醉鱼草苷Ⅳ在制备治疗非酒精性脂肪肝和胰岛素抵抗的药物中的应用

摘要

本发明公开了醉鱼草苷Ⅳ在制备治疗非酒精性脂肪肝和胰岛素抵抗的药物中的应用。试验表明，应用醉鱼草苷Ⅳ对非酒精性脂肪肝具有显著的改善作用，其机制与抗氧化应激效应及改善胰岛素抵抗相关，故醉鱼草苷Ⅳ还可用于治疗其他胰岛素抵抗相关疾病。

说明书

技术领域

本发明属于制药技术领域，涉及醉鱼草苷Ⅳ的医药用途，尤其是醉鱼草苷Ⅳ在制备治疗非酒精性脂肪肝和胰岛素抵抗的药物中的应用。

背景技术

随着人们物质生活的不断提高和饮食结构的改变，非酒精性脂肪肝病(Non-alcoholicfatty liver disease,NAFLD)的发病率也逐年升高，已成为仅次于病毒性肝炎的常见肝病。目前，NAFLD的发病机制非常复杂，迄今尚未完全研究清楚。一般认为，NAFLD疾病的发生和发展可以归纳为“两次打击”或“多次打击”的分子机制模型。同时治疗药物也不甚完善，临床仍处于探索阶段。因此，研究NAFLD的药物治疗具有重要意义。

醉鱼草苷Ⅳ(BuddlejasaponinⅣ)从唇形科风轮菜属植物细风轮菜(Clinopodiumgracile(Benth.)Matsum.)中分离得到，为Δ¹¹-13，28-环氧-齐墩果烯型三萜皂苷。经检索查阅国内外文献，涉及醉鱼草苷IV医药应用的有：韩国学者研究了醉鱼草苷Ⅳ在抑制NO、PGE₂和TNF-α因子方面具有显著抗炎效果(Biol Pharm Bull，2005，28(9)：1668-1671)，其机制为通过阻塞NF-kB活化而抑制iNOS、COX-2、IL-6等炎症因子的表达而具有较好的抗炎效果，同时其也被发现在醋酸扭体、热板致痛有明显镇痛作用(Bri JPharm，2006，148(2)：216-225)；并且研究表明醉鱼草苷Ⅳ也具有显著抑制口腔癌细胞的作用(J Cancer Prev.，2013，18(4)：330-336；Phytother Res，2011，25(10)：1503-1510)。此外，该团队也采用poloxamer-407、Triton WR-1339、高胆固醇饮食等作为诱导剂，醉鱼草苷Ⅳ具有显著的抑制高胆固醇血症和高脂血症，其效果与普罗布考相当(J Ethno，2007，112(2)：255-261)。发明人早期的研究也发现了醉鱼草苷Ⅳ具有体外抗肝纤维化活性(中国实验方剂学杂志，2011，17(20)：203-206)和体内对H₂₂肝癌小鼠具有抑瘤作用(广西植物，2014，34(5)：710-713)。总体来说，对于醉鱼草苷IV的药理活性研究较少。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供醉鱼草苷Ⅳ在制备治疗非酒精性脂肪肝和胰岛素抵抗的药物中的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：醉鱼草苷Ⅳ在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用。

