尿碘快速定量检测试剂盒及尿碘检测方法

摘要

尿碘快速定量检测试剂盒及尿碘检测方法,试剂盒由消解液、解析剂、中和剂、还原剂、指示剂、氧化剂和碘系列标准溶液组成。检测时先用由过氧化酰氯、次氯酸钠、二氧化氯按一定比例组成的消解液在常温下消解尿样,分解尿中干扰碘测定的物质,再使用脲解析剂和酸中和剂分解残余的消解液和调节酸度,然后通过碘催化还原剂(亚砷酸)与氧化剂(硫酸铈或硫酸铈铵)反应,选用指示剂(Ferroin亚铁灵)指示反应终点,采用秒表记录反应时间。因反应时间(S)的对数值与碘含量(C)的对数值成线形定量关系,即lnC=a+blnS或lgC=a+blgS,由此来计算尿碘含量。本试剂盒检测快速、准确、灵敏度高

说明书

                               技术领域

本发明属于检测试剂类，具体地属于测定尿中碘含量的检测试剂及检测方法。

                               背景技术    

尿碘水平是评价人体碘营养状况的重要指标。通过检测尿碘含量可以诊断人体是否缺碘。

尿中碘含量甚微，只有百万分之零点几；尿液成分复杂，干扰碘测定的物质很多。因此，测定尿碘一般采用先排除干扰物质，然后利用碘催化几种化学反应的性质，间接测定尿碘。

德国默克公司1998年提出了尿碘半定量检测试剂盒，该试剂盒采用树脂过滤尿样，将干扰碘测定的有机物吸附在树脂上，取滤液进行测定。测定方法采用碘催化四甲基联苯二胺与双氧水的反应，根据双氧水将四甲基联苯二胺氧化成四甲基联苯二醌显现黄色，比较黄色的深浅程度来半定量判断尿碘含碘范围，检测分为＜100μg/L、100-300μg/L和＞300μg/L三档。

                              发明内容

本发明的目的是根据上述现状况，旨在提供一种能快速、准确检测出尿中碘含量的尿碘快速定量检测试剂盒及尿碘检测方法。

本发明目的的实现方式为，尿碘快速定量检测试剂盒，试剂盒由以下主要试剂成分组成，

(1)消解液：由过氧化酰氯、次氯酸钠、二氧化氯复合组成或其中的单一成分组成，其总有效氯含量(以Cl₂计)在0.3～1.2mol./L，

(2)解析剂，为脲溶液，其浓度以脲计，为0.1～1mol/L，

(3)中和剂：硫酸、盐酸或磷酸溶液，其酸度以氢离子浓度，计为1～10mol/L，

(4)还原剂：由三氧化二砷溶于酸性溶液中制备成的亚砷酸溶液，其含量以三氯化二砷计，为1×10^-3～0.5mol/L，

(5)指示剂：Ferroin(亚铁灵)溶液，其浓度以Ferroin计，为5.0×10^-3～1.0×10^-2mol/L，

(6)氧化剂：硫酸铈铵或硫酸铈溶液，含量为5×10^-4～5×10^-2mol/L。

尿碘快速定量检测试剂盒检测尿碘的方法，具体步骤为：

(1)消解  准确移取50、100、200、300和400μg/L的系列碘标准溶液和尿样各0.1-1ml于试管中，各加0.2-2ml消解液，室温静置5分钟后剧烈振摇试管多次，致使反应产生的气体(主要为N₂、O₂和少量Cl₂)排尽为止，消解全过程约需10-15分钟；

(2)解析  每管加入0.2-2ml ml解析剂，室温静置2分钟后剧烈振摇试管多次，排尽反应产生的气体，全过程不得少于10分钟；

(3)中和  每管加入0.2-2ml中和剂，剧烈振摇试管多次，排尽反应产生的气体，全过程不得少于10分钟；

(4)将处理好的样品在测定处放置10分钟，待温度平衡后每管加入0.2-2ml还原剂，摇匀；

(5)测定  每管加入0.2-2ml指示剂，摇匀，选定一管，一手用加样器快速加入0.2-2ml氧化剂，另一手同时启动秒表计时，并立即取出该试管摇匀，此时试液变为蓝色，随着反应的进行，试液将从蓝色变为蓝紫色，最后变为红色，当试液变为蓝紫色且刚出现红色(突变点)时停止秒表，记录反应时间(秒)，

