冠状病毒和SARS－COV的蛋白酶抑制剂及其应用

摘要

公开了冠状病毒和SARS－CoV或小核糖核酸病毒的蛋白酶抑制剂，以及所述蛋白酶抑制剂预防、减少、改善和治疗由冠状病毒和SARS－CoV或小核糖核酸病毒引起的疾病和病症的用途。还公开了本发明的化合物减轻或预防冠状病毒或小核糖核酸病毒传播的方法，阻止或减少冠状病毒或小核糖核酸病毒复制的方法。

说明书

背景技术

发明领域

本发明是药物化学领域。本发明特别涉及冠状病毒和SARS-CoV，或小核糖核酸病毒的蛋白酶抑制剂。本发明还涉及上述蛋白酶抑制剂改善或治疗疾病的用途，所述疾病是由冠状病毒、SARS-CoV和小核糖核酸病毒引起的。

现有技术

引起严重急性呼吸道综合症(SARS)的病原体已得到鉴别，为冠状病毒科的一种病毒(Peiris J.et al.Lancet，2003，361：1319-1325)。冠状病毒是正链RNA病毒，具有大基因组尺寸，而且是已知造成动物和人疾病的原因。存在两种冠状病毒HCV OC43和HCV 229E，已知其是引起普通感冒的原因。已经进行了所述冠状病毒的分子生物学研究，充分了解了这些病毒的基因和蛋白质的结构和功能(Lai，M.M.C.和Cavanagh，D.Adv.Virus Res.1997，48：1-100)。已知冠状病毒编码若干蛋白酶，所述蛋白酶处理病毒蛋白质，且这些蛋白酶对于病毒的复制是必不可少的(Ziebuhr J.et al.J.Gen.Virol.2000，81：853-79)。还发现上述蛋白酶是半胱氨酸蛋白酶，包括PL1^pro和PL2^pro，它们是像木瓜蛋白酶的蛋白酶并与口蹄疫病毒leader蛋白酶L^pro和主要的像糜蛋白酶的蛋白酶3CL^pro相似，并与主要的小核糖核酸病毒蛋白酶3C^pro相似。已经报道了冠状病毒的主蛋白酶3CL^pro中的底物特异性的保守性，其具有LQS或LQA，为优选的P2-P1-P1’序列(Hegyi A.和ZiebuhrJ.J.Gen.Virol.2002，83：595-9；和Hegyi，A.et al.J.Gen.Virol.2002，83：581-593)。几个机构测定了引起严重急性呼吸道综合症的新冠状病毒的(SARS-CoV)基因组(Ksiazek，T.et al.N.Engl.J.Med.2003，348：1953-1966；和Drosten，C.et al.N.Engl.J.Med.2003，348：1967-76)。据报道尽管ORF1a的全部基因产物在不同的冠状病毒中具有低的保守性，但是蛋白酶的序列除外。SARs-CoV的ORFla的预计基因产物看来含有一个PLP^pro功能区。在所有的包括SARS-CoV的冠状病毒中，3CL^Pro催化的组氨酸和半胱氨酸的残基有很好地保守性(HiS₃₂₈₁和Cys₃₃₈₅)(Rota P.et al.，Scienceexpress，2003，300：1394-1399)。另外，据报道SARS-CoV的复制酶1a和1b ORFs拥有21.2kb的SARS病毒基因组。这些基因编码若干由大的多聚蛋白的蛋白水解分裂产生的蛋白，与其它冠状病毒复制酶蛋白相比，其在长度和氨基酸序列上是保守的。(Marra M.A.etal.，Scienceexpress，2003，300：1399-1404)。上述结果认为SARS-CoV的蛋白酶应处理与其它冠状病毒相似的病毒蛋白。

冠状病毒的蛋白酶对于处理病毒蛋白和病毒的复制是必不可少的。已经有报道半胱氨酸蛋白酶抑制剂E64d抑制了病毒蛋白转译后的加工和病毒的复制(Kim，J.C.et al.Virology，1995，208：1-8)。因此设计和合成的SARS-CoV和冠状病毒的蛋白酶抑制剂可以有效治疗SARS，以及有效治疗动物和人类中由冠状病毒引起的其它疾病。

在已知的冠状病毒的底物序列的保守性的基础上设计SARS-CoV和冠状病毒的蛋白酶抑制剂，并且优选使用二肽骨架(scaffold)。二肽骨架法已经成功用于有效力的和有效的半胱天冬酶的抑制剂的设计，其是另一类对细胞凋亡很重要的半胱氨酸蛋白酶(美国专利6,184,210)。二肽骨架可以是LQ，其在冠状病毒的主要蛋白酶3CL^pro中是保守的。二肽骨架也可以是RG或RA，对于冠状病毒PLl^pro其是优选的和保守的(Dong，S.，Baker，S.C.Virology，1994，204：541-9；和Hughes S.A.et al.J.Virol.1995，69：809-13)。

小核糖核酸病毒是另一类的RNA病毒，也编码用于加工和释放病毒蛋白的病毒3C蛋白酶，其对于病毒的复制必不可少。小核糖核酸病毒科分为6个亚科(subgroups)，具有相似基因组织和翻译策略。上述亚科包括一些重要的人和兽病原体，例如脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒(肠道病毒)，口蹄疫病毒(口疮病毒)、脑心肌炎病毒(心脏病毒)、A型肝炎病毒(肝病毒)、或人鼻病毒(鼻病毒)。已经测定了数个小核糖核酸病毒3C蛋白酶的晶体结构，包括14型人鼻病毒(Matthews，D.A.et al.Cell，1994，77：761-771)，A型肝炎(Allaire，M.et al.Nature(London)，1994，369：72-76)和脊髓灰质炎病毒(Mosimann，S.C.et al.J.Mol.Biol.1997，273：1032-1047)。小核糖核酸病毒3C蛋白酶是对其底物的Gln-Gly分裂具有不同寻常的特异性的一类独特的酶(Matthews，D.A et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1999，96：11000-11007)。底物Gln-Gly分裂的特异性与冠状病毒的主蛋白酶3CL^pro(M^pro)的特异性相似(Anand，Science，2003，300：1763-1767)。因此，期望本发明的SARS-CoV和冠状病毒的蛋白酶抑制剂作为小核糖核酸病毒3C蛋白酶的抑制剂也应该有作用，并对小核糖核酸病毒引起的疾病的治疗有用。

                      发明概述

本发明提供如上述的具有通式I-X的化合物。上述化合物是SARS-CoV和冠状病毒，或小核糖核酸病毒的蛋白酶的抑制剂。

本发明也提供含有通式I-X的化合物的药物组合物，该化合物以有效量治疗动物中由SARS-CoV和冠状病毒或小核糖核酸病毒引起的疾病。

本发明也涉及本发明的化合物改善、预防或治疗病症的用途，其中SARS-CoV和冠状病毒或小核糖核酸病毒是致病因素。

本发明也涉及提供预防或减少冠状病毒或小核糖核酸病毒传播的方法，包括用本发明的化合物接触怀疑被冠状病毒污染的物品和废物。

本发明也提供预防和减少冠状病毒或小核糖核酸病毒复制的方法，包括用本发明的化合物接触冠状病毒。

                  本发明的详细描述

本发明的SARS-CoV和冠状病毒的蛋白酶的抑制剂包括具有通式(X)的化合物：

其中Y是氢、烷基、CH₂(CH₂)_nC(O)NR₁R₃或CH₂(CH₂)_nNR₁₆C(O)NR₁R₃；

其中n是0-2；

其中R₁和R₃独立地是氢或任选取代的烷基；或R₁和R₃，和与R₁与R₃附着的N一起形成杂环；

其中R₁₆是氢或任选取代的烷基；或R₁₆，和R₁或R₃中的任一，与所附着的原子一起形成杂环；

其中R₂是氢或任选取代的烷基；

其中L是单键，或-ZCR₆R₇C(O)-；

其中R₆和R₇独立地是氢、任选取代的芳基、任选取代的杂环、任选取代的碳环、任选取代的杂芳基、任选取代的烷基、任选取代的链烯基或任选取代的炔基；

其中Z是单键、氧、-CR₈R₉-或下式的结构：

其中R₈和R₉独立地是氢、任选取代的芳基、任选取代的杂环、任选取代的碳环、任选取代的杂芳基、任选取代的烷基、任选取代的链烯基或任选取代的炔基；

其中R₁₀和R₁₁独立地是氢、卤素、卤代烷基、芳基、稠合的芳基、碳环基团、杂环基团、杂芳基、C_1-10烷基、链烯基、炔基、芳烷基、芳基链烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基链烯基、杂芳基炔基、碳环烷基、杂环烷基、羟烷基、氨基烷基、羧烷基、硝基、氨基、氰基、酰氨基、羟基、巯基、酰氧基、叠氮基、烷氧基、羧基、亚甲基二氧基、羰基酰氨基或烷基巯基；

其中X是CR₁₇或N，其中R₁₇是氢、卤素、卤代烷基、芳基、稠合芳基、碳环基团、杂环基团、杂芳基、C_1-10烷基、链烯基、炔基、芳烷基、芳基链烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基链烯基、杂芳基炔基、碳环烷基，杂环烷基、羟烷基、氨基烷基、羧烷基、硝基、氨基、氰基、酰氨基、羟基、巯基、酰氧基、叠氮基、烷氧基、羧基、亚甲基二氧基、羰基酰氨基或烷基巯基；

