黑胸大蠊水提取物在制备抗炎免疫药物中的应用

摘要

本发明涉及黑胸大蠊活性提取物的新用途，即在制备抗炎免疫药物中的应用。本发明发掘了黑胸大蠊提取物新的医疗用途。黑胸大蠊提物具有显著抗炎免疫作用，兼治标本，安全无毒；其原料来源丰富、价格低廉、制备工艺成熟。本发明同时涉及蟑螂活性提取物的制备方法：低温处死后置于研钵中加入适量碳酸氢盐－盐水提取液充分研磨成浆。－70℃反复冻融，纱布过滤去粗渣，超声粉碎；石油醚去脂，稀醇抽提，过滤后滤液用盐水提取48h～72h；10,000r/min离心20min，调整试药浓度后0.22μm滤膜过滤。

说明书

技术领域

本发明涉及黑胸大蠊水提取物的用途，具体涉及黑胸大蠊提取物在制备抗炎免疫药物中的应用。

背景技术

蜚蠊在地球上已生存了35亿年，千百年来一直被人类视为害虫而消灭之，然而面对人类最原始或最现代化的杀灭手段仍能顽强生存至今，可见其体内具有最优秀的生物活性物质和特殊的生理机制，以及超强的生命信息维护系统，从而才能使它成为世界上最古老，繁衍至今最成功的昆虫类群。

《中国药学大辞典》、《中药大辞典》、《中国药用动物志》、《全国中草药汇编》等近、现代药学专著均记载蜚蠊有“活血、散瘀、化积、消疳、解毒、利尿、消肿”等功能，并用于治疗疔疮、喉蛾、痈肿、蛇虫咬伤等。姚廉等学者经考证认为，以上典籍中记载的药用蜚蠊，其基源及原动物应为蜚蠊目蜚蠊科大蠊属的美洲大蠊(Periplanetaamericana)、澳洲大蠊(P.australasiae)、褐色大蠊(P.brunnea)、黑胸大蠊(P.fuliginosa)等。

本发明的目的在于提供黑胸大蠊水提取物用于炎症免疫性疾病的临床常规治疗

免疫是机体接触抗原性异物或异己成分的一种特异性生理反应，其作用是识别、排除抗原性异物，以维持机体的生理平衡。炎症是人类疾病中的一种最常见的病理过程，是具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的防御反应，可以发生于机体的任何部位和任何组织，以血管反应为主要特征和防御的中心环节。炎症和免疫是机体对异物的两种不同反应，相互重叠而不可分割，涉及了许多共同的细胞类型(如巨噬细胞、淋巴细胞)，细胞因子类(白细胞介素、前列腺素、白三烯等)炎症介质与发病机制，因而既有抗炎活性又有免疫调节作用的抗炎免疫药才能起到好的临床治疗效果。目前按照药物治标与治本的目的，并参考化学结构与药理学特点，将抗炎免疫药物分为非甾体类抗炎免疫药物、甾体类抗炎免疫药物和疾病调修药物。

1、非甾体抗炎药物：一类非同质且具有不同药理作用机制的化合物，主要通过抑制前列腺素的生物合成等发挥作用，如吲哚美辛、吡罗昔康主要通过抑制环氧酶I(CoxI)，而萘丁美酮、双氯芬酸钠、布洛芬主要通过抑制环氧酶II(COXII)而降低PGs的生物合成。药理学作用特点是起效快，可减轻炎症性肿胀，缓解疼痛和改善功能，但不影响炎症的病程，停药后可出现反跳症状，且无选择性地抑制前列腺素的合成，但前列腺素在慢性炎症反应中有致炎与抗炎的双重作用，这就导致很多副反应的发生。作用虽然效果明确但不能治本，不能消除致炎的基本原因。

2、甾体类抗炎药物：一类包括天然和合成的糖皮质激素，有强大的抗炎作用(阻止炎症细胞向炎症部位集中，抑制炎性因子的释放，并抑制T、B淋巴细胞的增殖和分化)和弱的免疫抑制作用，能从很多环节影响炎症和免疫过程，广乏用于治疗以慢性炎症为特征的自身免役病。但因为其严重的不良反应，所以在临床一般不作为相对轻的炎症免疫性疾病的常规治疗。

3、疾病调理药物：这类药物包括雷公藤多苷、人参皂苷、三七总皂苷、黄芪皂苷、柴胡皂苷、白芍总苷、青藤碱、粉防己碱等。具有药理作用广泛、多效、双向调节、毒副作用小等特点，在自身免疫性疾病、肿瘤、感染、免疫缺陷病等的治疗上发挥着独特的作用。本发明的黑胸大蠊水提取物就属于这一类型。

