旋光异构体分离用填充剂及使用该剂的旋光异构体分离法

摘要

本发明提供了使用模拟移动床式色谱的旋光异构体的分离方法，其特征是将旋光性的高分子化合物以特定的比例载持在载体上构成旋光异构体分离用填充剂，并且在特定保留体积比的条件下进行色谱分取。可以有效且高效地将旋光异构体混合物进行旋光拆分。

说明书

技术领域

本发明涉及旋光异构体分离用填充剂及旋光异构体的分离方法。本发明更详细地是涉及适合旋光异构体混合物分离用填充剂及使用该旋光异构体分离用填充剂的模拟移动床式色谱旋光异构体的分离方法。

背景技术

以往，从含有2种以上的成份的异构体混合溶液等的原料中分离必要成份的工业方法是采用色谱分离法，特别是液相色谱法。

该方法是使用离子交换树脂、硅藻土、硅胶等吸附剂作为填充剂，利用含在原料混合物中的各成份间对上述吸附剂的吸附性能的差别进行分离的方法。该方法中作为洗脱液是使用水、或者有机溶剂或这些的混合物，而且通过浓缩含有目的成份的洗脱液，可以得到高纯度的目的成份。

作为液相色谱法已知有分批式及模拟流动床式。

分批式的液相色谱法，是从分析水平的色谱分离的结果，通过相似形的放大进行色谱分取，所以具有可在短的时间得到目的成份的优点。可是所使用的洗脱液的量多，吸附剂的使用效率低，其生产能力下降，所以使用分批式的液相色谱法的色谱分取一般是高成本的。另一方面，模拟移动床式的色谱分离法，所使用的洗脱液量与分批法比较是少的，以及可以连续地对各成份进行分离，所以与分批法比较分取生产能力高，对工业规模的异构体的分离是极其有效的方法。

旋光异构体混合物的旋光拆分中所使用的模拟流动床式色谱分离法的具体例，可以举出日本第211021/1992号及第239767/1994号专利公开公报中所描述的那样，使用在作为载体的硅胶上载有多糖衍生物的旋光拆分用填充剂的方法。

另一方面，使用模拟移动床法的旋光拆分，也在研究使其运转成本尽量下降。例如在美国第5,518,625号公报所公开的模拟移动床法的旋光拆分，试验在0.1＜k’＜1.0的条件下运转来降低成本。此外，k’表示保留体积比，但是其节约的效果小，难以说是根本的解决方法。

由此，强烈希望有更高生产能力的优良旋光异构体分离用填充剂，及旋光异构体的分离方法。

本发明是基于上述的事实而做出的。即本发明的目的在于提供旋光异构体的分离方法，该方法是使用了生产能力更高的、而且适合于旋光异构体的分离的旋光异构体分离用填充剂的模拟移动床式色谱分离法，进而具有高分取生产能力。

发明的公开

本发明者为了解决上述的课题进行了精心研究的结果，发现了将载体上载有旋光性的高分子化合物的旋光异构体分离用填充剂的旋光性的高分子化合物的载有量，相对于例如上述的美国第5,518,625号公报所公开的以往市售的填充剂的多糖衍生物载有量是10～20质量％，作成至少23质量％，进而，将上述填充剂用在流动床式色谱分离法，进行旋光拆分时将保留体积比k1’和/或k2’的值作成至少是1，这样可以提高旋光异构体混合物的旋光拆分的生产能力，从而完成了本发明。

也就是，为了解决上述课题的本发明的方法是在将旋光性的高分子化合物载持在载体上构成的旋光异构体分离用填充剂中，旋光性的高分子化合物的载有量对于上述的旋光异构体分离用填充剂的质量至少是23质量％的旋光异构体分离用填充剂。

本发明所涉及的旋光异构体分离用填充剂的合适方式是旋光性高分子化合物是多糖衍生物。

本发明所涉及的旋光异构体分离用填充剂的合适方式是多糖衍生物是从纤维素的酯及氨基甲酸酯衍生物、和直链淀粉的酯及氨基甲酸酯衍生物中选择出的至少一种。

本发明所涉及的旋光异构体分离用填充剂的合适方式是上述载体的平均粒径是5～70μm。

本发明所涉及的旋光异构体分离用填充剂的合适方式是该旋光异构体分离用填充剂是使用在模拟移动床式色谱分离法的旋光拆分方法中。

本发明的其他方法是，在使用将旋光性高分子化合物载持在载体上构成的旋光异构体分离用填充剂的模拟移动床式色谱分离法的旋光拆分中，旋光活性的上述高分子化合物载有量，对于上述旋光异构体分离用填充剂的质量至少使用23质量％的旋光异构体分离用填充剂，进行旋光拆分的模拟移动床式色谱分离的旋光异构体的分离方法。