其中A是1-2个氨基酸的肽或单键；

其中R₅是包含下列结构之一的基团：

其中R₄是任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的苄氧基、任选取代的芳氧基、任选取代的芳基烷氧基、任选取代的烷基胺、任选取代的苄胺、任选取代的芳胺、任选取代的芳烷基胺、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；和

其中R₁₂、R₁₃、R₁₄和R₁₅独立地是氢、卤素、卤代烷基、芳基、稠合芳基、碳环的基团、杂环的基团、杂芳基、C_1-10烷基、链烯基、炔基、芳烷基、芳基链烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基链烯基、杂芳基炔基、碳环烷基、杂环烷基、羟烷基、氨基烷基、羧烷基、硝基、氨基、氰基、酰氨基、羟基、巯基、酰氧基、叠氮基、烷氧基、羧基、亚甲基二氧基、羰基酰氨基或烷基巯基；或R₁₂和R₁₃、R₁₃和R₁₄，R₁₄和R₁₅与和它们连接的原子一起形成芳基、杂芳基、任选取代的碳环基团或任选取代的杂环基团，其中所述基团可以任选取代。

在一个具体实施方式中，本发明的SARS-CoV和冠状病毒的蛋白酶的抑制剂是具有通式I-III的化合物：

或药学上可接受的盐或其前药，其中

R₁和R₃独立地是氢或任选取代的烷基；或R₁和R₃和与R₁和R₃连接的N一起形成杂环；

R₂是氢或任选取代的烷基；

R₄是任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的苄氧基、任选取代的芳氧基、任选取代的芳基烷氧基、任选取代的烷基胺、任选取代的苄基胺、任选取代的芳基胺、任选取代的芳基烷基胺、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；

A是1-2个氨基酸的肽或单键。

在另一个具体实施方式中，本发明的SARS-CoV和冠状病毒的蛋白酶的抑制剂是具有通式IV的化合物：

或药学上可接受的盐或其前药，其中

n是0、1或2；

R₁和R₃独立地是氢或任选取代的烷基；或R₁和R₃和与R₁和R₃连接的N一起形成杂环；

R₂是氢或任选取代的烷基；

A是1-2个氨基酸的肽或单键；

R₅是所述肽或氨基酸的保护基，优选的保护基包括下列结构之一：

其中，

R₄是任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的苄氧基、任选取代的芳氧基、任选取代的芳基烷氧基、任选取代的烷基胺、任选取代的苄胺、任选取代的芳胺、任选取代的芳基烷基胺、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。

在另一个具体实施方式中，本发明的SARS-CoV和冠状病毒的蛋白酶的抑制剂是具有通式V的化合物：

或药学上可接受的盐或其前药，其中

n是0、1或2；

R₁和R₃独立地是氢或任选取代的烷基；或R₁和R₃和与R₁和R₃连接的N一起形成杂环；

R₂是氢或任选取代的烷基；

R₆和R₇独立地是氢、任选取代的芳基、任选取代的杂环、任选取代的碳环、任选取代杂芳基、任选取代的烷基、任选取代的链烯基或任选取代的炔基；

A是1-2个氨基酸的肽或单键；

R₅是所述肽或氨基酸或羟酸的保护基团，如关于通式IV的定义。

在另一个具体实施方式中，本发明的SARS-CoV和冠状病毒的蛋白酶的抑制剂是具有通式VI的化合物：

或药学上可接受的盐或其前药，其中

n是0、1或2；

R₁和R₃独立地是氢或任选取代的烷基；或R₁和R₃和与R₁和R₃连接的N一起形成杂环；

R₂是氢或任选取代的烷基；

R₄是任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的苄氧基、任选取代的芳氧基、任选取代的芳烷氧基、任选取代的烷基胺、任选取代的苄胺、任选取代的芳胺、任选取代的芳烷基胺、任选取代的碳环、任选取代的杂环、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；

R₆、R₇、R₈和R₉独立地是氢、任选取代的芳基、任选取代的杂环、任选取代的碳环、任选取代的杂芳基、任选取代的烷基、任选取代的链烯基或任选取代的炔基。

在另一个具体实施方式中，本发明的SARS-CoV和冠状病毒的蛋白酶的抑制剂是具有通式VII的化合物：

或药学上可接受的盐或其前药，其中

n是0、1或2；

R₁和R₃独立地是氢或任选取代的烷基；或R₁和R₃和与R₁和R₃连接的N一起形成杂环；

R₂是氢或任选取代的烷基；

R₅是如通式IV定义的氨基的保护基；

R₆和R₇独立地是氢、任选取代的芳基、任选取代的杂环、任选取代的碳环、任选取代杂芳基、任选取代的烷基、任选取代的链烯基或任选取代的炔基；

R₁₀和R₁₁独立地是氢、卤素、卤代烷基、芳基、稠合芳基、碳环基团、杂环基团、杂芳基、C_1-10烷基、链烯基、炔基、芳烷基、芳基链烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基链烯基、杂芳基炔基、碳环烷基、杂环烷基、羟烷基、氨基烷基、羧烷基、硝基、氨基、氰基、酰氨基、羟基、巯基、酰氧基、叠氮基、烷氧基、羧基、亚甲基二氧基、羰基酰氨基或烷基巯基；

X是CR₁₇或N，其中R₁₇是氢、卤素、卤代烷基、芳基、稠羰基芳基、碳环基团、杂环基团、杂芳基、C_1-10烷基、链烯基、炔基、芳烷基、芳基链烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基链烯基、杂芳基炔基、碳环烷基，杂环烷基、羟烷基、氨基烷基、羧烷基、硝基、氨基、氰基、酰氨基、羟基、巯基、酰氧基、叠氮基、烷氧基、羧基、亚甲基二氧基、羰基酰氨基或烷基巯基。

在另一个具体实施方式中，本发明的SARS-CoV和冠状病毒的蛋白酶的抑制剂是具有通式VIII的化合物：

或药学上可接受的盐或其前药，其中

n是0、1或2；

R₁和R₃独立地是氢或任选取代的烷基；或R₁和R₃和与R₁和R₃连接的N一起形成杂环；

R₂是氢或任选取代的烷基；

R₆和R₇独立地是氢、任选取代的芳基、任选取代的杂环、任选取代的碳环、任选取代杂芳基、任选取代的烷基、任选取代的链烯基或任选取代的炔基；和

R₅是环状结构，包含以下通式之一：

其中，

R₁₂、R₁₃、R₁₄和R₁₅独立地是氢、卤素、卤代烷基、芳基、稠合芳基、碳环基团、杂环基团、杂芳基、C_1-10烷基、链烯基、炔基、芳烷基、芳基链烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基链烯基、杂芳基炔基、碳环烷基、杂环烷基、羟烷基、氨基烷基、羧烷基、硝基、氨基、氰基、酰氨基、羟基、巯基、酰氧基、叠氮基、烷氧基、羧基、亚甲基二氧基、羰基酰氨基或烷基巯基；或

R₁₂和R₁₃、R₁₃和R₁₄、R₁₄和R₁₅、和与它们连接的原子一起形成芳基、杂芳基、任选取代的碳环基团或任选取代的杂环基团，其中所述基团是任选取代的。

例如，R₁₂和R₁₃、R₁₃和R₁₄、R₁₄和R₁₅，可以一起形成选自如下组的结构：-OCH₂O-、-(CH₂)₃-、-(CH₂)₄-、-OCH₂CH₂O-、-CH₂N(R)CH₂-、-CH₂CH₂N(R)CH₂-、CH₂N(R)CH₂CH₂-、-CH＝CH-CH＝CH-、-N(R)-CH＝CH-、-CH＝CH-N(R)-、-O-CH＝CH-、-CH＝CH-O-、-S-CH＝CH-、-CH＝CH-S-、-N＝CH-CH＝CH-、-CH＝N-CH＝CH-、-CH＝CH-N＝CH-、-CH＝CH-CH＝N-和-N＝CH-CH＝N-、其中R是氢、C_1-10烷基、卤代烷基、芳基、稠合芳基、碳环、杂环基团、杂芳基、链烯基、炔基、芳烷基、芳基链烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基链烯基、杂芳基炔基、碳环烷基，杂环烷基、羟烷基、氨基烷基。

