一种湿性软颗粒饵料及其制备方法

摘要

本发明涉及一种湿性软颗粒饵料及其制备方法，具体是通过控制pH值和含水量，使所述软颗粒饵料在水体中稳定，不易溃散。再经过挤压制粒，使物料具有一定质密度，具备颗粒剂型的特征，便于投撒和动物抱食。本发明的软颗粒饵料营养全面，活性物质丰富，与干颗粒饲料相比避免了制粒加工、熟化、烘干等过程中营养成分损失，乳酸菌等活性物质失活的问题，易食易消化易吸收，节约资源，减少水体污染，增强虾体免疫抗病力。

说明书

技术领域

本发明属于水产饲料和生物工程技术领域，具体涉及一种湿性软颗粒 饵料及其制备方法。

发明背景

湿性饵料(Moist Pellet)，是指含水分较多(一般≥20％)的固态饵料。 目前湿性饵料多以鲜鱼或鱼浆、鱼油及水作为湿性配料，与干粉料(鱼粉， 豆粕粉、酵母、小麦粉等)、粘合剂、矿物质、维生素和防腐剂等干性配 料混合，挤压成粒而成。上世纪50年代，在美国俄勒冈州使用湿性饵料 饲养鲑鱼。上世纪60-70年代在日本，进一步研究更具特点的湿性饵料是 将粉状配合饵料与生鲜饵混合制成有不同营养需求的湿性饵料。我国90 年代初也开始这方面的探索，方法基本相同，也是用干粉料与鲜杂鱼虾混 合制粒而成。在产量、饵料利用、经济效益方面都有好的表现。但上述方 法具有以下问题，由于原料未发酵变性，粒径低于1mm的颗粒难制成， 且越小越易溃散，不稳定；上述湿性饵料在应用过程中，由于水分含量偏 高，易发霉变质、不宜长时间保存，也不宜长途运输，对自产自用还可以， 作为商业性的饵料厂这些质量问题不解决，养殖用户则不敢使用这类产 品。

发明内容

为了克服现有水产品饵料中存在的上述问题，本发明提供一种新颖的 湿性软颗粒饵料及其制备方法。

本发明充分认识到湿性饵料好处，通过配方、生物发酵、生物物理、 制粒技术等多种技术方法运用，制成了一种湿性软颗粒，在水体中稳定， 不易溃散，营养全面，活性物质丰富，易消化吸收，使水体保持洁净。易 运输，易存放，易投喂，保质期可达180天。

具体而言，本发明的第一个方面提供一种湿性软颗粒饵料，所述湿性 软颗粒饵料由包括豆粕细粉、玉米细粉、鱼浆、糖蜜、发酵豆粕、鱼粉、 酵母、小麦粉、虾蟹壳粉、大豆磷脂、磷酸二氢钙、复合维生素、复合矿 物质的物料制成，其总含水量为20-40％，pH为2.8-5.5。

在一个优选的实施方案中，所述物料中各成分的含量如下：豆粕细粉 5～35重量％、玉米细粉20～30重量％、鱼浆10～25％重量、糖蜜5～15 重量％、发酵豆粕15～35重量％，鱼粉5～15重量％，酵母6～8％重量， 小麦粉15～25重量％，虾蟹壳粉2～4重量％，大豆磷脂0.8～2.2重量％， 磷酸二氢钙1～2重量％，复合维生素0.5～1重量％，复合矿物质0.5～1.2 重量％。

在一个优选的实施方案中，所述饵料通过发酵制备。

在一个优选的实施方案中，所述饵料的粒径大小为0.2-3mm。

在一个优选的实施方案中，其中所述饵料的形状为胶囊形或圆球形。

在一个优选的实施方案中，其中所述饵料入水中2小时散失率小于或 等于16％。

在一个优选的实施方案中，其中所述饵料的粗蛋白含量为15-50重 量％，优选为38重量％。

在一个优选的实施方案中，所述湿性软颗粒饵料是鱼或虾或幼畜饲料， 更优选是虾饲料。

本发明的第二个方面提供一种制备湿性软颗粒饵料的方法，所述方法 依次包括以下步骤：

a.将包含豆粕细粉5～35重量％、玉米细粉20～30重量％、鱼浆10～ 25％重量、糖蜜5～15重量％的物料与水混合。

b.加入益生菌种，厌氧发酵；

c.将包含超微粉碎的发酵豆粕15～35重量％，鱼粉5～15重量％， 酵母6～8％重量，小麦粉15～25重量％，虾蟹壳粉2～4重量％，大豆磷 脂0.8～2.2重量％，磷酸二氢钙1～2重量％，复合维生素0.5～1重量％， 复合矿物质0.5～1.2重量％的物料混入步骤b的产物，使总含水量为 20-40％，调节pH值到2.8-5.5。

d.在低于60℃条件下制粒。

在一个优选的实施方案中，步骤a中的料水重量比为1:0.65～1.3。

在一个优选的实施方案中，步骤b中的益生菌包括但不限于凝结芽孢 杆菌、粪链球菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌的一种或几种。

