大部分1H、¹³C-NMR信号与齐墩果醇的相似，只是比齐墩果醇多出¹H-NMR信号δ0.92(3H，J＝8.2Hz，H-4)，2.26(2H，t，J＝7.8Hz，H-2)，1.62(2H，m，H-3)和相应的¹³C-NMR信号δ13.9(C-4)，36.5(C-2)，18.7(C-3)，174.0(C-1)(据HMQC)，表明化合物6比齐墩果醇多出一个丁酯基。化合物6碱水解(10％KOH乙醇溶液)得到齐墩果醇，因此，该化合物的结构为5-(3-丙酸丁酯基)-7-甲氧基-2-(3，4-二氧亚甲基苯基)苯并呋喃，即齐墩果醇丁酯。高分辨质谱准分子离子峰m/z＝419.1459[M+Na]⁺推算出其分子式为C₂₃H₂₄O₆，进一步确证了该结构的正确性。

化合物7  5-丙烯醛基-7-羟基-2-(3，4-亚甲基二氧苯基)苯并呋喃(7)的特征在于：

颜色和形状：无色针状晶体(丙酮)；

熔点：187-189℃；

红外光谱：主要的特征谱带位于2923，1673，1620，1474，1234，1129，1038cm^-1；

紫外光谱(MeOH)：λ_max(logε)＝216(4.08)，299(4.30)，319(4.40)nm；

质谱(HRESIMS)：m/z＝345.0730[M+Na]⁺(calcd.：345.0733)；

核磁共振氢谱(600MHz，CDCl₃)：δ6.87(1H，s，H-3)，7.38(1H，d，J＝1.6Hz，H-4)，6.99(1H，d，J＝1.6Hz，H-6)，7.33(1H，d，J＝1.4Hz，H-2′)，6.90(1H，d，J＝8.2Hz，H-5′)，7.42(1H，dd，J＝8.2，1.4Hz，H-6′)，7.54(1H，d，J＝15.8Hz，H-1″)，6.72(1H，dd，J＝15.8，7.6Hz，H-2″)，9.71(1H，d，J＝7.6Hz，H-3″)，6.03(2H，s，H-(-O-CH₂-O-))，4.08(3H，s，H-7-OMe)；

核磁共振碳谱(150MHz，CDCl₃)：δ56.2(OMe-7)，100.4(C-3)，101.4(-O-CH₂-O-)，105.6(C-6)，105.7(C-2′)，108.7(C-5′)，115.2(C-4)，119.6(C-6′)，124.0(C-1′)，127.6(C-2″)，130.2(C-5)，131.5(C-9)，145.7(C-7)，145.6(C-8)，148.2(C-4′)，148.5(C-3′)，153.7(C-1″)，157.3(C-2)，193.6(C-3″)。

从化合物7的高分辨质谱准分子离子峰m/z＝345.0730[M+Na]⁺推算出其分子式为C₁₉H₁₄O₅；¹H-NMR信号δ6.72(1H，dd，J＝7.6，15.8Hz，H-2″)，7.54(1H，d，J＝15.8Hz，H-1″)，9.71(1H，d，J＝7.6Hz，H-3″)，以及相应的¹³C-NMR信号δ127.6(C-2″)，153.7(C-1″)，193.6(C-3″)(据HMQC)提示分子中有一个丙烯醛基存在；化合物7的大部分¹H、¹³C-NMR信号与齐墩果醇的相似，不同之处在于化合物7含丙烯醛基，而齐墩果醇含正丙醇基。H-1″与C-4、C-6，以及H-4、H-6与C-1″有HMBC相关(如下图所示)，说明丙烯醛基位于C-5。因此，化合物7的结构被确定为5-丙烯醛基-7-羟基-2-(3，4-亚甲基二氧苯基)苯并呋喃。