在另一个具体实施方式中，本发明的SARS-CoV和冠状病毒的蛋白酶的抑制剂是具有通式IX的化合物：

或药学上可接受的盐或其前药，其中

R₂是氢或任选取代的烷基；

A是1-2个氨基酸的肽或单键；

R₅是所述肽或氨基酸的保护基；

R₁和R₃独立地是氢或任选取代的烷基；或R₁和R₃和与R₁和R₃连接的N一起形成杂环；

R₁₆是氢或任选取代的烷基；或

R₁₆，与R₁或R₃之一，和所连接的原子一起形成杂环。

优选A是氨基酸。可组成肽A的1个或2个氨基酸的实例包括20个普通氨基酸的任一，如Ala、Val、Leu、Ile、Pro、Phe、Trp、Met、Gly、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asp、Asn、Glu、Asn、Lys、Arg和His，或非天然氨基酸例如2-甲基缬氨酸、2-甲基丙氨酸、(2-异丙基)-β-丙氨酸、苯基甘氨酸、4-甲基苯基甘氨酸、4-异丙基苯基甘氨酸、3-溴苯基甘氨酸、4-溴苯基甘氨酸、4-氯苯基甘氨酸、4-甲氧基苯基甘氨酸、4-乙氧基苯基甘氨酸、4-羟基苯基甘氨酸、3-羟基苯基甘氨酸、3，4-二羟基苯基甘氨酸、3，5-二羟基苯基甘氨酸、2，5-二羟基苯基甘氨酸、2-氟苯基甘氨酸、3-氟苯基甘氨酸、4-氟苯基甘氨酸、2，3-二氟苯基甘氨酸、2，4-二氟苯基甘氨酸、2，5-二氟苯基甘氨酸、2，6-二氟苯基甘氨酸、3，4-二氟苯基甘氨酸、3，5-二氟苯基甘氨酸、2-(三氟甲基)苯基甘氨酸、3-(三氟甲基)苯基甘氨酸、4-(三氟甲基)苯基甘氨酸、2-(2-噻吩基)甘氨酸、2-(3-噻吩基)甘氨酸、2-(2-呋喃基)甘氨酸、3-吡啶基甘氨酸、4-氟苯丙氨酸、4-氯苯丙氨酸、2-溴苯丙氨酸、3-溴苯丙氨酸、4-溴苯丙氨酸、2-萘基丙氨酸、3-(2-喹啉基(quinoyl))丙氨酸、3-(9-蒽基)丙氨酸、2-氨基-3-苯基丁酸、3-氯苯丙氨酸、3-(2-噻吩基)丙氨酸、3-(3-噻吩基)丙氨酸、3-苯基丝氨酸、3-(2-吡啶基)丝氨酸、3-(3-吡啶基)丝氨酸、3-(4-吡啶基)丝氨酸、3-(2-噻吩基)丝氨酸、3-(2-呋喃基)丝氨酸、3-(2-噻唑基)丙氨酸、3-(4-噻唑基)丙氨酸、3-(1，2，4-三唑-1-基)-丙氨酸、3-(1，2，4-三唑-3-基)-丙氨酸、六氟缬氨酸、4，4，4-三氟缬氨酸、3-氟缬氨酸、5，5，5-三氟亮氨酸、2-氨基-4，4，4-三氟丁酸、3-氯丙氨酸、3-氟丙氨酸、2-氨基-3-氟丁酸、3-氟正亮氨酸、4，4，4-三氟苏氨酸、L-烯丙基甘氨酸、叔亮氨酸、炔丙基甘氨酸、乙烯基甘氨酸、S-甲基半胱氨酸、环戊基甘氨酸、环己基甘氨酸、3-羟基正缬氨酸、4-氮亮氨酸、3-羟基亮氨酸、2-氨基-3-羟基-3-甲基丁酸、4-硫代异亮氨酸、阿西维辛、鹅膏蕈氨酸、使君子氨酸(quisqalic acid)、2-茚满基甘氨酸、2-氨基异丁酸、2-环丁基-2-苯基甘氨酸、2-异丙基-2-苯基甘氨酸、2-甲基缬氨酸、2，2-二苯基甘氨酸、1-氨基-1-环丙烷羧酸、1-氨基-1-环戊烷羧酸、1-氨基-1-环己烷羧酸、3-氨基-4，4，4-三氟丁酸、3-苯基异丝氨酸、3-氨基-2-羟基-5-甲基己酸、3-氨基-2-羟基-4-苯基丁酸、3-氨基-3-(4-溴苯基)丙酸、3-氨基-3-(4-氯苯基)丙酸、3-氨基-3-(4-甲氧基苯基)丙酸、3-氨基-3-(4-氟苯基)丙酸、3-氨基-3-(2-氟苯基)丙酸、3-氨基-3-(4-硝基苯基)丙酸和3-氨基-3-(1-萘基)丙酸。上述非天然氨基酸可以是从下列商业供应者中购得，所述商业供应者包括Aldrich、Sigma、Fluka、Lancaster、ICN、TCI、AdvancedChemTech、Oakwood Products、Indofine Chemical Company、NSCTechnology、PCR Research Chemicals、Bachem、Acros Organics、Celgene、Bionet Research、Tyger Scientific、Tocris、ResearchPlus、Ash Stevens、Kanto、Chiroscience、和Peninsula Lab。通过文献公开的生产过程能够合成下列氨基酸：3，3，3-三氟丙氨酸(Sakai，T.；et al.Tetrahedron 1996，52，233)和3，3-二氟丙氨酸(D′Orchymont，H.Synthesis 1993，10，961)。当A是氨基酸时，式I化合物的优选氨基酸为Leu、Val、Ile、Ala、Pro、Phe、Trp、Met、Tyr。式II和式III的化合物的优选氨基酸是Arg和Lys。当A是碱性氨基酸如谷氨酰胺时，其可以为相应的酰胺、烷基酰胺、二烷基酰胺。

关于R₁和R₃，优选的烷基基团是C_1-6烷基例如甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基、戊基和己基。最优选的R₁和R₃基团之一是甲基。另一个最优选的R₁和R₃基团是，R₁为氢，R₃为一个烷基基团。

关于R₂，优选的R₂是用带负电的基团或离去基团取代的烷基，包括氟代甲基、氯代甲基、烷氧基甲基、芳氧基甲基、杂芳氧基甲基、烷基硫代甲基、芳基硫代甲基、芳烷基硫代甲基、氨甲基、酰氧基甲基和芳基酰氧基甲基。在R₂烷基基团中可以存在的其它任选取代基的实例包括，但不限于，在2、4和5位用低级烷基任选取代的3-吡唑基氧基；3-(1-苯基-3-三氟甲基)吡唑基氧基(PTP)、2，6-二(三氟甲基)苯甲酰氧基、2，6-二甲基苯甲酰氧基、五氟-苯氧基、2，6-二氯苯甲酰氧基(DCB)、2-(3-(2-咪唑基)萘基)氧基、二苯基氧膦基氧基、特窗酰基氧基(tetronyloxy)、和特窗氨酰基氧基(tetramoyloxy)。根据美国专利6,495,522；Dolle，R.E.etal.，J.Med.Chem.37：563-4(1994)或Dolle，R.E.et al.，J.Med.Chem.37：3863-6(1994)公开的技术可以制备DCB或PTP的修饰产物；在此引入上述全部作为参考。

关于R₄，优选的烷基是甲基、乙基、异丙基、异丁基；烷基上优选的取代基是羟基、羧基、卤素、C₄-C₇环烷基、饱和和不饱和的杂环基、芳基或杂芳基；优选的环烷基是环戊基和环己基；优选的饱和和不饱和的杂环基团是哌啶基和吗啉基；优选的芳基是苯基和萘基；优选的杂芳基是吡啶基、吲哚基、呋喃基和噻吩基；芳基和杂芳基上优选的取代基是甲基、乙基、氯、氟、溴、三氟甲基、甲氧基、羟基、羧基、氰基和硝基。优选的杂环包括环胺如哌嗪、哌啶、吗啉和N-甲基哌嗪。

关于R₆和R₇，优选R₆和R₇之一是氢。关于R₈和R₉，优选R₈和R₉之一是氢，或R₈和R₉两者优选是氢。优选的n是1。

式I-X表示的化合物是SARS-CoV和冠状病毒的蛋白酶的抑制剂，并阻断SARS-CoV和冠状病毒的蛋白酶以及所述病毒的复制。因此，本发明也涉及治疗、预防或改善SARS-CoV和冠状病毒在其中起作用的病症的方法。所述病症在下文中更全面地描述。

式I-X表示的化合物也是小核糖核酸病毒的蛋白酶的抑制剂，并阻断所述病毒的复制，包括脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒(肠道病毒)，口蹄疫病毒(口疮病毒)、脑心肌炎病毒(心脏病毒)、A型肝炎病毒(肝病毒)、或人鼻病毒(鼻病毒)。因此，本发明也涉及治疗、预防或改善小核糖核酸病毒在其中起作用的病症的方法。

所述方法包括对需要上述治疗的动物给予抑制SARS-CoV和冠状病毒或小核糖核酸病毒的有效量的本发明的抑制剂，或药学上可接受的盐或其前药。

优选的具有式I-X的SARS-CoV和冠状病毒或小核糖核酸病毒的蛋白酶的抑制剂包括，但不限于：

Cbz-Leu-Gln-fmk；

4-(Cbz-Val-Leu-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸二甲基酰胺；

4-(Cbz-Leu-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸甲基酰胺；

(与Cbz-Leu-Gln-fmk相同)

4-(Cbz-Ile-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸甲基酰胺；

4-(Cbz-Val-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸甲基酰胺；

3-(Cbz-Val-酰氨基)-5-氟-4-氧-戊酸二甲基酰胺；

(这是Z-VD-fmk)