在一个优选的实施方案中，所述益生菌一方面改善动物对营养物质的 消化吸收，另一方面代谢重金属等有害物质，以使养殖进入良好循环。因 此，只要对于动物消化吸收和饲养环境有用的益生菌都可以用于本发明。

在一个优选的实施方案中，所述益生菌以液体菌种的形式加入。

在一个优选的实施方案中，步骤b中厌氧发酵的终点为pH3～5，总酸 量10～22％。

在一个优选的实施方案中，步骤c中的总含水量20-28％。

在一个优选的实施方案中，步骤c中的pH值为2.8-5.2，维持酸性条 件以阻止霉菌生长。

在一个优选的实施方案中，步骤d中制粒在低于60℃、优选低于40℃ 条件下进行。

在一个优选的实施方案中，步骤d中制粒所产生的饵料的粒径大小为 0.2-3mm。此范围内的粒径大小是人为在制粒时缩小粒径20％，从而结合 入水后膨大15-25％，适合对虾的抱食。

在一个优选的实施方案中，步骤d中制粒所产生的饵料的形状为胶囊 形或圆球形。

通过本发明的方法制备的本发明的软颗粒饵料，具有多个优点。

具体地，首先，在所述总含水量和pH下，部分蛋白质解离成正、负 离子的趋势相等，净电荷趋于零，此时蛋白胶体可以相互聚集，并且部分 蛋白质水解，产生凝胶性，从而具备持水性，进而保证了在虾池水体中的 稳定性，不易溃散，而无需加入其他粘合剂；

其次，所述含水量使得物料在挤压制粒时摩擦力和压力较小，温度升 高不超过8℃，从而最大限度地保留活性物质(如，乳酸菌)和其它热敏 物质(如，酶和维生素)；

最后，具备该含水量的颗粒入水后，颗粒表面和内部所受的水体的压 差较小，削弱了颗粒在水中四散的力。

与传统干性颗粒对虾饲料相比，本发明的软颗粒饵料中，大分子的蛋 白质经有益微生物发酵，营养更佳；并且富含发酵的所产生的代谢产物和 热敏性活性物质；另外湿性软颗粒剂型适口性更好。

与普通发酵对虾饲料相比，本发明的软颗粒饵料将各种有益成分混合 均匀并捏合到每个颗粒中，对虾个体进食营养更均衡；为颗粒剂型，更适 合养殖用户的投料习惯，投料时更加便捷、均匀、方向性好、受户外风力 的影响小。

具体实施方式

实施例1

本发明软颗粒饵料的制备和水中散失率测定

1.制备

将凝结芽孢杆菌、粪链球菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌液体菌种接入 包含豆粕细粉35重量％，玉米细粉30重量％，鱼浆25重量％，糖蜜10 重量％的物料与水的混合物中，料水比1:0.65洁净环境下38℃，厌氧发酵， 72时，pH4.0总酸量16％。再混入包含超微粉碎的发酵豆粕35重量％， 鱼粉15重量％，酵母8重量％，小麦粉25重量％，虾蟹壳粉4重量％，大 豆磷脂0.8重量％，磷酸二氢钙1重量％，复合维生素0.5重量％，复合矿 物质0.5重量％的物料，控制总含水量25％，pH值4.8，在低于40℃条 件下混合、制粒，根据软颗粒大小，调整制粒压力，粒径为1.2mm,通过 制粒机上的循环冷水降低物料在挤压制粒时摩擦与压力产生的热，控制制 粒温度上升不超过8℃。