Major HMBC Correlations(→)of 7and 8

化合物8(trans)-5-(3-羟基丙基)-7-甲氧基-2-(2，3-二氢-3-羟甲基-7-甲氧基-2-(3-甲氧基-4-羟基苯基)苯并呋喃基)苯并呋喃：

颜色和形状：白色无定形粉末；

红外光谱：主要的特征谱带位于3430，2925，2854，1613，1469，1459，1337，1161，1117，1053，963cm^-1；

紫外光谱(MeOH)：λ_max(logε)＝222(3.84)，316(3.81)nm；

质谱(HRESIMS)：m/z＝529.1849[M+Na]⁺(calcd.：529.1833)；

核磁共振氢谱(600MHz，DMSO-d₆)：δ＝7.18(1H，s，H-3)，6.97(1H，d，J＝1.4Hz，H-4)，6.74(1H，d，J＝1.4Hz，H-6)，5.51(1H，d，J＝6.4Hz，H-2′)，3.56(1H，dt，J＝8.6，6.4Hz，H-3′)，7.43(1H，d，J＝1.2Hz，H-4′)，7.36(1H，d，J＝1.2Hz，H-6′)，3.73(2H，d，J＝8.6Hz，H-10′)，5.10(1H，s，H-10′-OH)，6.94(1H，d，J＝1.6Hz，H-2″)，9.06(1H，s，H-1″-OH)，6.76(1H，d，J＝8.2Hz，H-5″)，6.79(1H，dd，J＝8.2，1.6Hz，H-6″)，3.95(3H，s，H-7-OMe)，3.88(3H，s，H-7′-OMe)，3.75(3H，s，H-3″-OMe)，2.67(2H，t，J＝7.6Hz，H-1)，1.77(2H，m，H-2)，3.44(2H，t，J＝6.2Hz，H-3)，4.49(1H，s，H-3-OH)；

核磁共振碳谱(150MHz，DMSO-d₆)：δ156.4(C-2)，100.8(C-3)，112.4(C-4)，138.6(C-5)，107.8(C-6)，144.8(C-7)，141.9(C-8)，123.7(C-9)，88(C-2′)，53.3(C-3′)，114.2(C-4′)，131.1(C-5′)，109.4(C-6′)，144.5(C-7′)，148.9(C-8′)，130.7(C-9′)，63.2(C-10′)，132.4(C-1″)，110.9(C-2″)，148.1(C-3″)，147.0(C-4″)，115.8(C-5″)，119.2(C-6″)，56.1(OCH₃-7)，56.4(OCH₃-7′)，56.2(OCH₃-3″)，32.5(C-1)，35.2(C-2)，60.6(C-3)。

从化合物8的高分辨质谱准分子离子峰m/z＝529.1849[M+Na]⁺推算出其分子式为C₂₉H₃₀O₈；¹H-NMR信号δ3.95(3H，s，H₃-7-OMe)，3.88(3H，s，H₃-7′-OMe)，及3.75(3H，s，H₃-3″-OMe)提示分子中含3个甲氧基；两个羟基信号分别在δ4.49(1H，s，H-3OH)和5.10(1H，s，H-10′-OH)；¹H-NMR信号δ3.44(2H，t，J＝6.2Hz，H-3)、3.73(2H，d，J＝8.6Hz，H-10′)，以及它们相应的¹³C-NMR信号δ60.6(C-3，CH₂)，63.2(C-10′，CH₂)(据HMQC)提示分子中有两个羟甲基；¹H-NMR信号δ6.76(1H，d，J＝8.2Hz，H-5″)，6.94(1H，d，J＝1.6Hz，H-2″)and 6.79(1H，dd，J＝8.2，1.6Hz，H-6″)表明有一个1，3，4-三取代苯环存在；其它5个芳环质子信号分别在δ7.18(1H，s，H-3)，6.97(1H，d，J＝1.4Hz，H-4)，6.74(1H，d，J＝1.4Hz，H-6)，7.43(1H，d，J＝1.2Hz，H-4′)，7.36(1H，d，J＝1.2Hz，H-6′)；根据HMQC和HMBC(见上图)，化合物8的结构被确定为(trans)-5-(3-羟基丙基)-7-甲氧基-2-(2，3-二氢-3-羟甲基-7-甲氧基-2-(3-甲氧基-4-羟基苯基)苯并呋喃基)苯并呋喃，它是dihydrodehydrodiconiferyl alcohol与苯并呋喃通过C-2′和C-3′的偶联产物，H-2′与H-3′之间的偶合常数(J＝6.4Hz)，以及H-2′与H-10′之间有NOESY相关信号决定了C-2′与C-3′之间的反式相对构型。

实施例7  片剂的制备

片剂组成：

瓦山安息香提取物                    0.5g

HPMC_LV100                           30g

乳糖                                70g

硬脂酸镁                            1g(共制成1000片)

安息香属植物总苯并呋喃提取物、HPMC、乳糖，混匀，以75％醇为粘合剂制湿颗粒，过22目筛，50℃干燥3h，22目筛整粒，加入硬脂酸镁混匀压片，每片重0.1g，用于雌激素缺乏症患者，口服，每日三次，每次1片，一月为一疗程。