4-(Cbz-Leu-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸二甲基酰胺；

4-(Cbz-Ile-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸二甲基酰胺；

4-(Cbz-Val-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸二甲基酰胺；

4-(Cbz-Ala-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸二甲基酰胺；

4-(Cbz-Gly-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸二甲基酰胺；

Ac-Leu-Gln-fmk；

Cbz-Val-Gln-fmk；

Ac-Val-Gln-fmk；

Cbz-Ile-Gln-fmk；

Ac-Ile-Gln-fmk；

Cbz-Leu-Gln-DCB-甲基酮；

Cbz-Gln-fmk；

Ac-Gln-fmk；

Cbz-Arg-Gly-fmk；

Ac-Arg-Gly-fmk；

Cbz-Lys-Gly-fmk；

Ac-Lys-Gly-fmk；

Cbz-Arg-Gly-DCB-甲基酮；

Cbz-Gly-fmk；

Ac-Gly-fmk；

Cbz-Arg-Ala-fmk；

Ac-Arg-Ala-fmk；

Cbz-Lys-Ala-fmk；

Ac-Lys-Ala-fmk；

Cbz-Arg-Ala-DCB-甲基酮；

Cbz-Ala-fmk；

Ac-Ala-fmk；

其中Cbz是苄氧基羰基，DCB是2，6-二氯苯甲酰基氧基以及fmk是氟代甲基酮。

适用的芳基是C_6-14芳基，尤其是C_6-10芳基。典型C_6-14芳基包括苯基、萘基、菲基、蒽基、茚基、薁基、联苯、亚联苯基和芴基。

适用的环烷基是C_3-8环烷基。典型环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。

适用的饱和或部分饱和的碳环基团包括如上定义的环烷基，以及环烯基，例如环戊烯基、环庚烯基和环辛烯基。

适用的卤代或卤素基团包括氟、氯、溴和碘。

适用的烷基包括直链和支链C_1-10烷基，更优选C_1-6烷基。典型C_1-10烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、3-戊基、己基和辛基。也可以考虑位于本发明化合物的苯环上的两个相邻位点的三亚甲基。

适用的链烯基包括直链或支链的C_2-10链烯基、更优选C_2-6链烯基。典型C_2-10链烯基包括乙烯基、丙稀基、异丙稀基、丁烯基、戊烯基、己烯基和辛烯基。

适用的炔基包括直链或支链的C_2-10炔基、更优选C_2-6炔基。典型C_2-10炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基和辛炔基。

适用的芳基烷基包括被上述任何C_6-14芳基取代的上述任何C_1-10烷基。适用的基团包括苄基、苯乙基和萘甲基。

适用的卤代烷基包括被一个或多个氟、氯、溴或碘原子取代的C_1-10烷基，例如氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、五氟乙基、1，1-二氟乙基、氯甲基、氯氟甲基和三氯甲基。

适用的烷氧基包括被一个上述C_1-10烷基取代的氧。

适用的烷硫基包括被一个上述C_1-10烷基取代的硫，还包括这些烷硫基的亚砜和砜类化合物。

适用的酰氨基是任何与氨基氮相连的C_1-6酰基(烷酰基)，例如乙酰氨基、丙酰氨基、丁酰氨基、戊酰氨基、己酰氨基，以及芳基取代的C_2-6取代酰基。

适用的酰氧基是任何与氧基(-O-)相连的C_1-6酰基(烷酰基)，例如甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、戊酰氧基、己酰氧基等。

适用的芳基酰氧基包括取代在上述任何酰氧基上的上述任何芳基，例如2，6-二氯苯甲酰氧基、2，6-二氟苯甲酰氧基和2，6-二(三氟甲基)苯甲酰氧基。

适用的氨基包括-NH₂、-NHR₁₁和-NR₁₁R₁₂，其中R₁₁和R₁₂是定义如上的C_1-10烷基或环烷基。

适用的饱和或部分饱和的杂环基团包括四氢呋喃基、吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、咪唑烷基、咪唑啉基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、奎宁环基、吗啉基、异苯并二氢吡喃基、苯并二氢吡喃基、吡唑烷基和吡唑啉基、特窗酰基和特窗氨酰基。

适用的杂芳基包括下列的任一基团：噻吩基、苯并[b]噻吩基、萘并[2，3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、吡喃基、异苯并呋喃基、色烯基(chromenyl)、呫吨基、吩黄嘌呤基(phenoxanthiinyl)、2H-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、中氮茚基、异吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基(phthalzinyl)、1，5-二氮杂萘基(naphthyridinyl)、喹喔啉基(quinozalinyl)、噌啉基、喋啶基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基(acrindinyl)、啶基(perimidinyl)、菲咯啉基、吩嗪基、异噻唑基、吩噻嗪基、异噁唑基、呋咱基、吩噁嗪基、1，4-二氢喹喔啉-2，3-二酮、7-氨基异香豆素、吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮、1，2-苯并异噁唑-3-基、苯并咪唑基、2-羟吲哚基和2-氧代苯并咪唑基。在环上含有氮原子的杂芳基中，该氮原子可以是N-氧化物形式，例如吡啶基N-氧化物、吡嗪基N-氧化物、嘧啶基N-氧化物等。

保护基R₅包括但不限于具有式IVa、IVb、IVc的基团。具体的例子包括烷酰基(例如，乙酰基、丙酰基、叔丁酰基)，苄氧基羰基和叔-丁氧羰基。

任选的取代基包括一个或多个烷基；卤素；卤代烷基；环烷基；；被一个或多个低级烷基、卤素、卤代烷基、或杂芳基任选取代的芳基；被一个或多个低级烷基、卤素、卤代烷基或杂芳基任选取代的芳氧基；芳烷基；被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基任选取代的杂芳基；被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基任选取代的杂芳氧基；烷氧基；烷硫基；芳基硫基；氨基；酰氧基；被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基任选取代的芳基酰氧基；被一个或多个低级烷基、卤素或卤代烷基任选取代的二苯基氧膦基氧基；被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基任选取代的杂环；被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基任选取代的杂环烷基氧基；被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基任选取代的部分不饱和杂环烷基；或被一个或多个低级烷基、卤代烷基和芳基任选取代的部分不饱和的杂环烷基氧基。

本发明的某些化合物可以以包括光学异构体的立体异构体存在。本发明包括所有的立体异构体，和这些异构体的外消旋混合物以及可按照本领域普遍专业技术人员熟知的那些方法分离的各种单个对映体。

药学上可接受加成盐的例子包括无机酸和有机酸加成盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、扁桃酸盐和草酸盐；以及无机和有机碱加成盐，例如氢氧化钠和三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS，tromethane)。

前药的实例包括式I-X化合物，其中的R₁是烷基或取代的烷基如CH₂OCH₃和CH₂OCOCH₃(AM酯)。

本发明的化合物可以采用本领域技术人员熟知的方法或本发明的新方法来制备。式I的蛋白酶抑制剂可以按照方案1例举的反应制备。酯1通过与如氨/甲醇形式的氨反应可以转化为酰胺2。酰胺2与2-氟乙醇的Swern氧化得到的醛中间体的反应将产生硝基-醇3。3氢化还原将产生氨基-醇4。4与N-保护的亮氨酸如Z-Leu-OH偶合将得到酰胺5，其可以由Dess-martin试剂或PCC(氯铬酸吡啶鎓)氧化得到6。为了制备谷氨酰胺的酰胺基团上具有烷基的化合物，采用取代的胺而不是氨来制备2。例如，1与甲胺反应制得甲基酰胺类似物，1与二甲基胺反应制得二甲基酰胺的类似物。

方案1

式II的蛋白酶抑制剂可以按照方案2例举的反应制备。硝基乙烷7与醛中间体反应得到硝基-醇8。8氢化还原制得氨基-醇9。9与N-保护的精氨酸如Z-Arg-OH的偶合得到酰胺10，其可以被Dess-Martin试剂氧化而得到11。

方案2

在方案2中用硝基甲烷替代硝基乙烷，该反应将产生如方案3例举的式III的蛋白酶抑制剂。

方案3

采用方案4中例举的N-保护的氨基酸或肽可以制备式IV的蛋白酶抑制剂。4与N-保护的氨基酸如TOS-Phe-OH的偶合将得到酰胺17，其可以被Dess-Martin试剂氧化而得到18。

方案4

采用方案5中列举的O-保护的α-羟酸可以制得式V的蛋白酶抑制剂。4与O-保护的α-羟酸例如19的偶合将得到酰胺20，按照美国专利号6,495,522或WO01/71707的公开内容可以制得19。用Dess-Martin试剂氧化20产生21。

方案5

采用方案6中例举的取代的琥珀酸，可以制得式VI的蛋白酶抑制剂。4与取代的琥珀酸如22的偶合将得到酰胺23。用Dess-Martin试剂氧化23产生24。乙基酯基团可以转化为其它基团，如在碱性条件下水解，紧接着与胺偶合反应。

方案6

采用方案7例举的取代的吡啶酮可以制得式VII的蛋白酶抑制剂。4与取代的吡啶酮如25的反应将得到酰胺26，根据已报道的步骤(Semple etaL，Bioorg Med.Chem.Lett.7，1337-1342，1997)可以制备25。用Dess-Martin试剂氧化26产生27。

方案7

按照方案8中例举的取代的吡啶酮可以制备式VIII的蛋白酶抑制剂。取代的吡啶酮如28与取代的2-溴乙酸酯如由已报道的步骤(Semple et al.，Bioorg Med.Chem.Lett.7，1337-1342，1997)得到的29反应，得到吡啶酮取代的酯30，其可以被碱如NaOH水解得到酸31。31与胺4偶合得到酰胺32。用Dess-Martin试剂氧化32产生33。

方案8

按照方案9例举的反应可以制备式IX的蛋白酶抑制剂。脲34与甲苯-4-磺酸2-硝基-乙基酯35在碱如K₂CO3存的条件下反应制备取代的脲36。酰胺36与2-氟乙醇的Swern氧化产生的醛中间体的反应将得到硝基-醇37。37氢化还原得到氨基-醇38。38与N-保护的亮氨酸如Z-Leu-OH的偶合将得到酰胺39，将其用Dess-Martin试剂和PCC(氯铬酸吡啶鎓)氧化产生40。

方案9

按照方案10中例举的反应制备式XI的蛋白酶抑制剂，其中R₁₆，与R₁或R₃中的一个，和所连接的原子一起形成杂环。该取代的环化的脲42可以通过在碱存如NaH存在的条件下脲41与甲苯-4-磺酸2-硝基-乙基酯35的反应制得。与方案9相似，从42开始用4步制得最终产物43。

