青虾卵黄蛋白原Vg基因、编码蛋白及应用

摘要

本发明公开一种青虾卵黄蛋白原Vg基因、编码蛋白及应用。利用本发明提供的引物组从青虾肝胰腺中克隆到了一种Vg基因全长cDNA序列，该基因dsRNA注入雌性青虾围心腔后可以沉默卵巢和肝脏内的卵黄蛋白原基因的表达，使青虾卵巢发育显著延缓。本发明为解决青虾性早熟现象，培育优良品种提供新的思路和有效手段。

说明书

  

技术领域

    本发明公开一种青虾卵黄蛋白原Vg基因、编码蛋白及应用，涉及生物技术和发育调控领域，具体涉及青虾卵黄蛋白原基因的克隆，还涉及利用该基因dsRNA来调控青虾卵巢的发育速度。 

  

背景技术

    青虾，学名日本沼虾(Macrobrachium nipponense)，俗称河虾，隶属十足目（Decapoda）、长臂虾科（Palaemonidae）、沼虾属（Macrobrachium），广泛分布于我国各地水域，生长快、适应性强、养殖经济效益高，是我国重要的淡水养殖虾类。据2012年《中国渔业年鉴》记载，全国养殖青虾年产量超过23万吨，年产值超过150亿元，是目前淡水养殖业中最有发展前途的品种之一。近年来,随着其自然资源的锐减和养殖规模的扩大,养殖的青虾出现了生产性能下降和种质资源退化的情况,其中虾个体小型化和“性早熟”的现象尤为突出。“性早熟”即雌、雄性个体性腺提前发育，在生产中小虾性腺过早成熟，产卵导致个体变小、池塘养殖密度过大、生长规格不齐、近亲交配等一系列问题，最终商品虾的规格降低,繁殖性能下降,严重影响了青虾的品质和产值，成为青虾养殖业发展的一大瓶颈。为实现青虾产业的可持续发展，寻找解决雌性青虾“性早熟”的解决方法变得刻不容缓。 

    卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vg)是一种普遍存在于卵生非哺乳动物血液中的蛋白,是几乎所有卵生动物中卵黄蛋白(vitellin,Vn)的前体。卵黄蛋白是所有卵生的脊椎动物和无脊椎动物雌性卵黄的主要成分，在卵黄发生期迅速积累。它被认为是由卵巢外组织合成，分泌释放到血液中，通过血液运输到卵母细胞，以卵黄蛋白的形式积累和储存，是胚胎和幼体早期发育主要的营养来源。卵黄蛋白和卵黄蛋白原含有许多脂肪成分,可为正在发育的胚胎提供氨基酸、脂肪、碳水化合物、维生素、磷和硫等营养和功能性物质。 

    RNAi（RNA interference, RNAi）是一种广泛存在于真核生物中的高效的序列特异性基因剔除技术。RNAi是由不同来源和长度的双链 RNA（double-stranded RNA, dsRNA）前体所诱发的，可以有效地抑制靶基因RNA 的翻译。近年开始在甲壳动物基因功能研究中使用。目前，甲壳类关于Vg基因的沉默表达尚未见报道。 

  

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种青虾卵黄蛋白原Vg基因、编码蛋白及应用，该基因用于调控雌性青虾卵巢发育速度，为解决青虾性早熟提供理论基础。 

技术方案： 

一种青虾卵黄蛋白原，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

编码上述青虾卵黄蛋白原的青虾卵黄蛋白原Vg基因。 

所述的青虾卵黄蛋白原Vg基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1中的第35位～第7645位所示。 

所述的青虾卵黄蛋白原Vg基因所合成的dsRNA。 

所述的青虾卵黄蛋白原Vg基因在延缓雌性青虾卵巢发育中的应用。 

所述的应用，包括如下步骤：对青虾DNA样本中的青虾卵黄蛋白原Vg基因进行PCR扩增，将扩增产物进行体外转录合成dsRNA，再将dsRNA以注射到青虾的围心腔内。 

所述的应用，PCR扩增中使用的上下游引物的序列如SEQ ID NO.3～4所示。 

所述的应用，注射步骤中的注射剂量是4μg/g。 

  