发明内容

本发明按照以下技术方案实现：取一月龄内黑胸大蠊雌成虫、3～4龄期若虫，仅供水饲养5～6天，待试虫吐尽肠内容物后，-20℃冷冻30min处死。75％酒精清洗虫体表面，晾干，称重，去翅、足、触须。将试虫置于研钵中，加入适量碳酸氢盐-盐水提取液充分研磨成浆。-70℃反复冻融，纱布过滤去粗渣，超声粉碎；石油醚去脂后用盐水提取48h～72h；10,000r/min离心20min，调整试药浓度后0.22μm滤膜过滤，即得黑胸大蠊活性提取物。

再以黑胸大蠊水提取物进行抗炎药效学的动物实验。分别以黑胸大蠊雌成虫和若虫水提取物作为试药，观察不同药物剂量对二甲苯致小鼠耳肿胀及毛细血管通透性、小鼠琼脂肉芽组织增生、小鼠实验性急性腹膜炎、小鼠醋酸性扭体反应以及角叉菜胶致大鼠足肿胀等的抑制作用。结果表明，高剂量雌虫试药组均有显著的抗肿胀性炎症、抗渗出性炎症、抗增生性炎症以及镇痛作用，与对照组相比有统计学意义；高剂量若虫试药组在某些炎症动物模型中也显示有一定的抗炎效果。

本发明的有益效果在于：

A.本发明对黑胸大蠊水提取物发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。

B.本发明的黑胸大蠊水提取物兼治标本，安全无毒，预示着有良好的药用前景。

C.本发明的黑胸大蠊水提取物原料来源丰富，制备工艺成熟，成本低廉。

具体实施方式

1、黑胸大蠊提取物的制备

选取一月龄内黑胸大蠊雌成虫、3～4龄期若虫，转移至供水但撤食的缸内饲养5～6天，待动物吐尽肠内容物后，-20℃冷冻30min处死。75％酒精短时间清洗虫体表面，蒸馏水淋洗两遍，晾干，称重，去翅、足、触须。将试虫置于研钵中，加入适量碳酸氢盐-盐水提取液充分研磨成浆。-70℃反复冻融，纱布过滤去粗渣，超声粉碎；石油醚去脂，再用盐水提取48h～72h；10,000r/min离心20min，调整试药浓度后0.22μm滤膜过滤，雌虫提取物原液呈浅棕色清亮溶液，比重0.9985g/ml，特殊甜香味，蛋白氮含量7.1mg/ml。

2、黑胸大蠊水提取物抗炎效果检测

2.1材料

2.1.1药物及试剂

黑胸大蠊原动物由本实验室饲养传代。

萘丁美酮(Nabumetone，NAB)片，商品名瑞力芬，规格0.5g/片，中美史克制药有限公司出品(批号04060597)。

角叉菜胶(carrageenan)，批号C1013，购自SIGMA公司；依文思兰(Evan’s blue)，B.D.H进口分装(上海化学试剂采购供应站分装)，批号75-04-29；琼脂糖(Agarose)，批号061390，西班牙进口分装(上海Yito企业有限公司分装)；TRYPTONE(批号Ch-B 245808)和YEAST EXTRACT(批号Ch-B 817999)为英国OXOID产品；琼脂(Agar)，日本进口分装，购自北京夏斯生物技术公司；其余试剂均为国产分析纯。

2.1.2实验动物

昆明种小鼠，雌雄各半；Sprague-Dawley(SD)大鼠，雌雄各半，由中南大学湘雅医学院实验动物学部提供。

2.1.3仪器

JY92-II型超声波细胞粉碎仪为宁波新芝科器研究所生产；SPECTRUM 752型紫外-可见光分光光度计为上海光谱仪器有限公司生产；千分尺为上海量具刃具厂生产；AB204-E万分之一电子天平为瑞士METTLER TOLEDO公司产品；LG10-3A高速冷冻离心机为北京医用离心机厂产品；HHS型电热恒温水浴锅由上海博迅实业有限公司医疗设备厂生产；PYX-DHS隔水式电热恒温培养箱为上海跃进医疗设备厂产品；Olympus BX41光学显微镜(配备OlympusU-CMAD3照相机)，英国SHADON组织切片机。

