公开/公告号CN1048380A
专利类型发明专利
公开/公告日1991-01-09
原文格式PDF
申请/专利权人 中国医学科学院肿瘤医院;
申请/专利号CN89104228.8
申请日1989-06-28
分类号C07C61/29;A61K35/78;
代理机构农牧渔业部专利事务所;
代理人杨厚
地址 100021 北京市左安门外潘家窑
入库时间 2023-12-17 12:06:25
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2002-08-28
专利权的终止未缴年费专利权终止
专利权的终止未缴年费专利权终止
1994-09-07
授权
授权
1991-01-09
公开
公开
扶正女贞素有从中药女贞子中制备的一种五环三萜酸。分子量为456.71,其结构与已知的齐墩果酸相同。
女贞子是我国的传统中药之一,可补腰膝,壮筋骨,强阴肾,乌鬓发等。是常用的扶正培本药物。国外对本药虽有研究,但目前仍无应用,国内从70年代开始将其用于治疗肝炎。但将该药用于促免疫方面,尚未见有文献报导。
本发明的目的:是从女贞子中寻找促免疫有效成份,通过药理及临床验证,制备成肿瘤病人的康复药和促免疫活性药物。
本发明的内容要点:
1、扶正女贞素的制备流程:以女贞子粗粉或青叶胆为原料,乙醇回流提取三次,回收乙醇,得浸膏;加入HCL,使PH<2;水洗,抽滤。把滤饼投入碱中煮沸30分钟,趁热抽滤,得固体碱化物,水洗,乙醇溶解,脱色,酸化,抽滤得结晶;水洗至无Cl-,得纯品,收率为0.5%。
2、产品质量检测方法:
(1)紫外吸收法(含量测定):精密吸取100ug/ml,95%乙醇溶的扶正女贞素液,加入5%香草醛冰乙酸0.2ml;高氯酸0.8ml,水溶80℃保温10分钟,加入乙酸乙酯总体积达5ml,于560nm波长处测定吸收度,由标准曲线查含量。
(2)酸碱滴定法:取本品约0.15g精密称量加乙醇30ml,微热使其溶解,放冷,加酚酞指示液3滴,用乙醇制氢氧化钾液(0.05M)滴定,并将滴定结果用空白试验校正,即得。每ml的醇制KOH(0.05M)相当于22.84mg的扶正女贞素。
3、生物活性:
(1)扶正女贞素对正常小鼠吞噬细胞功能的影响:口服灌胃扶正女贞素100mg/kg×5天,能非常显著的增强正常小鼠Mφ的吞噬活性,与对照组比较有非常明显的差异。
(2)扶正女贞素对正常小鼠迟发超敏反应(DHR)的影响:口服灌胃扶正女贞素100mg/kg×7天,小鼠DHR值为37.5±4.5,而对照组为13.0±2.0,两组比较有非常显著的差异,表明扶正女贞素对正常小鼠DHR有明显的增强作用。
(3)对CTX(环酰胺)免疫抑制小鼠DHR的影响:用10mg/kg×2天的剂量皮下注射CTX使小鼠产生免疫抑制状态,DHR值为3.77,在致敏后第1天开始,先间日后连续给扶正女贞素100mg/kg×7(ig)天,其DHR值回升至17.3,两组间差异性测定P<0.01,从而看出扶正女贞素对CTX造成的免疫抑制状态小鼠有非常显著的免疫恢复功能。
(4)扶正女贞素对荷瘤小鼠低下的免疫功能也有非常明显的回升作用。
(5)对淋巴细胞增殖转化的影响:体外实验表明,扶正女贞素在其最适浓度(1μg-10μg/ml)时,能不同程度地增强丝裂原PHA、ConA、PWM及IL-2对正常人及恶性肿瘤病人淋巴细胞的增殖作用。
表1: 扶正女贞素体外对淋巴细胞转化的影响
3H-TdR掺入(CPM×10-3,X±SD)
淋巴细胞 扶正女贞素 对照 PHA ConA PWM IL-2
