补血当归制剂的质量控制方法

摘要

本发明涉及一种补血当归制剂的质量控制方法，与现有技术比较，本发明针对原有制剂补血当归精质量控制标准简单，产品质量不易控制等缺点，对本制剂的质量控制方法进行了研究，提高了补血当归制剂的质量标准，保证了本制剂的临床疗效。

说明书

技术领域：本发明涉及一种补血当归制剂的质量控制方法，属于药品技术的领域。

技术背景：妇女月经不调、产后血虚体弱、贫血是我们日常生活中的常见病，补血当归制剂由当归、熟地黄、白芍、川芎、党参、甘草和黄芪共七味药组成；具有滋补气血的功效，对头晕、贫血、身体衰弱、妇女月经不调，产后血虚体弱等疾病有确切的疗效。其中“补血当归精”刊登在中华人民共和国卫生部药品标准第十册，该药物在临床上应用多年，在治疗头晕、贫血、身体衰弱方面取得比较满意的治疗效果，但经我们研究发现，现有补血当归制剂存在质量控制方法落后，产品质量不易控制的缺点。由于当归具有补血活血、调经止痛、润肠通便等功效，是本发明制剂中主要有效成分，另外，白芍、黄芪和甘草也是本发明制剂中发挥主要药效的物质，而现有质量控制方法中中并没有对当归进行鉴别，或对当归中有效成分进行含量测定。也没有对其他药物进行鉴别，故现有质量控制方法不能有效控制补血当归制剂的质量，从而将影响产品的生产和保证质量。

发明内容：本发明的目的在于：提供一种补血当归制剂的质量控制方法，该制剂为口服固体制剂，包括胶囊剂、片剂和颗粒剂。

本发明所述补血当归制剂是这样构成的：按照重量组份计算：它主要由当归300-500g、熟地黄(酒蒸制)10-50g、白芍(酒炒)10-50g、川芎(酒炒)5-20g、黄芪(蜜制)10-50g、党参10-50g、甘草5-20g制备而成。

优选的处方组成是：按照重量组份计算：它主要由当归400g、熟地黄(酒蒸制)24g、白芍(酒炒)24g、川芎(酒炒)12g、黄芪(蜜制)24g、党参24g、甘草12g制备而成。

本发明所述制剂这样制备：以上七味，分别粉碎成粗粉，当归、白芍、川芎、黄芪分别用20-85％乙醇作溶剂，照中国药典流浸膏与浸膏剂项下的渗漉法进行渗漉提取，分别收集8-15倍量渗漉液，漉液减压回收乙醇；熟地黄、甘草、党参加水煎煮1-5次，合并煎液，滤过，滤液浓缩，加乙醇1-10倍量，搅匀，静置，滤过，滤液回收乙醇，与上述药液合并，再按照常规方法，加入不同辅料，制成胶囊剂、片剂或颗粒剂。

处方中当归具有补血活血、调经止痛、润肠通便等功效，是本发明制剂中主要有效成分，故补血当归制剂中应对当归中主要有效成分建立含量测定方法，方能很好地控制该制剂的质量，但是如何选择色谱条件及如果制备供试品溶液成为本发明的难点。经过大量实验，本发明选择色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙晴∶0.05-0.5％磷酸溶液＝1-9∶9-1为流动相；检测波长为200-500nm，理论板数以阿魏酸峰计算不得低于4000的高效液相色谱法测定当归中阿魏酸的含量。结果，药品中有效成分提取完全，且在该条件下，待测组分与其他组分分离完全(分离度＞1.5)，精密度、稳定性等均能符合要求。另外，本发明还对当归、白芍、黄芪和甘草四个药材进行薄层鉴别研究，并选择以当归对照药材为对照，以正己烷∶乙酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂鉴别方中当归；以芍药对照品为对照，以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝5-30∶0.5-5∶0.5-5∶0.5-5为展开剂鉴别方中白芍；以黄芪甲苷对照品为对照，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝5-30∶3-15∶1-10的下层溶液为展开剂鉴别方中黄芪；以甘草对照药材为对照，以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝5-30∶0.5-5∶0.5-5∶0.5-5为展开剂鉴别方中甘草；结果其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。故采用本发明质量控制方法可有效控制补血当归制剂的质量，从而保证该制剂的临床疗效。

