胃肠安丸中柚皮苷含量的测定方法

摘要

本发明公开了一种胃肠安丸中柚皮苷含量的测定方法，由如下步骤组成：(1)对照品溶液的制备：取柚皮苷对照品适量，加甲醇制成对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：取胃肠安丸研细，取粉末置具塞锥形瓶，加甲醇，水浴加热回流，放冷，精密称定，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；(3)采用高效液相色谱仪进行测定，本发明的一种胃肠安丸中柚皮苷含量的测定方法具有方便、快速、专属性及重现性好的特点，结果准确可靠，可用于胃肠安丸的质量控制。

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药制剂中柚皮苷含量的测定方法，特别是涉及一种利用高效液相色谱法测定中药制剂胃肠安丸中柚皮苷含量的测定方法。

背景技术

目前，随着中药现代化的不断发展，中药制药工艺及质量检测水平的不断提高，越来越多的先进检测仪器及实验手段被用于中成药质量的检测中来。同时，随着人们生活水平的提高，社会对药品的质量要求也越来越高，这就要求各个制药企业要有先进、稳定、可靠的检测方法对药品的质量进行有效的控制。因此，提高中成药的质量标准是势在必行的。

此外，国家鼓励各个制药企业及科研单位提高现有的中成药质量标准，并通过一些途径促进质量标准的提高，例如：

1.2005年版《中国药典》在2000年版的基础上增加了许多中药材及中成药的定性、定量鉴别方法；

2.在新品研制及老产品二次开发等药品注册申报的过程中，都要求在原有质量标准的基础上进行提高。

胃肠安丸为中新药业天津乐仁堂制药厂研制开发的治疗胃肠道疾病的纯中药制剂，收载于《中国药典》2000年版，该处方由木香、沉香、大黄、枳壳等药味组成，具有芳香化浊、理气止痛有健胃导滞之功，临床用于治疗消化不良引起的腹泻、肠炎、菌痢、脘腹涨满、腹痛及食积乳积等症。枳壳为处方中主要药味，起利胸腹之气、散积消痞、化湿导滞消食的作用。柚皮苷为枳壳中的主要成分之一，因柚皮苷在枳壳药材中含量较高，且性质稳定，因此，通过对胃肠安丸中柚皮苷含量的监控可有效地控制该产品内在质量。

发明内容

本发明的目的是提供一种胃肠安丸中柚皮苷含量的测定方法，本发明是利用高效液相色谱法测定胃肠安丸中柚皮苷的含量，以提高胃肠安丸的质量标准。

本发明的技术方案概述如下：

一种胃肠安丸中柚皮苷含量的测定方法，由如下步骤组成：

(1)对照品溶液的制备取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.0119mg/ml～0.119mg/ml的溶液，优选的是0.01mg/ml，作为对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备取胃肠安丸研细，取粉末0.1g精密称定，置50ml具塞锥形瓶，加甲醇25ml，精密称定，水浴加热回流20-90分钟，最好是30分钟，放冷至室温，精密称定，用甲醇补足减失重量，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液，微孔滤膜孔径最好是0.45μm；

(3)采用高效液相色谱仪进行测定，色谱条件为：Diamonsil色谱柱：C₁₈反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相：乙腈与0.1％～1％冰乙酸水溶液的体积比为10～50∶90～50，最佳比为20∶80，所述冰乙酸水溶液的浓度为体积百分比浓度，优选的浓度为0.3％；检测波长：217nm；流速：0.5ml/min～1.0ml/min，最佳流速为0.8ml/min；柱温20℃～40℃，以35℃为宜，分别精密取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入所述高效液相色谱仪，测定。

本发明的优点是：方便、快速、专属性及重现性好，结果准确可靠，可用于胃肠安丸的质量控制。

附图说明

图1为对照品柚皮苷的高效液相色谱图；

图2为胃肠安丸中柚皮苷的高效液相色谱图；

图3为阴性对照品的高效液相色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

一种胃肠安丸中柚皮苷含量的测定方法，包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.01mg/ml的溶液，作为对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备取胃肠安丸研细，取粉末0.1g精密称定，置50ml具塞锥形瓶，加甲醇25ml，精密称定，水浴加热回流30分钟，放冷至室温，精密称定，用甲醇补足减失重量，0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；

(3)采用高效液相色谱仪进行测定，色谱条件为：Diamonsil色谱柱：C₁₈反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相：乙腈与0.3％冰乙酸水溶液的体积比为20∶80，所述冰乙酸水溶液的浓度为体积百分比浓度；检测波长：217nm；流速：0.8ml/min；柱温35℃，分别精密取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入所述高效液相色谱仪，测定。

实施例2

一种胃肠安丸中柚皮苷含量的测定方法，包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.0119mg/ml的溶液，作为对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备取胃肠安丸研细，取粉末0.1g精密称定，置50ml具塞锥形瓶，加甲醇25ml，精密称定，水浴加热回流20分钟，放冷至室温，精密称定，用甲醇补足减失重量，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；