上述模拟移动床式色谱分离的旋光异构体的分离方法的合适的方式是用下式(1)及(2)计算出的保留体积比k1’和/或k2’至少是1的条件下进行旋光拆分的。

k1’＝(v1-v0)/v0---(1)

k2’＝(v2-v0)/v0---(2)

(其中，v1及v2分别表示作为溶质成份的各旋光异构体的保留体积，v0表示死体积。)

上述模拟移动床式色谱分离的旋光异构体的分离方法的合适的方式是，其中上述旋光性高分子化合物是多糖衍生物。

使用上述模拟移动床式色谱分离的旋光异构体的分离方法的合适的方式是，其中多糖衍生物是从纤维素的酯及氨基甲酸酯、和直链淀粉的酯及氨基甲酸酯衍生物中选择出的至少一种。

使用上述模拟移动床式色谱分离的旋光异构体的分离方法的合适的方式是，其中上述载体的平均粒径是5～70μm。

附图的简单说明

图1是表示实施本发明的模拟移动床式色谱分离装置的一例的说明图。图1中，1～12是单位柱、13是洗脱液供给管线、14是排出提取液的管线、15是旋光异构体混合液供给管线、16是精制液排出管线、17是在循环管线、18是循环泵。

图2是表示实施本发明的模拟移动床式色谱分离装置的其他例的说明图。

图3是实施例1得到的色谱图。

图4是实施例2得到的色谱图。

图5是比较例1得到的色谱图。

图6是实施例3得到的色谱图。

图7是比较例2得到的色谱图。

实施本发明的最佳方式

以下，详细地说明本发明的实施方式

本发明中的旋光异构体分离用填充剂是，旋光性的高分子化合物的载有量对于旋光异构体分离用填充剂的质量至少是23质量％。上述载有量低于23质量％时，由于负载量少，分离旋光异构体的效率下降，工业上不实用。考虑到生产能力时，载体上的旋光性高分子化合物的载有量优选的是对于旋光异构体分离用填充剂的质量至少是27质量％。虽然没有载有量的上限，但是载有量超过60质量％时，由于层数的减少会引起分离效率的下降，所以是不理想的。这里所说的载有量是指对于旋光异构体分离用填充剂的质量的旋光性的高分子化合物的质量的比例。

作为旋光性高分子化合物，可以举出没有旋光性取代基的(甲基)丙烯酸酯或者(甲基)丙烯酰胺、具有旋光性取代基的(甲基)丙烯酸酯或者(甲基)丙烯酰胺、苯乙烯、乙炔等的聚合物或者共聚物、多糖及其聚合物、肽、蛋白质等。优选的是对于分离对象化合物具有不同的识别能力的高分子化合物，特别是已知的具有不同的识别能力的高分子化合物的(甲基)丙烯酸酯或者(甲基)丙烯酰胺的聚合物或共聚物、多糖及其聚合物、蛋白质更为优选。在本说明书中，所说的(甲基)丙烯酸酯是指丙烯酸酯或者甲基丙烯酸酯、(甲基)丙烯酰胺是指丙烯酰胺或者甲基丙烯酰胺。这些旋光性高分子化合物中优选的是在侧链上具有取代基的(甲基)丙烯酸酯或者(甲基)丙烯酰胺的聚合物或共聚物、多糖及其衍生物，特别优选的是多糖衍生物。作为多糖可以是合成多糖、天然多糖、及天然物变成的多糖中的任何一种，只要具有旋光性，就没有特别的限制。

作为该多糖的例子可以举出α-1，4-葡聚糖(直链淀粉、支链淀粉)、β-1，4-葡聚糖(纤维素)、α-1，6-葡聚糖(右旋糖酐)、β-1，4-葡聚糖(裂榄素ブスッラン)、α-1，3-葡聚糖、β-1，3-葡聚糖(凝乳糖、裂裥糖等)、β-1，2-葡聚糖(CrawnGaII多糖)、β-1，4-半乳聚糖、α-1，6-多缩甘露糖、β-1，4-多缩甘露糖、β-1，2-果聚糖(菊糖)、β-2，6-果聚糖(左旋糖)、β-1，4-聚木糖、β-1，3-聚木糖、β-1，4-N-乙酰基壳多糖(壳多糖)、葡聚多糖、琼脂、藻酸、环糊精等。

