一种噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫醚酮缩氨基硫脲衍生物及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫醚酮缩氨基硫脲衍生物及其制备方法和应用，采用如下式I化学结构通式：

说明书

技术领域

本发明属于药物合成技术领域，具体涉及一种噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫醚酮缩氨 基硫脲衍生物，同时还涉及噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫醚酮缩氨基硫脲衍生物的制备方 法，以及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

基于抗菌氟喹诺酮的作用靶酶—拓扑异构酶与哺乳动物体内相应的拓扑异构酶在序 列和功能的相似性，可通过氟喹诺酮的结构修饰将其抗菌活性转化为其抗肿瘤活性。同时， 氟喹诺酮C-3位羧基虽然是抗菌活性所必需的药效团，但并非是抗肿瘤活性的药效团，可被 杂环等排体替代。另外，由于缩氨基硫脲类不但能与多种金属离子螯合产生重要的药理作 用，常被用作一个重要的药效团来构建药物分子骨架，同时其许多衍生物因具有如抗病毒、 抗细菌、抗真菌、抗肿瘤活性等广泛的生物活性而引起药物化学工作者的关注。尤其是一些 杂环缩氨基硫脲类化合物的抗肿瘤作用靶点也可能是DNA拓扑异构酶II(TopoII)，已成为 抗肿瘤药物研究的热点。

发明内容

本发明的目的是提供一种噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫醚酮缩氨基硫脲衍生物，具有 抗肿瘤的作用和功效，同时提供噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫醚酮缩氨基硫脲衍生物的制备 方法和应用。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：一种噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫 醚酮缩氨基硫脲衍生物，其化学结构式如通式(I)所示：

式(I)中，R为H、醚基、羟基、甲基、卤素和硝基中的至少一种。

本发明一种噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫醚酮缩氨基硫脲衍生物，该类衍生物具体为 以下化学结构的化合物：

本发明的一种噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫醚酮缩氨基硫脲衍生物的制备方法，以式 (II)所示的氧氟沙星为原料制备而成，

具体制备步骤如下：

(1)以式(II)所示的氧氟沙星为原料，经肼解制得相应的酰肼(III)，将酰肼(III)与硫氰 化钾在盐酸溶液中发生缩合反应得C-3酰胺基硫脲(IV)，它在5wt％NaOH溶液中发生分子 内缩合反应制成C-3均三唑硫醇(V)；

(2)将式(V)所示的化合物与α-溴代苯乙酮或α-溴代苯乙酮衍生物在乙醇中发生亲核取 代反应制成式(VI)所示噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫醚酮衍生物，由化合物(II)到化合物 (VI)的详细操作步骤可以参照文献(曹铁耀，喹诺酮C-3[1,2,4]三唑硫醚及衍生物的合成和 抗肿瘤活性研究(Ⅱ)：左氧氟沙星和氧氟沙星均三唑硫醚及衍生物，河南大学硕士论文， 2012年)所述的方法，

其中，式(VI)中，R为H、醚基、羟基、甲基、卤素和硝基中的至少一种；

(3)将式(VI)所示的噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫醚酮衍生物分别与氨基硫脲在冰乙酸中 发生缩合反应制成式(I)所示噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫醚酮缩氨基硫脲衍生物，

其中，式(I)中，R为H、醚基、羟基、甲基、卤素和硝基中的至少一种。

作为进一步的改进，所述步骤(3)中式(VI)所示的噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫醚 酮衍生物与氨基硫脲的摩尔比为1:1.0～1.5。

所述的噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫醚酮缩氨基硫脲衍生物在制备抗肿瘤药物中的应 用。

所述抗肿瘤药物为治疗膀胱癌、胃癌或胰腺癌药物。

本发明一种噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫醚酮缩氨基硫脲基于药效团的拼合原理，将 氟喹诺酮、均三唑杂环和缩氨基硫脲等三种药效团有效的结合，实现了结构的互补和药效团 活性的叠加，达到了增效降毒的效果，可作为全新结构的抗肿瘤药物开发。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。

一、中间体2-{5-[6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-喹啉-4(1H)-酮-3-基]-4H- [1,2,4]三唑-3-硫基}-1-(取代)苯基-乙酮(VI)的制备通法：