本发明所述质量控制方法包括以下步骤：

对性状进行观察，对内容物进行鉴别，根据药典的方法对内容物进行检查，对含有的阿魏酸进行含量测定。

其中对性状进行观察包括：

对于胶囊剂，性状为：产品内容物为棕黄色的细粉或颗粒，味辛，微苦；

对于片剂性状为：药物显棕黄色的细粉或颗粒；味辛，微苦；

对于颗粒剂性状为：产品为棕黄色的的颗粒；

对内容物进行鉴别，包括以下步骤：

(1)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加石油醚，超声处理，提取液滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加乙酸乙酯，超声提取，提取液滤过，弃乙酸乙酯液，残渣再加水饱和过的正丁醇，超声提取，滤过，滤液用正丁醇饱和过的水洗1-8次，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣用水溶解，转移至已处理好的大孔树脂柱，用水洗脱，弃水液，再用20-85％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取芍药对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，分别点于同一以0.5-5％的氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝5-30∶0.5-5∶0.5-5∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加甲醇，回流提取，提取液滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，用水饱和过的正丁醇提取1-8次，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1-8次，弃氨水洗液，正丁醇液再用正丁醇饱和过的水洗涤1-5次，弃水洗液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，过中性氧化铝柱，用20-85％甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，置水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝5-30∶3-15∶1-10的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯下显相同的橙黄色荧光斑点。

(4)分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，加乙酸乙酯，超声提取，提取液滤过，弃乙酸乙酯液，残渣再加水饱和过的正丁醇，超声提取，滤过，滤液用正丁醇饱和过的水洗1-8次，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣用水溶解，转移至已处理好的D101型大孔树脂柱，用水洗脱，弃水液，再用20-85％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材，加乙醚，回流提取，滤过，弃滤液，药渣加甲醇，水浴回流提取，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，并转移至分液漏斗中，用水饱和过的正丁醇提取1-8次，合并正丁醇液，再用正丁醇饱和过的水洗1-5次，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，分别点于同一以0.5-5％的氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝5-30∶0.5-5∶0.5-5∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，于日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

根据药典的方法对内容物进行检查包括：

本发明的胶囊剂、片剂或颗粒剂应符合中国药典关于胶囊剂、片剂或颗粒剂项下的有关规定。

对含有的阿魏酸进行含量测定包括以下步骤：

阿魏酸  采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙晴∶0.05-0.5％磷酸溶液＝1-9∶9-1为流动相；检测波长为200-500nm；精密称取阿魏酸对照品，用甲醇溶解，即得对照品溶液；分别取胶囊剂、片剂或颗粒剂，

精密加入甲醇溶液水浴回流提取，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含当归以阿魏酸计，不得少于0.05mg/g、片剂中含当归以阿魏酸计，不得少于0.05mg/g、颗粒剂中含当归以阿魏酸计，不得少于0.005mg/g。

具体的质量控制方法包括：

对性状进行观察包括：

对于胶囊剂性状为：产品内容物为棕黄色的细粉或颗粒，味辛，微苦；

对于片剂性状为：药物显棕黄色的细粉或颗粒；味辛，微苦；

对于颗粒剂性状为：产品为棕黄色的的颗粒；

对内容物进行鉴别，包括

(1)分别取胶囊剂、片剂各1g，或取颗粒剂5g，加石油醚20-150ml，超声处理10-60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.1-0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-25μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯200-500nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2)分别取胶囊剂、片剂各5g，或取颗粒剂20g，加乙酸乙酯20-200ml，超声提取10-60分钟，滤过，弃乙酸乙酯液，残渣再加水饱和过的正丁醇20-100ml，超声提取0.5-3小时，滤过，滤液用正丁醇饱和过的水洗1-8次，每次10-50ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣用水溶解，转移至已处理好的D101型大孔树脂柱(1.5×15cm)，用20-100ml水洗脱，弃水液，再用20-85％乙醇20-100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药对照品，加甲醇制成每1ml含0.2-1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-25μl，分别点于同一以0.5-5％的氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝5-30∶0.5-5∶0.5-5∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5-20％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)分别取胶囊剂、片剂各5g，或取颗粒剂20g，加甲醇20-200ml，回流提取10-100分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10-100ml使溶解，用水饱和过的正丁醇提取1-8次，每次10-100ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1-8次，每次10-100ml，弃氨水洗液，正丁醇液再用正丁醇饱和过的水10-100ml洗涤1-5次，弃水洗液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2-10ml使溶解，过中性氧化铝柱(1.5×20cm，5g)，用20-85％甲醇溶液50-200ml洗脱，收集洗脱液，置水浴蒸干，残渣加甲醇0.2-1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2-1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-25μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝5-30∶3-15∶1-10的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5-20％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯200-500nm下显相同的橙黄色荧光斑点。