有益效果

    本发明提供的青虾卵黄蛋白原Vg基因可以制备得到dsRNA，通过注射的方式注入青虾围心腔内，可以有效地延缓青虾卵巢成熟的时间，证明该基因的表达对雌性卵巢发育有非常重要的影响。

  

附图说明

图1是外源性注射Vg-dsRNA对雌性青虾卵巢GSI性腺发育指数影响的示意图。 

注： 1d，3d, 5d, 7d, 9d, 11d, 13d, 15d，17d分别为注射后1，3，5，7，9，13，15和17天(样本量N≥ 3)。 

图2是外源性注射Vg-dsRNA对雌性青虾内源Vg基因的表达量影响的示意图。 

注： 1d, 3d, 5d, 7d, 9d,11d, 13d, 15d，17d分别为注射后1，3，5，7，9，13，15和17天(样本量N≥ 3)。对照组注射相同剂量的DEPC水。 

图3是在肝脏中外源性注射Vg-dsRNA对雌性青虾内源Vg基因的表达量的影响的示意图。 

注： 1d，3d, 5d, 7d, 9d, 11d, 13d, 15d，17d分别为注射后1，3，5，7，9，13，15和17天(样本量N≥3)。对照组注射相同剂量的DEPC水。 

  

具体实施方式

下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细说明。但本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件(例如参考J. 萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社)或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。 

本文使用的近似语在整个说明书和权利要求书中可用于修饰任何数量表述，其可在不导致其相关的基本功能发生变化的条件下准许进行改变。因此，由诸如“约”的术语修饰的值并不局限于所指定的精确值。在至少一些情况下，近似语可与用于测量该值的仪器的精度相对应。除非上下文或语句中另有指出，否则范围界限可以进行组合和/或互换，并且这种范围被确定为且包括本文中所包括的所有子范围。除了在操作实施例中或其他地方中指明之外，说明书和权利要求书中所使用的所有表示成分的量、反应条件等等的数字或表达在所有情况下都应被理解为受到词语“约”的修饰。 

本研究的目的就是通过用Vg-dsRNA 注入青虾体内，研究该基因在dsRNA 刺激下的表达变化以及对卵巢发育的影响，阐释 dsRNA 对青虾卵巢发育的调节机制，为利用Vg-dsRNA干扰技术抗性早熟的实用化提供新思路和参考依据。 

  

实施例1：青虾Vg基因全长cDNA的获得

总RNA提取：选取3～4支成熟雌虾的肝脏，迅速放入盛有液氮的预冷研钵中，迅速的研磨。总RNA的提取使用Takara公司的RNAiso Plus提取试剂结合传统的酚仿抽提法进行，提取方法参照使用说明书。经过琼脂糖凝胶电泳检测RNA的质量，分光光度计分析该样品OD260/280 比值在1.8～2.0 之间，并测定RNA的浓度。

cDNA第一链合成：参照Takara M-MLV反转录试剂盒进行第一链cDNA的合成。 

青虾Vg基因全长cDNA序列的克隆： 

根据已获得的Vg基因全长cDNA序列(罗氏沼虾Macrobrachium rosenbergii, BAB69831；日本仿长额虾Pandalopsis japonica, ACU51164; 高背长额虾Pandalus hypsinotus BAD11098;)的编码区进行比对，依据比对结果，在保守区域设计引物，利用引物组一（SEQ ID NO:5～SEQ ID NO:14） 和上述反转录的cDNA为模板进行中间片段的克隆。

更具体地，上述的引物组的组成如下： 

正向引物VGAF1的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

正向引物VGBF2的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

正向引物VGCF3的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；

正向引物VGDF4的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；

正向引物VGEF5的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示;

反向引物VGAR1的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；

反向引物VGBR2的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示；

反向引物VGCR3的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；

反向引物VGDR4的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；

反向引物VGER5的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示。

进行PCR扩增反应体系如下： 

PCR反应程序为：94℃预变性3min，然后进入下列循环：94℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 30s，30个循环，最后72℃延伸10min，4℃保存。1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。

利用上海生工生物工程有限公司(Sangon)的柱式DNA 胶回收试剂盒进行目的片段的回收，将产物连接到pMD18-T载体（Takara），并转化入大肠杆菌DH5α，进行蓝白斑筛选，挑取单克隆白斑扩增培养后，将插入目的片段的阳性克隆送至上海铂尚生物公司进行测序分析。将得到的几段产物进行拼接，得到青虾Vg基因的中间片段。 