取C-3均三唑硫醇V(2.0g,4.8mmol)与α-溴代苯乙酮(1.2g,6.2mmol)或α-溴代苯乙酮类 (6.2mmol)在无水乙醇(50mL)中搅拌回流反应10h；放置室温，过滤；粗品悬浮于蒸馏水(50 mL)中，用碳酸氢钠饱和溶液调中性，滤集固体，干燥；用无水乙醇重结晶,得黄色结晶2- {5-[6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-喹啉-4(1H)-酮-3-基]-4H-[1,2,4]三唑-3-硫基}-1- 苯基-乙酮(VI-1)或2-{5-[6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-喹啉-4(1H)-酮-3-基]-4H- [1,2,4]三唑-3-硫基}-1-(取代)苯基-乙酮(VI-1～VI-12)，其理化性质和¹HNMR数据见表1。

表1中间体硫醚酮(VI-1～VI-12)的理化性质和¹HNMR数据

二、目标化合物的制备

实施例1

2-{5-[6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-喹啉-4(1H)-酮-3-基]-4H-[1,2,4]三唑-3-硫基}- 1-苯基-乙酮缩氨基硫脲(I-1)，其化学结构式为：

即式I中的R为氢原子。

取中间体硫醚酮(VI-1)(2.0g,3.7mmol)溶于冰乙酸(15mL)中，加入氨基硫脲(0.40g,4.4 mmol)，混合物回流反应6h。减压蒸除溶剂，加水(30mL)溶解，用0.1g的活性炭在60℃搅 拌脱色1h。滤液用浓氨水调至中性，滤集产生的固体，水洗，干燥，无水乙醇重结晶，得 淡黄色结晶物(I-1)，产率63.7％，m.p.214～216℃。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:1.46(t, J＝7.2Hz,3H,CH₃),2.32(s,3H,N-CH₃),3.05-3.57(m,8H,piperazine-H),4.68-4.57(OCH₂CHN), 4.84(s,2H,SCH₂),7.53-7.66(m,4H,Ph-H和5-H),7.83(s,1H,NH),8.03-8.07(m,2H,Ph-H), 8.28,8.36(2s,2H,NH₂),8.77(s,1H,2-H),13.77(s,1H,triazole-NH)；MS(m/z):608[M+H]⁺,计 算(C₂₈H₃₀FN₉O₂S₂):607.74。

实施例2

2-{5-[6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-喹啉-4(1H)-酮-3-基]-4H-[1,2,4]三唑-3-硫基}- 1-(对甲氧苯基)-乙酮缩氨基硫脲(I-2)，其化学结构式为：

即式I中的R为对甲氧基。

该化合物的制备方法为：取中间体硫醚酮(VI-2)(2.0g,3.6mmol)溶于冰乙酸(15mL) 中，加入氨基硫脲(0.33g,3.6mmol)，混合物回流反应12h。减压蒸除溶剂，加水(30mL)溶 解，加入0.1g的活性炭在60℃搅拌脱色1h。滤液用浓氨水调至中性，滤集产生的固体，水 洗、干燥、无水乙醇重结晶，得淡黄色结晶物(I-2)，产率67.6％，m.p.218～220℃。¹H  NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:1.47(t,J＝7.2Hz,3H,CH₃),2.34(s,3H,CH₃),3.13-3.60(m,8H, piperazine-H),3.87(s,3H,OCH₃),4.68-4.57(OCH₂CHN),4.86(s,2H,SCH₂),7.46(d,J＝8.6Hz, 2H,Ph-H),7.68(d,J＝6.8Hz,1H,5-H),7.85(s,1H,NH),8.07(d,J＝8.6Hz,2H,Ph-H),8.33,8.37 (2s,2H,NH₂),8.78(s,1H,2-H),13.76(s,1H,triazole-NH)；MS(m/z):638[M+H]⁺,计算 (C₂₉H₃₂FN₉O₃S₂):637.76。

实施例3

(2-{5-[6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-喹啉-4(1H)-酮-3-基]-4H-[1,2,4]三唑-3-硫基}- 1-(邻甲氧苯基)-乙酮缩氨基硫脲(I-3)，其化学结构式为：

