一种具有免疫调节和抗突变作用的保健品

摘要

本发明公开了一种保健品组合物，它由松杉灵芝和枸杞制成，松杉灵芝和枸杞的重量配比范围为：3－7∶2－4；制备方法是分别将松杉灵芝和枸杞水煮提取，得松杉灵芝和枸杞两种提取液；将两种提取液混合，按药剂学常规工艺、加入常规辅料制备成临床可接受的各种剂型。本发明保健品具有免疫调节和抗突变作用，主要适宜于免疫力低下者、接触致突变物质者。

说明书

技术领域

本发明涉及一种保健品组合物，特别是涉及一种具有免疫调节和抗突变作用的保健品组合物，属于医药保健品领域。

背景技术

致突变物指的是促使细胞发生突变的物质，突变包括核糖核酸和染色体发生异常修复、增殖等特异性改变。自然界中存在大量致突变物，人类长期接触后可引起肿瘤、畸形和遗传缺陷等，这些疾病同时会影响机体的免疫力，使机体免疫力低下。因此，寻找一种具有多种保健功能，既具有抗突变作用、又具有免疫调节功能的保健品是当今需要迫切解决的问题。

发明内容

本发明目的在于提供一种新的具有免疫调节和抗突变作用的保健品组合物；本发明的另一个目的在于提供一种新的具有免疫调节和抗突变作用的保健品组合物的制备方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现的。

本发明保健品组合物由如下重量配比的原料药制成：

松杉灵芝3-7重量份、枸杞2-4重量份；

其中松杉灵芝与枸杞的优选重量配比为5∶3、4∶4或6∶2。

取本发明保健品组合物，加入常规辅料、按药剂学常规工艺制备成任何一种临床可接受的剂型，如：胶囊剂(如硬胶囊剂、软胶囊剂)、片剂、粉剂、丸剂或口服液等，优选口服液。

本发明保健品组合物的制备方法为：

A.取松杉灵芝子实体，水洗、破碎；加入8-12倍量纯净水，分别煮沸提取2-4次，每次时间为1-3小时，滤过，合并滤液，浓缩至体积比为1∶2.5倍后，滤过；取滤液，离心，得松杉灵芝提取液，备用；

B.取枸杞子水洗、沥干；加入4-6倍量温度为80℃纯净水，分别浸提2-4次，每次时间为1-3小时，滤过，合并滤液，浓缩至体积比1∶2.5倍后，滤过；取的滤液，离心，得枸杞子提取液，备用；

C.取松杉灵芝提取液、枸杞子提取液加入常规辅料、按药剂学常规工艺可制备成任何一种临床可接受的剂型，如：胶囊剂(如硬胶囊剂、软胶囊剂)、片剂、粉剂、丸剂或口服液等，优选口服液。

本发明口服液的制备方法为：

取松杉灵芝3-7重量份，枸杞子2-4重量份，山梨酸钾0.024-0.032重量份，己基氨基磺酸钠(甜蜜素)0.017-0.023重量份；

按上述方法制备松杉灵芝提取液、枸杞子提取液；将松杉灵芝提取液、枸杞子提取液、山梨酸钾、环己基氨基磺酸钠(甜蜜素)配成溶液，静置，滤过，灌装、封口、蒸气灭菌、灯检、包装、即得本发明口服液。

本发明保健品口服液每100mL中，含功效成分粗多糖2262mg。

本发明保健品口服液功效成分粗多糖的检验方法为：

A.总糖的测定：

量取本发明口服液1.0mL于特制10mL酸水解玻璃管中，加1mol/L稀硫酸溶液4.0mL，加盖，并用锡箔纸密封，置于103℃烘箱加热水解10h，取出冷却至室温；