在这些之中，优选的是可容易得到高纯度的多糖的纤维素、直链淀粉、β-1，4-多缩甘露糖、菊糖、凝乳糖等，特别优选的是纤维素、直链淀粉等。

这些多糖的数均聚合度(含在1个分子中的吡喃糖或吡喃糖环的平均数)通常至少是5、优选的至少是10。另外，虽然没有特别限制，但在1,000以下的聚合度，从容易使用的方面上看是优选的，特别优选的是500以下。进而说，多糖的适宜的数平均聚合度是5～1000、特别优选的是10～1000、更优选的是10～500。

作为可适宜使用的多糖衍生物，可举出多糖酯衍生物及多糖氨基甲酸酯衍生物。

在这些中，作为特别优选的多糖酯衍生物或多糖氨基甲酸酯衍生物，可举出将多糖所具有的羟基或氨基上的氢原子的一部分或全部用下述式(1)式(2)、式(3)及式(4)中的任何一个表示的原子团的至少一种进行取代的化合物。

其中，式中，R是也可含有杂原子的芳香族烃基，可以是无取代，另外，也可被下述的基取代，即从碳数1～12的烷基、碳数1～12的烷氧基、碳数1～12的烷硫基、氰基、卤原子、碳数1～8的酰基、碳数1～8的烷氧羰基、硝基、氨基及碳数1～8的烷基氨基组成群选择出的至少一种的基。这些中特别适宜的芳香族烃基，可举出苯基、萘基、菲基、蒽基、茚基、呋喃基、亚硫酰基、吡咯基、苯并呋喃基、苯亚硫酰基、吲哚基、吡啶基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基等。这些中优选的是苯基、萘基、吡啶基等，特别优选的是卤化苯基及烷基苯基。

X是碳数1～4的烃基，也可含有双键或三键。作为X可举出亚甲基、甲基亚甲基、乙烯基、亚乙基、亚乙烯基、亚乙炔基、1，2-或1，3-丙烯基、1，1-或2，2-次丙烯基等。

本发明中，作为多糖衍生物可适宜采用的多糖的氨基甲酸酯衍生物，可通过用下述式5或6表示的异氰酸酯和多糖反应、而多糖的酯衍生物可通过用下述式7或8表示的酰氯和多糖反应，可以任何一种公知的方法进行制造。

     R-N＝C＝O    ------(5)

     R-X-N＝C＝O  ------(6)

其中，式中，R及X表示与上述相同的定义。

在本发明中，多糖衍生物上的取代基的导入率，通常是10％～100％、优选的是30％～100％、最优选的是80％～100％。若上述导入率不足10％，由于几乎不显示旋光拆分能力，所以是不理想的。另外，若上述导入率不足30％时，根据要进行旋光拆分的旋光异构体混合物的种类、浓度，有时分离不充分，所以是不理想的。若上述导入率超过80％，由于可得到旋光异构体的分离能特别优良的粒子，所以是理想的。上述取代基的导入率。例如可通过元素分析检测取代基导入前后的碳、氢及氮的变化而求出。

作为本发明的载体，可举出多孔质有机载体及多孔质无机载体，优选的是多孔质无机载体。作为多孔质有机载体适当的是由聚苯乙烯、聚丙烯酰胺及聚丙烯酸酯等组成群选择出的高分子物质，作为适当的多孔质无机载体是氧化硅、氧化铝、氧化镁、玻璃、高岭土、氧化钛、硅酸盐、及羟基磷灰石等。特别优选的载体是硅胶。硅胶的平均粒径是5～70μm，优选的是10～50μm。这些平均粒径小于5μm时运转压力上升，若大于70μm时则生产能力下降，是不理想的。氧化硅的平均粒径是10A～100μm，优选的是50A～50,000A。为了排出表面残留的硅烷醇的影响提高与旋光性高分子化合物的亲和性，希望进行表面处理，但是完全不进行表面处理也是没有问题的。

