银杏叶中银杏内酯B和白果内酯的提取方法

摘要

本发明公开了一种银杏叶中银杏内酯B和白果内酯的提取方法。将银杏叶烘干、去杂、粉碎，用乙醇水溶液提取，上吸附柱去杂质，然后用乙酸乙酯萃取出银杏内酯，上氧化铝柱纯化，分步结晶及重结晶，获得较纯的银杏内酯B和白果内酯。本发明工艺简单，操作方便，成本低廉，银杏内酯B、白果内酯有广泛的医药用途。

说明书

                            技术领域

本发明属于一种植物提取物，它涉及到从银杏叶中分离提取银杏内酯B和白果内酯的方法，本发明提取的银杏内酯B和白果内酯适用于治疗血小板活化因子引起的疾病和神经系统疾病。

                            背景技术

银杏内酯和白果内酯是唯一的从银杏中发现的特殊物质，由于空间结构复杂，手性多变，合成非常烦琐，目前只能从银杏叶中提取。由于它们治疗疾病的特效性，国内外研究比较热，国外未见银杏内酯B和白果内酯同时分离、提取生产的报道，有银杏内酯提取的报道，如日本公开特许公报平3-24084，用丙酮浸提银杏叶，溶液用四氯化碳萃取去杂，水相加氢氧化钠使其变成碱性，然后用苯或乙酸乙酯萃取。水相分离出后，加入盐酸使其为酸性，再加入二氯甲烷或乙醚萃取，两次萃取液合并，浓缩、干燥，用丙酮溶解干燥物，用乙酸铅沉淀、过滤，溶液上活性炭、硅胶柱，流出液再浓缩、干燥，干燥物用乙醇溶解，结晶，获银杏内酯和白果内酯混合物。该提取方法用10多种有机试剂，其中四氯化碳、二氯化碳、苯、乙酸铅等有毒，生产成本高，并且银杏内酯无被分离，国内有9项有关银杏内酯提取的专利报道，大都用乙醇浸提，用树脂吸附纯化，用硅胶柱分离，有的也用有毒试剂三氯甲烷萃取，但未见同时分离出银杏内酯B和白果内酯的报道。合肥工业大学用银杏叶提取物(含银杏黄酮甙24％，银杏内酯6％)，以丙酮-石油醚萃取出银杏内酯后，用超临界二氧化碳萃取银杏内酯，方法虽简单，但成本高，而且银杏内酯不分离。

                           发明内容

本发明的目的是在于提供了一种银杏叶中银杏内酯B和白果内酯的提取方法，方法简单，操作方便，成本低廉，纯度可达到95％以上。银杏内酯B用以治疗中风、休克、移植排拆，血液透析、哮喘等疾病。白果内酯用以治疗神经系统疾病，如轻瘫、肌肉萎缩、肌挛、震颤、表层和深部感觉障碍，头痛、头晕、四肢疼痛、语言、视力、听力、记忆、意识障碍等。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施：本发明要求银杏叶为含内酯大于0.3％的干燥绿叶，首先将采购的银杏叶进一步烘干，温度控制在65-75℃，去杂、粉碎，过55-65目筛，用50-60％乙醇提取2-3次，每次90-120分钟，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇；浓缩液加1-2倍的水，沉淀20-24小时，离心，取上清液上吸附柱，先用水冲洗，然后用75-80％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩。第二是将浓缩液加入1-2倍水和浓缩液的30-40％乙酸乙酯萃取2-3次，水相液浓缩、65-75℃真空干燥，主要为银杏黄酮甙产品。萃取分离出的有机相浓缩、65-75℃真空干燥、粉碎到90-100目，主要为银杏内酯产品；第三是在银杏内酯中，加入85-95％乙醇，上酸性氧化铝柱，收集流出液，浓缩至固形物25-30％时、停止加热(室温20-25℃)，有大量结晶析出，主要为银杏内酯A、B，过滤，再用95％乙醇溶解结晶，重结晶，先析出内酯A，当用色谱分析，银杏内酯A在溶液中含量极少时，用抽滤器分离，分离出结晶银杏内酯A，溶液再结晶，主要为银杏内酯B，用结晶的20-40％的95％乙醇冲洗、抽滤，再用95％乙醇溶解，重结晶，银杏内酯B经三次重结晶、分离，纯度可达95％以上；第四是在母液中加入1-2倍水，在75-80℃下蒸完乙醇、冷却、析出结晶，主要为银杏内酯C，分离出结晶，母液减压蒸干，粉碎至90-100目为黄色粉末白果内酯，用结晶的20-40％无水乙醇冲洗白果内酯，抽滤，用95％乙醇溶解，重结晶为白色的白果内酯，再用95％乙醇溶解，再重结晶，白果内酯经三次重结晶，分离，纯度可达95％以上。