(4)分别取胶囊剂、片剂各5g，或取颗粒剂20g，加乙酸乙酯20-200ml，超声提取10-60分钟，滤过，弃乙酸乙酯液，残渣再加水饱和过的正丁醇20-100ml，超声提取0.5-3小时，滤过，滤液用正丁醇饱和过的水洗1-8次，每次10-50ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣用水溶解，转移至已处理好的D101型大孔树脂柱(1.5×15cm)，用20-100ml水洗脱，弃水液，再用20-85％乙醇20-100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.5g，加乙醚10-100ml，回流提取0.5-5小时后，滤过，弃滤液，药渣加甲醇10-100ml，水浴回流提取0.5-5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水10-50ml使溶解，并转移至分液漏斗中，用水饱和过的正丁醇提取1-8次，每次10-100ml，合并正丁醇液，再用正丁醇饱和过的水洗1-5次，每次10-50ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5-25μl，分别点于同一以0.5-5％的氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝5-30∶0.5-5∶0.5-5∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，于日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

根据药典的方法对内容物进行检查为

本发明的胶囊剂、片剂或颗粒剂应符合中国药典关于胶囊剂、片剂或颗粒剂项下的有关规定。

对所含进行含量测定，包括以下步骤：

阿魏酸  采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙晴∶0.05-0.5％磷酸溶液＝1-9∶9-1为流动相；检测波长为200-500nm，理论板数以阿魏酸峰计算不得低于4000；精密称取阿魏酸对照品，用甲醇溶解并制成每1ml含阿魏酸5-20μg，即得对照品溶液；取胶囊剂、片剂各1.0g或颗粒剂5g，精密称定，置回流瓶中，精密加入甲醇10-100ml，称定重量，水浴回流20-80分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-25μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含当归以阿魏酸计，不得少于0.05mg/g、片剂中含当归以阿魏酸计，不得少于0.05mg/g、颗粒剂中含当归以阿魏酸计，不得少于0.005mg/g。

更具体的质量控制方法包括：

对性状进行观察包括：

对于胶囊剂，性状为：产品内容物为棕黄色的细粉或颗粒，味辛，微苦；

对于片剂性状为：药物显棕黄色的细粉或颗粒；味辛，微苦；

对于颗粒剂性状为：产品为棕黄色的的颗粒；

对内容物进行鉴别，包括以下步骤：

(1)分别取胶囊剂、片剂各1g，或取颗粒剂5g，加石油醚30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2)分别取胶囊剂、片剂各5g，或取颗粒剂20g，加乙酸乙酯40ml，超声提取30分钟，滤过，弃乙酸乙酯液，残渣再加水饱和过的正丁醇60ml，超声提取1小时，滤过，滤液用正丁醇饱和过的水洗3次，每次20ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣用水溶解，转移至已处理好的D101型大孔树脂柱(1.5×15cm)，用50ml水洗脱，弃水液，再用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一以1％的氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝15∶1∶1∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)分别取胶囊剂、片剂各5g，或取颗粒剂20g，加甲醇50ml，回流提取40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和过的正丁醇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次25ml，弃氨水洗液，正丁醇液再用正丁醇饱和过的水30ml洗涤1次，弃水洗液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，过中性氧化铝柱(1.5×20cm，5g)，用40％甲醇溶液100ml洗脱，收集洗脱液，置水浴蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯365nm下显相同的橙黄色荧光斑点。

(4)分别取胶囊剂、片剂各5g，或取颗粒剂20g，加乙酸乙酯40ml，超声提取30分钟，滤过，弃乙酸乙酯液，残渣再加水饱和过的正丁醇60ml，超声提取1小时，滤过，滤液用正丁醇饱和过的水洗3次，每次20ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣用水溶解，转移至已处理好的D101型大孔树脂柱(1.5×15cm)，用50ml水洗脱，弃水液，再用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.5g，加乙醚20ml，回流提取1小时后，滤过，弃滤液，药渣加甲醇30ml，水浴回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，并转移至分液漏斗中，用水饱和过的正丁醇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，再用正丁醇饱和过的水洗3次，每次30ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一以1％的氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝15∶1∶1∶2为展开剂，展开，取出，晾干，于日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