作为适宜的表面处理方法，可以举出使用有机硅烷化合物的硅烷化处理、用等离子聚合的表面处理法。

本发明所涉及的旋光异构体分离用填充剂是通过将旋光活性高分子化合物，例如多糖衍生物直接与载体化学结合的方法，以及将旋光性高分子化合物，例如多糖衍生物溶液涂敷在载体上后蒸馏出溶剂的方法中任何一种方法而得到的。此时，溶解旋光性高分子化合物，例如多糖衍生物的溶剂，只要是能够溶解旋光性高分子化合物，例如多糖衍生物的话，可以使用通常使用的任何一种有机溶剂。

进而，通过载体和涂敷了的旋光性高分子化合物，例如多糖衍生物的化学结合、载体上的旋光性高分子化合物，例如多糖衍生物之间的化学结合、使用第3成份的化学结合及对载体上的旋光性高分子化合物，例如多糖衍生物的光照射、γ线等的放射线照射、微波等的电磁波照射的反应、通过自由基等的自由基发生反应等的进一步化学结合，可以将旋光性高分子化合物，例如多糖衍生物的载体上的一层更坚固化。

使用模拟移动床式色谱分离的本发明的分离方法适合于旋光异构体混合物的分离。这里，作为旋光异构体混合物，可以举出例如7-[2-环丙基-4-(4-氟苯基)喹啉-3-基]-3，5-二羟基-6-庚烯酸酯，除此外，例如二山梨酰胺(Disopyramide)、华法灵(Warfarin)等的各种旋光异构体混合物也可以作为本发明的原料使用。使用该模拟移动床式色谱分离的旋光异构体的分离方法，根据作为分离对象的化合物，可以采用将有机溶剂作为移动相的顺相系，以及将水溶性溶剂作为移动相的逆相系的两种。进而，为了分离旋光异构体混合物也可以使用将超临界流体作为移动相的超临界流体色谱分离。

以下，表示了使用模拟移动床式色谱分离的本发明的分离方法的一个例子，但是使用模拟移动床式色谱分离的本发明的分离方法不仅限于此，例如也可以象WO00/258855号公报所公开的那样，为了运转最佳化，任意地设定周期时间等的条件。

使用模拟移动床式色谱分离的旋光异构体的分离方法的吸附分离，作为基本操作可以连续地循环实施以下所表示的吸附操作、浓缩操作、脱吸附操作及脱离回收操作。

(1)吸附操作

旋光异构体混合物与填充剂接触，吸附容易吸附的旋光异构体(强吸附成份)，难以吸附的其他旋光异构体(弱吸附成份)作为残液流与洗脱液一起被回收。

(2)浓缩操作

吸附了强吸附成份的填充剂，与后述的提取液的一部分接触，将残存在填充剂上的弱吸附成份去除，强吸附成份被浓缩。

(3)脱吸附操作

含有浓缩了的强吸附成份的填充剂与脱离液接触，从填充剂去除强吸附成份，随着脱离液作为提取液流而回收。

(4)脱离液回收操作

实质上只吸附了脱离液的填充剂与残留液流的一部分接触，含在填充剂的脱离液的一部分作为脱离液回收流被回收。

以下，按照附图说明本发明的方法。图1是表示本发明使用的模拟移动床式色谱装置的一个例子的模式图，图2是表示本发明使用的模拟移动床式色谱装置的另外一个例子的模式图。

在图1中将作为模拟移动床式色谱装置的主要部分的填充床的内部区分成12个单元填充床，在图2中区分成8个单元填充床，但这些数和大小是根据旋光异构体混合物含有液的组成、流量、压损、装置的大小等要因而决定的，没有特别限制。

在图1中1～12是装有填充剂的室(吸附室)，是相互连接着的。13是脱离液供给管线、14是提取液排出管线、15是旋光异构体混合液供给管线、16是残留液排出管线、17是循环管线、18是泵。

在由图1所示的吸附室1～12和各管线13～16的配置的状态中，分别进行吸附室1～3的脱吸附操作、吸附室4～6的浓缩操作、吸附室7～9的吸附操作、吸附室10～12的洗脱液回收操作。对于这样的模拟移动床，每一定时间间隔通过阀的操作，将各供给液及排出管线分别在液流方向向着吸附室1移动。因此，在以下的吸附室的配置状态，分别进行吸附室2～4的脱吸附操作、吸附室5～7的浓缩操作、吸附室8～10的吸附操作、吸附室11～1的脱离液回收操作。通过依次进行这样的操作可连续地高效地进行旋光异构体的混合物的分离处理。