本发明与现有技术相比，从银杏叶中分离提取出银杏内酯B和白果内酯单体，其纯度可达95％以上，并且在生产中可提取出银杏内酯A、C和银杏黄酮甙五种产品，生产过程中无使用有机毒剂，成本低廉，方法比较简单，可行，可进行工业化生产。提取的银杏内酯B和白果内酯有广泛的医药用途，银杏内酯B用以治疗中风、休克、移植排拆，血液透析、哮喘等疾病。白果内酯用以治疗神经系统疾病，如轻瘫、肌肉萎缩、肌挛、震颤、表层和深部感觉障碍，头痛、头晕、四肢疼痛、语言、视力、听力、记忆、意识障碍等。

                        具体实施方式

实施例1：

A、将采购的干绿色银杏叶，在65或68或70或73或75℃下烘干，去杂、粉碎，过60目筛，称60kg，放入提取罐中，加入600L50％乙醇，在搅拌下，70℃提取90分钟，停止搅拌，过滤，再重复提取2次，减压浓缩，回收乙醇含量在20％以下时，停止浓缩，放入贮存罐，加入100L净化水，沉淀20小时，取上清液离心、分离，将离心的清液上ADS-15吸附柱(当流出液用1％硫酸亚铁检验呈深兰色时，说明柱已饱和，停止上柱)。用净化水过柱清洗，待流出液较清亮时，用75％乙醇洗脱(约为120L)，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩约40L时，停止加热，放入萃取器内；

B、在萃取器中加入40L净化水，用每次30L乙酸乙酯萃取2次，合并萃取液、浓缩、干燥、粉碎到95目，主要为银杏内酯产品。水相液浓缩，烘干，主要为银杏黄酮甙产品；

C、银杏内酯产品用55L95％乙醇溶解，上酸性氧化铝柱，收集清亮淡黄色流出液(当流出液为橙色时，说明柱已饱和，需要重新装入新的酸性氧化铝)，流出液减压浓缩至固形物为25％时，有大量晶体析出，主要为银杏内酯A、B，用抽滤器分离出晶体，抽滤，晶体再用95％乙醇溶解，结晶，先析出银杏内酯A，当用色谱分析溶液中含银杏内酯A极少时，用抽滤器分离出结晶银杏内酯A，剩下的溶液再结晶为银杏内酯B，用1ml的95％乙醇冲洗结晶，抽滤，银杏内酯B经95％乙醇溶解，经3次重结晶，获3.0g银杏内酯B，纯度为97％；

D、在母液中加入3.5L净化水，75℃下蒸出乙醇，冷却后，有结晶析出，主要为银杏内酯C，用抽滤器分离出结晶，母液浓缩、干燥、粉碎到100目，黄色粉末为银杏白果内酯，放入抽滤器，用1ml的无水乙醇冲洗、抽滤，再用95％乙醇溶解，重结晶，获白色的白果内酯，白果内酯经三次重结晶，获4.1g白果内酯，纯度为95.1％。

实施例2：

A、将采购的干绿色银杏叶进一步在65或68或70或72或75℃下烘干，去杂，粉碎，过55或58或60或62或65目筛，称60kg，放入提取罐中，加入550L55％乙醇，在搅拌下，70℃提取120分钟，停止搅拌，过滤，再重复提取一次，过滤，两次滤液合并，减压浓缩至回收乙醇含量在20％以下时，停止加热，加入200L净化水，沉淀22小时，取上清液离心，将离心的清亮液上ADS-15吸附柱(当流出液用1％硫酸亚铁检验呈深兰色反应时，说明柱已饱和，停止上柱)。用净化水过柱清洗，待流出液较清亮时，用75％乙醇洗脱(约120L)，收集洗脱液，减压浓缩，回收乙醇，浓缩至约40L时，停止加热，放入萃取器内；

