一种治疗牙龈炎和牙周炎的药物及其制备方法

摘要

本发明提供了一种治疗牙龈炎和牙周炎的药物及其制备方法。该药物是由金银花、黄芩、广藿香、牡丹皮、白芷和香薷制备而成的口服药物，优选含片、胶囊、颗粒剂和口服液。经药效学实验研究表明，本发明药物具有很好的治疗牙龈炎和牙周炎的作用，临床实用价值很高。

说明书

技术领域

本发明属于中药领域，本发明提供了一种治疗牙龈炎和牙周炎的药物及其制备方法。

背景技术

目前口含片的品种都集中在治疗咽喉疾病的喉片方面，而居口腔疾病首位的牙龈红肿疼痛、口臭却无人问津。引起牙龈红肿疼痛、口臭的原因很多，其中以牙龈炎、牙周炎最为常见。该病可使牙龈充血水肿、溢脓、出血，口臭，牙齿松动、移位，最终牙齿脱落。出现如此病损不但使咀嚼能力降低，影响消化功能，且有碍于美观和社交活动。牙周组织的进一步病损可影响牙体组织，发生逆行性牙髓炎和根尖周炎。炎症扩散，常形成牙周脓肿及颌面部的间隙感染。牙周袋内的细菌及毒素进入血液，可造成菌血症和毒血症，引起细菌性心内膜炎、心肌炎、肾炎、关节炎和眼病等。随着现代社会文明的进步，人们对这种影响个人观瞻、妨碍社交活动的疾病将越来越重视。

目前西医治疗本病亦无理想药物，特别是定位在口臭、牙龈红肿疼痛的使用方便的口含片成药制剂更是缺如。已批准上市的新品种中更是没有治疗口臭、牙龈红肿疼痛、龈缘萎缩以致影响牙齿美观的中成药。因此，发明一种有效的治疗牙龈炎和牙周炎的药物在目前临床上是非常急需的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种治疗牙龈炎和牙周炎的药物及其制备方法。

本发明的治疗牙龈炎和牙周炎的药物是由下述重量份的原料制备而成的：

金银花500-800    黄  芩400-600

广藿香300-550    牡丹皮150-350

白  芷200-400    香  薷200-400

上述原料的重量比优选：

金银花500      黄  芩450    广藿香320

牡丹皮200      白  芷250    香  薷250

上述原料的重量比还优选：

金银花625      黄  芩500    广藿香438

牡丹皮250      白  芷312    香  薷312

上述原料的重量比还优选：

金银花750      黄  芩580    广藿香500

牡丹皮350    白  芷380      香  薷380

上述原料的重量比还优选：

金银花650    黄  芩420      广藿香300

牡丹皮160    白  芷300      香  薷300

本发明药物可以是任何常规的口服药物剂型。优选含片、胶囊剂、颗粒剂和口服液。

本发明含片可通过以下方法制备而成：

1)取金银花、广藿香、牡丹皮(粗粉)、白芷(粗粉)、香薷加6-15倍量水，浸泡0.5-2小时，加热回流提取3-8小时，收集挥发油；药液滤过，滤液和药渣备用；在挥发油中加等量乙醇(浓度范围50％-100％)溶解，取2-8倍于挥发油量的环糊精，加入1-5倍于环糊精量的水拌匀，缓缓滴加挥发油乙醇液，研磨，干燥，过40-120目筛，得环糊精包合物备用；

2)取黄芩，用水提取，第一次加沸水煎煮，第二次与以上五味药蒸馏提取挥发油后的药渣合并，再加水煎煮，过滤，滤液与第一次沸水煎煮液合并，浓缩至相对密度0.8-1.5(60℃测)，离心，上清液继续减压浓缩至相对密度1.0-2.0(60℃测)的稠膏，真空干燥，粉碎，得浸膏粉；

3)取浸膏粉，加入蔗糖粉、AK糖、柠檬酸，用50％-100％乙醇制粒，过8-20目，50～60℃干燥，用12-20目筛整粒，加入环糊精包合物、苦掩香精、苹果香精和适量硬脂酸镁，混匀，压片，包薄膜衣，包装，即得含片。