方案10

采用方案11例举的取代琥珀酸制备式VI的蛋白酶抑制剂。酸44与取代的胺如苄胺的偶合，紧接着水解，应制得酸45。45与胺中间体偶合，紧接着与方案6相似的氧化步骤产生产物46。

方案11

按照方案12例举的反应可以制得式IV蛋白酶抑制剂，其中R₂是取代的烷基CH₂X且X是二氯苯甲酰基氧基。酸47与胺偶合，紧接着脱去叔丁基保护应制得酸48。先用EtOCOCl处理酸48，然后用重氮甲烷进行处理，使其转化为重氮甲基酮，紧接着用HBr处理得到溴代甲基酮49。溴代甲基酮49与2，6-二氯苯甲酸反应产生DCB化合物50。氢化脱去Cbz基团保护得到胺51，其与Cbz保护的酸如Cbz-Val偶合得到产物52。

方案12

按照方案13中例举的反应制备式IV的蛋白酶抑制剂，其中Gln部分从手性起始原料开始制备，且制备成单个的立体异构体。从Boc-L-Gln(N，N-Me₂)开始，按照公开的步骤(Morris，T.S.etal.Bioorg Med.Chem.1997，5：97-807)制备手性中间体58，将其与Cbz保护的酸如Cbz-Val偶合得到单个立体异构体的产物59。

方案13

通过数种方法测定上述化合物的蛋白酶抑制活性。例如，采用已知的冠状病毒蛋白酶测定上述化合物的蛋白酶抑制活性，如FIPV3CL^Pro(Hegyi A.和Ziebuhr J.J.Gen.Virol.2002，83：595-9；和Hegyi，A.et al.J.Gen.Virol.2002，83：581-593)，或SARS-COVM^pro(Yang et al，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，2003，100：13190-13195)。使用冠状病毒感染的细胞测定所述化合物的蛋白酶抑制活性，如MHV-A59感染的鼠科动物DBT细胞(Kim，J.C.etal.Virology，1995，208：1-8)，或SARS-CoV感染的Vero-细胞(Drosten，C.et al.N.Engl.J.Med.2003，348：1967-76)。SARS-CoV感染的Vero-细胞检验测量化合物对SARS-CoV-诱导的细胞死亡(细胞病变效应(CPE))的保护效应，作为测量化合物对SARS-CoV的复制的抑制作用的方法(Cinatl J，et al.Lancet，2003，361：2045-6；和Tan E.L.C.et al.Emerg.Infect.Dis.2004，10：581-586)。

本发明的重要方面是具有式I-X的化合物是SARS-CoV和冠状病毒的蛋白酶抑制剂。因此，期望这些抑制剂阻断和杀死多种临床病症中的SARS-CoV和冠状病毒，所述临床病症中存在SARS-CoV和冠状病毒的感染，包括动物和人类。

本发明的另一个重要的方面是具有式I-X的化合物也是小核糖核酸病毒的蛋白酶的抑制剂，如脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒(肠道病毒)，口蹄疫病毒(口疮病毒)、脑心肌炎病毒(心脏病毒)、A型肝炎病毒(肝病毒)、或人鼻病毒(鼻病毒)。因此，期望这些抑制剂阻断和杀死多种临床病症中的小核糖核酸病毒，所述临床病症中存在小核糖核酸病毒的感染，包括动物和人类。

含有效量本发明范围内的组合物包括其中含有实现上述目的有效量的本发明化合物的所有组合物。当各别需要改变时，各成分的最佳有效量范围的确定在本领域技术范围内。通常，所述的化合物在对哺乳动物如人体给药时口服剂量可以是例如每天0.0025-50mg/kg被治疗哺乳动物体重，或等效量的其药学可接受盐，用于治疗该哺乳动物的SARS-CoV或冠状病毒引起的病症。优选地，经口服给予约0.01-约10mg/kg以治疗或预防此类疾病。对于肌肉内注射，剂量通常约为口服剂量的半数。该药品也可以IV、吸入、鼻内喷雾给药。

单位口服剂量可以含有约0.01-约50mg，优选约0.1-约10mg的化合物。单位剂量可以以一个或多个片剂每天给药1次或数次，各片剂中含有约0.1-约10，常为0.25-50mg的化合物或其溶剂化物。

在局部制剂中，所述化合物可以以约0.01-100mg/g载体的浓度存在。

除了施用作为原料化学品的化合物以外，本发明的化合物可以作为药物制剂的组成部分给药，该组合物含有适宜的药学可接受载体，其包括辅助化合物加工成为可药用制剂的赋形剂和辅剂。优选地，所述制剂特别是经口服或经局部给药和可用于优选给药剂型的那些制剂如片剂、糖衣丸、缓释锭剂和胶囊、口腔洗剂和漱口剂、凝胶、液体混悬液、护发素、发用凝胶、香波，和可以直肠给药的制剂如栓剂，以及通过注射、局部或口服给药的适用溶液，含有约0.01-99％，优选约0.25-75％活性化合物，以及所述赋形剂。

属于本发明范围内的是本发明的化合物的无毒药学上可接受盐。通过将本发明的溶液与药学可接受无毒酸的溶液混合可以制备酸加成盐，所述酸例如盐酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、乙酸、柠檬酸、酒石酸、碳酸、磷酸、草酸等。通过将本发明的特定化合物的溶液与药学可接受无毒碱的溶液混合可以制备碱性盐，所述碱例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化胆碱、碳酸钠Tris等。

本发明的药物组合物可以施用给任何感受到本发明化合物有益效应的动物。虽然本发明不受此限制，上述动物为哺乳动物，例如人和兽医类动物如牛、羊、马、鸡等。

SARS-CoV和冠状病毒和小核糖核酸病毒的蛋白酶抑制剂及其药物组合物可以通过实现上述目的的任何方式给药，所述病毒如脊髓灰质炎病毒、柯萨基病毒(肠道病毒)，口蹄疫病毒(口疮病毒)、脑心肌炎病毒(心脏病毒)、A型肝炎病毒(肝病毒)、或人鼻病毒(鼻病毒)。例如，给药可以经胃肠外、皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、经皮、经颊、鞘内、颅内、鼻内、吸入或局部途径给药。二者择一地或常常是经口服途径给药。施用的剂量取决于接受者的年龄、健康和体重、如果存在的话联合疗法的种类、治疗的频率和预期作用的特性。

本发明的药物制剂是以其本身已知的方式制备，例如，通过常规混合、制粒、糖衣掩蔽、溶解或冷冻干燥过程的方式。因此，通过混合活性化合物和固体赋形剂可以获得口服用药物制剂，任选地将所得混合物研磨并且加工为颗粒的混合物，如果希望或需要的话，加入适当辅剂后，得到片剂或糖衣片芯。

适用的赋形剂特别是：填充剂如糖，例如乳糖或蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇、纤维素制剂和/或磷酸钙，如磷酸三钙或磷酸氢钙；和粘合剂，例如淀粉糊，如采用玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、土豆淀粉、明胶、黄耆胶、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮。如果希望，可以加入崩解剂，例如上述淀粉和羧甲基淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸及其盐，如藻酸钠。首先，辅剂是流动调节剂和润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸或其盐，如硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇。提供的糖衣片芯具有适当的包衣，如果需要，该包衣可以耐受胃液。出于此目的，可以采用浓缩的糖溶液，其任选地含有阿拉伯胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛、紫胶溶液和适当的有机溶剂或溶剂混合物。为了制备耐胃液的包衣，利用适当纤维素制剂如邻苯二甲酸醋酸纤维素或邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素的溶液。片剂或糖衣中可以加入染料或颜料，譬如用于识别或为了使活性化合物剂量的组合具有特征。

其他可以用于口服的药物制剂包括有由明胶组成的推嵌式胶囊以及由明胶和增塑剂如甘油或山梨糖醇组成的软的密封胶囊。推嵌式胶囊可以含有颗粒形式的活性化合物，其可以与填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉和/或润滑剂如滑石粉或硬脂酸镁和任选的稳定剂混合。在软胶囊中，活性化合物优选溶于或悬浮在适当液体中，如脂肪油或液体石蜡。此外，可以加入稳定剂。

可用于直肠的可能的药物制剂包括，例如栓剂，其由一种或多种活性化合物与栓剂基质的联合组成。适用的栓剂基质例如是天然或合成甘油三酯，或链烷烃。此外，也可以采用明胶直肠胶囊，其由活性化合物与基质的联合形式组成。可行的基质原料包括，例如液态甘油三酯、聚乙二醇或链烷烃。

适合胃肠外给药的制剂包括水可溶形式的活性化合物的水溶液，例如水溶性盐和碱性溶液。此外，可以施用活性化合物的混悬液作为适宜的油性注射混悬液。适用的亲脂性溶剂或载体包括：脂肪油，例如芝麻油；或合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯或聚乙二醇-400(这些化合物可溶于PEG-400)。含水注射混悬液可以含有提高混悬液粘度的物质，包括如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇和/或葡聚糖。任选地，混悬液可以含有稳定剂。

本发明的局部组合物通过选择适当的载体优选地配制为油、霜剂、洗剂、软膏等。适用的载体包括植物或矿物油、白凡士林(白色软石蜡)、支链脂肪或油、动物脂肪和高分子量醇(大于C₁₂)。优选的载体是活性成分可溶于其中的那些载体。组合物中还可以含有乳化剂、稳定剂、保湿剂和抗氧剂，如果希望也可以含有着色剂或香料。此外，透皮制剂促进剂可以是用在上述局部制剂中。此类促进剂的实例可以参见U.S.专利号3,989,816和4,444,762。