B、在萃取器中加入50L净化水，用每次35L乙酸乙酯萃取2次，合并萃取液，浓缩、干燥、粉碎到90目，是银杏内酯产品，水相液浓缩、烘干，主要是含银杏黄酮甙的产品；

C、银杏内酯产品用60L95％乙醇溶解，上酸性氧化铝柱，收集清亮的淡黄色流出液(当流出液为橙色时，说明柱已饱和，需重新装入新的酸性氧化铝)。将流出液减压浓缩至固形物为30％时，有大量晶体析出，晶体主要为银杏内酯A、B，用抽滤器分离晶体，用95％乙醇溶解结晶，再结晶，先析出银杏内酯A、用色谱分析溶液中含银杏内酯A极少时，用抽滤器分离出晶体，晶体主要为银杏内酯A，溶液再结晶为银杏内酯B，用1.1ml的95％乙醇冲洗结晶，抽滤，银杏内酯B用95％乙醇溶解，经三次重结晶、分离，获银杏内酯B3.7g，纯度为96.5％；

D、将母液加入4L净化水，在78℃下蒸去乙醇，冷却后，有结晶析出，主要是银杏内酯C，用抽滤器分离出结晶，母液减压浓缩、干燥、粉碎到90目，黄色粉末为白果内酯，放入抽滤器，用1.2ml的无水乙醇冲洗，抽滤，再用95％乙醇溶解，重结晶，得白色的白果内酯，白果内酯经三次重结晶，分离，获白果内酯4.5g，纯度95.2％。

实施例3：

A、采购的干绿色银杏叶在65或68或70或72或75℃下进一步烘干、去杂、粉碎，过55或58或60或63或65目网筛，称60kg，放入提取罐，加入500L60％乙醇，在搅拌下，70℃提取120分钟，停止搅拌，过滤，再重复提取1次，两次提取液合并，减压浓缩至回收乙醇含量在20％以下时，停止加热，加入200L净化水，沉淀24小时，取上清液离心，离心的清亮液上ADS-15吸附柱(当流出液用1％硫酸亚铁检验呈深兰色反应时，说明柱已饱和，停止上柱)。用净化水过柱清洗，待流出液清亮时，用80％乙醇洗脱(约120L)，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至约40L时，停止加热，放入萃取器内；

B、在萃取器中加入45L净化水，用每次30L乙酸乙酯萃取2次，合并萃取液，浓缩、干燥、粉碎到100目，主要是银杏内酯产品，水相液浓缩、烘干，主要为银杏黄酮甙产品；

C、银杏内酯产品用65L95％乙醇溶解，上酸性氧化铝柱，收集清亮的淡黄色流出液(当流出液为橙色时，说明柱已饱和，需重新装入新的酸性氧化铝)。将流出液减压浓缩至固形物为30％时，有大量晶体析出，晶体主要为银杏内酯A、B，用抽滤器分离晶体，抽滤，用95％乙醇溶解晶体，再结晶，先析出银杏内酯A，当用色谱分析溶液中含银杏内酯A极少时，用抽滤器分离出晶体，晶体主要为银杏内酯A。溶液再结晶为银杏内酯B，用1ml的95％乙醇冲洗结晶，抽滤，银杏内酯B用95％乙醇溶解，经三次重结晶，获银杏内酯B3.2g，纯度为97.1％；

D、在母液中加入5L净化水，在80℃下蒸去乙醇，冷却后，有结晶析出主要是银杏内酯C，用抽滤器分离出晶体，母液减压浓缩，真空干燥，粉碎到95目，得黄色粉末为白果内酯，放入抽滤器，用1.1ml的无水乙醇冲洗，抽滤，再用95％乙醇溶解，重结晶，得白色的白果内酯，白果内酯经三次重结晶分离，获白果内酯4.0g，纯度为95.9％。

注浓缩时，温度一般控制在65或68或70或72或75℃下减压浓缩。