本发明胶囊、颗粒剂和口服液的制备方法为：步骤同上述1)、2)步，第3)步按本领域常规的制备胶囊、颗粒剂和口服液的方法进行，制得本发明胶囊、颗粒剂或口服液。

本发明中，环糊精可以是α-、β-、γ-环糊精或其他环糊精衍生物。

实施例1

金银花500    黄  芩450    广藿香320

牡丹皮200    白  芷250    香  薷250

制备方法如下：

1)取金银花、广藿香、牡丹皮(粗粉)、白芷(粗粉)、香薷加10倍量水，浸泡1小时，加热回流提取6小时，收挥发油；药液滤过，滤液和药渣备用；挥发油加等量乙醇溶解，取5倍于挥发油量β-CD，加入3倍于β-CD量的水拌匀，缓缓滴加挥发油乙醇液，研磨3小时，40℃干燥，过80目筛，得β-CD包合物备用。

2)取黄芩，用水提取，第一次入10倍量沸水煎煮1.5小时，第二次与蒸馏提取挥发油后的药渣合并，加8倍量水煎煮1小时，过滤，滤液与前述药液合并，浓缩至相对密度1.08(60℃测)，离心，上清液继续减压浓缩至相对密度约1.30(60℃测)的稠膏，真空干燥，粉碎，得浸膏粉。

3)取浸膏粉，加入蔗糖粉、AK糖、柠檬酸，用95％乙醇制粒，过14目，50～60℃干燥，用16目筛整粒，加入β-CD包合物、苦掩香精、、苹果香精和适量硬脂酸镁，混匀，压片，包薄膜衣，包装，即得含片。

实施例2

金银花625    黄  芩500   广藿香438

牡丹皮250    白  芷312   香  薷312

制备方法同实施例1。

实施例3

金银花750    黄  芩580    广藿香500

牡丹皮350    白  芷380    香  薷380

制备方法为：

步骤1)和2)同实施例1，第3)步按照本领域常规的制备胶囊的方法进行，制得本发明胶囊剂。

实施例4

金银花650    黄  芩420    广藿香300 

牡丹皮160    白  芷300    香  薷300

制备方法为： 

步骤1)和2)同实施例1，第3)步按照本领域常规的制备颗粒剂的方法进行，制得本发明颗粒剂。

实施例5

金银花650    黄  芩420    广藿香300

牡丹皮160    白  芷300    香  薷300

制备方法为：

步骤1)和2)同实施例1，第3)步按照本领域常规的制备口服液的方法进行，制得本发明口服液。

一、药效学资料

药效学实验研究表明，本发明药物具有很好的治疗牙龈炎和牙周炎的作用。主要表现在：(1)能降低牙龈炎模型豚鼠切牙组织浸泡液细菌检出阳性率，改善模型豚鼠牙龈红肿，质地松软，龈沟加深的表现指标，改变模型豚鼠牙龈上皮溃疡，局部炎性坏死，胶原松解，粘膜全层炎症等严重牙龈炎症的病理学变化。(2)能控制牙周炎模型大鼠出现皮毛光泽，肢冷无力，食欲不振，甚至死亡等表现，基本阻止了该牙周炎引起的大鼠体重下降。(3)对模型大鼠上颌磨牙周围组织糜烂、坏死、牙齿发黑、质地松软，以及上颌牙龈上皮溃疡，局部炎性坏死，胶原溶解，粘膜炎症，牙槽骨、松质骨出现少量骨小梁稀疏、变细等病理变化均有较好改善，表明其对豚鼠牙龈炎、大鼠牙周炎有较好的治疗作用。(4)能明显降低溶血性链球菌标准株及临床株感染后小鼠的死亡率；降低流感嗜血杆菌标准株及临床株感染小鼠的死亡率，具有一定的体内抗菌作用。(5)能抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀；抑制鸡蛋清致大鼠足跖肿胀；减少羧甲基纤维素钠引起大鼠腹腔白细胞游走，具有一定的抗炎作用。(6)能抑制由醋酸引起的小鼠扭体反应；提高小鼠的耐热能力，具有较好的镇痛作用。(7)能缩短小鼠的血凝时间；缩短家兔血浆复钙时间，具有一定的止血作用。(8)可促进小鼠网状内皮系统的吞噬能力；促进小鼠的溶血素抗体生成，具有提高免疫功能的作用。