治疗非酒精性脂肪肝药物，含治疗有效量的醉鱼草苷Ⅳ和药用辅料。

醉鱼草苷Ⅳ在制备治疗胰岛素抵抗药物中的应用。

胰岛素抵抗为高脂肪、高蛋白饮食导致的胰岛素抵抗症状或2型糖尿病引起的胰岛素抵抗症状。

治疗胰岛素抵抗药物，含治疗有效量的醉鱼草苷Ⅳ和药用辅料。

上述药物为口服制剂。

在对醉鱼草苷Ⅳ进行长期深入研究的过程中，发明人首次发现醉鱼草苷Ⅳ对非酒精性脂肪肝等相关疾病有较好的治疗效果，具有改善胰岛素敏感性和抗氧化应激作用。为证实其药理作用和探究其作用机制，发明人采用高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝模型，以辛伐他汀作为阳性对照药，给予醉鱼草苷Ⅳ灌胃8周后，观察醉鱼草苷Ⅳ对NAFLD的影响。结果显示，应用醉鱼草苷Ⅳ对非酒精性脂肪肝具有显著的改善作用，具体表现为明显改善了高脂诱导的肝组织病理学改变，减轻了肝细胞的损伤，降低了肝内脂质蓄积，抑制了肝内氧化应激反应，其机制与抗氧化应激效应及改善胰岛素抵抗相关，故醉鱼草苷Ⅳ还可用于治疗其他胰岛素抵抗相关疾病，如高脂肪、高蛋白饮食导致的胰岛素抵抗症状或2型糖尿病引起的胰岛素抵抗症状。

附图说明

图1是醉鱼草苷Ⅳ对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏组织病理影响的HE染色图，图中：A:空白对照组；B：模型对照组；C：阳性对照组；D：醉鱼草苷Ⅳ低剂量组；E醉鱼草苷Ⅳ高剂量组。

具体实施方式

1、动物模型的建立

昆明种小鼠雄性，SPF级，体重18-22g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。生产许可证号：SCXK(湘)2009-0004。

将小鼠随机分为两组，对照组小鼠(10只)喂饲普通饲料，其余小鼠(45只)喂饲高脂饲料(66.9％普通饲料粉、10％猪油、10％奶粉、10％蔗糖、2％胆固醇、1％胆酸盐、0.1％丙基硫氧嘧啶)，自由摄食、饮水。连续喂养8周后，与对照组比较，造模肝脏指数明显升高，肝组织病理切片观察可见肝细胞脂肪变性。

2、分组与给药

将造模小鼠40只随机分为4组，每组10只，分别为模型组、辛伐他汀阳性对照组(剂量浓度为5mg/kg，用5‰的CMC水溶液溶解)、醉鱼草苷Ⅳ组(高、低剂量浓度为30mg/kg和15mg/kg，用蒸馏水溶解)。对照组和模型组灌胃蒸馏水，阳性对照组和醉鱼草苷Ⅳ组，给药体积0.01mL/g，连续给药8周。每天记录小鼠体质量。所有小鼠在末次给药后，禁食不禁水12h，眼球取血，3500r/min离心10min，血清于-20℃低温保存，用于检测各项生化指标。小鼠脱颈处死，剖腹，迅速取肝脏，称质量，剪下一片较大肝叶置4％福尔马林固定，HE染色，切片，显微镜观察(×400)病理变化。计算肝脏指数和胰岛素抵抗指数，计算公式分别为：肝脏指数＝肝脏湿质量/体质量醉鱼草苷Ⅳ×100；胰岛素抵抗指数IRI＝FBG×INS/22.5。

3、数据处理

采用SPSS19.0软件对数据进行统计学描述和分析，结果以表示，采用单因素方差分析进行多组间均数比较。

4、结果分析

4.1各组小鼠体重、肝脏指数比较(见表1)

由于模型组和空白组小鼠的喂食采用自由取食模式，同时小鼠实验时间过长，导致小鼠体重已经增至最高点，故各组小鼠体重无明显差异。但模型组和给药组给予高脂饲料，肝脏重量明显增大；与模型组比较，醉鱼草苷Ⅳ高剂量组小鼠肝重、肝指数均明显降低(P<0.05)；醉鱼草苷Ⅳ低剂量组小鼠肝重明显降低(P<0.05)，而阳性药辛伐他汀组无显著差异。

表1 醉鱼草苷Ⅳ对非酒精性脂肪肝小鼠体重、肝重和肝脏指数指标的影响(n＝10，)

注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较：#P＜0.05##P＜0.01，下同。

4.2醉鱼草苷Ⅳ对非酒精性脂肪肝小鼠血脂水平的影响(见表2)