另外，在由图2所示的吸附室1～8和各管线13～16的配置的状态中，分别进行吸附室1的脱离液回收操作、吸附室2～5的吸附操作、吸附室6～7的浓缩操作、吸附室8的脱吸附操作。对于这样的模拟移动床，每一定时间间隔通过阀的操作，将各供给液及排出管线分别在液流方向向着吸附室1移动。因此，在以下的吸附室的配置状态，分别进行吸附室2的脱吸附操作、吸附室3～6的浓缩操作、吸附室7～8的吸附操作、吸附室1的脱离液回收操作。通过依次进行这样的操作可连续地高效地进行旋光异构体的混合物的分离处理。

在使用模拟移动床色谱分离的本发明的分离方法中，优选的是在保留体积比k至少是1(换言之，是大于1)条件下进行色谱分取。在此所说的k1’及k2’是用下式算出的保留体积比。

k1’＝(v1-v0)/v0(1)

k2’＝(v2-v0)/v0(2)

此时，v1及v2分别表示作为洗脱成份的各旋光异构体的保存体积、v0表示死体积。

所有的保存体积比k1’及k2’小于1时，生产能力下降，不理想。优选的是k1’及k2’中任何一个至少是1，保存体积比k1’及k2’均至少是1的，从提高生产能力看是理想的。

实施例

(合成例1)

制作由载有量24质量％的纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)载持填充剂构成的HPLC柱

(1)氧化硅表面处理

用公知的方法使多孔质硅胶(平均粒径20μm)与3-氨基丙基三乙氧基硅烷反应，进行氨基丙基硅烷处理(APS处理)，将得到的APS处理硅胶与3，5-二甲基苯基异氰酸酯反应，得到施以氨基甲酸酯处理了的硅胶。对该氨基甲酸酯处理了的硅胶进行元素分析的结果得到的碳含有率(C％)表示在表1中。

(2)纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)的合成

在氮气氛下将纤维素100g在干燥吡啶3.8L中，4-氯苯基异氰酸酯714.1g(2.5当量)和吡啶回流的温度下进行60小时的加热搅拌后，注入到2-丙醇40L内。析出的固体用玻璃过滤器过滤取出，用2-丙醇洗涤数次后，进行真空干燥(80℃、15小时)。其结果，得到略带黄色的白色固体287g(75％)。对此纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)的元素分析结果，其碳含有率(C％)表示在表1中。

(3)载有量24质量％的纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)硅胶载持填充剂的制作

将上述(2)得到的纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)硅胶120g溶解在丙酮600ml中，将此聚合物涂敷液的半量均匀地涂敷在(1)的硅胶380g上。涂敷后在40℃及40Kpa的条件下减压蒸馏出丙酮45分钟。进而，将聚合物涂敷液的残余半量均匀地涂敷在硅胶上，同样的条件下进行减压蒸馏得到具有24质量％的载有量的纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)的载持型填充剂。进行该填充剂的分析，其结果从得到的碳含有率(C％)及碳的含有量计算出来的纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)对填充剂的载有量表示在表1中。

(4)从填充剂制作HPLC用填充柱

将上述(3)制作的载有纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)填充剂用浆液填充法填充到长度25cm及内径0.46cm的不锈钢制的柱内，制作旋光异构体用分离柱。

(合成例2)

制作由载有量30质量％的纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)载持填充剂构成的HPLC柱

(1)硅胶表面处理

用与合成例1相同的方法进行表面处理。

(2)纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)的合成

用与上述合成例1的(2)相同的方法合成纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)。

(3)载有量30质量％的纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)硅胶载持填充剂的制作

将上述(2)得到的纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)硅胶150g溶解在丙酮800ml中，将此聚合物涂敷液均匀地涂敷在(1)的硅胶350g上。涂敷后在40℃及40Kpa的条件下减压蒸馏出丙酮30分钟。同样的条件下进行减压蒸馏得到具有30质量％的载有量的纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)的载持型填充剂。进行该填充剂的元素分析，其结果从得到的碳含有率(C％)及碳的含有量计算出来的纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)对填充剂的载有量表示在表1中。

(4)从填充剂制作HPLC用填充柱

将上述(3)制作的载有纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)填充剂用浆液填充法填充到长度25cm及内径0.46cm的不锈钢制的柱内，制作旋光异构体用分离柱。

(合成例3)