1.实验材料

1.1药物与试剂

溶血性链球菌标准株及临床分离株，流感嗜血杆菌标准株及临床分离株，临床牙周袋厌氧菌由湖南省中医学院微生物教研室提供。临床牙周袋厌氧菌分离培养方法：从临床牙周炎患者牙周袋中用注射器取得菌斑，通过厌氧培养，得到牙菌斑总厌氧菌培养液。

2.方法与结果

(统计方法：计量资料以X±S表示，方差齐者以方差分析和成组t检验分析；方差不齐者以秩和检验分析。计数资料以X2检验分析。等级资料以Ridit检验分析。)

2.1.对豚鼠牙龈炎模型的影响

2.1.1方法

造模：以正畸钢丝拴结豚鼠下颌切牙牙颈部，用探针将临床患者牙周袋菌斑的厌氧菌培养液接种入拴结豚鼠牙龈沟，连续5天造成急性牙龈炎模型。

取豚鼠60只，雌雄各半，体重425.6±16.5g，按体重随机分成6组，分别为空白对照组(ig蒸馏水10ml/kg)、模型对照组(ig蒸馏水10ml/kg)、牛黄清胃丸组(ig牛黄清胃丸3.8g/kg，为临床等效剂量的2倍)、康龈洁齿含片低、中、高剂量组(分别ig康龈洁齿含片2.3、4.6、9.2g生药/kg，分别相当于临床等效剂量的1、2、4倍)。除空白对照组外，其余动物造模，所有豚鼠于造模第1天每鼠按表1剂量给药，每天1次，连续5天，给药方法为：经口滴入，自然吞咽。观察指标：A、牙龈炎症观察。B、取切牙及周围组织浸泡液进行细菌学检查。C、取切牙及周围组织常规石腊切片，HE染色，观察牙龈病理变化：①牙龈组织结构正常(-)；②牙龈上皮覆盖完整，固有层少量血管扩张，散在少量炎症细胞浸润(+)；③牙龈上皮未见糜烂，固有层炎症细胞局灶性浸润，胶原纤维肿胀，血管扩张，充血(++)；④牙龈上皮溃疡形成，局部大量炎性坏死组织，胶原溶解，炎症累及粘膜全层(+++)。

      表1康龈洁齿含片对牙龈炎模型豚鼠切牙组织浸泡液细菌学的影响

                    动物数        剂量              牙周细菌学检查

组别

                    (只)          (g/kg)         阳性数       阳性率％

空白对照组          10            DW             1            10^**

模型对照组          10            DW             9            90

牛黄清胃丸组        10            3.8            6            60

康龈洁齿含片  低    10            2.3            7            70

              中    10            4.6            6            60

              高    10            9.2            5            50^*

经X²检验，与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

      表2康龈洁齿含片对牙龈炎模型豚鼠切牙组织病理学的影响

                    动物数             病理组织学检查结果(只)

组别

                    (只)           -        +        ++       +++

空白对照组          10             10       0        0        0

模型对照组          10             0        1        3        6

牛黄清胃丸组        10             0        4        5        1^*

康龈洁齿含片  低    10             0        5        3        2

              中    10             0        5        4        1^*

              高    10             1        5        4        0^**

经Ridit检验，与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

2.1.2结果

表征观察结果：模型对照组豚鼠牙龈红肿，水肿，质地松软，龈沟加深，轻探出血。康龈洁齿含片中、高剂量组豚鼠牙龈稍见红肿，水肿。

由表1可见，与模型对照组比较，康龈洁齿含片高剂量组豚鼠切牙组织浸泡液细菌学检出阳性率显著降低。

由表2可见，模型对照组豚鼠大多牙龈上皮溃疡形成，局部大量炎性坏死组织，胶原溶解，炎症累及粘膜全层，表现出严重的牙龈炎症；康龈洁齿含片低剂量组动物牙龈上皮虽未见糜烂，但固有层炎症细胞局灶性浸润，胶原纤维肿胀，血管扩张，充血，多数表现为中、重度牙龈炎症；中、高剂量组动物多数牙龈上皮覆盖完整，固有层少量血管扩张，组织水肿不明显，只有散在少量炎症细胞浸润，胶原纤维肿胀不明显，表现为轻、中度牙龈炎症。经Ridit检验，与模型对照组比较，康龈洁齿含片中、高剂量组豚鼠切牙及周围组织病理学改变显著，表明康龈洁齿含片对豚鼠急性牙龈炎有较好的治疗作用。