霜剂优选由矿物油、自乳化蜂蜡和水的混合物配制，其中溶于少量油如杏仁油中的活性成分混合在该混合物中。此类霜剂的典型实例是一种含有约40份水、约20份蜂蜡、约40份矿物油和约1份杏仁油的霜剂。

通过混合活性成分在植物油如杏仁油中的溶液与热的软石蜡并使该组合物冷却可以配制得到软膏。此类软膏的典型实例是一种含有约30％(重量)杏仁油和约70％(重量)白色软石蜡的软膏。

洗剂一般通过将活性成分溶解在适当的高分子量醇如丙二醇或聚乙二醇中制成。

此外，这些组合物可以含有其他药剂、抗病毒剂和载体等，这是所属领域普通技术人员熟知的或明显的。本发明的组合物可以施用给需要该组合物动物，例如业已患有冠状病毒感染，怀疑冠状病毒感染或处于遭受冠状病毒感染的危险中的动物。给予处于冠状病毒感染危险中的动物该化合物，目的是尝试避免该动物感染冠状病毒，例如，预防病毒从别的传染源到动物的传播。

本发明还提供预防或减少冠状病毒或小核糖核酸病毒的传播的方法，包括把怀疑被冠状病毒污染的物品和废料与本发明的化合物接触。通常，该化合物为溶液形式，例如任选加入清洁剂或非离子的表面活性剂的水溶液。在此具体实施方案中，物品的表面与含该化合物的溶液接触。上述物品的例子包括但不限于医疗器械，如镊子、插管(intabation tube)和解剖刀；绷带和面罩；检查台和其它设备；地板等。另一个实施方案中，用本发明的化合物来处理来自于感染冠状病毒的病人的传染性的废料。所述传染性的废料包括但不限于痰、血液、尿、脑脊髓液和粪。

本发明进一步提供防止冠状病毒或小核糖核酸病毒的复制的方法，包括用本发明的化合物接触冠状病毒。所述冠状病毒可以污染上述的物品或传染性的废料，或存在于作为传染性生物体的细胞、组织或动物中。

                     实施例1

                  4-硝基-丁酰胺

在0℃下，向存在于甲醇(20ml)中的4-硝基丁酸甲酯(8.38g，60mmol)溶液中加入存在于甲醇中的氨溶液(7N，30ml)。令该溶液加热至室温同时搅拌72h。蒸发除去溶剂，将剩余物在乙酸乙酯中重结晶得到标题产物(6.2g，78％)。¹H NMR(丙酮-d₆)：6.86(bs，NH，1H)，6.28(bs，NH，1H)，4.59(t，J＝6.9Hz，2H)，2.36-2.30(m，2H)，2.28-2.20(m，2H)。

                      实施例2

            6-氟-5-羟基-4-硝基-己酸酰胺

在-78℃下，向存在于无水二氯甲烷(30mL)中的乙二酰氯(5.29g，41.4mmol)溶液中逐滴加入无水DMSO(6.2mL，87.4mmol)，并以保持温度为-50℃至-60℃的速度持续搅拌。溶液搅拌15分后，再滴加2-氟乙醇(1.62mL，27.6mmol)并搅拌15分钟，用二氯甲烷(100mL)稀释，紧接着加入无水Et₃N(13.5mL)。反应的混合物搅拌15分钟，随后加热至0℃并在0℃搅拌2h。向反应的混合物中加入存在于CH₂Cl₂/THF(50mL，1∶1)中的4-硝基-丁酰胺(3.04g，23mmol)溶液。在0℃下搅拌反应混合物3h，随后在室温下搅拌过夜。该混合物浓缩至大约20mL，并倒入水(180mL)中。用乙酸乙酯(12×40mL)萃取，蒸发干燥合并的有机层，再用硅胶(CH₂Cl₂/EtOAc)提纯残留物得到1.84g(41％)的标题产物，为无色的粘稠的油。¹H NMR(丙酮-d6)：6.88(bs，NH，1H)，6.31(bs，NH，1H)，5.20-4.20(m，5H)，2.40-2.15(m，4H)。

                      实施例3

            4-氨基-6-氟-5-羟基-己酸酰胺

向存在于MeOH(20mL)的6-氟-5-羟基-4-硝基-己酸酰胺(0.5g，2.58mmol)溶液中加入Raney Ni(约200mg)，随后在室温H₂(40-45psi)条件下振摇混合物6h。过滤并用MeOH(3×10mL)洗催化剂。蒸发掉该MeOH溶液，无需进一步纯化即可使用残留的油(435mg)。¹H NMR(丙酮-d6)：6.85(bs，NH，1H)，6.15(bs，NH，1H)，4.70-4.25(m，3H)，3.65-3.50(m，1H)，2.86(bs，2H)，2.40-2.20(m，4H)。

                      实施例4

        4-(Cbz-Leu-酰氨基)-6-氟-5-羟基-己酸酰胺

向存在于THF(20mL)的Cbz-亮氨酸(132.7mg，0.5mmol)溶液中加入EDCI(96mg，0.5mmol)、HOBT(67.5mg，0.5mmol)和DMAP(130.5mg，0.25mmol)。所得的混合物搅拌10分钟，随后加入存在于DMF(2mL)的4-氨基-6-氟-5-羟基-己酸酰胺(82mg，0.5mmol)溶液，在室温下搅拌其过夜。蒸发掉溶剂，用乙酸乙酯(20mL)稀释残留物。用水(4×20mL)洗涤溶液，蒸发干燥有机层。通过硅胶(己烷-EtOAc，1∶1至EtOAc/MeOH＝3∶1)采用色谱法纯化残留物得到85mg(41％)的标题化合物，为白色固体。¹H NMR(丙酮-d6)：7.38-7.15(m，5H)，7.08(bs，1H)，6.80(bs，1H)，6.54(bs，1H)，6.31(bs，1H)，5.09(s，2H)，4.70-3.80(m，5H)，2.20(t，J＝6.90Hz，H)，185(m，2H)，175(m，1H)，1.62(m，2H)，0.93(m，6H)。

                      实施例5

                   Cbz-Leu-Gln-fmk

在0℃下，向存在于CH₂Cl₂(20mL)中的4-(Cbz-Leu-酰氨基)-6-氟-5-羟基-己酸酰胺(82mg，0.2mmol)溶液中加入在CH₂Cl₂(12ml)中的Dess-Martin全碘烷(254mg，0.6mmol)，所得的白色混合物在室温下搅拌4h。蒸发掉溶剂，用乙酸乙酯(40mL)稀释残留物。用水(5×20mL)洗涤，干燥浓缩有机层。用柱色谱法(EtOAc/MeOH 8∶1)纯化该残留物得到标题产物(18mg，22％)，为基于¹H NMR测量的环状或开环的混合物。¹H NMR(丙酮-d6)：7.38-7.15(m，5H)，7.10-7.00(m，1.2H)，6.60(m，1H)，6.31(bs，0.2H)，5.09(s，2H)，4.55-4.15(m，4H)，2.35(m，2H)，1.76(m，2H)，1.65(m，2H)，0.93(m，6H)。

                        实施例6

    4-(Cbz-Val-Leu-酰氨基)-6-氟-5-羟基-己酸二甲基酰胺

应用与实施例4相似的方法制备标题化合物。由Cbz-Val-Leu(189.9mg，0.52lmmol)和4-氨基-6-氟-5-羟基-己酸二甲基酰胺(100mg，0.521mmol)得到56mg(20％)的标题化合物。¹H NMR(丙酮-d6)：7.70-7.05(m，7H)，6.60-6.40(m，1H)，5.20-5.00(m，2H)，5.60-3.70(m，6H)，6.80(bs，1H)，2.90-2.70(m，6H)，2.45-2.30(m，2H)，2.15(m，1H)，1.90(m，2H)，1.80-1.50(m，4H)，1.05-0.85(m，12H)。

                      实施例7

    4-(Cbz-Val-Leu-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸二甲基酰胺

应用与实施例5相似的方法制备标题化合物。从4-(Cbz-Val-Leu-氨基)-6-氟-5-羟基-己酸二甲基酰胺(26.9mg，0.05mmol)、Dess-Martin试剂(84.9mg，0.2mmol)获得12.8mg(48％)的标题化合物。¹H NMR(丙酮-d6)：8.00-7.50(m，2H)，7.42-7.25(m，5H)，6.80-6.50(m，1H)，5.40-4.90(m，4H)，4.50(m，2H)，4.05(m，1H)，3.90(m，1H)，2.86-2.81(m，6H)，2.50-2.35(m，2H)，2.24-2.05(m，2H)，1.95(m，1H)，1.80-1.50(m，4H)，1.05-0.85(m，12H)。

                      实施例8

              N-甲基-4-硝基-丁酰胺

向密封反应容器内加入4-硝基丁酸甲酯(1.00g，6.80mmol)和甲胺(2.0M甲胺MeOH溶液，50.0mL，100mmol)。在室温下，搅拌所得的黄色溶液20h。蒸发溶剂，通过闪式色谱法(硅胶，负载：CH₂Cl₂，EtOAc：己烷，1∶1的洗脱液)提纯残留物得到标题产物(0.97g，98％)，为白色固体。¹H NMR(CDCl₃)：5.84(br s，NH，1H)，4.54-4.48(m，2H)，2.82(d，J＝4.7Hz，3H)，2.36-2.32(m，4H)。