实施例8  胶囊剂的制备

胶囊组成：楚雄安息香提取物          0.5g

淀粉                                100g

硬脂酸镁                            1g(共制成1000粒)

安息香属植物总苯并呋喃提取物、淀粉、硬脂酸镁，混匀，装胶套。每粒装100mg，用于雌激素缺乏症患者，口服，每日三次，每次1片，一月为一疗程。

实施例9  射液的制备

注射液组成：

滇南安息香提取物                    0.5g

吐温80                              10ml

氯化钠                              8g(共制成1000ml)

安息香属植物总苯并呋喃提取物，加10％Na₂CO₃调pH至7.0-7.5，冷藏滤过，加吐温-80，NaCl，加注射用水至1000ml，G₃垂熔漏斗(玻璃)滤过，分装，灌封，100℃流通蒸气灭菌30min即得。

实施例10  复方片剂的制备

取瓦山安息香提取物0.5g，大豆异黄酮提取物200g，丹参酮提取物200g，按常规方法，加入相应辅料，制成片剂或胶囊。每粒装200mg，用于雌激素缺乏症患者，口服，每日三次，每次1片，一月为一疗程。

以下通过安息香属植物提取物及部分有效成分的药效试验进一步说明本发明的有益效果。

试验例1 促进小鼠卵巢颗粒细胞合成雌激素：

收集小鼠卵巢颗粒细胞，培养在96孔培养板中，加入0.5mM睾酮或雄烯二酮，同时加入待测药物，提取物浓度为100μg/ml，在37℃，5％CO₂条件下培养48小时，收集上清，1000转/分钟离心3min，去除残余细胞，采用酶免试剂盒检测上清中雌二醇(E₂)或雌酮的含量，(以0.5mM睾酮转换成E₂的生成量作为100％生成率，计算待测样品的E₂合成率)，结果见下表：

          表1 促进小鼠卵巢颗粒细胞合成E₂

 样品  E₂含量(pg/ml)  E₂生成率(％) 细胞对照 瓦山安息香提取物1 瓦山安息香提取物2 楚雄安息香提取物 滇南安息香提取物 禄春安息香提取物 化合物3 化合物10 化合物11  170.15  297.35  435.98  245.37  210.78  304.92  323.76  700.46  862.38  100  174.75  256.23  144.21  123.88  179.21  190.28  411.67  506.83

由表1可以明显地看到瓦山安息香提取物1、2(总苯并呋喃重量百分比分别为40％和90％)、楚雄安息香提取物(总苯并呋喃重量百分比为60％)、滇南安息香提取物(总苯并呋喃重量百分比为70％)、禄春安息香提取物(总苯并呋喃重量百分比为80％)以及从瓦山安息香中分离的化合物3、10、11对小鼠卵巢颗粒细胞产生的E₂有显著的促进作用。

试验例2 促进小鼠脂肪细胞合成E₂：

将形成胰岛素抵抗的小鼠3T3-L1脂肪细胞按2.4×10⁵/孔，1mL/孔接种到24孔培养液中，待细胞生长为单层后加入底物睾酮或雄烯二酮(0.5mM)，同时加入待测药物，终浓度为100μg/ml，继续在37℃，5％CO₂条件下培养，以不加药物(仅含睾酮或雄烯二酮)作为对照。72小时后吸取上清，1000转/分钟离心3min，去除残余细胞，采用酶免试剂盒检测上清中雌激素E₂或雌酮的含量，(以0.5mM睾酮转换成E₂的生成量作为100％生成率，计算待测样品的E₂合成率)，结果见下表：

             表2 促进小鼠脂肪细胞合成E₂

  样品  E₂含量(pg/ml)  E₂生成率(％)  细胞对照  瓦山安息香提取物1  瓦山安息香提取物2  楚雄安息香提取物  滇南安息香提取物  禄春安息香提取物  化合物3  化合物10  化合物11  313.68  487.33  612.02  392.34  432.98  521.34  545.06  810.19  972.73  100  155.36  195.11  125.08  138.03  166.20  173.76  258.29  310.10

由表2可以明显地看到瓦山安息香提取物1、2以及楚雄安息香提取物、滇南安息香提取物、禄春安息香提取物和从瓦山安息香中分离的化合物3、10、11对3T3-L1脂肪细胞产生E₂也有显著地促进作用。