2.3.抑菌作用研究

2.3.1对溶血性链球菌标准株及临床株感染小鼠死亡的影响

2.3.1.1方法

取ICR系清洁级小鼠120只，雌雄各半，体重21.3±1.5g，随机分成6组，分别为模型对照组(ig蒸馏水20ml/kg)、阿莫西林组(0.4g/kg，为临床等效剂量的2倍)、牛黄清胃丸组(ig牛黄清胃丸6.2g丸/kg，为临床等效剂量的2倍)、康龈洁齿含片低、中、高剂量组(分别ig康龈洁齿含片3.8、7.6、15.2g生药/kg，分别相当于临床等效剂量的1、2、4倍)。按表5剂量给药6次，给药方法为：先灌胃，最后留约0.1ml让小鼠含服。于注射细菌前每天给药1次，共3次，于第3次给药后30min，每鼠腹腔注射0.5ml乙种溶血性链球菌液(标准株)(通过预试得出该菌感染小鼠，出现90％死亡率的浓度约为1×10⁹个/ml)，注射溶血性链球菌后1h及第2、3天继续给药3次，观察记录4天内小鼠的死亡情况，以死亡率进行统计比较。

另取ICR系清洁级小鼠120只，雌雄各半，体重22.8±2.0g，按上述方法给药，并注射0.5ml乙种溶血性链球菌液(临床分离株)(通过预试得出该菌感染小鼠，出现90％死亡率的浓度约为5×10⁸个/ml)，观察记录4天内小鼠的死亡情况，以死亡率进行统计比较。结果见表5。

     表5康龈洁齿含片对溶血性链球菌感染小鼠死亡的影响

                       动物数      剂量            标准株               临床分离株

组别                   (只)        (g/kg)     死亡数     死亡率     死亡数     死亡率

                                              (只)       (％)       (只)       (％)

模型对照组             20          DW         18         90         19         95

阿莫西林组             20          0.4        0          0^**       1          5^**

牛黄清胃丸组           20          6.2        12         60^*       13         65^*

康龈洁齿含片  低       20          3.8        13         65         14         70^*

              中       20          7.6        11         55^*       12         60^*

              高       20          15.2       11         55^*       11         55^**

经X²比较，与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

2.3.1.2结果

表5可见，与模型对照组比较，康龈洁齿含片低、中、高剂量组小鼠的死亡率有显著性差异，其死亡率明显降低，表明康龈洁齿含片能明显降低溶血性链球菌标准株和临床分离株感染后小鼠的死亡率，具有一定的抗菌作用。阳性对照药阿莫西林胶囊有很好的体内抗菌作用。

2.3.2对流感嗜血杆菌标准株及临床株感染小鼠死亡的影响

2.3.2.1方法

取ICR系清洁级小鼠120只，雌雄各半，体重21.6±2.6g，随机分成6组，分别为模型对照组(ig蒸馏水20ml/kg)、阿莫西林组(0.4g/kg，为临床等效剂量的2倍)、牛黄清胃丸组(ig牛黄清胃丸6.2g丸/kg，为临床等效剂量的2倍)、康龈洁齿含片低、中、高剂量组(分别ig康龈洁齿含片3.8、7.6、15.2g生药/kg，分别相当于临床等效剂量的1、2、4倍)。按表6剂量给药6次，给药方法为：先灌胃，最后留约0.1ml让小鼠含服。于注射细菌前每天给药1次，共3次，于第3次给药后30min，每鼠腹腔注射0.5ml流感嗜血杆菌液(标准株)(通过预试得出该菌感染小鼠，出现90％死亡率的浓度约为1.5×10⁹个/ml)，注射流感嗜血杆菌后1h及第2、3天继续给药3次，观察记录4天内小鼠的死亡情况，以死亡率进行统计比较。