根据药典的方法对内容物进行检查包括：

本发明的胶囊剂、片剂或颗粒剂应符合中国药典关于胶囊剂、片剂或颗粒剂项下的有关规定。

对含有的阿魏酸进行含量测定包括以下步骤：

阿魏酸采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，以甲醇或乙晴∶0.085％磷酸溶液＝1.6∶8.4为流动相；检测波长为324nm，理论板数以阿魏酸峰计算不得低于5000；精密称取阿魏酸对照品，用甲醇溶解并制成每1ml含阿魏酸10μg，即得对照品溶液；取胶囊剂、片剂各1.0g或颗粒剂5g，精密称定，置回流瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，水浴回流45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含当归以阿魏酸计，不得少于0.05mg/g、片剂中含当归以阿魏酸计，不得少于0.05mg/g、颗粒剂中含当归以阿魏酸计，不得少于0.005mg/g。

与现有技术比较，本发明针对原有制剂补血当归精质量控制标准简单，产品质量不易控制等缺点，对本制剂的质量控制方法进行了研究，提高了补血当归制剂的质量标准，保证了本制剂的临床疗效，达到了发明的目的。

本发明的质量控制方法是经过大量的筛选得到的最佳方案，以下实验研究为本发明的优选过程。

一、阿魏酸含量测定方法研究

1、流动相的选择：

流动相1：以甲醇或乙晴、磷酸溶液的混合溶液为流动相；

流动相2：以甲醇、水和冰醋酸的混合溶液为流动相；

流动相3：以甲醇和冰醋酸的混合溶液为流动相。

结果：以甲醇或乙晴∶0.05-0.5％磷酸溶液＝1-9∶9-1为流动相，阴性样品色谱图在阿魏酸位置处无假阳性峰，阿魏酸和相近的杂质峰分离完全(分离度＞1.5)，即在该条件下阿魏酸与其他组分分离完全。最佳流动相为：乙晴∶0.085％磷酸溶液＝16∶84。

2、供试品溶液制备方法研究：

2.1提取方法的选择

取制剂1.0g，分别以浸泡、水浴回流提取、超声波提取等方法各加甲醇50ml，称定重量，分别提取1小时后，放冷，甲醇补足减失的重量，滤过，测定其含量，结果见下表：

  提取方法  浸泡  水浴回流提取  超声提取  含量(mg/g)  RSD(％)  0.1538  2.75  0.2392  2.82  0.2268  1.89

试验结果表明，回流提取更能将制剂中的阿魏酸提取完全，故选择提取方法为水浴回流提取。

2.2提取溶剂的选择

取制剂1.0g，分别加甲醇、50％乙醇、乙醇50ml，称定重量，分别水浴回流提取1小时后，放冷，补足减失的重量，滤过，测定其含量，结果见下表：

  提取溶剂  甲醇  50％乙醇  乙醇  含量(mg/g)  RSD(％)  0.2405  1.32  0.2381  0.79  0.1932  1.48

试验结果表明，甲醇作为提取溶剂更能将制剂中的阿魏酸浸出，故选择提取溶剂为甲醇。

3、重复性试验

取制剂，按上述供试液的制备方法，分别制备5份供试液，进样，测定峰面积，阿魏酸平均含量为0.2407mg/g，RSD为1.88％。表明重复性良好。结果见下表：

  进样次数  1  2  3  4  5  平均值 RSD(％)  含量(mg/g)  0.2412  0.2438  0.2386  0.2456  0.2341  0.2407 1.88

4、供试品溶液中阿魏酸稳定性试验

取制剂，按上述供试液的制备方法，分别于0、2、4、6、8小时测定其阿魏酸峰面积，平均峰面积为404106，RSD为1.19％。表明供试品溶液中阿魏酸在8小时内稳定性良好，结果见下表：

  时间(小时)  0  2  4  6  8  平均值  RSD(％)  峰面积  406474  409737  406178  399316  398826  404106  1.19

二、当归薄层鉴别研究

以当归对照药材为对照。

供试品溶液制备方法一：取制剂1g，加乙醚，回流提取30min，放冷，滤过，低温蒸干，残渣加无水乙醇溶解，作为供试品溶液；同法制备缺当归阴性对照液。

供试品溶液制备方法二：取制剂1g，加石油醚，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇溶解，作为供试品溶液；同法制备缺当归阴性对照液。