即式I中的R为邻甲氧基。

该化合物的制备方法为：取中间体硫醚酮(VI-3)(2.0g,3.6mmol)溶于冰乙酸(15mL) 中，加入氨基硫脲(0.49g,5.4mmol)，混合物回流反应10h。减压蒸除溶剂，加水(30mL)溶 解，加入0.1g的活性炭在60℃搅拌脱色1h。滤液用浓氨水调至中性，滤集产生的固体，水 洗、干燥、无水乙醇重结晶，得淡黄色结晶物(I-3)，产率54.7％，m.p.192～194℃。¹H NMR (400MHz,DMSO-d₆)δ:1.46(t,J＝7.2Hz,3H,CH₃),2.34(s,3H,CH₃),3.15-3.57(m,8H, piperazine-H),3.86(s,3H,OCH₃),4.68-4.57(OCH₂CHN),4.84(s,2H,SCH₂),7.57-7.68(m,4H, Ph-H和5-H),7.87-8.02(m,2H,NH和Ph-H),8.30,8.32(2s,2H,NH₂),8.81(s,1H,2-H), 13.77(s,1H,triazole-NH)；MS(m/z):638[M+H]⁺,计算(C₂₉H₃₂FN₉O₃S₂):637.76。

实施例4

(2-{5-[6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-喹啉-4(1H)-酮-3-基]-4H-[1,2,4]三唑-3-硫基}- 1-(对羟基-苯基)-乙酮缩氨基硫脲(I-4)，其化学结构式为：

即式I中的R为对羟基。

上述化合物的制备方法为：取中间体硫醚酮(VI-4)(2.0g,3.6mmol)溶于冰乙酸(15mL) 中，加入氨基硫脲(0.40g,4.4mmol)，混合物回流反应10h。减压蒸除溶剂，加水(30mL)溶 解，加入0.1g的活性炭在60℃搅拌脱色1h。滤液用浓氨水调至中性，滤集产生的固体，水 洗、干燥、无水乙醇重结晶，得淡黄色结晶物(I-4)，产率51.4％，m.p.217～219℃。¹H  NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:1.47(t,J＝7.2Hz,3H,CH₃),2.35(s,3H,CH₃),3.15-3.62(m,8H, piperazine-H),4.65-4.55(OCH₂CHN),4.85(s,2H,SCH₂),7.24(d,J＝8.8Hz,2H,Ph-H),7.64(d, J＝6.8Hz,1H,5-H),7.95(d,J＝8.8Hz,2H,Ph-H),7.87(s,1H,NH),8.31,8.34(2s,2H,NH₂),8.83 (s,1H,2-H),10.56(s,1H,OH),13.77(s,1H,triazole-NH)；MS(m/z):624[M+H]⁺,计算 (C₂₈H₃₀FN₉O₃S₂):623.74。

实施例5

(2-{5-[6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-喹啉-4(1H)-酮-3-基]-4H-[1,2,4]三唑-3-硫基}- 1-(邻羟基-苯基)-乙酮缩氨基硫脲(I-5)，其化学结构式为：

即式I中的R为邻羟基。

上述化合物的制备方法为：取中间体硫醚酮(VI-5)(2.0g,3.6mmol)溶于冰乙酸(15mL) 中，加入氨基硫脲(0.40g,4.4mmol)，混合物回流反应10h。减压蒸除溶剂，加水(30mL)溶 解，加入0.1g的活性炭在60℃搅拌脱色1h。滤液用浓氨水调至中性，滤集产生的固体，水 洗、干燥、无水乙醇重结晶，得淡黄色结晶物(I-5)，产率48.6％，m.p.186～188℃。¹H NMR (400MHz,DMSO-d₆)δ:1.46(t,J＝7.2Hz,3H,CH₃),2.27(s,3H,CH₃),3.12-3.58(m,8H, piperazine-H),4.66-4.57(OCH₂CHN),4.81(s,2H,SCH₂),6.24(s,2H,OCH₂O),7.58-7.76(m,3H, Ph-H和5-H),7.84,8.05(2s,2H,Ph-H和NH),8.31,8.34(2s,2H,NH₂),8.79(s,1H,2-H), 13.75(s,1H,triazole-NH)；MS(m/z):624[M+H]⁺,计算(C₂₈H₃₀FN₉O₃S₂):623.74。

实施例6

(2-{5-[6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-喹啉-4(1H)-酮-3-基]-4H-[1,2,4]三唑-3-硫基}- 1-(3,4-二氧亚甲基-苯基)-乙酮缩氨基硫脲(I-6)，其化学结构式为：