制作由载有量20质量％的纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)载持填充剂构成的HPLC柱

(1)硅胶表面处理

用与合成例1的(1)相同的方法进行表面处理。

(2)纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)的合成

用与上述合成例1的(2)相同的方法合成纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)。

(3)载有量20质量％的纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)硅胶载持填充剂的制作

将上述(2)得到的纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)100g溶解在丙酮600ml中，将此聚合物涂敷液均匀地涂敷在(1)的硅胶400g上。涂敷后在40℃及40Kpa的条件下减压蒸馏出丙酮30分钟。得到具有20质量％载有量的纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)的载持型填充剂。进行该填充剂的元素分析，其结果从得到的碳含有率(C％)及碳的含有量计算出来纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)对填充剂的载有量表示在表1中。

(4)从填充剂制作HPLC用填充柱

将上述(3)制作的载有纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)填充剂用浆液填充法填充到长度25cm及内径0.46cm的不锈钢制的柱内，制作旋光异构体用分离柱。

                                    表1

  C％    计算的载有量(％)  合成例1①氨基甲酸酯化硅胶  1.10    -  合成例1②纤维素三(4氯苯基氨基甲酸酯)  51.38    -  合成例1③纤维素三(4氯苯基氨基甲酸酯)载持型填充剂  13.21    23.9  合成例2③纤维素三(4氯苯基氨基甲酸酯)载持型填充剂  15.79    29.2  合成例3③纤维素三(4氯苯基氨基甲酸酯)载持型填充剂  11.10    19.9

此外，从元素分析求出的碳含有量(C％)计算载有量的计算式如下。

{[C％(纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)载持型填充剂)-C％(氨基甲酸酯化硅胶)]/[C％(纤维素三(4-氯苯基氨基甲酸酯)-C％(氨基甲酸酯化硅胶))]}×100

(实施例1)

使用合成例1制作的柱及填充剂的保留体积比的测定和模拟移动床式色谱分离

使用液相色谱装置，用合成例1制作的HPLC用柱进行下式(9)表示的Disopyramide的分析，分析条件及分析结果得到的保留体积比记载在表2中。图3表示了色谱图。

将合成例(1)制作的填充剂用浆液填充法填充到8根的φ1.0cm×L10cm的不锈钢制的柱内，安装在小型模拟移动床式分取装置上，进行分取。操作条件如以下。小型模拟移动床式分取装置的运转结果，得到的前成份(Raffinate)的旋光纯度、后成份(Extract)的旋光纯度及前成份的生产能力记载在表3中。

移动相：正己烷/2-丙醇/二乙基胺＝25/75/0.1(v/v)

柱温度：40℃

加料(Feed)流速：1.79ml/min

前成份(Raffinate)流速：3.12ml/min

后成份(Extract)流速：9.63ml/min

洗脱液(Eluent)流速：10.96ml/min

分阶时间(Step time)：2.5min

加料(Feed)浓度：50(mg/ml-移动相)

区域-1流速：13.97ml/min

区域-II流速：4.34ml/min

区域-1II流速：6.13ml/min

区域-1V流速：3.00ml/min

(实施例2)

使用合成例2制作的柱及填充剂的保留体积比的测定和模拟移动床式色谱分离

使用液相色谱装置，用合成例2制作的HPLC用柱进行上式(9)表示的化合物的分析，分析条件及分析结果得到的保留体积比记载在表2中。图4表示了色谱图。

将合成例(2)制作的填充剂用浆液填充法填充到8根的φ1.0cm×L10cm的不锈钢制的柱内，安装在小型模拟移动床式分取装置上，进行分取。操作条件如以下。小型模拟移动床式分取装置的运转结果，得到的前成份(Raffinate)的旋光纯度、后成份(Extract)的旋光纯度及前成份的生产能力记载在表3中。

移动相：正己烷/2-丙醇/二乙基胺＝25/75/0.1(v/v)

柱温度：40℃

加料(Feed)流速：1.83ml/min

前成份(Raffinate)流速：4.24ml/min

后成份(Extract)流速：14.55ml/min

洗脱液(Eluent)流速：16.96ml/min

分阶时间(Step time)：2.5min

加料(Feed)浓度：50(mg/ml-移动相)

区域-1流速：20.44ml/min

区域-II流速：5.89ml/min

区域-1II流速：7.72ml/min

区域-1V流速：3.48ml/min

(比较例1)