- 0.31±0.06 32.5±1.2 21.3±0.9 14.3±1.4 8.6±0.7
健康人
+ 0.43±0.10 38.3±1.1 27.6±1.2 19.8±2.2 10.8±1.4
- 0.22±0.08 24.3±1.7 16.1±0.8 10.9±1.9 4.8±0.6
肿瘤病人
+ 0.37±0.09 29.8±3.7 27.1±2.4 16.3±1.8 7.6±1.0
(6)对混合淋巴细胞培养的影响:在1-5μg/ml浓度下,扶正女贞子素体外可部分地消除恶性肿瘤病人的淋巴细胞抑制正常人淋巴细胞对丝裂反应的抑制作用。
(7)对ConA诱导抑制细胞的影响:ConA诱导抑制细胞能明显地抑制导体淋巴细胞对丝裂原的增殖反应,扶正女贞素可以部分地消除这种抑制活性,使抑制百分率平均由31%降至19%。
表2:扶正女贞素对ConA诱导抑制细胞(ConA-SC)的影响 ※
3H-TdR掺入(CPM×10-3)
扶正女贞素 ConA-SC 对照细胞 抑制率(%)
(1μg/ml)
+ 35.37±1.38 51.27±1.94 31
- 41.59±2.72 51.49±1.58 19
※ 健康成人外周血淋巴细胞
(8)对恶性肿瘤病人免疫功能的影响:对病人随机分为治疗组和对照组两组,治疗组病人接受扶正女贞素治疗,40mg,每日2次口服,疗程为1个月,对照组同样方法服用安慰剂。免疫功能测定包括淋巴细胞转化试验(以刺激指数给出结果)和巨噬细胞吞噬率,结果表明,治疗组病人淋转功能由疗前的37.29±24.00提高到72.39±38.1(P<0.05),巨噬细胞吞噬率由疗前的36.86±19.2%提高到52.7±9.61%(P<0.05),而对照组病人治疗前后无明显变化。初步的临床结果已表明,扶正女贞素可明显地提高恶性肿瘤病人的淋巴细胞转化率及巨噬细胞吞噬率。
毒性试验:
共设六个计量组:以给药后10天死亡率计算,用寇氏法(Karber)计算出LD50及95%平均可信限L95。
LD50=2.548g/kg(ig)
L95=2.548±0.533g/kg。证明此药毒性极小,常规剂量无毒副作用。
本发明的优点和积极效果在于:1、我们所采用的是一种新的较为简单的工艺,可以从女贞子中提到扶正女贞素。由于可以从制作贞芪扶正冲剂的药渣中提到相当量,可以综合利用,有相当经济效益;2、实验和临床初步研究表明此药具有肯定的促巨噬细胞和淋巴细胞功能的作用,至少是女贞子免疫调节作用的有效成份之一,经检索为首次,国内外尚无人报道;3、首次证明扶正女贞素在体外与白细胞介素2(IL-2)有协同作用。
发明实施例:
1kg女贞子粗粉,95%乙醇回流提取3次回收乙醇,得浸膏;加入Hcl使PH=1,水洗,抽滤。把滤饼投入10%NaOH中煮沸30分钟,趁热抽滤,得固体碱化物,水洗,乙醇溶解,脱色,酸化,抽滤,得结晶,水洗至无cl-,得纯品,收率为0.5%左右。
机译: 数字视频接收器,ECM提取设备,EMM提取设备,易碎的密钥提取设备,CCI提取设备,数字视频接收系统,ECM提取方法,EMM提取方法,易碎的密钥提取方法,CCI提取方法,CCI提取方法中
机译: 数字视频接收机,ECM提取设备,EMM提取设备,加扰密钥提取设备,CCI提取设备,数字视频接收系统,ECM提取方法,EMM提取方法,加扰密钥提取方法,CCI提取方法,数字视频接收方法和记录中
机译: 样品的制备方法,核酸或蛋白质的提取方法,制备方法,核酸或蛋白质的提取方法,提取方法的检测或癌变的检测方法,样品的制备方法