从紫葳科植物Stereospermum personatum得到的抗氧化剂(+)－环橄榄树脂素

摘要

本发明涉及一种包括(+)－环橄榄树脂素和添加剂的新型药物组合物，其用作抗氧化剂且从一种新的原料紫葳科植物Stereospermum personatum制得。本发明还提供了从植物原料即紫葳科植物stereospermum personatum分离出活性化合物(+)－环橄榄树脂素的方法以及化合物(+)－环橄榄树脂素作为抗氧化剂的用途。

说明书

技术领域

本发明涉及从一种新的植物原料即紫葳科植物stereospermumpersonatum(拉丁文植物原名)以很好的收率分离出活性化合物(+)-环橄榄树脂素。该化合物被证明是有用的并且是比目前医药上使用的重要亲脂性抗氧化剂即丙丁酚和α-生育酚更好的抗氧化剂分子。该化合物对发炎性病症、动脉粥样硬化症、糖尿病并发症、癌症、肝中毒和由氧化影响和/或明显的氧化负担介导的或促进的多种疾病可能有更好的治疗潜力，该明显的氧化负担是由于自由基的增加或没有清除(under scavenging)自由基而引起的。

背景技术

大量的流行病学证据表明饮食中富含水果和蔬菜与心血管疾病和某些形式的癌症的风险降低之间具有联系。通常假设对这些保护作用有贡献的活性组分(active principles)不是别的，而正主要是抗氧化剂植物化学物质(antioxidant phytochemicals)。

过去几十年的研究已经积累了足够的证据，表明了自由基清除剂/抗氧化剂在在抗诱变、抗发炎、antiamerosclerotic、抗糖尿病、抗肝中毒、抗老化以及多种神经紊乱病症方面的有益效果。因此为改善对例如白内障、风湿病、动脉粥样硬化症、阿尔茨海默氏症(Alzheimer’s disease)和其他神经变性病症等病理学疾病而进行的药理学治疗，对新型抗氧化剂成分的研究十分必要。

药理学研究方法集中在对富含抗氧化剂成分的潜在资源进行研究。含有丰富抗氧化剂成分的植物的药学价值因此而成为热门课题。

Stereospermum personatum是应用于传统的印度药物体系中的药用植物，也被广泛倡导用于制备利尿剂、溶石药、除痰剂、强心剂、壮阳剂、开胃剂、抗炎剂、抗菌剂、治疗消化不良、腹泻、肾和膀胱结石、咳嗽、哮喘、剧渴、痔疮以及胃酸过多症的药物(Indian Medicinal Plants，Vol.5p 192)。也有报道称该植物具有抗细菌、抗真菌、低血糖活性并且抗p338淋巴白血病细胞(Ind.Jour，ofExp.Biol.，1971，9，100)。因此寻找具有此类生物特性价值的分子变得适宜。在这方面，对Stereospermum personatum的植物化学研究已经兴起。本申请人努力的结果是是实现了以很好的收率分离(+)-环橄榄树脂素。已知(+)-环橄榄树脂素具有的几种活性列于表-1中。

 表-1

化合物活性参考文献(+)-环橄榄树脂素1.环AMP  磷酸二酯酶抑制性2.抗高血压和Ca²⁺拮  抗剂活性3.与人类性激素结合Chem.Pharm.Bull，1981，29，3586-92Chem.Pharm.Bull，1986，34，3514-17Plant.Med.1997，63，529-532

发明目的

本发明的主要目的是提供包括(+)-环橄榄树脂素和添加剂的新型组合物，其用作氧化剂。

本发明的另一目的是提供以高收率制得(+)-环橄榄树脂素的新型原料。

本发明的又一目的是提供了从植物原料即Stereospermum personatum制备(+)-环橄榄树脂素的方法。

本发明的另一目的是(+)-环橄榄树脂素作为抗氧化剂的用途。

发明概述

本发明提供了包括(+)-环橄榄树脂素，并用作抗氧化剂的新型组合物。本发明进一步提供了从植物原料即Stereospermum personatum分离(+)-环橄榄树脂素的方法。

本发明发现了以高收率从新原料Stereospermum personatum分离出(+)-环橄榄树脂素。另外，本发明还发现(+)-环橄榄树脂素显示出抗氧化剂性质。

发明详述

由于对多种起源的疾病，如冠心病、癌症、糖尿病、风湿病和发炎症状等具有广谱活性，抗氧化剂化合物最近引起了人们的注意。在上述疾病中，自由基扮演了重要角色。现在人们的注意力被引向从天然原料利用和采集抗氧化剂化合物。

化合物(+)-环橄榄树脂素以纯态形式使用。因此该使用方式可比目前使用的具有相似性质的化合物的混合物更有优势。认识到分离(+)-环橄榄树脂素非常经济也是很重要的。

因此，本发明提供了一种有用的原料，Stereospermum Personatum，其含有以纯态分离出的并且是有效的抗氧化分子的抗氧化剂成分(+)-环橄榄树脂素。将(+)-环橄榄树脂素与现存的药学上可接受的/治疗学上可接受的抗氧化剂丙丁酚和α-生育酚相比较，发现(+)-环橄榄树脂素优于上述参考药物并且可与药学上可接受的/治疗学上可接受的添加剂共同使用。