将水解样品转移到250ml碘量瓶中，用10mL蒸馏水分次洗净酸水解玻璃管；加1滴1％酚酞指示剂，摇匀；用2mol/L氢氧化钠溶液调pH值近中性(加氢氧化钠至红色出现，再加1滴1mol/L稀硫酸溶液使红色褪去即可)；精确加入25mL的0.1mol/L碘液，一次性加入1mol/L氢氧化钠溶液4mL，立即加盖，剧烈振摇1min，暗处放置15min；取出加入1mol/L稀硫酸4mL，摇匀，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠溶液滴定至近终点时，加入0.5％可溶性淀粉指示剂3mL，摇匀，继续滴定至兰色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得；每1mL的0.1mol/L碘液相当于9.008mg的无水葡萄糖(C₆H₁₂O₆)；通过计算可得总糖含量。

B.单糖的测定：

量取本发明口服液1.0mL于250mL碘量瓶中，加10mL水、1滴1％酚酞指示剂；加1mol/L氢氧化钠溶液及1mol/L稀硫酸溶液调pH值至近中性，精确加入25mL碘液，一次性加入1mol/L氢氧化钠溶液4mL，立即加盖，剧烈振摇1min，暗处放置15min。取出加入1mol/L稀硫酸4mL，摇匀，立即用0.1mol/L硫代硫酸钠溶液滴定至近终点时，加入0.5％可溶性淀粉指示剂3mL，摇匀，继续滴定至兰色消失，并将滴定结果用空白试验校正，即得；每1mL的0.1mol/L碘液相当于9.008mg的无水葡萄糖(C₆H₁₂O₆)；通过计算可得单糖含量。

本发明保健品组合物及本发明保健品组合物各种制剂包括口服液，经功能试验，证明具有免疫调节、抗突变的保健功能；特别是将松杉灵芝和枸杞配合使用，产生了良好的协同效果，二者的配合使用可替代以往需要多种组合物才能产生的疗效。主要适宜于免疫力低下者、接触致突变物质者。

下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例1：本发明制剂的抗突变作用

1.本发明制剂对修改的小鼠骨髓细胞微核试验体重的影响：见表1。

        表1修改的小鼠骨髓细胞微核试验小鼠体重

                              初始体重             中期体重                末期体重

组别                                                                                            

                     动物数(只)    体重(克)  动物数(只)   体重(克)     动物数(只)    体重(克)

对照组(蒸馏水)           10        26.9±1.3    10        35.4±2.6        10        40.7±2.7

阳性对照组(CP)           10        26.8±1.3    10        35.3±2.2        10        39.7±2.2

本发明制剂低剂量组       10        26.8±1.3    10        35.6±2.4        10        38.7±2.2

本发明制剂中剂量组       10        26.7±1.4    10        34.9±2.3        10        39.3±2.5

本发明制剂高剂量组       10        27.0±1.5    10        35.1±2.3        10        39.8±2.1

表1结果表明，本发明制剂各剂量组与对照组比较无显著性差异，说明

本发明制剂对小鼠体重无影响。

2.本发明制剂对染色体畸变实验组小鼠体重的影响：见表2。

                        表2染色体畸变实验组小鼠体重

                      初始体重               中期体重             末期体重

组别                                                                                  

               动物数(只)    体重(克)   动物数(只)  体重(克)  动物数(只)    体重(克)

对照组(蒸馏水)    10        26.3±1.0        10    33.1±1.6      10        40.6±1.4

阳性对照组(CP)    10        26.7±1.0        10    33.3±1.3      10        40.1±1.3

低剂量组          10        26.6±0.7        10    32.6±1.7      10        39.9±1.0

中剂量组          10        25.9±0.8        10    32.8±1.7      10        39.8±1.5

高剂量组    10    26.5±1.1    10    32.8±1.5    10     40.6±1.7

表2结果表明，本发明制剂各剂量组与对照组比较无显著性差异，说明本发明制剂对染色体畸变实验组小鼠体重无影响。

3.Ames试验：见表3

         表3 Ames试验结果    (相对菌落数/皿)