与正常组比较，模型组小鼠TC和LDL水平明显升高(P＜0.01)，HDL水平明显降低(P＜0.01)，证明高脂饲料诱导非酒精性脂肪肝小鼠造模成功。与模型组比较，辛伐他汀组和醉鱼草苷Ⅳ高剂量组TC和LDL水平明显降低(P＜0.01)，HDL水平明显升高(P＜0.05)，醉鱼草苷Ⅳ的降脂效果与辛伐他汀相当。与正常组比较，各组小鼠的TG水平无显著差异。

表2 醉鱼草苷Ⅳ对非酒精性脂肪肝小鼠血脂的影响(n＝10，)

4.3醉鱼草苷Ⅳ对非酒精性脂肪肝小鼠肝匀浆中TC、TG、SOD、MDA和NEFA水平的影响(见表3)

与正常组比较，模型组小鼠肝匀浆组织中TC和TG水平均明显升高(P＜0.01)，模型组小鼠肝匀浆的有害过氧化因子MDA的血清水平升高(P＜0.05)，而抗氧化的保护性因子T-SOD的水平降低(P＜0.01)，NEFA的生成水平升高(P＜0.01)，证明高脂诱导脂肪肝小鼠模型是成功的。与模型组比较，给药治疗组均具有显著降低肝组织的TC和TG水平(P＜0.01)；醉鱼草苷Ⅳ高剂量组可以有效降低有害过氧化因子MDA的生成水平(P＜0.05)，提高抗氧化保护性因子T-SOD生成水平(P＜0.01)，同时也显著降低了肝脏NEFA含量(P＜0.01)；而醉鱼草苷Ⅳ低剂量较模型组亦显著提高的血清T-SOD生成水平(P＜0.01)。

表3 醉鱼草苷Ⅳ对非酒精性脂肪肝小鼠肝匀浆TC、TG、SOD、MDA和NEFA水平的影响(n＝10，)

4.4醉鱼草苷Ⅳ对非酒精性脂肪肝小鼠血糖和胰岛素含量以及IRI的影响(见表4)

与正常小鼠比较，模型组小鼠的血糖、胰岛素含量和IRI均明显升高(P<0.01或P<0.05)，说明高脂诱导脂肪肝小鼠模型是成功的；与模型组比较，醉鱼草苷Ⅳ高、低剂量给药组均能拮抗高胰岛素血症(P<0.01)和IRI升高(P<0.01)；辛伐他汀组均有降低胰岛素水平和抑制IRI升高的趋势，但无统计学差异。

表4 醉鱼草苷Ⅳ对非酒精性脂肪肝小鼠血糖和胰岛素含量以及IRI的影响(n＝10，)

4.5肝组织病理学观察(见图1)

HE染色光镜观察正常组：肝细胞肝小叶结构清晰，肝细胞以中央静脉为中心，向周围放射状分布，胞浆红染均匀一致，肝窦清晰可见，肝索排列整齐。模型组：大量肝细胞肿胀，气球样变，多数肝细胞内可见大小不等的脂滴空泡，肝索排列紊乱，汇管区伴有炎细胞浸润以及部分点状肝细胞坏死。阳性对照组：肝脏的损伤程度比模型组减轻，水样变性和脂肪变性减少，可见脂肪滴空泡。醉鱼草苷Ⅳ低剂量组：肝脏的损伤程度比模型组明显减轻，肝细胞脂肪变性显著减少，仅出现少量脂肪滴空泡，汇管区无明显炎细胞浸润。醉鱼草苷Ⅳ高剂量组：肝小叶较清晰，未见明显的气球样变性和脂肪变性。

5、结论

应用醉鱼草苷Ⅳ对非酒精性脂肪肝具有显著的改善作用，具体表现为明显改善了高脂诱导的肝组织病理学改变，减轻了肝细胞的损伤，降低了肝内脂质蓄积，抑制了肝内氧化应激反应，其机制与抗氧化应激效应及改善胰岛素抵抗相关，故醉鱼草苷Ⅳ还可用于治疗其他胰岛素抵抗相关疾病，如高脂肪、高蛋白饮食导致的胰岛素抵抗症状或2型糖尿病引起的胰岛素抵抗症状。