在本发明的一种实施方式中，(+)-环橄榄树脂素在低于上述参考药物的量时是有效的。

本发明的一种实施方式涉及用作抗氧化剂的药物组合物，所述组合物包括有效量的(+)-环橄榄树脂素，其与药学可接受的添加剂组合或联合。

在本发明的另一实施方式中，药学上可接受的添加剂是以不影响或干扰(+)-环橄榄树脂素的有效性的方式加以选择。

在本发明的另一实施方式中，添加剂选自营养物如碳水化合物、糖、蛋白质、脂肪和药学上可接受的载体。

在本发明的一种实施方式中，(+)-环橄榄树脂素与添加剂的比例在0.1∶10-3∶10的范围，优选0.4∶10-2∶10的范围。

在本发明的另一种实施方式中，(+)-环橄榄树脂素的给药量在300mg-380mg每剂，一天至少两次。

在本发明的另一种实施方式中，组合物以片剂、胶囊、糖浆或粉末形式通过口服途径给药。

本发明的另一种实施方式涉及从植物Stereospermum personatum分离(+)-环橄榄树脂素的方法，所述方法包括下列步骤：

a)用己烷提取Stereospermum personatum的干燥木粉末；

b)用氯仿进一步提取步骤a)的残余物；

c)在真空下浓缩步骤b)的氯仿溶液；

d)在硅胶(60-120目)上吸附深棕色提取物，并装载于硅胶(60-120目)柱上(直径4cm至高度100cm)；

e)用氯仿甲醇梯度洗脱该硅胶柱；和

f)用溶于氯仿的5％甲醇收集洗脱的馏分，浓缩得到纯的(+)-环橄榄树脂素。

在本发明的另一种实施方式中，使用的溶剂选自己烷、氯仿和甲醇。

在本发明的另一种实施方式中，得到的(+)-环橄榄树脂素的收率约是干燥植物原料的0.061％。

另一种实施方式涉及(+)-环橄榄树脂素作为动物和人类的抗氧化剂或自由基清除剂的用途。

本发明的另一种实施方式涉及(+)-环橄榄树脂素在制备作为抗氧化剂的组合物中的用途。

在本发明的另一种实施方式中，(+)-环橄榄树脂素通过口服给药。

本发明的另一种实施方式涉及进行自由基清除的治疗方法，包括对需要的主体以有效量的(+)-环橄榄树脂素给药，优选地，(+)-环橄榄树脂素的给药剂量范围为300mg-380mg/剂，一天两次。

Stereospermum personatum是(+)-环橄榄树脂素的新原料，(+)-环橄榄树脂素在这种植物中的以高收率存在使本发明更加重要。从不同植物获得(+)-环橄榄树脂素的收率比较见表.2

植物名称(+)-环橄榄树脂素的收率％参考文献油橄榄(Olea europaea)杜仲(Eucommia ulmoides)Stereospermum kunthianum Stereospermum peronatum  0.00085  0.001   0.001  0.061Chem Pharm Bull.1984，32，2730Chem Pharm.Bull.1986，34，523Plant.Med.1986本发明

本发明包括从新植物原料中分离作为氧化剂成分的(+)-环橄榄树脂素，并识别了(+)-环橄榄树脂素与具有医学价值的抗氧化药物分子相比的自由基清除特性。

附图简述

图1显示了从Stereospermum personatum制得的(+)-环橄榄树脂素和参考化合物的抗氧化(抗自由基，DPPH)活性

图2是化合物(+)-环橄榄树脂素的分子结构。

在以下实施例中进一步描述本发明，该实施例以说明的方式给出而非用于限制本发明。

实施例1

实验方案：上述木聚素的分离方法

将Stereospermum personatum(3Kg)的干燥木粉末装载到Soxhlet装置上。第一次用己烷提取该粉末。用氯仿进一步提取己烷提取物的残余物。在真空下浓缩己烷溶液。在硅胶上(60-120目)吸附深棕色提取物(22g)，将其装载在硅胶(60-120目)柱上(直径4cm至高度100cm)。

用氯仿甲醇梯度洗脱该硅胶柱。选择氯仿甲醇梯以得到特定馏分，并因此而得到希望的化合物。在本实施例中，分别收集和浓缩用溶于氯仿的5％甲醇洗脱的馏分。

用硅胶柱(＞200目，直径2.5cm，长度50cm)并采用氯仿甲醇梯度进一步纯化上述馏分，从溶于氯仿的5％甲醇中的洗脱物得到纯的(+)-环橄榄树脂素(2.2g)。以下给出(+)-环橄榄树脂素的光谱化学数据。

(+)-环橄榄树脂素

1.分子式：C₂₀H₂₄O₇

2.¹HNMR：δ1.9(1H，d)，2.45(1H，d)，3.15(1H，d)，3.38和3.4(2H，d)，3.65(1H，d)，3.75(6H，s)，3.78(1H，)，3.90(1H，d)，6.05(1H，s)，6.55-6.70(4H，m)，8.49和8.75(2x Ar-OH).