2.2方法

2.2.1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀作用和毛细血管通透性改变的影响

昆明种小鼠66只，雌雄各半，体重25～30g，随机分成6组，药物组每组11只，对照组12只。受试物组分别命名为高剂量雌虫提取物组、低剂量雌虫提取物组、高剂量若虫提取物组、低剂量若虫提取物组(后同)，受试物剂量均折合成原动物生药剂量。各组均经口灌胃(ig)给药或生理盐水(NS)，对照组ig生理盐水0.1ml/10g体重。各组灌胃qd×4d，末次灌胃后2h，尾静脉注射(iv)Evan’s blue50mg/kg，于小鼠右耳双面涂二甲苯25μl/面，20min后，拉颈处死小鼠。沿耳廓基线剪下双耳，用直径7.5mm的打孔器分别在同一部位冲下圆耳片，电子天平称重，求出两耳片的重量差，用以表示肿胀度(肿胀度＝右耳耳片重-左耳耳片重)。按以下公式计算肿胀抑制百分率。

抑制率＝(对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)÷对照组平均肿胀度×100％。当抑制率＞30％，并经统计学处理有显著性差异时，则可评定有抗炎作用。

两耳片剪碎后，分别置3ml丙酮-生理盐水(V/V＝7∶3)中浸泡24h，3000r/min离心15min后取上清，于610nm波长处用分光光度计比色，测得的吸光度差值表示毛细血管通透性。

每组留1只小鼠，除不注射Evan’s blue外，其他处理方法同上，冲下的双耳片立即经福尔马林(formalin)固定，常规脱水、石蜡包埋，以4～5μm厚度切片，苏木精-伊红(hematoxylin and eosin，HE)染色，光学显微镜下观察病理组织学变化。同时将各病理组织学变化以Olympus显微镜摄片，Motic MC20001.0图象采集模块分析软件采集图象。

2.2.2对小鼠琼脂性肉芽组织增生的抑制作用

昆明种小鼠48只，雌雄各半，体重25～30g。将琼脂用双蒸水配成2％浓度，常规高压蒸气灭菌，于55℃恒温水浴保温。小鼠背部皮肤消毒后，用4号半注射针头沿小鼠背部中线皮下注射(sc)琼脂0.5ml/只。24h后按体重随机分成6组，每组8只。各组均ig给药或NS，对照组ig生理盐水0.1ml/10g体重，各组药物剂量见表3-3。各组灌胃qd×7d，末次灌胃后24h，拉颈脱椎处死小鼠。眼科剪剪开背部皮肤，小心剥离出肉芽肿琼脂块，电子天平称取肉芽肿湿重，观察各受试药物组对肉芽组织增生的抑制作用。按以下公式计算抑制率：

抑制率＝(对照组平均肉芽肿湿重-给药组平均肉芽肿湿重)÷对照组平均肉芽肿湿重×100％。

肉芽肿琼脂块经福尔马林固定处理后，按2.2.1方法行病理组织切片观察。

2.2.3对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的抑制作用

SD大鼠50只，雌雄各半，体重120～150g，随机分成6组，高剂量雌虫提取物组及高剂量若虫提取物组各9只，其余各组8只。各组均ig给药或NS，对照组ig生理盐水1ml/只，各组药物剂量见表4，qd×4d。于实验当日将角叉菜胶配成1％浓度，末次灌胃后30min，乙醚麻醉动物，予每只大鼠右后足跖sc角叉菜胶。注射时将大鼠后肢拉直，针头刺入右后足跖中部皮下，先向上注射一部分，再调转针头朝下注射完，总共注射0.1ml。用千分尺测量每只大鼠右后足0h足跖厚度，并分别于注射后1h、2h、3h、4h、5h、6h用千分尺在同一部位测量每鼠右后足跖厚度，观察肿胀到达高峰时间和消退时间，计算与0h足跖厚度的差值，用以表示肿胀度。按(对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)÷对照组平均肿胀度×100％计算肿胀抑制百分率。当抑制率＞30％，并经统计学处理有显著性差异时，则可评定有抗炎作用。测量完成后，拉颈脱椎处死动物，齐踝关节以上0.5cm剪下右后足，除去骨组织，经福尔马林固定处理后，按2.2.1方法行病理组织切片观察。