                      实施例9

           6-氟-5-羟基-4-硝基-己酸甲基酰胺

在-74℃下，向清澈的乙二酰氯(2.0M乙二酰氯的二氯甲烷，0.868g，6.84mmol)溶液10分钟内滴加入无水DMSO(1.06mL，14.9mmol)，同时保持内部温度小于-60℃。搅拌白色的悬浮液15分钟，然后滴加2-氟乙醇(0.273mL，4.65mmol)，同时保持内部温度小于-65℃。搅拌黄色的悬浮液20分钟，随后用二氯甲烷(19.5mL)稀释，紧接着加入无水Et₃N(3.90mL，28.0mmol)。在-71℃下搅拌该反应混合物15分钟，随后使其加热至0℃，并在0℃下搅拌2h。向反应混合物中加入存在于二氯甲烷(2.3mL)中的N-甲基-4-硝基-丁酰胺(0.570g，3.90mmol)溶液。在0℃下，搅拌反应混合物1h，再在室温下搅拌过夜。混合物浓缩成白色残留物，用乙酸乙酯(50mL)稀释，随后用水(25mL)洗涤有机层。乙酸乙酯(2×40mL)萃取水层，合并的有机层通过MgSO₄干燥，浓缩，用快速色谱法(硅胶，含EtOAc：己烷，1∶1至4∶1的梯度洗脱液)提纯残留物得到0.325g(40％)的标题产物，为无色的粘稠的油。¹H NMR(CDCl₃)：6.88(br s，NH，1H)，6.31(br s，NH，1H)，5.20-4.20(m，5H)，2.40-2.15(m，4H)。

                      实施例10

            4-氨基-6-氟-5-羟基-己酸甲基酰胺

向存在于MeOH(12mL)的6-氟-5-羟基-4-硝基-己酸甲基酰胺(0.325g，1.56mmol)中加入Raney Ni(约0.12g)，在室温H₂(40-45psi)下振摇混合物18h。该黑色的混合物通过硅藻土过滤，再用另加的MeOH(100mL)冲洗硅藻土。浓缩黄色溶液得黄色的油(0.250g，90％)，其无需进一步纯化就可以使用。¹H NMR(CDCl₃)：5.68(br s，NH，1H)，4.64-4.38(m，2H)，3.64-3.49(m，1H)，2.90-2.85(m，1H)，2.81(d，J＝5.10Hz，3H)，2.40-2.29(m，2H)，1.97-1.88(m，2H)；质谱：ESI：计算值：178.11；实测值：MH⁺ 179.18。

                        实施例11

      4-(Cbz-Leu-酰氨基)-6-氟-5-羟基-己酸甲基酰胺

向存在于THF(5.6mL)中的Cbz-Leu(0.371g，1.40mmol)溶液中加入EDCI(0.268g，1.40mmol)、HOBt(0.189g，1.40mmol)和DMAP(0.085g，0.70mmol)。搅拌所得的混合物15分钟，然后缓慢加入存在于DMF(2mL)中的4-氨基-6-氟-5-羟基-己酸甲基酰胺(0.250g，1.40mmol)溶液，在室温下搅拌该溶液过夜。蒸发溶剂，用乙酸乙酯(100mL)稀释残留物。用水(4×20mL)洗涤溶液，通过MgSO₄干燥有机层，浓缩，用快速色谱法(硅胶，含EtOAc∶己烷，1∶1至iPrOH∶CH₂Cl₂，5∶95的梯度洗脱液)提纯残留物得0.180g(32％)的标题产物，为无色的粘稠的油。¹HNMR(CDCl₃)：7.35-7.29(m，5H)，6.93-6.90(m，1H)，6.62-6.58(br s，1H)，5.75-5.64(m，1H)，5.09(s，2H)，4.42-3.80(m，5H)，2.76-2.71(m，3H)，2.17-2.15(m，1H)，1.92-1.90(m，2H)，1.67-1.51(m，2H)，1.75(m，4H)，0.94(d，J＝6.6Hz，6H)；质谱：ESI：计算值：425.23；实测值：MH⁺ 426.29。

                      实施例12

        4-(Cbz-Leu-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸甲基酰胺

在0℃下，在5分钟内向存在于CH₂Cl₂(20mL)的4-(Cbz-Leu-酰氨基)-6-氟-5-羟基-己酸甲基酰胺(0.180g，0.423mmol)溶液中多次少量加入Dess-Martin全碘烷(0.538g，1.27mmol)。令所得混合物平衡至室温并搅拌1.5h。蒸发掉溶剂，并用乙酸乙酯(200mL)稀释残留物，再用水(5×20mL)洗涤，随后通过Na₂SO₄干燥有机层并浓缩。通过快速色谱法(硅胶，含EtOAc∶己烷，1∶1的洗脱液)提纯残留物得0.038g(21％)的标题产物，为基于¹H NMR计算的环状和开环的混合物。¹HNMR(CDCl₃)：7.36-7.33(m，5H)，7.08-7.00(m，0.5H)，6.94-6.90(m，0.5H)，5.50-5.38(m，1H)，5.09-5.07(m，3H)，4.55-4.05(m，4H)，2.93(d，3H)，2.48-2.43(m，2H)，1.93-1.88(m，3H)，1.68-1.53(m，4H)，0.93(m，6H)；质谱：ESI：计算值：423.22；实测值：MH⁺ 424.28。

                    实施例13

        4-(Cbz-Ile-酰氨基)-6-氟-5-羟基-己酸甲基酰胺

应用与实施例11相似的方法制备标题化合物。由Cbz-Ile(0.298g，1.12mmol)和4-氨基-6-氟-5-羟基-己酸甲基酰胺(0.718M的DMF溶液，0.200g，1.12mmol)获得0.090g(19％)标题化合物，为白色固体。¹H NMR(CDCl₃)：7.38-7.27(m，5H)，6.54-6.51(m，1H)，6.19(br s，1H)，5.27(br s，1H)，5.12-5.08(m，2H)，4.45-3.83(m，5H)，2.80-2.76(m，3H)，2.26-2.05(m，3H)，0.97-0.89(m，6H)；质谱：ESI：计算值：425.23；实测值：MH⁺ 426.19。

                     实施例14

        4-(Cbz-Ile-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸甲基酰胺

应用与实施例12相似的方法制备标题化合物。由4-(Cbz-Ile-酰氨基)-6-氟-5-羟基-己酸甲基酰胺(0.090g，0.21mmol)和Dess-Martin试剂(0.269g，0.634mmol)获得0.008g(9％)的标题化合物。¹H NMR(CDCl₃)：7.37-7.31(m，5H)，6.65-6.60(m，1H)，5.40-5.36(m，1H)，5.12-5.08(m，3H)，4.54.40(m，2H)，3.96-3.91(m，1H)，2.97-2.95(m，3H)，2.63-2.43(m，3H)；质谱：ESI：计算值：423.22；实测值：MH⁺ 424.27。

                     实施例15

        4-(Cbz-Val-酰氨基)-6-氟-羟基-己酸甲基酰胺

应用与实施例11相似的方法制备标题化合物。由Cbz-Val(0.282g，1.12mmol)和4-氨基-6-氟-5-羟基-己酸甲基酰胺(0.718M的DMF溶液，0.200g，1.12mmol)获得0.214g(46％)的标题化合物，为白色固体。¹H NMR(CDCl₃)：7.36-7.34(m，5H)，6.75-6.64(m，1H)，6.30(br s，1H)，5.40-5.38(m，1H)，5.31(s，2H)，5.12(s，2H)，4.45-4.35(m，1H)，3.98-3.84(m，4H)，2.80-2.75(m，3H)，0.98-0.92(m，6H)；质谱：ESI：计算值：411.22；实测值：MH⁺ 412.32。

                      实施例16

        4-(Cbz-Val-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸甲基酰胺

应用与实施例11相似的方法制备标题化合物。由4-(Cbz-Ile-酰氨基)-6-氟-5-羟基-己酸甲基酰胺(0.070g，0.17mmol)和Dess-Martin试剂(0.216g，0.510mmol)获得0.018g(12％)的标题化合物。¹H NMR(CDCl₃)：7.37-7.33(m，5H)，5.12-5.10(m，2H)，2.98-2.96(m，2H)，2.77-2.76(m，3H)；质谱：ESI：计算值：409.20；实测值：MH⁺ 410.29。

                        实施例17

        3-(Cbz-Val-酰氨基)-5-氟-4-氧-戊酸二甲基酰胺

在0℃下，向存在于THF(5mL)的3-(Cbz-Val-酰氨基)-5-氟-4-氧-戊酸(150mg，0.39mmol)溶液中加入存在于THF(0.2ml，0.4mmol)中的2.0M二甲胺、EDCI(82.2mg，0.42mmol)和HOBT(106mg，0.78mmol)的溶液。在0℃下，搅拌所得的混合物，再在室温下搅拌过夜。用乙酸乙酯(20mL)稀释该溶液，用水(4×20mL)洗涤，然后干燥蒸发有机层。通过硅胶(己烷-EtOAc，1∶1至纯EtOAc)采用色谱法提纯残留物得到10mg(6％)的标题化合物，为白色固体。¹H NMR(DMSO-d6)：8.36-8.30(m，1H)，7.45(d，J＝8.1Hz，1H)，7.33-7.29(m，5H)，5.45-5.09(m，2H)，5.03(bs，2H)，4.59-4.57(m，1H)，3.90-3.82(m，1H)，2.94(bs，3H)，2.84-2.73(m，4H)，1.97-1.93(m，1H)，1.25(bs，1H)，0.86-0.82(m，6H)。.

