一种莱竹草组培快繁和工厂化育苗的方法

摘要

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种莱竹草组培快繁和工厂化育苗的方法。该方法包括以下步骤：莱竹草的预处理、外殖体选择及处理、愈伤组织诱导、增殖分化、生根培养、移栽炼苗、工厂化育苗。通过莱竹草预处理、外殖体选择及处理，筛选出愈伤组织、增殖分化、生根等培养基配方，建立再生体系，并采取适宜炼苗措施和工厂化育苗条件控制，实现莱竹草的组培快繁和工厂化育苗，愈伤组织诱导率为92-98%，增殖系数5.6，生根率98%，移栽炼苗成活率99%，解决了莱竹草不能通过种子繁殖、扦插繁殖力低的难题。

说明书

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种莱竹草组培快繁和工厂化育苗的方法。

背景技术

莱竹作为一种菌草从莱索托引进，隶属于芦竹属。莱索托位于非洲东南部，海拔高1400-3482m，是世界上平均海拔最高的国家，属大陆性亚热带气候，平均年降水量约780mm，常年最低温度-10℃，极端最低温度可达-18℃。莱竹在莱索托全境均有分布，能正常越冬，耐旱、耐涝、耐瘠薄。莱竹具鞭状根，根系发达，株高350-620cm，茎中空，木质化程度高，因其耐寒，较耐盐碱，且根系发达，适合作为在水土流失区、荒漠、沙漠、盐碱地等生态脆弱区进行生态治理和发展菌草业的一种菌草。但因其没有种子、用茎节扦插繁殖力极低，因此需通过组培快繁方式和工厂化育苗技术培育出生长一致、质量高的草苗。外殖体选择和预处理，最佳培养基配方筛选，高效再生体系建立和工厂化育苗生长条件控制是莱竹组培快繁和工厂化育苗的关键。

发明内容

本发明的目的在于针对莱竹草不能通过种子繁殖、扦插繁殖力低的难题，提供一种莱竹草组培快繁和工厂化育苗的方法。该方法使莱竹草的育苗不受地区、气候限制，能在短期内提供大量规格一致的优质种苗，用于水土流失区、荒漠、沙漠、盐碱地等生态脆弱区的生态治理和菌草业的发展。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种莱竹草组培快繁和工厂化育苗的方法，包括以下步骤：莱竹草的预处理、外殖体选择及处理、愈伤组织诱导、增殖分化、生根培养、移栽炼苗、工厂化育苗。

所述的莱竹草预处理为：对植株施用0.2wt%尿素溶液和0.2wt%磷酸二氢钾溶液，每隔1天施一次，共施3次。

所述的外殖体选择及处理为：选择预处理后的莱竹草茎节和茎段，洗净，用75%酒精擦拭表面，消毒45秒；再放入0.12%氯化汞溶液中消毒10min；最后用无菌水冲洗5遍，切除莱竹草茎节的两端、仅保留侧芽，侧芽、茎段再切成2mm的小段。

所述的愈伤组织诱导为：暗光培养，培养温度22~26℃，培养时间45天；培养基的配方为：1/2MS+2mg·L^-1BA+0.1mg·L^-12，4-D，附加3%蔗糖、0.6%琼脂，pH=6；侧芽诱导率98%，茎段诱导率92%。

所述的增殖分化具体方法为：光照16小时/天，光强2500 Lx，培养温度23~27℃，培养时间35天；培养基配方为：1/2MS+2mg·L^-1BA+0.2mg·L^-1NAA；增殖系数5.6。

所述的生根培养具体条件为：光照10小时/天，光强1500 Lx，培养温度21~25℃，培养时间15天；培养基配方1/2MS+2mg·L^-1BA+0.1mg·L^-1IAA；生根率98%。

所述的移栽炼苗具体方法为：将苗高为4-6cm完整植株的再生苗的根系冲洗干净，移至工厂化棚炼苗；所用的基质为菌草栽培平菇后的废菌料，加入30%的沙壤土和3%的石灰，拌匀后堆制发酵3-6个月；苗成活率99%。