即式I中R为3,4-二氧亚甲基。

上述化合物的制备方法为：取中间体硫醚酮(VI-6)(2.0g,3.5mmol)溶于冰乙酸(15mL) 中，加入氨基硫脲(0.40g,4.4mmol)混合物回流反应10h。减压蒸除溶剂，加水(30mL)溶解， 加入0.1g的活性炭在60℃搅拌脱色1h。滤液用浓氨水调至中性，滤集产生的固体，水洗、 干燥、无水乙醇重结晶，得淡黄色结晶物(I-6)，产率66.3％，m.p.243～245℃。¹H NMR(400 MHz,DMSO-d₆)δ:1.46(t,J＝7.2Hz,3H,CH₃),2.27(s,3H,CH₃),3.12-3.58(m,8H,piperazine- H),4.66-4.57(OCH₂CHN),4.81(s,2H,SCH₂),6.24(s,2H,OCH₂O),7.58-7.76(m,3H,Ph-H和 5-H),7.84,8.05(2s,2H,Ph-H和NH),8.31,8.34(2s,2H,NH₂),8.79(s,1H,2-H),13.75(s,1H, triazole-NH)；MS(m/z):652[M+H]⁺,计算(C₂₉H₃₀FN₉O₄S₂):651.75。

实施例7

(2-{5-[6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-喹啉-4(1H)-酮-3-基]-4H-[1,2,4]三唑-3-硫基}- 1-(3,4-二甲氧苯基)-乙酮缩氨基硫脲(I-7)，其化学结构式为：

即式I中的R为3,4-二甲氧基。

上述化合物的制备方法为：取中间体硫醚酮(VI-7)(2.0g,3.4mmol)溶于冰乙酸(15mL) 中，加入氨基硫脲(0.37g,4.1mmol)，混合物回流反应12h。减压蒸除溶剂，加水(30mL)溶 解，加入0.1g的活性炭在60℃搅拌脱色1h。滤液用浓氨水调至中性，滤集产生的固体，水 洗、干燥、无水乙醇重结晶，得淡黄色结晶物(I-7)，产率57.0％，m.p.217～219℃。¹H NMR (400MHz,DMSO-d₆)δ:1.45(t,J＝7.2Hz,3H,CH₃),2.30(s,3H,CH₃),3.12-3.65(m,8H, piperazine-H),3.87,3.89(2s,6H,2×OCH₃),4.67-4.56(OCH₂CHN),4.78(s,2H,SCH₂),7.62- 7.78(m,3H,Ph-H和5-H),7.86(s,1H,NH),8.07(s,1H,Ph-H),8.30,8.34(2s,2H,NH₂),8.83(s, 1H,2-H),13.77(s,1H,triazole-NH)；MS(m/z):668[M+H]⁺,计算(C₃₀H₃₄FN₉O₄S₂):667.79。

实施例8

(2-{5-[6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-喹啉-4(1H)-酮-3-基]-4H-[1,2,4]三唑-3-硫基}- 1-(3-甲氧基-4-羟基-苯基)-乙酮缩氨基硫脲(I-8)，其化学结构式为：

即式I中的R为3-甲氧基-4-羟基。

上述化合物的制备方法为：取中间体硫醚酮(VI-8)(2.0g,3.4mmol)溶于冰乙酸(15mL) 中，加入氨基硫脲(0.37g,4.1mmol)，混合物回流反应12h。减压蒸除溶剂，加水(30mL)溶 解，加入0.1g的活性炭在60℃搅拌脱色1h。滤液用浓氨水调至中性，滤集产生的固体，水 洗、干燥、无水乙醇重结晶，得淡黄色结晶物(I-8)，产率51.6％，m.p.243～245℃。¹H NMR (400MHz,DMSO-d₆)δ:1.46(t,J＝7.2Hz,3H,CH₃),2.33(s,3H,CH₃),3.17-3.66(m,8H, piperazine-H),3.87(s,3H,OCH₃),4.65-4.53(OCH₂CHN),4.76(s,2H,SCH₂),7.57-7.74(m,3H, Ph-H和5-H),7.87(s,1H,NH),8.12(s,1H,Ph-H),8.34,8.37(2s,2H,NH₂),8.86(s,1H,2-H), 10.65(s,1H,OH),13.77(s,1H,triazole-NH)；MS(m/z):654[M+H]⁺,计算(C₂₉H₃₂FN₉O₄S₂): 653.76。

实施例9

(2-{5-[6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-喹啉-4(1H)-酮-3-基]-4H-[1,2,4]三唑-3-硫基}- 1-(对甲基-苯基)-乙酮缩氨基硫脲(I-9)，其化学结构式为：