2.2.4对实验性腹膜炎小鼠腹腔毛细血管通透性增高的抑制作用

昆明种小鼠62只，雌雄各半，体重25～30g，随机分成6组，高剂量雌虫提取物组及高剂量若虫提取物组各11只，其余各组10只。对照组ig生理盐水0.1ml/10g体重，其余各组按表3-5ig给药，qd×4d。末次灌胃后2h，尾静脉iv 2％Evan’s blue 0.1ml，10min后，腹腔注射(ip)0.6％醋酸溶液0.2ml/只，造成实验性腹膜炎模型。20min后拉颈脱椎处死小鼠，剪开腹腔，每次用2ml生理盐水冲洗腹腔，共3次，用吸管吸取腹腔洗出液，混匀后取1滴于细胞计数板上计数白细胞量，余液3000r/min离心15min后取上清，于590nm波长处用分光光度计比色，测得的吸光度值表示腹腔毛细血管通透性。计算抑制百分率。

2.2.5对小鼠醋酸性扭体反应的抑制作用

昆明种小鼠62只，雌雄各半，体重25～30g，随机分成6组，高剂量雌虫提取物组及高剂量若虫提取物组各11只，其余各组10只。对照组ig生理盐水0.1ml/10g体重，其余各组按表3-6ig给药，qd×4d。末次灌胃后2h，尾静脉iv 2％Evan’s blue 0.1ml，10min后，腹腔注射(ip)0.6％醋酸溶液0.2ml/只。观察20min内小鼠的扭体次数，计算抑制百分率。

2.2.6黑胸大蠊提取物的急性毒性试验

昆明种小鼠80只，雌雄各半，体重20±2g，随机分成8组，每组10只。动物给药前隔夜禁食，不禁水，编号后将雌虫提取物和若虫提取物经一次性灌胃给药。两种受试物各分四个剂量组，最大剂量组取原液，其他剂量组按1∶0.8设组间间距，灌胃量为0.25ml/10g体重，给药后至少间隔2h进食，连续观察动物灌胃后14天的毒性反应，求出受试物对小鼠的半数致死剂量(LD₅₀)。

用SPSS 13.0 for windows统计软件对以上试验数据进行One-Way ANOVA分析，评价受试物在各药效学实验中的药物作用效果，P＜0.05表示差异有显著性。

2.3结果

2.3.1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀作用和毛细血管通透性改变的影响

二甲苯为急性致炎剂，所导致的急性炎症改变包括血管扩张、血管通透性增加、渗出等。耳肿胀法方法可靠，复制成功率高，常用于新型抗炎药物的常规筛选。实验结果显示，高剂量雌虫提取物组有抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀和毛细血管通透性的增加等急性炎症作用，肿胀度抑制率为69.44％，毛细血管通透性增加的抑制率为71.73％，与对照组相比均有统计学意义(P＜0.01)，显示高剂量雌虫提取物有抗炎作用。结果见表1。

表1黑胸大蠊提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀作用和毛细血管通透性改变的影响

  动物组别(n)  Groups  剂量(mg/kg)  Dosage  肿胀度(mg)  Swelling  抑制率(％)  Inhibition 毛细血管通透性(A₆₁₀×10³) Capillary vessel permeability  空白对照组(11)  低剂量雌虫提取物组(10)  高剂量雌虫提取物组(10)  低剂量若虫提取物组(10)  高剂量若虫提取物组(10)  萘丁美酮组(10)  /  25  250  25  250  500  15.25±6.95  9.38±3.20  4.66±3.16^a  13.36±4.55  9.65±3.49  7.91±3.42^a  /  38.49  69.44  12.39  36.72  48.13 216.5±141.8 131.6±91.2 61.2±54.9^a 205.4±80.5 114.0±99.7 107.3±49.8^b

a：P＜0.01，与对照组比较；b：P＜0.05，与对照组比较.

同时发现对照组小鼠右耳与左耳相比明显肿胀，耳片增厚，血管扩张，染料Evan’s blue在整个右耳炎症组织中均有分布，蓄积程度增高特别明显；而高剂量雌虫提取物组小鼠右耳的炎症反应明显较弱，提示受试物有降低炎性渗出、水肿程度的作用，有利于减轻急性炎症时脏器水肿、阻塞的病理改变。

耳片经组织切片显示对照组左耳正常无肿胀，血管无扩张，无炎性渗出，无炎性细胞浸润；对照组右耳组织有炎性渗出，示有水肿发生；低剂量雌虫提取物组右耳血管扩张较明显，有淋巴细胞浸润。高剂量雌虫提取物组右耳血管虽然有轻度扩张，但无明显炎性渗出发生，也未见明显炎性细胞浸润。