其中，

鱼粉为青岛翔润水产品开发有限公司的标准鱼粉(蛋白62％)；

酵母为秦皇岛骊华淀粉有限公司的饲料级酵母；

小麦粉为五得利集团赵县面粉有限公司的小麦次粉；

虾蟹壳粉为温州永平鱼粉有限公司的普通虾蟹壳粉；

大豆磷脂为黑龙江珍宝岛生物工程有限公司的饲料级大豆磷脂粉；

磷酸二氢钙为济南盛琳化工有限公司的饲料级磷酸二氢钙，22％含量；

凝结芽孢杆菌的保藏编号为：CGMCC(中国普通微生物菌种保藏管理 中心)1.2009，粪链球菌的保藏编号为：ACCC(中国农业微生物菌种保藏管 理中心)：10180，嗜酸乳杆菌的保藏编号为：CICC(中国工业微生物菌种 保藏管理中心)6088，植物乳杆菌的保藏编号为：ACCC11016)。

豆粕、玉米为市购，再用超微粉碎机(捷怡纳牌，JYNU75-75型)粉 碎至70目获得豆粕细粉和玉米细粉；鱼浆从山东荣成建皇水产食品有限 公司购入；糖蜜从广西柳州市黑黔湾糖蜜有限公司购糖厂购入的甘蔗糖 蜜；

发酵豆粕是从浙江科峰生物技术有限公司购入的CP48型发酵豆粕。

复合维生素和复合矿物质为从广州兴腾生物工程有限公司购入的生态 虾专用的添加剂。

所述复合维生素每公斤的成分含量为：维生素A280万IU、维生素D3  120万IU、维生素K 1500mg、维生素E50 5000mg、维生素B1 1000mg、 维生素B2 16000mg、维生素B6 3000mg、维生素B12 15mg、盐酸和烟 酰胺70000mg、叶酸5000mg、泛酸钙30000mg、生物素100mg、L- 抗坏血酸400000mg、肌醇150000mg。

所述复合矿物质每公斤成分含量为：铜4g、铁15g、锌11g、锰2g、 碘0.3g、硒0.05g、钴0.2g、镁16g、钾30g。

将软颗粒装入带有只能出气不能进气的单向阀的包装袋中，装入专用 包装箱，入库。

2.水中散失率测定

仪器和设备：

天平：感量为0.01g

用孔径为0.450mm(用于粒径小于1.5mm的饲料)、0.850mm(用于粒 径等于和大于1.5mm的饲料)的金属筛网晒分别制作的网筛(高6.5cm, 直径为6.5cm,呈圆桶形)。

刻度尺：精度为0.1cm

温度计：精度为0.1℃

秒表

恒温电热烘箱：105℃±2℃

干燥器

测定步骤：

称取本发明的软颗粒试样三份，每份10g,先取一份(对照样)在烘箱 内105℃，烘至恒重。将另外2份(实验样)作平行实验：分别放入已备 好的孔径为0.450mm网筛中，网筛置于内盛5.5cm深的海水容器中；海 水水温为25℃至28℃，盐度为20；待浸泡到2h,把网筛从底部至水面提 动上下各三次，下沉时使饲料离开网筛底面，然后取出网筛，把网筛内饲 料置105℃烘箱烘至恒重；取算数平均值，允许相对偏差为4％。水中散失 率按下面公式计算：

C＝(m₀-m)/m₀×100

式中：

C－散失率，％；

m₀－烘干后对照样质量，单位为克(g)；

m－烘干后实验样质量，单位为克(g)。

经计算，本发明的饵料入水中2小时散失率为10％。

实施例2

实验室中对本发明的软颗粒饵料与市场购买的通威牌南美白对虾专用饲 料对比

1.实验方案：

将实验用凡纳滨对虾幼虾，在厦门集美大学水产学院试验中心海水室 内水循环系统中进行养殖试验。

在水泥池中暂养2周后，挑选大小均匀、健康活泼的虾苗随机放入 玻璃缸(水体体积60*80*100cm)中，每缸放养100尾，分成软颗粒饵 料组和普通干性颗粒饲料对照组，每组4个重复。采用饱食投喂法，每天 投喂3次(8：00、14：00和20：00)，根据对虾的摄食情况适当调整 投喂量(投喂量每组一致，自由采食)，试验周期为28天。试验期间连续 充气，自然光照，水体条件为水温25～29℃，盐度1.0～3.0，pH 6.8～ 7.2。