即式I中的R为对甲基。

上述化合物的制备方法为：取中间体硫醚酮(VI-9)(2.0g,3.5mmol)溶于冰乙酸(15mL) 中，加入氨基硫脲(0.33g,3.5mmol)，混合物回流反应10h。减压蒸除溶剂，加水(30mL)溶 解，加入0.1g的活性炭在60℃搅拌脱色1h。滤液用浓氨水调至中性，滤集产生的固体，水 洗、干燥、无水乙醇重结晶，得淡黄色结晶物(I-9)，产率54.7％，m.p.191～193℃。¹H NMR (400MHz,DMSO-d₆)δ:1.45(t,J＝7.2Hz,3H,CH₃),2.26,2.28(2s,6H,2×CH₃),3.03-3.57(m,8H, piperazine-H),4.65-4.57(OCH₂CHN),4.74(s,2H,SCH₂),6.93(d,J＝8.2Hz,2H,Ph-H),7.75(d, J＝13.2Hz,1H,5-H),7.87(s,1H,NH),7.96(d,J＝8.2Hz,2H,Ph-H),8.26,8.30(2s,2H,NH₂), 8.77(s,1H,2-H),13.73(s,1H,triazole-NH)；MS(m/z):622[M+H]⁺,计算(C₂₉H₃₂FN₉O₂S₂): 621.76。

实施例10

(2-{5-[6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-喹啉-4(1H)-酮-3-基]-4H-[1,2,4]三唑-3-硫基}- 1-(对氟苯基)-乙酮缩氨基硫脲(I-10)，其化学结构式为：

即式I中的R为对氟原子。

上述化合物的制备方法为：取中间体硫醚酮(VI-10)(2.0g,3.6mmol)溶于冰乙酸(15mL) 中，加入氨基硫脲(0.40g,4.3mmol)，混合物回流反应12h。减压蒸除溶剂，加水(30mL)溶 解，加入0.1g的活性炭在60℃搅拌脱色1h。滤液用浓氨水调至中性，滤集产生的固体，水 洗、干燥、无水乙醇重结晶，得淡黄色结晶物(I-10)，产率54.7％，m.p.221～223℃。¹H  NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:1.48(t,J＝7.2Hz,3H,CH₃),2.34(s,3H,CH₃),3.18-3.62(m,8H, piperazine-H),4.68-4.63(OCH₂CHN),4.80(s,2H,SCH₂),7.47(d,J＝8.2Hz,2H,Ph-H),7.78(d, J＝13.2Hz,1H,5-H),7.88(s,1H,NH),8.17(d,J＝8.2Hz,2H,Ph-H),8.35,8.38(2s,2H,NH₂),8.84 (s,1H,2-H),13.78(s,1H,triazole-NH)；MS(m/z):626[M+H]⁺,计算(C₂₈H₂₉F₂N₉O₂S₂): 625.73。

实施例11

(2-{5-[6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-喹啉-4(1H)-酮-3-基]-4H-[1,2,4]三唑-3-硫基}- 1-(对氯苯基)-乙酮缩氨基硫脲(I-11)，其化学结构式为：

即式I中的R为对氯原子。

上述化合物的制备方法为：取中间体硫醚酮(VI-11)(2.0g,3.5mmol)溶于冰乙酸(15mL) 中，加入氨基硫脲(0.38g,4.2mmol)，混合物回流反应12h。减压蒸除溶剂，加水(30mL)溶 解，加入0.1g的活性炭在60℃搅拌脱色1h。滤液用浓氨水调至中性，滤集产生的固体，水 洗、干燥、无水乙醇重结晶，得淡黄色结晶物(I-11)，产率63.8％，m.p.195～197℃。¹H  NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:1.46(t,J＝7.0Hz,3H,CH₃),2.32(s,3H,CH₃),3.15-3.66(m,8H, piperazine-H),4.66-4.58(OCH₂CHN),4.77(s,2H,SCH₂),7.54(d,J＝8.5Hz,2H,Ph-H),7.74(d, J＝13.2Hz,1H,5-H),7.85(s,1H,NH),8.14(d,J＝8.5Hz,2H,Ph-H),8.33,8.37(2s,2H,NH₂), 8.80(s,1H,2-H),13.77(s,1H,triazole-NH)；MS(m/z):642[M+H]⁺(³⁵Cl),计算 (C₂₈H₂₉ClFN₉O₂S₂):642.18。

实施例12

(2-{5-[6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(3,1-氧丙基)-喹啉-4(1H)-酮-3-基]-4H-[1,2,4]三唑-3-硫基}- 1-(对硝基-苯基)-乙酮缩氨基硫脲(I-12)，其化学结构式为：