根据Vg基因cDNA中间片段序列，又设计特异性正向引物3VGF1（SEQ ID NO.15）、3VGF2（SEQ ID NO.16）；和反向引物5VGR1（SEQ ID NO.17）、5VGR2（SEQ ID NO.18）分别进行cDNA 3’和5’快速扩增，操作步骤按TaKaRa 3’-RACE和TaKaRa5’-RACE试剂盒说明书进行。按上述克隆的步骤进行随后的切胶、回收、转化、克隆及测序最终得到Vg 基因的3’和5’端的序列。将中间片段和3’和5’端的测序结果进行比对，拼接得到青虾Vg基因全长cDNA序列。经过序列比对显示，青虾Vg基因和其它甲壳类的同源性在70%以上。其核苷酸序列如SEQ ID NO.1中的第35位～第7645位所示（第1～34和第7646～7800位是3’和5’端的非编码区），其编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。 

  

实施例2：青虾Vg基因dsRNA的合成

以SEQ ID NO.1核苷酸序列为依据，在开放阅读框以内采用NCBI在线dsRNA引物设计软件（http://www.flyrnai.org/cgi-bin/RNAi_find_primers.pl）设计制备双链RNA 的引物(SEQ ID NO.3- SEQ ID NO.4)，根据Transcript AidTM T7 High Yield Transcription kit (Fermentas, Inc., USA)试剂盒说明进行体外转录合成dsRNA。将制备好的dsRNA溶解在DEPC 水中，测定其浓度并在1.5%琼脂糖凝胶上检测其纯度。将上述dsRNA溶液以4μg/g的剂量注射到青虾的围心腔内。对照组注射相同体积的DEPC 水，实验所用的雌虾都处于卵巢发育初期（刚排完卵）。在注射后的第1、3、5、7、9、11、13、15和17天收集样品(N≥3)，并将组织保存在RNA 保存液中（Takara）。最后提取各样品的总RNA并反转成cDNA，采用Real Time PCR检测Vg基因相对于对照组的表达量变化，以此来计算Vg基因干扰的效率。性腺指数是评价动物性腺发育状况的重要指标。根据公式GSI=性腺湿重/体重湿重×100%，计算两组雌性青虾的GSI性腺发育指数（Gonad Somatic Index，GSI)。

  

实验结果

图1所示，为对照组的GSI性腺发育指数和注射组的性腺发育指数对比的示意图，可以看出Vg-dsRNA 注射显著延缓了青虾卵巢的发育在第11天对照组卵巢发育已处于成熟期实验组仍处于卵黄积累时期。

如图2所示，在卵巢中，相对于对照组，注射后第1天，青虾Vg基因的表达量显著下降了76%，在第5天已经下降了92%，随着对照组卵巢的发育，Vg 基因在卵巢中呈现了先升高后降低的表达规律。然而在对照组这一规律明显被延后，在第15天时处理组处于卵黄发生的高峰期，而对照组卵巢已完成一轮发育周期，已经排空。 

如图3所示，在肝脏中，相对于对照组，注射后第1天，青虾Vg基因的表达量显著下降了74%，在第5天已经下降了97%，随着对照组卵巢的发育，Vg 基因在肝脏中同样呈现了先升高后降低的表达规律。根据表达规律来看对照组的发育明显被延缓。结果证明外源注射Vg-dsRNA ,可以有效地延缓性腺发育，这一研究结果为解决青虾性早熟这一难题提供了理论基础，也为后续将该方法应用到生产实践提供指导意义。 