使用合成例3制作的柱及填充剂的保留体积比的测定和模拟移动床式色谱分离

使用液相色谱装置，用合成例3制作的HPLC用柱进行上式(9)表示的化合物的分析，分析条件及分析结果得到的保留体积比记载在表2中。图5表示了色谱图。

将合成例(3)制作的填充剂用浆液填充法填充到8根的φ1.0cm×L10cm的不锈钢制的柱内，安装在小型模拟移动床式分取装置上，进行分取。操作条件如以下。小型模拟移动床式分取装置的运转结果，得到的前成份(Raffinate)的旋光纯度、后成份(Extract)的旋光纯度及前成份的生产能力记载在表3中。

移动相：正己烷/2-丙醇/二乙基胺＝25/75/0.1(v/v)

柱温度：40℃

加料(Feed)流速：1.60ml/min

前成份(Raffinate)流速：2.90ml/min

后成份(Extract)流速：7.93ml/min

洗脱液(Eluent)流速：9.22ml/min

分阶时间(Step time)：2.5min

加料(Feed)浓度：50(mg/ml-移动相)

区域-1流速：12.24ml/min

区域-II流速：4.31ml/min

区域-1II流速：5.91ml/min

区域-1V流速：3.02ml/min

                                 表2

柱  载有量(质量％)分析条件k1’，k2’色谱柱实施例1合成例1制作    24    (1)  1.02，2.57  图3实施例2合成例2制作    30    (1)  1.73，15.43  图4比较例1合成例3制作    20    (1)  0.86，2.19  图5

表2中的分析条件

(1)移动相：正己烷/2-丙醇/二乙基胺＝25/75/0.1(v/v/v))、流速：1.0ml/min、温度：40℃、检测：254mm、加入量：1.5mg/ml(移动相)×2.5μl

(2)移动相：2-丙醇＝100/0.1(v/v)、流速：1.0ml/min、温度：40℃、检测：254mm、加入量：1.5mg/ml(移动相)×2.5μl

k1’及k2’是用下式计算出的。

k1’＝(v1-v0)/v0、k2’＝(v2-v0)/v0，

v0是三叔苄基苯的保留体积、v1及v2是作为溶质成份的各旋光异构体的保留体积。

                            表3

   实施例1   实施例2   比较例1           移动相     (1)     (1)     (1)    Raffinate^*1旋光纯度(％ee)    99.5    99.4    99.5    Extract^*2旋光纯度(％ee)    94.7    94.8    94.6          生产能力(kg-rac./kg-CSP/day)    3.42    3.49    3.05

表3中的移动相种类

(1)：正己烷/2-丙醇/二乙基胺＝25/75/0.1(v/v/v)、

(2)：2-丙醇/二乙基胺＝100/0.1(v/v)

^*1：前成份

^*2：后成份

^*3：每1kg填充剂1日可处理的外消旋体质量(kg)

(合成例4)

制作由载有量30质量％的直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)载持填充剂构成的HPLC柱

(1)硅胶表面处理

用与合成例1相同的方法进行，得到氨基甲酸酯表面处理了的硅胶。

(2)直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的合成

在氮气氛下将直链淀粉50g在干燥吡啶3.8L中，3，5-二甲基异氰酸酯340.7g(2.5当量)和吡啶回流的温度下进行60小时的加热搅拌后注入到甲醇40L内。析出的固体用玻璃过滤器过滤取出，用甲醇洗涤数次后，进行真空干燥(80℃、15小时)。其结果，得到略带黄色的白色固体177g(95％)。

(3)载有量30质量％的直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)硅胶载持填充剂的制作

将上述(2)得到的直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)15.0g溶解在醋酸乙酯120ml中，将此聚合物涂敷液均匀地涂敷在硅胶35.0g上。涂敷后，减压蒸馏出醋酸乙酯。得到具有30质量％的载有量的直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的载持型填充剂。进行该填充剂的元素分析，其结果从得到的碳含有率(C％)及碳的含有量计算出直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)对填充剂的载有量表示在表4中。

(4)从填充剂制作HPLC用填充柱

将上述(3)制作的载有直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)填充剂用浆液填充法填充到长度25cm、内径0.46cm的不锈钢制的柱内，制作旋光异构体用分离柱。

(合成例5)