即式I中的R为对硝基。

上述化合物的制备方法为：取中间体硫醚酮(VI-12)(2.0g,3.1mmol)溶于冰乙酸(15mL) 中，加入氨基硫脲(0.44g,4.8mmol)，混合物回流反应12h。减压蒸除溶剂，加水(30mL)溶 解，加入0.1g的活性炭在60℃搅拌脱色1h。滤液用浓氨水调至中性，滤集产生的固体，水 洗、干燥、无水乙醇重结晶，得淡黄色结晶物(I-12)，产率63.8％，m.p.237～239℃。¹H  NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:1.51(t,J＝7.0Hz,3H,CH₃),2.35(s,3H,CH₃),3.22-3.68(m,8H, piperazine-H),4.68-4.64(OCH₂CHN),4.82(s,2H,SCH₂),7.57(d,J＝8.5Hz,2H,Ph-H),7.83(d, J＝13.2Hz,1H,5-H),7.94(s,1H,NH),8.31(d,J＝8.5Hz,2H,Ph-H),8.37,8.43(2s,2H,NH₂),8.95 (s,1H,2-H),13.78(s,1H,triazole-NH)；MS(m/z):653[M+H]⁺,计算(C₂₈H₂₉FN₁₀O₄S₂):652.73。

试验例

一、实施例1-12提供的一种噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫醚酮缩氨基硫脲衍生物的体外抗肿 瘤活性测定

1、供试样品

以实施例1-12提供的12个新的一种噁嗪并喹啉酮C-3均三唑硫醚酮缩氨基硫脲衍生物及经 典抗肿瘤TOPO抑制剂10-羟基喜树碱(HC)和母体化合物氧氟沙星(LOF)为供试样品，共 14种，其中HC和LOF为对照品，实施例1-12样品为实验组；

实验癌细胞株分别为T24膀胱癌细胞、HGC823胃癌细胞、HGC27胃癌细胞、Panc-1胰腺 癌细胞、Capan-1胰腺癌细胞，癌细胞株均购买自中国科学院上海细胞库。正常细胞采用 VERO非洲绿猴肾细胞，购买于上海通派生物科技有限公司。

2、测定方法

测定方法的具体步骤为：

(1)首先将上述14种供试样品分别用二甲基亚砜(DMSO)溶解，配制成10mmol·L^-1浓 度的储备液，之后用质量百分比浓度为10％的小牛血清的RPMI-1640培养液将储备液稀释 成具有6个浓度梯度(1.0,10.0,20.0,30.0,40.0,50.0μmol·L^-1)的工作液；

(2)取对数生长期的T24膀胱癌细胞、HGC823胃癌细胞、HGC27胃癌细胞、Panc-1胰腺 癌细胞和Capan-1胰腺癌细胞及VERO细胞株，以每孔6000个细胞接种于96孔板，随后分 别加入上述14种样品的具有6个浓度梯度的工作液10μL，并设有无药对照孔(添加10μ L含DMSO的质量百分比浓度为10％的小牛血清的RPMI-1640培养液，且DMSO的体积不 超过总体积的5％)，48小时后每孔加入5g·L^–1MTT(噻唑蓝)水溶液10μL，继续培养4 小时后加入100μL质量百分比浓度为10％的十二烷基硫酸钠(SDS)水溶液培养24小 时，然后用酶标仪在570nm波长处测定OD值；

(3)按下述所示公式计算不同浓度的供试样品对癌细胞的抑制率，

癌细胞抑制率＝[(1－给药孔OD值)/无药对照孔OD值]×100％，

然后以供试样品的各浓度的对数值对各浓度对应的癌细胞抑制率作线性回归，得到剂量-效 应方程，从所得剂量-效应方程计算出各供试样品对实验癌细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)；每个 数据平行测定五次，求其平均值，结果见表1所示。

表1各供试样品的抗肿瘤活性(IC₅₀)

从表1可以看出，实施例1-12提供的化合物对实验5种癌细胞的抑制活性显著强于母体化 合物氧氟沙星的活性，尤其是大部分化合物的活性强于或相当于对照羟喜树碱的活性。更有 意义的是，实施例1-12提供的化合物对VERO细胞显示出较低的毒性，具有成药性的潜 力。因此，按照药物开发的一般途径(先进行常规的抗肿瘤体外筛选，然后进行针对性的研 究)，本发明的化合物具有强的抗肿瘤活性和较低的毒性，可通过与人体可接受的酸成盐或 与药用载体混合制备抗肿瘤药物。