一种河弧菌及用它生产褐藻胶裂合酶的方法

摘要

一种菌,其特征是该菌为河弧菌(Vibrio fluvialis),保藏单位简称CCTCC,保藏号为M200015。可用它生产褐藻胶裂合酶。本发明的菌种具有营养要求范围广,容易培养和代时短的特点,特别是具有高的产酶活性,其发酵液中酶的比活力为30.72U/mg。用本发明的方法生产褐藻胶裂合酶,产品的活性高,稳定性好,成本低,能够实现工业化生产。

说明书

本发明涉及一种河弧菌及用它生产褐藻胶裂合酶的方法。

据本发明人所知，褐藻胶裂合酶在制备具有不同分子量并具有多种生物活性的糖醛酸等方面显示出极其重要的作用，它对一些海洋药物的研制和工业化生产有决定性的意义。目前，已经有人用假单胞菌等生产褐藻胶裂合酶，其中有的用褐藻酸钠或海藻制成发酵培养基液，在25℃摇瓶培养96小时，然后投入提酶剂，使产品下沉，经分离冷冻干燥即可制得褐藻胶裂合酶。这些方法的缺点是制得的产品活性不高，稳定性差，成本高，难以实现工业化生产。这些缺点均与所用的菌种有关。

本发明的目的是提供一种河弧菌及用它生产褐藻胶裂合酶的方法，它能克服现有技术的上述缺点。

一种菌，其特征是该菌为河弧菌(Vibrio fluvialis)，保藏单位简称为CCTCC，保藏号为M200015。

一种河弧菌，其特征是用它生产褐藻胶裂合酶。

一种用河弧菌生产褐藻胶裂合酶的方法，包括把菌株放入褐藻酸钠发酵液中，在一定温度下培养一定时间，然后投入提酶剂，使产品下沉，再进行分离，最后冷冻干燥，其特征是所用的菌种为河弧菌。

本发明的菌种具有营养要求范围广，容易培养和代时短的特点，特别是具有高的产酶活性，其发酵液中酶的比活力为30.72U/mg。用本发明的方法生产褐藻胶裂合酶，产品的活性高，稳定性好，成本低，能够实现工业化生产。

下面通过实施例说明本发明。

附图为本发明的菌株形态图。

本发明的河弧菌(Vibrio fluvialis)菌株为弧形，端生单鞭毛，G-，菌落园形、乳白色，形态特征如附图所示。培养河弧菌的方法是已知的，采用的培养基为海水细菌培养基2216E，培养基的组份为酵母膏1克，蛋白胨5克，磷酸高铁0.01克，琼脂15克，陈海水1000ml，其PH为7.6-7.8。所用的产酶培养基为上述培养基加入0.1％的褐藻酸钠，培养48小时即可得到酶液。其保藏单位为中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，保藏号为M200015。

将本发明的菌种用2216E培养基活化后，以5％的接种量接入装有100ml褐藻酸钠培养基的500ml三角瓶中，28℃摇瓶培养18-24h后，将该培养液用冷冻离心机以4000rpm离心10分钟去除菌体，获得发酵酶液。将该酶液于4℃冰箱中先以30％的(NH₄)₂SO₄去杂蛋白，冷冻离心后，将上清液继续加入(NH₄)₂SO₄至80％的饱和度，4℃下沉淀24h，冷冻离心收集沉淀，该沉淀经冷冻干燥后制成粗的褐藻胶裂合酶制剂。