展开剂选择：分别正己烷和乙酸乙酯各种比例的混合溶液为展开剂。

结果：采用方法二制备供试品溶液，以正己烷∶乙酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为：正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1。

三、白芍鉴别研究

以芍药对照品为对照。

供试品溶液制备方法一：分别取制剂5g，加乙酸乙酯，超声提取30分钟，滤过，弃乙酸乙酯液，残渣再加水饱和过的正丁醇50ml，超声提取1小时，滤过，滤液用正丁醇饱和过的水洗3次，每次20ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣用水溶解，转移至已处理好的D101型大孔树脂柱(1.5×15cm)，用50ml水洗脱，弃水液，再用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；同法制备缺芍药阴性对照液。

供试品溶液制备方法二：取制剂5g，加甲醇3，超声处理30min，放冷，滤过，蒸干，残渣加水10mL，溶解，加水饱和正丁醇提取2次，每次20mL，合并，水浴蒸干，残渣加乙醇20mL，置已处理好的中性氧化铝柱(＜115cm，中性氧化铝5g)上，水浴蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液；同法制备缺芍药阴性对照液。

展开剂选择：分别以乙酸乙酯、甲酸、冰醋酸和水各种比例的混合溶液；氯仿、醋酸乙酯和甲醇各种比例的混合溶液为展开剂。

结果：采用方法一制备供试品溶液，以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝5-30∶0.5-5∶0.5-5∶0.5-5为展开剂，其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为：乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝15∶2∶2∶1.5。

四、黄芪鉴别研究

以黄芪甲苷对照品为对照。

供试品溶液制备方法一：取制剂5g，加甲醇50ml，回流提取40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和过的正丁醇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次25ml，弃氨水洗液，正丁醇液再用正丁醇饱和过的水30ml洗涤1次，弃水洗液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，过中性氧化铝柱(1.5×20cm，5g)，用40％甲醇溶液100ml洗脱，收集洗脱液，置水浴蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；同法制备缺黄芪阴性对照液。

供试品溶液制备方法二：取制剂5g，研细，加甲醇50mL超声处理20min，滤过，蒸干，残渣加水20mL溶解，转移至分液漏斗中，加乙醚20mL萃取2次，弃去乙醚液，加水饱和正丁醇20mL，萃取2次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇2mL溶解作为供试液；同法制备缺黄芪阴性对照液。

展开剂选择：分别以三氯甲烷、甲醇和水各种比例的混合溶液为展开剂。

结果：采用方法一制备供试品溶液，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝5-30∶3-15∶1-10的下层溶液为展开剂，其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为：三氯甲烷∶甲醇∶水＝15∶10∶4的下层溶液。

五、甘草鉴别研究

以甘草对照药材为对照。

供试品溶液制备方法一：取制剂5g，加稀盐酸1ml，水40ml摇匀，加水饱和正丁醇提取5次，每次30ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣用甲醇5ml分次溶解，转移至100ml圆底烧瓶中，挥发去甲醇液，残渣加盐酸5ml，氯仿50ml，加热回流3h。放冷，分取氯仿层，滤过，用10ml氯仿分次洗涤滤纸，合并滤液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解定容至2ml，作为供试品液；同法制备缺甘草阴性对照液。

供试品溶液制备方法二：分别取制剂5g，加乙酸乙酯，超声提取30分钟，滤过，弃乙酸乙酯液，残渣再加水饱和过的正丁醇50ml，超声提取1小时，滤过，滤液用正丁醇饱和过的水洗3次，每次20ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣用水溶解，转移至已处理好的D101型大孔树脂柱(1.5×15cm)，用50ml水洗脱，弃水液，再用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；同法制备缺甘草阴性对照液。

供试品溶液制备方法三：取制剂2g，研细，加盐酸1ml与氯仿20ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇或甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；

展开剂选择：分别以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸和水各种比例的混合溶液；石油醚(30～60℃)、氯仿和冰醋酸各种比例的混合溶液；石油醚(60～90℃)、苯、醋酸乙酯和冰醋酸各种比例的混合溶液；环己烷、醋酸乙酯和冰醋酸各种比例的混合溶液；环己烷、醋酸乙酯、苯和甲酸各种比例的混合溶液为展开剂。