2.3.2对小鼠琼脂性肉芽组织增生的抑制作用

肉芽肿模型可产生与炎症后期病理变化相似的肉芽组织增生，是常用的抗炎模型之一。实验结果显示，低剂量雌虫提取物组、高剂量雌虫提取物组和高剂量若虫提取物组均有抑制小鼠琼脂性肉芽组织增生的作用，与对照组相比均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)，高剂量提取物组效果更为明显，显示其抗慢性增殖性炎症的作用与药物的剂量依赖性关系。结果见表2。

表2黑胸大蠊提取物对小鼠琼脂性肉芽组织增生的抑制作用

 动物组别(n) Groups  剂量(mg/kg)  Dosage 肉芽肿湿重(mg) Wet weight of granuloma  抑制率(％)  Inhibition 空白对照组(8) 低剂量雌虫提取物组(8) 高剂量雌虫提取物组(8) 低剂量若虫提取物组(8) 高剂量若虫提取物组(8) 萘丁美酮组(8)  /  25  250  25  250  250 528.21±110.61 450.55±55.10^b 421.71±56.31^a 454.33±33.06 418.00±25.27^a 428.11±27.29^a  /  14.70  20.16  13.99  20.86  18.95

a：P＜0.01，与对照组比较；b：P＜0.05，与对照组比较.

试验结果显示对照组小鼠肉芽肿周围血管扩张、出血明显；而其余三组小鼠肉芽肿周围背景较干净，无红肿、出血现象。对照组有类上皮细胞增生发生，还可见红细胞，说明有出血现象；其余三组虽有炎性增生、血管扩张等情形，但肉芽肿反应轻微，表明受试药物对炎症纤维组织增生、肉芽形成有一定的抑制作用

2.3.3对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的抑制作用

实验结果显示，各组均在注射角叉菜胶1～2h达到肿胀高峰，而肿胀消退时间在各组之间有较大的差异。值得特别指出的是，高剂量雌虫提取物在抑制角叉菜胶致大鼠足跖肿胀中有非常明显的作用，表现在两个方面：首先达到肿胀高峰时肿胀度的绝对值最低，说明在药物的作用下，大鼠对致炎因子的致炎作用敏感性降低；其次肿胀消退迅速，5h后其平均足跖厚度已经基本恢复到正常的水平。从抑制率的角度分析，高剂量雌虫提取物在各时间点的肿胀抑制率分别为36.55％、58.99％、63.02％、46.43％、71.54％、75.45％，其肿胀度在各时间点与对照组相比均有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05)。按足肿胀实验中抗炎药物评价标准，高剂量雌虫提取物有十分明显的抗角叉菜胶致大鼠足跖肿胀炎症作用。结果见表3。

表3黑胸大蠊提取物对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的抑制作用

  动物组别(n)  Groups剂量(mg/kg)Dosage                                      肿胀度(mm)                                          Edema  1h  2h  3h  4h  5h  6h  空白对照组(8)  低剂量雌虫提取物组(8)  高剂量雌虫提取物组(9)  低剂量若虫提取物组(8)  高剂量若虫提取物组(9)  萘丁美酮组(8)/2525025250300  1.97±.55  2.02±.57  1.25±.35^b  1.57±.46  1.40±.38  1.07±.52^a  2.17±.71  1.86±.61  0.89±.37^a  1.50±.48^b  1.47±.43^b  1.35±.29^a  1.92±.69  1.43±.64  0.71±.42^a  1.32±.49  1.32±.36  1.24±.44^b  1.40±.59  1.34±.62  0.75±.42^b  1.03±.44  1.03±.39  1.02±.43  1.23±.68  1.19±.60  0.35±.35^a  1.02±.39  0.87±.28  0.84±.46  1.10±.56  1.00±.57  0.27±.25^a  0.83±.27  0.77±.23  0.67±.22

a：P＜0.01，与对照组比较；b：P＜0.05，与对照组比较.

