一种用于稳定同位素分析的鱼体肌肉的取样方法

摘要

本发明公开了一种用于稳定同位素分析的鱼体肌肉的取样方法，其步骤：1）设计肌肉取样管；2）准备鱼类样品：鱼体新鲜未腐败；3）取样工具：将取样用的不锈钢手术刀、镊子、肌肉取样管于酒精灯上预烧后待用；4）在鱼体上切口：用预烧过的手术刀在鱼体背鳍下方，脊椎上方；5）取肌肉：将预烧过的肌肉取样管的一端从一个切口插入，平行于鱼体向另一个切口方向旋转；6）清洗：用去离子水冲洗掉肌肉上面的血液；7）烘干；8）研磨：将烘干后的肌肉样品转入预烧过的陶瓷研钵中研磨成粉末，保存。方法易行，操作简便，能够有效的避免和减少了取样过程中由于样品采集装置和样品容器带来的污染，烘干后的鱼体肌肉样品能够长期保存并保存稳定。

说明书

技术领域

本发明涉及分析测试领域，更具体涉及一种用于稳定同位素分析的鱼体背部白肌肉的取样方法。

背景技术

稳定同位素技术是利用氢、氮、碳、氧、硫等轻元素的稳定同位素作为示踪原子，研究各种生物化学的过程和机理，以及分子的微观结构与性质之间关系的一项技术。该技术被广泛地运用于食品安全检测和生态系统能量流动，鱼类是我们食物的重要组成部分，也是水生态系统中重要的消费者，因此，水产品质量检测和水生态系统研究中经常要用稳定同位素技术分析鱼类肌肉样品。然而，鱼体肌肉样品处理和保存过程中的不稳定性，对同位素分析易产生干扰。因此，用于稳定同位素分析的鱼体肌肉样品取样必须方便快捷，能够最大程度低排除干扰，样品并能长时间保存并保持稳定。

由于稳定同位素分析所需样品量很少，样品收到污染的风险相对较高。样品采集装置和样品容器，以及样品间的交叉污染，都会使稳定同位素分析的可靠性降低，此外，稳定同位素分析的结果还会受到不同的采样和处理方法的干扰。因此，本方法通过选取无稳定同位素干扰或干扰极小的样品采集装置及样品容器，对样品采集装置和样品容器作排除干扰处理，并简化取样过程，可有效减少样品遭受干扰和污染的几率，样品经低温烘干处理后可长期保存并保持稳定，有利于提高鱼类稳定同位素分析中的可靠性。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种用于稳定同位素分析的鱼体肌肉的取样方法，方法易行，操作简便，能够有效的避免和减少了取样过程中由于样品采集装置和样品容器带来的污染，以及样品交叉污染和取样不规范给稳定同位素分析带来的干扰，经过该方法取样烘干后的鱼体肌肉样品能够长期保存并保存稳定。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

一种用于稳定同位素分析的鱼体肌肉的取样方法：其步骤是： 

1. 设计肌肉取样管：选取内径为8－10mm，外径为9－10mm的低碳奥氏体耐酸不锈钢管，截取11－12cm长度，一端截面与不锈钢管长径成90°，另一端与不锈钢管长径成30°，不锈钢管30°一端的切口用砂纸打磨锋利；

2. 准备鱼类样品：选取鱼类样本，要求鱼体新鲜未腐败。春季和秋季气温在10-18℃时鱼体死亡样品处理的时间不要超过2h，夏季样品如不冷冻应立即处理，冬季气温在-1-4℃时样品最好也要在鱼体死亡后48h之内处理。样本个体大小要保证能够取到足够的背部白肌肉，用清水清洗干净鱼体，晾干鱼体表面水分，测量全长、体重；

3. 准备取样工具：将取样用的不锈钢手术刀、镊子、肌肉取样管于酒精灯上预烧后待用，盛放肌肉样品的5ml容量的Eppendorf管在10%的氯化氢（HCl）中浸泡28－32分钟，用去离子水反复清洗3－4次后干燥，编好标签待用；

4. 在鱼体上切口：用预烧过的手术刀在鱼体背鳍下方，脊椎上方，靠近鱼体前方的部位垂直于脊椎作两个切口，切口长度不小于15mm，深度12-15mm，两切口间距离39－41mm；