结果：采用方法二制备供试品溶液，以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝5-30∶0.5-5∶0.5-5∶0.5-5为展开剂其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝20∶3∶2∶1。

本发明的优点在于：本发明的质量控制方法是在原法定标准基础上，增加高效液相色谱法测定阿魏酸的含量；利用薄层色谱法鉴别该复方制剂中各药味，形成了新的质量控制方法(标准)。该方法保证了本发明的制剂的质量检测标准能够较全面有效控制制剂的质量特征，具有准确性和先进性，可作为质量控制和考察工艺的稳定性的有效技术手段。对提高产品质量有重大意义。

具体实施方式：以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1胶囊剂的质量控制

对于胶囊剂性状为：产品内容物为棕黄色的细粉或颗粒，味辛，微苦；

对内容物进行鉴别，包括

(1)取胶囊剂1g，加石油醚20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯＝1∶9为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯200nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2)取胶囊剂5g，加乙酸乙酯20ml，超声提取10分钟，滤过，弃乙酸乙酯液，残渣再加水饱和过的正丁醇20ml，超声提取0.5小时，滤过，滤液用正丁醇饱和过的水洗1次，每次10ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣用水溶解，转移至已处理好的D101型大孔树脂柱(1.5×15cm)，用20ml水洗脱，弃水液，再用20％乙醇20ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一以0.5％的氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝5∶0.5∶5∶5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)取胶囊剂5g，加甲醇20ml，回流提取10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用水饱和过的正丁醇提取1次，每次10ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1次，每次10ml，弃氨水洗液，正丁醇液再用正丁醇饱和过的水10ml洗涤1次，弃水洗液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，过中性氧化铝柱(1.5×20cm，5g)，用20％甲醇溶液50ml洗脱，收集洗脱液，置水浴蒸干，残渣加甲醇0.2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝5∶15∶1的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯200nm下显相同的橙黄色荧光斑点。

(4)取胶囊剂5g，加乙酸乙酯20ml，超声提取10分钟，滤过，弃乙酸乙酯液，残渣再加水饱和过的正丁醇20ml，超声提取0.5小时，滤过，滤液用正丁醇饱和过的水洗1次，每次10ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣用水溶解，转移至已处理好的D101型大孔树脂柱(1.5×15cm)，用20ml水洗脱，弃水液，再用20％乙醇20ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.5g，加乙醚10ml，回流提取0.5小时后，滤过，弃滤液，药渣加甲醇10ml，水浴回流提取0.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，并转移至分液漏斗中，用水饱和过的正丁醇提取1次，每次10ml，合并正丁醇液，再用正丁醇饱和过的水洗1次，每次10ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一以0.5％的氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝5∶5∶0.5∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，于日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

根据药典的方法对内容物进行检查为

本发明的胶囊剂应符合中国药典关于胶囊剂项下的有关规定。

对所含阿魏酸进行含量测定，包括以下步骤：

阿魏酸  采用高效液相色谱法，色谱柱为C4，以甲醇∶0.05％磷酸溶液＝1∶9为流动相；检测波长为200nm，理论板数以阿魏酸峰计算不得低于4000；精密称取阿魏酸对照品，用甲醇溶解并制成每1ml含阿魏酸5μg，即得对照品溶液；取胶囊剂1.0g，精密称定，置回流瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，水浴回流20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含当归以阿魏酸计，不得少于0.05mg/g。

实施例2片剂的质量控制

对于片剂性状为：药物显棕黄色的细粉或颗粒；味辛，微苦；

对内容物进行鉴别，包括

(1)取片剂1g，加石油醚150ml，超声处理60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各25μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯＝9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯500nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2)取片剂5g，加乙酸乙酯200ml，超声提取60分钟，滤过，弃乙酸乙酯液，残渣再加水饱和过的正丁醇100ml，超声提取3小时，滤过，滤液用正丁醇饱和过的水洗8次，每次50ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣用水溶解，转移至已处理好的D101型大孔树脂柱(1.5×15cm)，用100ml水洗脱，弃水液，再用85％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各25μl，分别点于同一以5％的氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝30∶5∶0.5∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)取片剂5g，加甲醇200ml，回流提取100分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水100ml使溶解，用水饱和过的正丁醇提取8次，每次100ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤8次，每次100ml，弃氨水洗液，正丁醇液再用正丁醇饱和过的水100ml洗涤5次，弃水洗液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇10ml使溶解，过中性氧化铝柱(1.5×20cm，5g)，用85％甲醇溶液200ml洗脱，收集洗脱液，置水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各25μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝30∶3∶10的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯500nm下显相同的橙黄色荧光斑点。