3.¹³CNMR：38.89(C-7’)，43.16(C-7’)，45.73(C-8)，55.64(OCH₃)，55.78(OCH₃)，59.09(C-9’)，68.06(C-9)，73.03(C-8’)，112.46(C-2’)，113.57(C-2)，115.47(C-5’)，116.22(C-5)，121.88(C-6)，125.22(C-6’)，132.16(C-1)，136.98(C-1’)，143.96(C-4’)，144.78(C-4)，145.77(C-3’)，147.43(C-3).

4.IR：3393cm^-1

5.MS：376(M⁺)

实施例2

体外自由基清除抗氧化能力的评估

测试化合物的对于清除最广泛使用的1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH)的抗氧化活性。采用被广泛接受和测试的抗氧化剂即丙丁酚和α-生育酚作为参考化合物。制备浓度为1mg/ml溶于DMSO的化合物，然后，用DMSO稀释至较低浓度。将200μl测试化合物在tris-HCl缓冲液(pH7.4)再生为1ml。用溶于乙醇的相等体积的500μM DPPH自由基与其反应。在黑暗中孵育45分钟，记录在517nm的吸光度。相应地计算以百分数表示的自由基清除活性。所有的读数均取自三重测定(triplicate)。结果表明(图1/表3)本发明化合物具有强大的抗氧化/自由基清除特性。

                         表3

化合物的50％自由基清除浓度

抗氧化剂浓度(μg/ml)CHCl₃提取物40.09(+)-环橄榄树脂素21.74丙丁酚28.71DL α-生育酚47.80

权利要求书

(按照条约第19条的修改)

PCT19条(1)修改声明

本发明涉及从一种新型原料Stereospermum personatum分离(+)-环橄榄树脂素的方法，以及含有(+)-环橄榄树脂素和任选的添加剂药物组合物，其用作抗氧化剂。

1.用作抗氧化剂的药物组合物，包括有效量的(+)-环橄榄树脂素和药学上可接受的添加剂。

2.权利要求1的组合物，其中所述添加剂以不影响或干扰(+)-环橄榄树脂素有效性的方式加以选择。

3.权利要求1的组合物，其中所述添加剂是营养物

4.权利要求3的组合物，其中所述营养物可以是碳水化合物。

5.权利要求3的组合物，其中所述营养物可以是糖。

6.权利要求3的组合物，其中所述营养物可以是蛋白质。

7.权利要求3的组合物，其中所述营养物可以是脂肪。

8.权利要求3的组合物，其中所述营养物可以是适宜的药学上可接受的载体。

9.权利要求1的药物组合物，其中，(+)-环橄榄树脂素与已知氧化剂相比，在剂量较低时作为抗氧化剂/自由基清除剂是有效的。

10.权利要求1的药物组合物，其中(+)-环橄榄树脂素的给药量为300mg-380mg/剂，至少一天两次。

11.权利要求1的药物组合物，其中所述组合物是以片剂、胶囊、糖浆或粉末的形式给药。

12.从植物Stereospermum personatum分离权利要求1的组合物中的活性组分(+)-环橄榄树脂素的方法，所述方法包括下列步骤：

a)用己烷提取Stereospermum personatum的干燥木粉末；

b)用氯仿进一步提取步骤a)的残余物；

c)在真空下浓缩步骤b)的氯仿溶液，得到深棕色的提取物；

d)在硅胶(60-120目)上吸附深棕色提取物，并装载于硅胶(60-120目)柱上；

e)用氯仿-甲醇梯度混合物洗脱步骤d)的产物；和

f)用溶于氯仿的5％甲醇收集洗脱的馏分，浓缩得到纯的(+)-环橄榄树脂素。

13.权利要求12的方法，其中使用的溶剂是己烷、氯仿和/或甲醇。

14.权利要求12的方法，其中(+)-环橄榄树脂素的收率约为植物干燥原料的0.061％。

15.权利要求12的方法，其中(+)-环橄榄树脂素是从一种新原料Stereospermum personatum得到。

16.(+)-环橄榄树脂素作为动物和哺乳动物的氧化剂/自由基清除剂的用途。

17.(+)-环橄榄树脂素在制备用作抗氧化剂的组合物中的用途。

18.权利要求17的用途，其中包括(+)-环橄榄树脂素的所述组合物通过口服给药。

19.权利要求18的用途，其中所述组合物包括营养物这一添加剂。

20.权利要求19的用途，其中所述营养物可以是碳水化合物。

21.权利要求19的用途，其中所述营养物可以是糖。

22.权利要求19的用途，其中所述营养物可以是蛋白质。

23.权利要求19的用途，其中所述营养物可以是脂肪。

24.权利要求19的用途，其中所述营养物可以是药学上可接受的载体。

25.权利要求17的用途，其中包括(+)-环橄榄树脂素的所述组合物是以300mg-380mg/剂的范围给药，至少一天两次。