工厂化育苗条件：移栽后7天内，晴天11：00-15:00遮阳，温度24~28℃，在10：00及16：00喷雾加湿，空气相对湿度控制在80-85%；移栽后8-20天，光照强度8000~10000Lx，温度25~29℃，9：00-18：00每隔3小时喷雾加湿，空气相对湿度控制在85-90%；移栽后21-40天，光照强度12000-18000 Lx，温度26~30℃，9：00-18：00每隔2小时喷雾加湿，空气相对湿度控制在85-95%，于移栽后第25天和第35天喷施0.2%尿素、0.2%磷酸二氢钾的叶面肥。

本发明的有益效果在于：

1）本发明通过莱竹草预处理、外殖体处理，筛选出愈伤组织、增殖分化、生根等培养基配方，建立再生体系，并采取适宜炼苗措施和工厂化育苗条件控制，实现了莱竹草的组培快繁和工厂化育苗，愈伤组织诱导率为92-98%，增殖系数5.6，生根率98%，移栽炼苗成活率99%；

2）本发明解决了莱竹草不能通过种子繁殖、扦插繁殖力低的难题，使莱竹草的育苗不受地区、气候限制，在短期内能提供大量规格一致的优质种苗，用于水土流失区、荒漠、沙漠、盐碱地等生态脆弱区的生态治理和菌草业的发展。

具体实施方式

本发明用下列实施例来进一步说明本发明，但本发明的保护范围并不限于下列实施例。

实施例1

1）植株选择：选择生长期1-2年、生长健壮的莱竹草植株；

2）预处理：对欲进行组培的植株进行壮株催芽6天，施用0.2%的尿素和0.2%的磷酸二氢钾溶液，每隔1天施一次，每次施用量为150ml/株，达到壮株催芽目的；

3）外殖体选择：选择进行过预处理的莱竹草茎节和茎段；

4）外殖体处理：洗净莱竹草茎节和茎段，用75%的酒精擦拭表面，消毒45 秒；再放入0.12%的氯化汞溶液中消毒10分钟，最后用无菌水冲洗5遍，切除莱竹草茎节两端、仅保留侧芽，侧芽、茎段切成2mm的小段；

5）愈伤组织诱导：培养基配方1/2MS+2mg·L^-1BA+0.1mg·L^-12，4-D，附加3%蔗糖、0.6%琼脂，pH=6，暗光培养，培养温度25℃，培养时间45天，侧芽诱导率98%，茎段诱导率92%；

6）增殖分化：培养基配方1/2MS+2mg·L^-1BA+0.2mg·L^-1NAA，光照16小时/天，光强2500 Lx，培养温度25℃，培养时间35天，增殖系数5.6；

7）生根培养：培养基配方1/2MS+2mg·L^-1BA+0.1mg·L^-1IAA，光照10小时/天，光强1500 Lx，培养温度23℃，培养时间15天，生根率98%；

8）移栽炼苗：将苗高4-6cm长成完整植株的再生苗的根系冲洗干净，移至工厂化棚炼苗，基质为菌草栽培平菇后的废菌料（参见公开号为CN 101121613A），加入30%的沙壤土和3%的石灰，拌匀后堆制发酵5个月，苗成活率99%；

9）工厂化育苗条件：移栽后7天内，晴天11：00-15:00遮阳，温度26℃，在10：00及16：00喷雾加湿，空气相对湿度80-85%；移栽后8-20天，光照强度 9000Lx，温度27℃，9：00-18：00每隔3小时喷雾加湿，空气相对湿度85-90%；移栽后21-40天，光照强度 15000Lx，温度28℃，9：00-18：00每隔2小时喷雾加湿，空气相对湿度85-95%，于移栽后第25天和第35天施0.2%尿素、0.2%磷酸二氢钾的叶面肥。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。