2.实验结果：

(1)、对虾生长性能指标及计算公式如下：

特定生长率(％/d)＝[(ln终末平均体重-ln初始平均体重)/饲养天 数]x100％；

相对增重率％＝[(终末体重-初始体重)/初始体重×100％；其中，终末 体重和初始体重均是每组平均体重

日生长速度＝体重增加量/实验时间×100％；其中体重增加量通过实验 末体重-实验除体重获得。

终末平均重＝实验组虾的体重/实验组虾的数量

对上述参数的计算结果如表1所示。

表1

  对照组 软颗粒饵料组 特定生长率(％/d) 10.31±1.68 15.21±4.08^*相对增重率(％) 11030±3864 16735±4479^**日生长速度(％) 13.18±3.14 18.51±5.65^*终末平均重(克) 8.006±2.46 10.367±3.67^*

*表示与对照组相比，差异显著(P＜0.05)，**表示与对照组相比，差 异极显著(P＜0.01)

(2)对虾肠、肝胰腺的脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶活性测定

养殖结束后禁食24h，每缸随机取10尾虾置于冰盘中解剖，取出胃、 肝胰腺和肠道用4℃预冷后的生理盐水冲洗，滤纸吸干后按要求匀浆配制 成组织匀浆液，部分匀浆液直接用于脂肪酶活性的测定，剩余匀浆液离心 后取上清液作为粗酶液，用于测定蛋白酶和淀粉酶活性。测定结果如表2 所示。

表2

*表示与对照组相比，差异显著(P＜0.05)，**表示与对照组相比，差异极 显著(P＜0.01)

从表1、2中可见，对虾的相对增重率，特殊生长率以及日增长速度都 高于对照组，这说明软颗粒饵料组可提高动物对饲料营养物质的利用率， 并可提高其消化道蛋白酶和淀粉酶活力。

(3)对虾免疫功能指标检测

对虾免疫系统主要有两个方面：一方面为触发细胞免疫系统，包括血 细胞的吞噬、包掩和凝集等免疫反应；另一方面也会诱发体液免疫系统， 包括血淋巴或体液中酶(如溶菌酶、酚氧化酶、超氧化物歧化酶等)、免疫 因子(如凝集素、溶血素等)以及调节因子(如酚氧化酶原激活系统等)的防 御功能。

1、氧化活性酶类：

超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)，均是用于衡量动物机体内 抗氧化功能的代表性指标。SOD活性与水生生物的免疫水平密切相关， 对于增强吞噬细胞防御能力和整个机体的免疫功能有重要作用。

2、非氧化活性酶类：

(1)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(ALP)在体内直接参与磷酸 机团的转移和代谢，是机体生长代谢、保持内环境稳定和维持机体健康所 必需的酶。

(2)、酚氧化酶(Phenoloxidase，PO)是体液免疫因子之一，参与宿主 的防御反应—包括释放具有调理作用的粘性蛋白，促进血细胞的吞噬和包 囊，产生多种因子介导凝结和凝固，以及产生杀菌物质等。一般认为甲壳 动物的PO系统的作用相当于脊椎动物的补体系统。

因此，本发明测定上述酶类作为评价对虾免疫功能的指标。具体操作 如下：

对虾血清的制备：试验结束后，从每一样本中取出30尾虾，用1ml 无菌注射器插入虾的围心腔抽取血液后，放入无菌指形离心管中，冰箱4℃ 保存，待血液凝固后，4℃，5000r/min离心10min，移取上清液即得血 清，-20℃保存备用。

测量方法如下：以下试剂盒均购自南京建成生物科技有限公司。具体 操作依照试剂盒说明书进行。

1、超氧化物歧化酶(SOD)：试剂盒购自南京建成生物科技研究所SOD 试剂盒(WST-1法)，规格：96次，生产批号20131103。货号：A001-3。 采用WST-1法(WST是具有磺酸基的可溶性单四唑盐)

高度水溶性四唑盐WST-1(2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸 苯基)-2氢-四唑盐,二钠盐)，能与超氧阴离子(O₂^-)反应生成一种水溶性 的染料。WST-1被超氧阴离子还原的比率与黄嘌呤氧化酶的活性线性相 关，并且会被SOD所抑制。因此，SOD或者SOD类似物的IC₅₀(50％的抑 制浓度)就能用比色法来测定。测定SOD活力，如下表操作

其中，酶工作液为用酶稀释液稀释的SOD酶；酶稀释液为0.1mol/L pH7.2 的磷酸盐缓冲液；底物应用液：稀释10倍后的WST溶解液。

计算公式：SOD抑制率(％)＝{(A对照-A对照空白)-(A测定-A 测定空白)}/(A对照-A对照空白)*100％

SOD活力(U/ml)＝SOD抑制率(％)÷50％×反应体系稀释倍数(0.24 ml/0.02ml)×样本测试前稀释倍数

2、过氧化氢酶(CAT)(U/ml)：试剂盒购自南京建成生物科技研究所 过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒(紫外法)，规格：100T/96次，生产批号 20131023。货号：A007-2。紫外吸收法，血清样品直接检测。