另取ICR系清洁级小鼠120只，雌雄各半，体重22.1±2.4g，按上述方法给药，并注射0.5ml流感嗜血杆菌液(临床分离株)(通过预试得出该菌感染小鼠，出现90％死亡率的浓度约为1×10⁹个/ml)，观察记录4天内小鼠死亡情况，以死亡率进行统计比较。结果见表6。

     表6康龈洁齿含片对流感嗜血杆菌感染小鼠死亡的影响

                    动物数     剂量             标准株             临床分离株

组别                (只)       (g/kg)     死亡数    死亡率    死亡数      死亡率

                                          (只)      (％)      (只)        (％)

模型对照组          20         DW         19        95        19          95

阿莫西林组          20         0.4        0         0^**       0           0^**

牛黄清胃丸组        20         6.2        14        70^*      15          75

康龈洁齿含片  低    20         3.8        15        75        14          70^*

              中    20         7.6        13        65^*      14          70^*

              高    20         15.2       12        60^**     13          65^*

经X²比较，与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

2.3.2.2结果

表6可见，与模型对照组比较，康龈洁齿含片低、中、高剂量组小鼠的死亡率有显著性差异，其死亡率明显降低，表明康龈洁齿含片能明显降低流感嗜血杆菌感染后小鼠的死亡率，具有一定的抗菌作用。阳性对照药阿莫西林胶囊有极好的体内抗菌作用。

二、补充资料

1.实验材料

1.1药物与试剂

康龈洁齿含片，临床拟用量为29.3g生药/日，实验时采用其浸膏，浓度为4.4g生药/g，由湖南省中医药研究院制剂室提供，批号：20030528。

阳性药物(一)，牛黄清胃丸，规格：每丸重6克；用量：口服，4丸/日。河北省沧洲唐圣药业有限公司生产，批号：20010524。

阳性药物(二)，甲硝唑片，规格0.2g/片，口服2-3片/次，3次/日，湖北华中制药有限公司生产，批号：021210。

牙龈卟啉单胞菌(ATCC33277)，中间普氏菌(ATCC25261)，由北京口腔医院研究所提供。牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌临床分离株，由临床牙周炎患者牙周袋分离，细菌增值培养由湖南中医学院微生物教研室提供。

1.2动物

NIH一级小鼠，雌雄各半，体重18-22g，由湖南中医学院实验动物中心提供，合格证号：20-001号。实验动物环境设施合格证号：027号。

2.方法与结果

(统计方法：计量资料以X±S表示，方差齐者以方差分析和成组t检验分析；方差不齐者以秩和检验分析。计数资料以X²检验分析。等级资料以Ridit检验分析。)

2.1.抑菌作用研究

2.1.1对牙龈卟啉单胞菌标准株及临床株感染小鼠死亡的影响

2.1.1.1方法(4)

取ICR系清洁级小鼠120只，雌雄各半，体重19.6±3.8g，随机分成6组，分别为模型对照组(ig蒸馏水20ml/kg)、甲硝唑组(0.4g/kg，为临床等效剂量的2倍)、牛黄清胃丸组(ig牛黄清胃丸6.2g丸/kg，为临床等效剂量的2倍)、康龈洁齿含片低、中、高剂量组(分别ig康龈洁齿含片3.8、7.6、15.2g生药/kg，分别相当于临床等效剂量的1、2、4倍)。按表3剂量给药6次，给药方法为：先灌胃，最后留约0.1ml让小鼠含服。于注射细菌前每天给药1次，共3次，于第3次给药后30min，每鼠腹腔注射0.5ml乙种牙龈卟啉单胞菌液(标准株)(通过预试得出该菌感染小鼠，出现90％死亡率的浓度约为1.2×10¹⁰个/ml)，注射牙龈卟啉单胞菌后1h及第2、3天继续给药3次，观察记录4天内小鼠的死亡情况，以死亡率进行统计比较。