       菌株     阴性对照      阳性对照     低剂量         中剂量        高剂量

        -S9      37.2±5.2    596.0±79.4  587.0±69.3    501.6±85.7   418.0±89.6*

TA98

        +S9      42.0±4.8    601.7±76.7  597.5±73.4    498.8±74.3*  450.7±70.7*

        -S9      172.3±12.1  762.7±86.8  762.8±80.4    671.0±80.9   613.0±83.8*

TA100

        +S9      161.7±10.8  800.6±53.3  792.3±62.7    662.7±78.1*  644.0±51.9*

由表3可见，本发明制剂对TA98；TA100两株试验菌株，加S-9情况下和不加S-9的情况下，呈现抗突变作用(*方差分析检验与阳性对照组相比较P＜0.05)。

4.本发明制剂对环磷酰胺诱发的小鼠骨髓细胞微核的影响：见表4。

表4本发明制剂对环磷酰胺诱发的小鼠骨髓细胞微核的影响

组别         动物数(只)    观察细胞数   微核数    微核率(‰)

阴性对照组      10          10×1000      28         2.8

阳性对照组(CP)  10          10×1000      252        25.2

低剂量          10          10×1000      244        24.4

中剂量          10          10×1000      208        20.8*

高剂量          10          10×1000      166        16.6*

由表4可见，本发明制剂高、中剂量组明显低于阳性对照组且具有统计学差异(泊松分布检验与阳性对照组P＜0.05)。

5.小鼠睾丸染色体畸变试验：见表5。

表5  本发明制剂对丝裂霉素C诱发小鼠睾丸染色体畸变的影响

                                性染色体分离      常染色体分离    染色体结构畸变

组别          动物数  细胞数                                                       

                               个    畸变率(％)  个  畸变率(％)   个    畸变率(％)

阴性对照组    10     10×100   12     1.2        4     0.4         2       0.2

低剂量        10     10×100   116    11.6       23    2.3         10      1.0

中剂量        10     10×100   116    11.6       23    2.3         11      1.1

高剂量        10     10×100   114    11.4       23    2.3         10      1.0

阳性对照组    10    10×100  106    10.6    18    1.8    10    1.0

由表5可见，泊松分布统计其染色体畸变率各剂量组与阳性对照组相比无统计学差异。

6.结论：依据《保健食品功能学评价程序和检验方法》，本发明制剂对TA98、TA100两株试验菌株，在加与不加S-9的情况下均呈现对阳性物致突变作用的抑制作用；能明显拮抗环磷酰胺所致小鼠骨髓细胞微核率。说明本发明制剂具有抗突变作用。

实验例2：本发明制剂的免疫调节作用

1.本发明制剂对小鼠体重的影响：

表1.本发明制剂对免疫一组小鼠体重影响

组别     动物数(只)    始重(g)      终重(g)    增重(g)     p

空白对照    12        20.0±1.2    37.2±5.2  17.2±5.6    ---

低剂量组    12        19.4±1.1    36.0±4.7  16.6±4.5    0.754

中剂量组    12        19.4±1.2    36.4±3.9  17.0±4.0    0.921

高剂量组    12        19.8±1.0    37.6±4.7  17.8±4.6    0.777

p值：各实验组与空白对照组比较

由表1可见，经统计学处理，小鼠的初始体重在低、中、高剂量组和空白对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。本发明制剂各剂量组小鼠增重在低、中、高剂量组和空白对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)。即本发明制剂对小鼠体重增重无影响。

             表2.本发明制剂对免疫二组小鼠体重影响

组别    动物数(只)     始重(g)      终重(g)    增重(g)     p

空白对照    12        19.3±0.9    34.7±3.0  15.3±3.0    ---

低剂量组    12        19.8±1.2    32.7±4.7  12.9±5.0    0.144

中剂量组    12        19.8±1.1    35.6±3.0  15.8±3.3    0.769

高剂量组    12        20.1±1.0    37.4±4.8  17.3±4.6    0.246

p值：各实验组与空白对照组比较

由表2可见，经统计学处理，小鼠的初始体重在低、中、高剂量组和空白对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。本发明制剂各剂量组小鼠增重在低、中、高剂量组和空白对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)。即本发明制剂对小鼠体重增重无影响。