对照组大鼠注射角叉菜胶1h后，出现严重的急性炎症反应，足爪包括踝关节均红肿充血，足跖厚度、周径均较正常者显著增厚、增大。由于血流动力学改变，血流放缓继而导致血管内红细胞浓集和血液粘稠度增加，足爪呈暗紫色。而高剂量雌虫提取物组大鼠同时期虽然也有水肿、充血等表现，但程度明显较对照组为轻；5h时则基本恢复正常。

组织切片显示，对照组有浆细胞(染色深者)增生，细胞间质变疏松，示有水肿发生。高剂量雌虫提取物组已基本接近正常足组织，角化层、上皮、间质层均较正常。

2.3.4对实验性腹膜炎小鼠腹腔毛细血管通透性增高的抑制作用

本实验研究表明，高剂量雌虫提取物既有抑制小鼠醋酸性腹腔毛细血管通透性增高的作用，也能够降低白细胞从血管渗出的数量，与对照组相比均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)，抑制率分别为49.66％和50.34％；高剂量若虫提取物对降低白细胞渗出有作用(P＜0.01)，抑制率为36.73％。结果见表4。

表4黑胸大蠊提取物对醋酸性小鼠腹腔毛细血管通透性增高的抑制作用

  动物组别(n)  Groups  剂量(mg/kg)  Dosage 毛细血管通透性(A₅₉₀×10³) Capillary vessel permeability  白细胞计数(个/L)  Amount of WBC  空白对照组(10)  低剂量雌虫提取物组(10)  高剂量雌虫提取物组(11)  低剂量若虫提取物组(10)  高剂量若虫提取物组(11)  萘丁美酮组(10)  /  25  250  25  250  500 188.00±74.76 148.20±88.57 94.64±53.30^b 29.50±77.13 157.27±90.87 84.20±60.60^b  2.94×10⁸±0.74×10⁸  2.28×10⁸±0.42×10⁸  1.46×10⁸±0.55×10^8a  2.36×10⁸±0.61×10⁸  1.86×10⁸±0.69×10^8a  1.96×10⁸±0.35×10^8a

a：P＜0.01，与对照组比较；b：P＜0.05，与对照组比较.

2.3.5对小鼠醋酸性扭体反应的抑制作用

实验结果显示，高剂量雌虫提取物和高剂量若虫提取物能有效减轻小鼠醋酸性腹腔疼痛反应，扭体次数与对照组相比有程度不同的下降，具有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05)，抑制率分别为66.34％和56.46％。结果见表5。

表5黑胸大蠊提取物对小鼠醋酸性扭体反应的抑制作用

  动物组别(n)  Groups  剂量(mg/kg)  Dosage 20min扭体次数 Amount of writhing response  抑制率(％)  Inhibition  空白对照组(10)  低剂量雌虫提取物组(10)  高剂量雌虫提取物组(11)  低剂量若虫提取物组(10)  高剂量若虫提取物组(11)  萘丁美酮组(10)  /  25  250  25  250  500 49.70±25.14 33.60±23.43 16.73±12.26^a 32.00±19.95 21.64±19.15^b 16.20±8.49^a  /  32.39  66.34  35.61  56.46  67.40

a：P＜0.01，与对照组比较；b：P＜0.05，与对照组比较

对照组小鼠不同的扭体反应行为：腹部内凹、躯干与后肢伸张、臀部抬起等，动作幅度大，每次扭体动作的持续时间长，说明疼痛程度较深。而高剂量雌虫提取物组和高剂量若虫提取物组小鼠不仅扭体次数减少，而且动作幅度小，持续时间短，表明两种受试物均有较强的镇痛作用。

2.3.6黑胸大蠊提取物的急性毒性试验

雌虫提取物原液呈浅棕色清亮溶液，比重0.9985g/ml，特殊甜香味，蛋白氮含量7.1mg/ml，最大剂量组受试物剂量折合生药剂量为5500mg/kg。若虫提取物原液呈浅棕黄色清亮溶液，比重0.9908g/ml，特殊香味，蛋白氮含量8.5mg/ml，最大剂量组受试物剂量折合生药剂量为6300mg/kg。

小鼠经灌胃给药后，连续观察14天未见小鼠死亡，小鼠生长良好，外观、行为活动、精神状态、饮食、大小便及其颜色、皮肤和皮毛等均未见异常，给药14天后体重均有增加。处死动物后解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等各内脏器官，均无异常改变。两种受试物LD₅₀值分别大于1100mg/kg和1260mg/kg。表明受试物无严重急性中毒的危险性，属基本无毒的化学物。测试结果见表6。

                 表6两种受试物的急性毒性测试结果

  受试物  Extracts  动物组别  Groups  剂量(mg/kg)  Dosage  动物数(只)  No.of mice  死亡动物数(只)  Died No.  死亡率(％)  Rate  雌虫提取物  1  2  3  4  1100  880  700  560  10  10  10  10  0  0  0  0  0  0  0  0  若虫提取物  1  2  3  4  1260  1000  800  640  10  10  10  10  0  0  0  0  0  0  0  0