制作由载有量20质量％的直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)载持填充剂构成的HPLC柱

(1)硅胶表面处理

用与合成例1的(1)相同的方法进行表面处理。

(2)直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的合成

用与合成例1的(2)相同的方法进行直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的合成。

(3)载有量20质量％的直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)硅胶载持填充剂的制作

将上述(2)得到的直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)10.0g溶解在醋酸乙酯70ml中，将此聚合物涂敷液均匀地涂敷在上述(1)硅胶40.0g上。涂敷后，减压蒸馏出醋酸乙酯。得到具有20质量％的载有量的直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的载持型填充剂。

(4)从填充剂制作HPLC用填充柱

将上述(3)制作的载有直链淀粉三(3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯)填充剂用浆液填充法填充到长度25cm、内径0.46cm的不锈钢制的柱内，制作旋光异构体用分离柱。

(实施例3)

使用合成例4制作的柱及填充剂的保留体积比的测定和模拟移动床式色谱分离

使用液相色谱装置，用合成例1制作的HPLC用柱进行下式Warfarin(II)表示的化合物的分析，分析条件及分析结果得到的保留体积比记载在表5中。

将合成例(4)制作的填充剂用浆液填充法填充到8根的φ1.0cm×L10cm的不锈钢制的柱内，安装在小型模拟移动床式分取装置上，进行分取。操作条件如以下。小型模拟移动床式分取装置的运转结果，得到的前成份(Raffinate)的旋光纯度、后成份(Extract)的旋光纯度及前成份的生产能力记载在表5中。

移动相：乙醇/醋酸＝100/0.1(v/v)

柱温度：25℃

加料(Feed)流速：3.15ml/min

前成份(Raffinate)流速：5.20ml/min

后成份(Extract)流速：19.20ml/min

洗脱液(Eluent)流速：21.25ml/min

分阶时间(Step time)：2.5min

加料(Feed)浓度：20(mg/ml-移动相)

区域-1流速：25.79ml/min

区域-II流速：6.59ml/min

区域-1II流速：9.74ml/min

区域-1V流速：4.54ml/min

(比较例2)

使用合成例5制作的柱及填充剂的保留体积比的测定和模拟移动床式色谱分离

使用液相色谱装置，用合成例2制作的HPLC用柱进行Warfarin(II)表示的化合物的分析，分析条件及分析结果得到的保留体积比记载在表4中。

将合成例(5)制作的填充剂用浆液填充法填充到8根的φ1.0cm×L10cm的不锈钢制的柱内，安装在小型模拟移动床式分取装置上，进行分取。操作条件如以下。小型模拟移动床式分取装置的运转结果，得到的前成份(Raffinate)的旋光纯度、后成份(Extract)的旋光纯度及前成份的生产能力记载在表5中。

移动相：乙醇/醋酸＝100/0.1(v/v)

柱温度：25℃

加料(Feed)流速：2.14ml/min

前成份(Raffinate)流速：4.14ml/min

后成份(Extract)流速：15.37ml/min

洗脱液(Eluent)流速：17.34ml/min

分阶时间(Step time)：2.5min

加料(Feed)浓度：50(mg/ml-移动相)

区域-1流速：21.76ml/min

区域-II流速：6.39ml/min

区域-1II流速：8.54ml/min

区域-1V流速：4.42ml/min

                              表4

柱  载有量(质量％)分析条件k1’，k2’色谱柱  实施例3  合成例1制作    30    (1)  0.43、1.07   图6  比较例2  合成例5制作    20    (1)  0.34、0.74   图7

表4中的分析条件

(1)移动相：乙醇/醋酸＝100/0.1(v/v/v)、流速：3.5ml/min、温度：25℃、检测：254nm、加入量：5.0mg/ml(移动相)×2.0μl

k1’及k2’与前述定义相同。

                      表5

   实施例3   比较例2           移动相     (1)     (1)   Raffinate^*1旋光纯度(％ee)    99.7    99.6    Extract^*2旋光纯度(％ee)    94.8    94.3          生产能力(kg-rac./kg-CSP/day)2.401.64

移动相(1)：乙醇/醋酸＝100/0.1(v/v/v)

^*1：前成份

^*2：后成份

^*3：每1kg填充剂1日可处理的外消旋体质量(kg)

产业上的可利用性

按照本发明，通过使用具有优良旋光拆分能力的填充剂作为旋光拆分用的填充剂，可以提供使用旋光异构体分离用填充剂以及使用该填充剂的模拟移动床式色谱的旋光异构体的分离方法，该分离方法可以连续且生产能力高地进行旋光异构体的旋光拆分，可以期待在工业上大幅度地降低成本。