(3)采用高效液相色谱仪进行测定，色谱条件为：Diamonsil色谱柱：C₁₈反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相：乙腈与0.1％冰乙酸水溶液的体积比为50∶50，所述冰乙酸水溶液的浓度为体积百分比浓度；检测波长：217nm；流速：0.5ml/min；柱温20℃，分别精密取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入所述高效液相色谱仪，测定。

实施例3

一种胃肠安丸中柚皮苷含量的测定方法，包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.119mg/ml的溶液，作为对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备取胃肠安丸研细，取粉末0.1g精密称定，置50ml具塞锥形瓶，加甲醇25ml，精密称定，水浴加热回流90分钟，放冷至室温，精密称定，用甲醇补足减失重量，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；

(3)采用高效液相色谱仪进行测定，色谱条件为：Diamonsil色谱柱：C₁₈反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相：乙腈与1％冰乙酸水溶液的体积比为10∶90，所述冰乙酸水溶液的浓度为体积百分比浓度；检测波长：217nm；流速：1.0ml/min；柱温40℃，分别精密取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入所述高效液相色谱仪，测定。

实施例4

线性关系的考察精密吸取柚皮苷对照品溶液(浓度为0.0119mg/ml)2、4、8、12、16、20μl进样，按上述色谱条件测定，以柚皮苷对照品的进样量为横坐标，相应峰面积积分值为纵坐标，计算回归方程为Y＝4666857X-15551.9，r＝0.99995(r：相关系数)。柚皮苷对照品溶液在0.0119～0.119mg/ml范围内成良好的线性关系。

实施例5

精密度实验取同一供试品溶液，连续6次进样，测得峰面积积分值，结果RSD(相对标准偏差)为1.7％。

实施例6

重现性实验取同一批样品，称取供试品6份，照供试品溶液制备方法制备，测定含量，平均含量为11.38mg/g，RSD为1.45％，表明本法重现性良好，精密度较高。

实施例7

稳定性实验取同一供试品溶液，每隔2小时进样2μl，共进样6次，测定峰面积并计算含量，结果RSD为1.7％(n＝6)。

实施例8

回收率实验采用加样回收法，取已知含量(11.38mg/g)的样品6份，分别精密加入一定量的柚皮苷对照品，照含量测定方法测定，计算加样回收率，结果见表1。

                           表1.回收率试验结果

                     Table 1 Result of recovery test

  样品取样量  (g)  样品柚皮苷  含量(mg)  柚皮苷加  入量(mg)  测定结  果(mg)  回收率  (％)  平均回收  率(％)  RSD  (％)  0.0531  0.0543  0.0535  0.0533  0.0545  0.0473  0.6037  0.6181  0.6091  0.6071  0.6205  0.5378  0.5712  0.5712  0.5712  0.5712  0.5712  0.5712  1.1567  1.2008  1.1854  1.1726  1.1717  1.0850  96.8  102.0  100.9  99.0  96.5  95.8  98.5  2.59

实施例9

空白对照液的制备与测定除枳壳外按处方量称取其他药味，按处方工艺制成不含枳壳的制剂，按供试品溶液制备法制成空白对照液，测定结果见图1，图2和图3，说明其他药材与辅料均不干扰柚皮苷的测定。

实施例10

样品测定取十批胃肠安样品，按供试品溶液制备项下方法制备供试品溶液，每批制备两份供试品溶液。精密吸取供试品溶液、对照品溶液各2μl，注入高效液相色谱仪，进行测定，十批样品结果见表2。

                   表2胃肠安丸中柚皮苷的测定结果

           Table2 Determination of Naringin in Weichang’an Pill

  批号  柚皮苷含量(mg/g)  D109004  4.8  D109007  4.9  D109008  5.2  D109009  5.4  D109010  4.6  D109016  5.6  D109019  5.3  D109020  4.4  030681  4.6  030784  4.8  平均值  4.98

通过对十批胃肠安丸中柚皮苷含量进行检测，得到平均值为4.98mg/g，建议胃肠安丸增加柚皮苷含量测定的标准定为：胃肠安丸中柚皮苷含量不得少于4.38mg/g。

本测定方法方便、快速、专属性及重现性好，结果准确可靠，可用于胃肠安丸的质量控制。

讨论

提取方法考察：文献报道，柚皮苷易溶于有机溶剂，提取方法主要有超声和回流提取，通过采用甲醇超声提取和甲醇回流提取进行比较，结果以甲醇回流提取效果最好，故采用此提取方法。

流动相的选择：先后试验甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.3冰乙酸、乙腈-0.3％冰乙酸等为流动相，进行实验，比较HPLC谱图，结果显示以乙腈-0.3％冰乙酸(20∶80)为流动相进行检测，样品峰分离最好，故优选乙腈-0.3％冰乙酸(20∶80)为流动相。