                      实施例18

              N，N-二甲基-4-硝基-丁酰胺

向存在于甲醇(10mL)中的4-硝基丁酸甲酯(1.0g，6.80mmol)溶液中加入40％二甲胺水溶液(12.5mL，102mmol)。该溶液在室温下搅拌48h，真空浓缩，再用乙酸乙酯(20mL)稀释。干燥蒸发有机层。通过硅胶(己烷-EtOAc，1∶1)采用快速色谱法提纯残留物得到标题产物(0.99g，91％)。¹H NMR(CDCl₃)：4.53(t，J＝6.6Hz，2H)，3.02-2.94(m，6H)，2.48-2.43(m，2H)，2.36-2.31(m，2H)。

                      实施例19

          6-氟-5-羟基-4-硝基-己酸二甲基酰胺

向存在于无水二氯甲烷(5mL)中的乙二酰氯(0.9mL，9.63mmol)的冷却(-78℃)溶液中滴加无水DMSO(1.4mL，19.38mmol)，搅拌反应混合物15分钟。二氯甲烷(2mL)中的2-氟乙醇(0.44mL，7.5mmol)溶液缓慢加入反应烧瓶中。搅拌反应混合物15分钟，再用二氯甲烷(60mL)将其稀释，紧接着加入无水的Et₃N(4.4mL，31.25mmol)。搅拌反应混合物15分钟，再加热至0℃并在0℃下搅拌2h。向反应混合物中加入CH₂Cl₂(5mL)中的N，N-二甲基-4-硝基-丁酰胺(0.99g，6.25mmol)溶液。在0℃下搅拌反应混合物3h，随后在室温下搅拌过夜。浓缩混合物并用乙酸乙酯萃取。干燥蒸发有机层。通过硅胶(CH₂Cl₂/EtOAc＝1∶3)提纯残留物得到1.23g(89％)的标题产物，为无色的粘稠的油。¹HNMR(CDCl₃)：4.98(bs，1H)，4.81-4.72(m，1H)，4.70-4.61(m，1H)，4.59-4.37(m，1H)，4.33-4.18(m，1H)，3.02-2.98(m，3H)，2.94-2.93(m，3H)，2.46-2.22(m，4H)。

                        实施例20

            4-氨基-6-氟-5-羟基-己酸二甲基酰胺

向存在于MeOH(20mL)中的6-氟-5-羟基-4-硝基-己酸二甲基酰胺(1.22g，5.5mmol)溶液中加入Ranny Ni(约500mg)，随后在室温40-45psi H₂下氢化混合物6h。除去催化剂。蒸发掉MeOH溶液，无需进一步提纯就可以使用残留的油。MS m/e 193(M+1)。

                        实施例21

      4-(Cbz-Leu-酰氨基)-6-氟-5-羟基-己酸二甲基酰胺

向THF(20mL)中的Cbz-亮氨酸(265mg，1mmol)溶液中加入EDCI(192mg，1mmol)、HOBT(135mg，1mmol)和DMAP(61mg，0.5mmol)。所得混合物搅拌10分钟，随后加入THF(2mL)中的4-氨基-6-氟-5-羟基-己酸二甲基酰胺(192mg，1mmol)溶液，并在室温下搅拌过夜。蒸发除去溶剂，用乙酸乙酯(20mL)稀释残留物。用水洗涤溶液，干燥蒸发有机层。通过硅胶(己烷-EtOAc，1∶1至EtOAc/MeOH＝3∶1)采用色谱法提纯残留物得到300mg(68％)的标题化合物，为白色固体。MS m/e 440(M+1)。

                        实施例22

       4-(Cbz-Leu-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸二甲基酰胺

在0℃下，向CH₂Cl₂(20mL)的4-(Cbz-Leu-酰氨基)-6-氟-5-羟基-己酸二甲基酰胺(300mg，0.68mmol)溶液中加入Dess-Martin全碘烷(868mg，2.05mmol)。所得混合物在室温下搅拌4h，蒸发掉溶剂，再用乙酸乙酯(40mL)稀释残留物。用水洗涤，干燥蒸发有机层。用柱色谱法(EtOAc/MeOH 8∶1)提纯残留物得到标题产物(253mg，85％)，为无色油。¹H NMR(丙酮-d6)：8.00-7.94(m，1H)，7.38-7.30(m，5H)，6.57(m，1H)，5.29-5.18(m，1H)，5.13-5.09(m，3H)，4.50-4.47(m，1H)，4.22-4.14(m，1H)，2.99-2.97(m，2H)，2.86-2.80(m，6H)，2.49-2.44(m，2H)，1.79-1.70(m，1H)，1.64-1.59(m，2H)，0.95-0.91(m，6H)。

                        实施例23

        4-(Cbz-Ile-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸二甲基酰胺

应用与实施例21和22相似的两个步骤来制备标题化合物。¹H NMR(丙酮-d6)：7.95-7.93(m，1H)，7.38-7.29(m，5H)，6.43(brs，1H)，5.30-5.20(m，1H)，5.14-5.04(m，3H)，4.54-4.48(m，1H)，4.09-4.00(m，1H)，2.99-2.97(m，2H)，2.86-2.80(m，6H)，2.50-2.46(m，2H)，1.61-1.52(m，1H)，1.30-1.77(m，2H)，0.96-0.86(m，6H)。

                        实施例24

      4-(Cbz-Val-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸二甲基酰胺

应用与实施例21和22相似的两个步骤来制备标题化合物。¹H NMR(丙酮-d6)：7.95(brs，1H)，7.38-7.29(m，5H)，6.43(brs，1H)，5.30-5.20(m，1H)，5.14-5.05(m，3H)，4.55-4.51(m，1H)，4.09-4.00(m，1H)，2.98-2.97(m，2H)，2.89-2.82(m，6H)，2.50-2.46(m，2H)，1.96-1.88(m，1H)，0.99-0.92(m，6H)。

                        实施例25

      4-(Cbz-Gly-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸二甲基酰胺

应用与实施例21和22相似的两个步骤来制备标题化合物。¹H NMR(丙酮-d6)：7.90(bs，1H)，7.83-7.25(m，5H)，6.70(bs，1H)，5.40-5.02(m，2H)，5.10(s，2H)，4.55(b s，1H)，3.83(d，2H)，2.90-2.85(m，6H)，2.45(m，2H)，2.20-1.85(m，2H)。

                        实施例26

       4-(Cbz-Ala-酰氨基)-6-氟-5-氧-己酸二甲基酰胺

用与实施例21和22相似的两个步骤来制备标题化合物。¹H NMR(CDCl₃)：7.85(bs，1H)，7.78(bs，1H)，7.30-7.20(m，5H)，5.40(m，1H)，5.15(bs，3H)，4.98(bs，1H)，4.65(bs，1H)，4.25(m，1H)，2.98(s，3H)，2.95(s，3H)，2.60-2.25(m，2H)，2.25-2.00(m，2H)，1.40(q，3H)。

                        实施例27

        抑制SARS冠状病毒引起的细胞死亡

用SARS-CoV感染的Vero-细胞来试验本发明的化合物对SARS-CoV-诱导的细胞死亡(细胞病变效应(CPE))的保护作用，作为测量化合物对SARS-CoV的复制的抑制作用的方法(Cinatl J，et al.Lancet，2003，361：2045-6；和Tan E.L.C.et al.Emerg.Infect.Dis.2004，10：581-586)。在连续稀释的试验化合物的存在下，SARS感染和未感染的Vero 76细胞在Microtiter平板孔里孵育72h。在孵育的结束时加入中性红，处理后，在450nm处测量孔中的光密度。通过细胞吞噬中性红的活力测定试验化合物的抗病毒活性(EC₅₀，对病毒引起的细胞死亡的保护)，细胞摄取中性红的能力测量了有活力的细胞的比例。用试验化合物处理未感染细胞来测量该化合物的毒性(TC₅₀).

发现实施例17的化合物具有EC₅₀值0.0021mg/mL，大于0.050mg/mL的TC₅₀值，其提供大于24的SI值。SI值是该化合物的潜在的治疗指数的示值。因此，实施例17化合物具有优良的抗SARS冠状病毒活性和很好的潜在治疗指数。

发现实施例24的化合物具有0.02μg/mL的EC₅₀值，大于10μg/mL的TC₅₀值，其提供大于500的SI值。因此，实施例24的化合物具有高的抗SARS冠状病毒活性和高的潜在治疗指数。

在SARS-CoV感染Vero-细胞的单独实验中，发现实施例24的化合物100％地抑制1μM浓度的SARS-CoV的细胞病变效应(CPE)，并且在相同浓度下没有发现毒性。类似地，发现实施例12的化合物100％地抑制1μM浓度的SARS-CoV的CPE，并且在相同浓度下没有发现毒性。发现实施例7的化合物94.5％地抑制1μM浓度的SARS-CoV的CPE，并且在相同浓度下没有发现毒性。

到此我们对本发明已进行了充分的描述，本领域普遍专业技术人员将认识到，同类型的产品是可在很宽和相当范围的条件、配方和其他参数下实施，而不影响本发明的范围或其任意的实施方案。这里所引用的所有专利、专利申请和出版物都全部整体纳入以供参考。