表3本发明制剂对免疫三组小鼠体重影响

           动物数

组别

                    始重(g)      终重(g)      增重(g)     p

            (只)

空白对照     12    20.6±1.0    34.5±6.0    13.9±6.5    ---

低剂量组     12    20.1±1.2    34.3±2.7    14.2±2.7    0.856

中剂量组     12    20.4±1.4    35.1±3.6    14.8±3.9    0.654

高剂量组     12    20.3±1.1    35.9±5.4    15.6±5.7    0.383

p值：各实验组与空白对照组比较

由表3可见，经统计学处理，小鼠的初始体重在低、中、高剂量组和空白对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。本发明制剂各剂量组小鼠增重在低、中、高剂量组和空白对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)。即本发明制剂对小鼠体重增重无影响。

2.本发明制剂对小鼠脏器/体重比值的影响：

表4  本发明制剂对小鼠脏器/体重比值的影响

组别    动物数(只)  脾脏/体重比值(mg/g)   P₁    胸腺/体重比值(mg/g)  P₂

空白对照    12        5.08±1.59          ---      3.13±0.55         ---

低剂量组    12        5.52±1.26          0.400    3.21±0.51         0.677

中剂量组    12        5.55±1.02          0.364    3.03±0.28         0.593

高剂量组    12        5.32±1.12          0.646    3.04±0.43         0.642

脾脏/体重比值p1值：各实验组与空白对照组比较

胸腺/体重比值p2值：各实验组与空白对照组比较

由表4可见，经统计学处理，脾脏/体重比值和胸腺/体重比值在本发明制剂低、中、高剂量组与空白对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即本发明制剂对小鼠的脏器体重比值无影响。

3.本发明制剂对小鼠细胞免疫功能的影响：

3.1本发明制剂对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

表5  本发明制剂对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

组别    动物数(只)    足跖肿胀度(mm)     p

空白对照    12        0.65±0.14         ---

低剂量组    12        0.74±0.16         0.151

中剂量组    12        0.79±0.13*        0.038

高剂量组    12        0.79±0.19*        0.032

p值；各实验组与空白对照组比较    *p＜0.05

由表5可见，经统计学处理，足跖肿胀度在本发明制剂低剂量组与空白对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，在本发明制剂中、高剂量组与空白对照组间比较有显著性差异(p＜0.05)，即高剂量的本发明制剂能增强小鼠的迟发型变态反应。

3.2本发明制剂对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验的影响

表6本发明制剂对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验的影响

组别        动物数(只)  淋巴细胞增殖能力(OD差值)    p

空白对照        12         0.163±0.047             ---

低剂量组        12         0.159±0.025             0.760

中剂量组        12         0.146±0.034             0.259

高剂量组        12         0.147±0.039             0.294

p值：各实验组与空白对照组比较

由表6可见，经统计学处理，淋巴细胞的增殖能力在本发明制剂低、中、高剂量组与空白对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即本发明制剂对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化能力无影响。

4.本发明制剂对体液免疫的影响

4.1本发明制剂对抗体生成细胞数的影响

表7本发明制剂对小鼠抗体生成细胞数的影响

组别     动物数(只)    溶血空斑数(×10³/全脾)       p

空白对照    12            255.5±46.8                ---

低剂量组    12            239.1±48.4                0.470

中剂量组    12            259.8±65.6                0.848

高剂量组    12            288.9±57.9                0.145

p值：各实验组与空白对照组比较

由表7可见，经统计学处理，抗体生成细胞数在本发明制剂低、中、高剂量组与空白对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即本发明制剂对小鼠的抗体生成细胞数无明显影响。

4.2本发明制剂对小鼠半数溶血值HC₅₀的影响

表8本发明制剂对小鼠半数溶血值HC₅₀的影响

组别        动物数(只)    样品HC₅₀   p

空白对照        12        172±38     ---

低剂量组        12        182±41     0.602

中剂量组        12        196±45     0.209

高剂量组        12        218±54*    0.016

p值：各实验组与空白对照组比较*p＜0.05

由表8可见，经统计学处理，半数溶血值在本发明制剂低、中剂量组与空白对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，在本发明制剂高剂量组与空白对照组间比较有显著性差异(p＜0.05)，即高剂量的本发明制剂能提高小鼠半数溶血值。