重复以上操作，测定并记录其余样品管反应时间；

(6)尿碘含量的计算

采用直线回归方程法计算尿碘含量，因反应时间S(秒)的对数值lnS或lgS与碘浓度C(μg/L)的对数值lnC或lgC成线性关系，按双回归统计方法求出标准曲线的回归方程，lnC＝a+blnS或lgC＝a+blgS。其中a，b分别是曲线的截距和斜率，为常数，由回归统计方法求得，其在不同温度下为不同的常数，将样品管的反应时间(秒)代入标准曲线的回归方程，计算出样品碘含量(μg/L)。

本发明用消解液(过氧化酰氯、次氯酸钠、二氧化氯或其中的混合物)在试管内分解尿中有机物来排除干扰物质；再通过解析剂分解过量的消解液和调节酸度；通过中和剂来调解酸度，并进一步分解残存的消解液；然后通过碘催化亚砷酸与硫酸铈反应，使用指示剂(Ferroin)指示反应终点，记录反应从开始到终点所需要的时间(秒)。

本发明在检测中，先对碘标准溶液、尿样进行消解、解析、中和的前处理过程，这些过程建议在室外通风处或通风橱中进行，以避免刺激性气体的吸入。将处理好的样品在测定处放置10分钟，待温度平衡后，每管加入0.2-2ml还原剂，摇匀。

测定时，每管加入0.2-2ml指示剂，摇匀。因指示剂在溶液中时间过长易钝化，一次加入的管数不要过多，以20管为宜。准备好秒表、记录本和一张白纸，以下进行单管操作。选定一管，一手用加样器快速加入0.2-2ml氧化剂，另一手同时启动秒表计时，并立即取出该试管摇匀，试液变为蓝色。以白纸为背景，观察试管内颜色的变化。随着反应的进行，试液将从蓝色变为蓝紫色，最后变为红色。当试液变为蓝紫色且刚出现红色(突变点)时停止秒表，记录反应时间(秒)。突变点的确定根据操作者的观察习惯，只要一致即可。

尿碘含量的计算，采用直线回归方程法计算尿碘含量。因反应时间S(秒)的数值lnS或lgS与碘浓度C(μg/L)的对数值lnC或lgC成线性关系，将标准溶液浓度的对数对应其反应时间的对数输入函数计算器，按双回归统计方法求出标准曲线的回归方程，lnC＝a+blnS或lgC＝a+blgS。式中a、b分别是曲线的截距和斜率，在不同温度下为不同的常数。将样品管的反应时间(秒)代入标准曲线的回归方程，计算样品碘含量(μg/L)。本试剂盒灵敏度为5μg/l。

本发明检测过程可以简化，解析剂和中和剂可以选择性加入，即碘标准溶液、尿样经消解后，先加入解析剂或中和剂，再加还原剂进行还原。中和剂、还原剂、指示剂可预先三者或其中二者混合后加入，同时进行中和、还原、指示过程或其中两过程。

                               具体实施方式

以下举出本发明的实施例：

试剂成分及含量

消解液：有效氯含量为0.6mol/l；解析剂：脲含量为0.25mol/l；中和剂：硫酸浓度为2.5mol/L；还原剂：三氧化二砷含量为6.0×10^-2mol/L；指示剂：Ferroin含量为3.6×10^-2mol/L；氧化剂：硫酸铈铵的含量为7.0×10^-3mol/L。

检测结果

按本发明的检测方法进行检测。其中，标准溶液和尿样各取0.2ml，每管其他6种试剂的用量均为0.5ml，在室温17℃下测得一组数据如下：

标准及样品(μg/L)  50      100     200     300    400   样品1   样品2

反应时间(S)        案78.03 50.91   31.43   25.24  20.   45.96   32.32

用函数计算器求得标准曲线的回归方程为：

lnc＝10.759-1.571lns

将样品1和样品2反应时间代入回归方程，得出样品l的碘含量为115.1μg/L，样品2的碘含量为200.1μg/L。