测定步骤如下：

(1)、CAT检测工作液的配制：用时在每瓶100uL试剂二(0.1mol/L H₂O₂) 中加入20mL试剂一(0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液)，充分混匀，作为工作 液。

(2)、测定前将CAT检测工作液室温放置，使之温度不低于室温。

(3)、取1mLCAT检测工作液于1mL石英比色皿中，再加入35μL血清， 混匀；室温下立即测定240nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值 A2。

CAT活性计算：血清CAT活力的计算:CAT(U/L)＝750×(A1－A2) 单位的定义：每升血清(浆)在反应体系中每分钟催化1umol H₂O₂降解 定义为一个酶活力单位。

3、酸性磷酸酶(ACP)(分光光度法)，试剂盒购自南京建成生物科技 研究所酸性磷酸酶(ACP)测定试剂盒(分光光度法)，规格：500T/48次， 生产批号20131109。货号：A060-1。根据酸性磷酸酶(AP)能分解磷酸苯酯 成分的特性，用酚试剂测定出在相应波长下酚的含量，并据此计算出酶的 活性。

酚标准应用液：0.1mg/1ml；缓冲液:0.1mol/L碳酸盐缓冲液(pH 10)。 基质液:取磷酸苯二钠·2H₂O 6克，4-氨基安替比林3克，分别溶于煮沸冷 却后的蒸馏水中，两液混合并稀释至1000毫升；碱液：0.1mol/L氢氧化 钠，显色剂:高铁氰化钾溶液，配制方法如下，称取硼酸28g，高铁氰化 钾48g，各自溶解于400ml蒸馏水中，两液合并后再加蒸馏水至1000ml， 置棕色瓶中保存。

立即混匀，室温静置10分钟，于520nm，1cm光径，空白管调零，测 各管吸光度值。

计算公式：酸性磷酸酶(ACP)(U/100ml)＝(测定OD值÷标准OD值) ×标准管含酚量(0.005mg)×(100ml/0.05ml)

4、酚氧化酶(PO)(U)血清酚氧化酶(PO)活性的测定参考Ashida 的方法，【ASHIDA M.Purification and characterization of prophenol oxidase  from hemolymph of the silkworm Bombyx mori[J].Arch Biochem Biophy， 1971，144：749-762.】把10μL血清加入96孔酶标板中，然后向各孔中 加人200μL浓度为0.1 mol/L、pH为6.0的磷酸盐缓冲液，最后向各样 品孔中加入10μL浓度为0.01 mol/L的L-多巴液(0.01mol/L，Sigma公司 产品)，振荡4次，在酶标仪中每隔4 min读取490 nm处的吸光值。酶活 力以试验条件下，OD₄₉₀值每分钟增加0.001为1个酶活力单位。

结果如表3所示。

表3

*表示与对照组相比，差异显著(P＜0.05)，**表示与对照组相比，差 异极显著(P＜0.01)

可见，饲喂软颗粒饵料可提高虾SOD、CAT、AC以及PO的生物活 性，在一定程度上能提高对虾的免疫力。

实施例3湿性软颗粒饵料中粗蛋白含量的测定

本发明湿性软颗粒饵料中的粗蛋白含量的测定按照饲料中粗蛋白测 定方法的国家标准(中华人民共和国国家标准,饲料中粗蛋白测定方法 GB/T 6432一94)进行。

测定结果为：粗蛋白含量为38％。

实施例4实地应用数据

为了检测本发明的软颗粒饵料在实际生产中的效果，2014年6月份我 们在天津市西青区翟庄子村实地养殖中使用，该养殖户拥有四口池塘，拿 出其中一口池塘做使用软颗粒，其他三口池塘使用通威牌普通硬质颗粒饲 料，结果显示于表4。

表4

注：2号、3号和4号虾塘因出现对虾偷死等病害，为减少损失提前出 塘。饵料系数又称增肉系数，即饵料用量与养殖动物所增重量的比值。

从表4可见，使用软颗粒饵料的池塘饵料系数较低，节省饲料；对虾 体质较强，不易发病，使得养殖周期加长，不用提前收虾，单只虾体重高； 等。