5.本发明制剂对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响

5.1本发明制剂对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清功能的影响

表9  本发明制剂对小鼠单核—巨噬细胞碳廓清功能的影响

组别         动物数(只)   吞噬指数(a)    p

空白对照        12        6.36±1.04     ---

低剂量组        12        5.92±0.96     0.344

中剂量组        12        6.38±0.66     0.959

高剂量组        12        7.33±1.59*    0.038

p值：各实验组与空白对照组比较*P＜0.05

由表9可见，经统计学处理，碳廓清功能在本发明制剂低、中剂量组与空白对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，在本发明制剂高剂量组与空白对照组间比较有显著性差异(p＜0.05)，即高剂量的本发明制剂能增强小鼠单核-巨噬细胞的碳廓清能力。

5.2本发明制剂对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力的影响

表10本发明制剂对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力的影响

组别        动物数(只)   吞噬率(％)    P₁      吞噬指数     P₂

空白对照        12        38±12               0.46±0.12    ---

低剂量组        12        40±9        0.685   0.47±0.09    0.826

中剂量组        12        38±10       0.984   0.46±0.10    0.952

高剂量组        12        37±37       0.776   0.45±0.10    0.810

吞噬率(％)  P₁值：各实验组与空白对照组比较

吞噬指数    p₂值：各实验组与空白对照组比较

由表10可见，经统计学处理，吞噬率在本发明制剂低、中、高剂量组与空白对照组间比较均无显著性差异(p＞0.05)，吞噬指数在本发明制剂低、中、高剂量组与空白对照组间比较均无显著性差异(p＞0.05)，即本发明制剂对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力无影响。

6.本发明制剂小鼠NK细胞活性的影响

表11本发明制剂对小鼠NK细胞活性的影响

组别        动物数(只)    NK细胞活性(％)   p

空白对照        12        14.9±2.3        ---

低剂量组        12        16.8±2.6        0.073

中剂量组        12        15.1±2.2        0.823

高剂量组        12        15.5±2.8        0.583

p值：各实验组与空白对照组比较

由表11可见，经统计学处理，NK细胞活性在本发明制剂低、中、高剂量组与空白对照组间比较无显著性差异(p＞0.05)，即本发明制剂对小鼠的NK细胞活性无影响。

7.结论

本发明制剂能提高小鼠的半数溶血值，能增强小鼠的迟发型变态反应，能增强小鼠单核—巨噬细胞碳廓清的能力；对小鼠的体重增长、脏器/体重比值、小鼠抗体生成细胞数、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力、NK细胞活性无影响。由此说明，本发明制剂具有免疫调节作用。

下述实施例均能达到上述实验例的效果。

实施例1：本发明口服液

松杉灵芝10.0Kg、枸杞子6.0Kg、山梨酸钾28.0g、环己基氨基磺酸钠(甜蜜素)20.0g

A.松杉灵芝提取液的制备：

取松杉灵芝子实体水洗、破碎，备用；

取已破碎松杉灵芝子实体加入10倍量纯净水，分别煮沸提取三次，时间分别为：3h、2h、1h，滤过(过100目筛)，合并滤液，浓缩至体积比1∶2.5倍后，静止48h后滤过(过300目筛)，备用；

取静止后的滤液置于立式连续高速离心机中离心(16000转/min)，离心液备用；

B.枸杞子提取液的制备：

取枸杞子水洗、沥干，备用；

取已洗净的枸杞子装入纱布袋中(2Kg/袋)，再加入5倍量温度为80℃纯净水，分别浸提三次，时间分别为：2h、2h、1h，滤过(过300目筛)，合并滤液，浓缩至体积比1∶2.5倍后，静止48h后滤过(过300目筛)，备用；