另取ICR系清洁级小鼠120只，雌雄各半，体重21.4±4.4g，按上述方法给药，并注射0.5ml牙龈卟啉单胞菌液(临床分离株)(通过预试得出该菌感染小鼠，出现90％死亡率的浓度约为6×10⁸个/ml)，观察记录4天内小鼠的死亡情况，以死亡率进行统计比较。结果见表3。

       表3康龈洁齿含片对牙龈卟啉单胞菌感染小鼠死亡的影响

                    动物数      剂量            标准株               临床分离株

组别                (只)        (g/kg)     死亡数    死亡率     死亡数      死亡率

                                           (只)      (％)       (只)        (％)

模型对照组          20          DW         19        95         19          95

甲硝唑组            20          0.4        2         10^**      3           15^**

牛黄清胃丸组        20          6.2        14        70^*       15          75

康龈洁齿含片低      20          3.8        14        70^*       16          80

            中      20          7.6        14        70^*       14          70^*

            高      20          15.2       12        60^**      13          65^*

X²比较，与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

2.1.1.2结果

表3可见，与模型对照组比较，康龈洁齿含片低、中、高剂量组小鼠的死亡率有显著性差异，其死亡率明显降低，表明康龈洁齿含片能明显降低牙龈卟啉单胞菌标准株与临床株腹腔注射小鼠后小鼠的死亡率，具有一定的抗菌作用。阳性对照药甲硝唑胶囊有较好的体内抗菌作用。

2.2.2对中间普氏菌标准株及临床株感染小鼠死亡的影响

2.2.2.1方法

取ICR系清洁级小鼠120只，雌雄各半，体重20.8±3.6g，随机分成6组，分别为模型对照组(ig蒸馏水20ml/kg)、甲硝唑组(0.4g/kg，为临床等效剂量的2倍)、牛黄清胃丸组(ig牛黄清胃丸6.2g丸/kg，为临床等效剂量的2倍)、康龈洁齿含片低、中、高剂量组(分别ig康龈洁齿含片3.8、7.6、15.2g生药/kg，分别相当于临床等效剂量的1、2、4倍)。按表4剂量给药6次，给药方法为：先灌胃，最后留约0.1ml让小鼠含服。于注射细菌前每天给药1次，共3次，于第3次给药后30min，每鼠腹腔注射0.5ml中间普氏菌液(标准株)(通过预试得出该菌感染小鼠，出现90％死亡率的浓度约为1.5×10¹⁰个/ml)，注射中间普氏菌后1h及第2、3天继续给药3次，观察记录4天内小鼠的死亡情况，以死亡率进行统计比较。

另取ICR系清洁级小鼠120只，雌雄各半，体重22.4±5.0g，按上述方法给药，并注射0.5ml中间普氏菌液(临床分离株)(通过预试得出该菌感染小鼠，出现90％死亡率的浓度约为9×10⁸个/ml)，观察记录4天内小鼠的死亡情况，以死亡率进行统计比较。结果见表4。

     表4康龈洁齿含片对中间普氏菌感染小鼠死亡的影响

                  动物数     剂量            标准株              临床分离株

组别              (只)       (g/kg)     死亡数    死亡率     死亡数      死亡率

                                        (只)      (％)       (只)        (％)

模型对照组        20         DW         19        95         19          95

甲硝唑组          20         0.4        3         15^**      5           25^**

牛黄清胃丸组      20         6.2        15        75         15          75

康龈洁齿含片低    20         3.8        15        75         14          70^*

            中    20         7.6        14        70^*       14          70^*

            高    20         15.2       13        65^*       14          70^*

经X²比较，与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01    

2.2.2.2结果

表4可见，与模型对照组比较，康龈洁齿含片低、中、高剂量组小鼠的死亡率有显著性差异，其死亡率明显降低，表明康龈洁齿含片能明显降低中间普氏菌感染后小鼠的死亡率，具有一定的抗菌作用。阳性对照药甲硝唑胶囊有较好的体内抗菌作用。

3.讨论

牙龈卟啉单胞菌和中间普氏菌为革兰氏阴性厌氧杆菌，近年研究较多，被认为是牙周炎等主要感染病菌。从上述研究结果可见，康龈洁齿含片对二者有一定的抑制作用。