一种真核生物CRISPR/Cas9全基因组编辑细胞文库及构建方法

摘要

本发明涉及一种真核生物CRISPR/Cas9全基因组编辑细胞文库及构建方法。本发明利用piggyBac转座子系统递送法构建真核生物CRISPR/Cas9全基因组编辑细胞文库，先将CRISPR/Cas9全基因组编辑系统构建到piggyBac转座子载体上，然后稳定转染细胞，筛选获得稳定表达CRISPR/Cas9文库的细胞系，再进行功能基因组筛选。本发明将Cas9蛋白表达框和sgRNA表达框整合到了同一个表达载体上，能够在从低等动物如昆虫到高等动物如哺乳动物等大多数真核生物中高效构建全基因组敲除细胞库。能够高效的在各种真核生物中实现全基因组编辑，可以高通量的在全基因组水平筛选功能基因。