取静止后的滤液置于立式连续高速离心机中离心(16000转/min)，提取液备用；

C.取松杉灵芝提取液、枸杞子提取液、甜蜜素、山梨酸钾和适量的纯净水置配液罐中调制至所需容积，静置，滤过，滤液备用；

取滤液经灌装、封口、蒸气灭菌(蒸汽灭菌参数：流通蒸汽100℃，灭菌30分钟)、灯检、包装，制成每瓶10mL的口服液4000瓶。

每日早晚各1次，每次10ml。

实施例2：本发明口服液

松杉灵芝8.0Kg、枸杞子8.0Kg、山梨酸钾28.0g、环己基氨基磺酸钠(甜蜜素)20.0g

A.松杉灵芝提取液的制备：

取松杉灵芝子实体水洗、破碎，备用；

取已破碎松杉灵芝子实体加入9倍量纯净水，分别煮沸提取4次，时间分别为：3h、2h、1h、1h，滤过(过100目筛)，合并滤液，浓缩至体积比1∶2.5倍后，静止48h后滤过(过300目筛)，备用；

取静止后的滤液置于立式连续高速离心机中离心(16000转/min)，离心液备用；

B.枸杞子提取液的制备：

取枸杞子水洗、沥干，备用；

取已洗净的枸杞子装入纱布袋中(2Kg/袋)，再加入6倍量温度为80℃纯净水，分别浸提2次，时间分别为：3h、2h，滤过(过300目筛)，合并滤液，浓缩至体积比1∶2.5倍后，静止48h后滤过(过300目筛)，备用；

取静止后的滤液置于立式连续高速离心机中离心(16000转/min)，提取液备用；

C.取松杉灵芝提取液、枸杞子提取液、甜蜜素、山梨酸钾和适量的纯净水置配液罐中调制至所需容积，静置，滤过，滤液备用；

取滤液经灌装、封口、蒸气灭菌(蒸汽灭菌参数：流通蒸汽100℃，灭菌30分钟)、灯检、包装，制成每瓶10mL的口服液4000瓶。

每日早晚各1次，每次10ml。

实施例3：本发明口服液

松杉灵芝12.0Kg、枸杞子4.0Kg、山梨酸钾28.0g、环己基氨基磺酸钠(甜蜜素)20.0g

A.松杉灵芝提取液的制备：

取松杉灵芝子实体水洗、破碎，备用；

取已破碎松杉灵芝子实体加入11倍量纯净水，分别煮沸提取二次，时间分别为：3h、3h，滤过(过100目筛)，合并滤液，浓缩至体积比1∶2.5倍后，静止48h后滤过(过300目筛)，备用；

取静止后的滤液置于立式连续高速离心机中离心(16000转/min)，离心液备用，

B.枸杞子提取液的制备：

取枸杞子水洗、沥干，备用；

取已洗净的枸杞子装入纱布袋中(2Kg/袋)，再加入4倍量温度为80℃纯净水，分别浸提四次，时间分别为：2h、2h、1h、1h，滤过(过300目筛)，合并滤液，浓缩至体积比1∶2.5倍后，静止48h后滤过(过300目筛)，备用；

取静止后的滤液置于立式连续高速离心机中离心(16000转/min)，提取液备用；

C.取松杉灵芝提取液、枸杞子提取液、甜蜜素、山梨酸钾和适量的纯净水置配液罐中调制至所需容积，静置，滤过，滤液备用；

取滤液经灌装、封口、蒸气灭菌(蒸汽灭菌参数：流通蒸汽100℃，灭菌30分钟)、灯检、包装，制成每瓶10mL的口服液4000瓶。

每日早晚各1次，每次10ml。

实施例4：本发明胶囊剂

取松杉灵芝10.0Kg、枸杞子6.0Kg，按药剂学常规工艺，加入辅料，制成胶囊剂。

实施例5：本发明片剂

取松杉灵芝8.0Kg、枸杞子8.0Kg，按药剂学常规工艺，加入辅料，制成片剂。

实施例6：本发明丸剂

取松杉灵芝12.0Kg、枸杞子4.0Kg，按药剂学常规工艺，加入辅料，制成丸剂。