5. 取肌肉：将预烧过的肌肉取样管30°的一端从一个切口插入，平行于鱼体向另一个切口方向缓慢旋转，肌肉取样管不要碰到鱼体骨骼，直至肌肉取样管的前端越过另一个切口，抽出肌肉取样管，用预烧过的镊子取出肌肉样品，不要取到背部白肌以外的鱼体组织，如骨骼、鳞片等；

6. 清洗：用去离子水将肌肉冲洗干净，晾干后转入编号的Eppendorf管；

7. 烘干：在58－62℃下烘干至恒重；

8. 研磨：将烘干后的肌肉样品转入预烧过的陶瓷研钵中研磨成粉末，过80目孔径筛网，转入Eppendorf管保存或送往测试。

相同实验条件下培养的鱼类，运用该取样方法获取和保存的鱼体肌肉样品，稳定同位素分析结果不同鱼体间的变异率远远小于现有国家标准（GB/T18932.1-2002）处理方法间的变异。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：

  本方法通过选取无稳定同位素干扰或干扰极小的样品采集装置及样品容器，对样品采集装置和样品容器作排除干扰处理，并简化了取样过程，可有效的减少了样品遭受干扰和污染的几率，样品经低温烘干处理后可长期保存并保持稳定，有利于提高鱼类稳定同位素分析中的可靠性。

相同实验条件下培养的异育银鲫，运用该取样方法获取和保存其中5条鱼的肌肉样品，用该方法获取样品稳定同位素分析结果的平均变异远远小于用现有国家标准（GB/T18932.1-2002）处理方法间的变异。其中5条鱼体间的碳稳定同位素的平均变异率0.13‰，低于食物网中不同营养级间碳同位素的平均差值0.4‰；5条鱼体间氮稳定同位素的平均变异率为0.97‰，低于不同营养级间氮稳定同位素的平均差值3.4‰。

附图说明

图1为一种鱼体背部白肌肉不锈钢取样管示意图。

其中，1为肌肉取样管内径，2为肌肉取样管外径，3为不锈钢管截面与管体长径30°夹角，4为不锈钢管截面与管体长径90°夹角，5为鱼体肌肉取样管（整体），6为鱼体肌肉取样管的长度。

图2为一种鱼体背部切口示意图。

其中7为切口长度，8为两切口间的距离，9为切口位置及方向部位。

具体实施方式

实施例1：

下面结合具体图示对本发明的进行详细说明：

一种用于稳定同位素分析的鱼体肌肉的取样方法：其步骤是： 

1. 设计肌肉取样管：选取肌肉取样管内径1为8或9或10mm，肌肉取样管外径2为9或9.5或10mm的低碳奥氏体耐酸不锈钢管，截取鱼体肌肉取样管的长度6为9或10或11cm的一段，不锈钢管截面一端与不锈钢管截面与管体长径90°4，另一端与不锈钢管截面与管体长径30°3，不锈钢管截面与管体长径30°3一端的切口用砂纸打磨锋利，形成鱼体肌肉取样管5；

2. 准备鱼类样品：选取鱼类样本，要求鱼体新鲜未腐败，个体大小保证能够取到足够的背部白肌肉，用清水清洗干净鱼体，晾干鱼体表面水分，测量全长、体重；

3. 准备取样工具：将取样用的不锈钢手术刀、镊子、肌肉取样管于酒精灯上预烧后待用，盛放肌肉样品的5ml容量的Eppendorf管在10%的HCl中浸泡28或29或30或31或32分钟，用去离子水反复清洗3或4次后干燥，编好标签待用；

4. 在鱼体上切口：用预烧过的手术刀在鱼体背鳍下方，脊椎上方，靠近鱼体前方的切口位置及方向部位9垂直于脊椎作两个切口，切口长度7不小于15mm，深度12或13或14或15mm，两切口间距离8为40mm；

5. 取肌肉：将预烧过的鱼体肌肉取样管5截面倾斜的一端从一个切口插入，平行于鱼体向另一个切口方向缓慢旋转，鱼体肌肉取样管5不要碰到鱼体骨骼，直至鱼体肌肉取样管5的前端越过另一个切口，抽出肌肉取样管，用预烧过的镊子取出肌肉样品，不要取到背部白肌以外的其它鱼体组织，如骨骼、鳞片等；

6. 清洗：用去离子水将肌肉冲洗干净，晾干后转入编号的Eppendorf管；

7. 烘干：在58或59或60或61或62℃下烘干至恒重；

8. 研磨：将烘干后的肌肉样品转入预烧过的陶瓷研钵中研磨成粉末，过80目孔径筛网，转入Eppendorf管保存或送往测试。