(4)取片剂5g，加乙酸乙酯200ml，超声提取60分钟，滤过，弃乙酸乙酯液，残渣再加水饱和过的正丁醇100ml，超声提取3小时，滤过，滤液用正丁醇饱和过的水洗8次，每次50ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣用水溶解，转移至已处理好的D101型大孔树脂柱(1.5×15cm)，用100ml水洗脱，弃水液，再用85％乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.5g，加乙醚100ml，回流提取5小时后，滤过，弃滤液，药渣加甲醇100ml，水浴回流提取5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解，并转移至分液漏斗中，用水饱和过的正丁醇提取8次，每次100ml，合并正丁醇液，再用正丁醇饱和过的水洗5次，每次50ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各25μl，分别点于同一以5％的氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝30∶0.5∶5∶5为展开剂，展开，取出，晾干，于日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

根据药典的方法对内容物进行检查为

本发明的片剂应符合中国药典关于片剂项下的有关规定。

对所含阿魏酸进行含量测定，包括以下步骤：

阿魏酸采用高效液相色谱法，色谱柱为C8柱，以乙晴0.5％磷酸溶液＝9∶1为流动相；检测波长为500nm，理论板数以阿魏酸峰计算不得低于4000；精密称取阿魏酸对照品，用甲醇溶解并制成每1ml含阿魏酸20μg，即得对照品溶液；取片剂1.0g精密称定，置回流瓶中，精密加入甲醇100ml，称定重量，水浴回流80分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各25μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，片剂中含当归以阿魏酸计，不得少于0.05mg/g。

实施例3颗粒剂的质量控制：

对于颗粒剂性状为：产品为棕黄色的的颗粒；

对颗粒剂的鉴别，包括：

(1)取颗粒剂5g，加石油醚30ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2)取颗粒剂20g，加乙酸乙酯40ml，超声提取30分钟，滤过，弃乙酸乙酯液，残渣再加水饱和过的正丁醇60ml，超声提取1小时，滤过，滤液用正丁醇饱和过的水洗3次，每次20ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣用水溶解，转移至已处理好的D101型大孔树脂柱(1.5×15cm)，用50ml水洗脱，弃水液，再用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一以1％的氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝15∶1∶1∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)取颗粒剂20g，加甲醇50ml，回流提取40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和过的正丁醇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次25ml，弃氨水洗液，正丁醇液再用正丁醇饱和过的水30ml洗涤1次，弃水洗液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，过中性氧化铝柱(1.5×20cm，5g)，用40％甲醇溶液100ml洗脱，收集洗脱液，置水浴蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯365nm下显相同的橙黄色荧光斑点。

(4)取颗粒剂20g，加乙酸乙酯40ml，超声提取30分钟，滤过，弃乙酸乙酯液，残渣再加水饱和过的正丁醇60ml，超声提取1小时，滤过，滤液用正丁醇饱和过的水洗3次，每次20ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣用水溶解，转移至已处理好的D101型大孔树脂柱(1.5×15cm)，用50ml水洗脱，弃水液，再用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.5g，加乙醚20ml，回流提取1小时后，滤过，弃滤液，药渣加甲醇30ml，水浴回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，并转移至分液漏斗中，用水饱和过的正丁醇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，再用正丁醇饱和过的水洗3次，每次30ml，弃水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一以1％的氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水＝15∶1∶1∶2为展开剂，展开，取出，晾干，于日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

根据药典的方法对内容物进行检查为

本发明的颗粒剂应符合中国药典关于颗粒剂项下的有关规定。

对所含进行含量测定，包括以下步骤：

阿魏酸  采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，以甲醇或乙晴∶0.085％磷酸溶液＝1.6∶8.4为流动相；检测波长为324nm，理论板数以阿魏酸峰计算不得低于5000；精密称取阿魏酸对照品，用甲醇溶解并制成每1ml含阿魏酸10μg，即得对照品溶液；取颗粒剂5g，精密称定，置回流瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，水浴回流45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定含量；

颗粒剂中含当归以阿魏酸计，不得少于0.005mg/g。