                         SEQUENCE LISTING

 <110>  中国水产科学研究院淡水渔业研究中心

 <120>  青虾卵黄蛋白原Vg基因、编码蛋白及应用

 <130>  无

 <160>  18   

 <170>  PatentIn version 3.5

 <210>  1

<211>  7800

<212>  DNA

<213>  vg

 <400>  1

aaagtagttg tggtgacaac ctcctcctgc caccatgacc tccttggctc ttctcctcct       60

 tgccatagct tccttttcac cagctccttg gccatcagga actaacttat gctcaaagga      120

 atgcccagtt gccggatcgc ccaaactctt ctacgcccct gaaaagactt atgtttactc      180

 atacactggc aagtcccgga tccacctgaa ggatgttgaa ggggccaacg tagacatgga      240

 atggaactcc caggtcgagc tttcgtggct ctccccctgt gatatggcca tcaccatgaa      300

 gaatccttcc attggaggtg gttcaggttc tgctgaagcc aggttcctcg agagatatcc      360

 cttagtggtg tctatcattg acggacgggt gaaagcagcc tgtggccatc ctgatgatga      420

 cacttggtct atcaacttga aaaagggcat tgcatcagct ttccagaaca ccttaccctc      480

 caactccacc atcaactcag gccttaactt cacagagact gatataattg gtaactgttc      540

 aactgtgtat gaagtgcaac atgagggaga aaaggttgtt gtgaccaagt tgaaaaacca      600

 tcgcttctgc caagatcatt acgctaaccg agctgagaca ccaaaagctt ggatgaaggc      660

 tcctttgcct atggaagaat cctactctga atgcaaacag gaaattacaa atggtattta      720

 caccagcatt acttgtaagg acaagaatgt cataaaacca gcctatggtt cttacaagta      780

 cgttgaagcc caccaagaat cagttttacg attccagtca gaaacagacc agattcctcc      840

 ttcagtttct cagctgccta gccgcttcat caggaagact cttcgttatg accagcacac      900

 actaaagaag gatccatcaa tggcggccaa acttgacgaa atgctcaaac aagtatgcga      960

 aaaggtgaag cacggagtcc acgaacatgc agcatctcaa tttgcccaag ccttacattt     1020

 cttgcgccgt gtacctgaag aggcaatccc acaaaccctc gagaagatcc gtggtggcca     1080

 aatctgtgaa caacgtcaaa agatggagag catgttctta gacggattag cttttgttta     1140

 cgaatctgga gcagtcaagg ttatggtgca agagttgatt tctggaaaag ctactggagg     1200

 tcgagctgct ctttatgctg cttcaatgta cttcatgccc cgaccatgca ttcactccat     1260

 tgaagccttg aaacctctgt ttgaaaattt ccagcgtttc ccaaggacca ctttagctgg     1320

 

tgccaccatg gtccatactt actgcagaca aaatcctaaa tgccaagaaa aagctcctgt     1380

 cagacagtta gctgagactt taagcagcaa agtaggacaa atgtgcactg cctcaccaaa     1440

 tgaagaaact agagagcatg ctcttgctct actcaagtcc cttggcaata tgggggtgat     1500

 gaattctgaa atagccagac caatcttgca gtgcatagaa aacccagaag ctgataaagg     1560

 catccgtagg gcagccaccc agaccttcag gaacgttcac tgtcatcaag aaatccaccc     1620

 aataatgaaa cagctcatta acgttgctct tgatcataga aagagaaccg aagttcgaat     1680

 tggatcatat cttgcagcaa ttaaatgtgc taaacatgaa gaactgcaca agattactga     1740

 aaaaatagct aaggaagaaa atacacaagt gagaagtttc atcttaagcc atctgcacaa     1800

 tatcaaggaa tcaactgtcc cttacaaggc aaatctcaaa tctaggcttg aaagtatagt     1860

 ccttccctct aacttcacca aagactggcg aaagcactcc cgcaatatcg acctgtctta     1920

 ctatgcacca acctttggcg taggtgctgg tgtggagtct aatgtcattt atgctccagg     1980

 atcttatgtt cctcgctcgg ttaacctaaa tctcacagca gcccttggtg caacaccctt     2040

 caatattgga gagattggag cacgttttga aggactcgag acaattatag aagaactttt     2100

 cgggccacac agttacttca agagaactcc agcaagacag atctgggaag atctcaaaga     2160

 gacacttagc aagataagcg aacgtttaga aggctcattc aggcagagaa ggtctattga     2220

 cttgtcccaa atctctcatc tctttgacaa actatatggc aacagacaca tgcagaaagc     2280

 tgatatttat gctcggatta ataatcaaga aatggccttt ggatcttggg aaggaaatat     2340

 gaaaaatatc aagatcgacg aacttatcaa taacttattt gataagtttg acaacgtgat     2400

 taacagagca gcaaccacca acatcgatac agtaagaaca gctcagtttt acatgaacaa     2460

 tcatttgcct acaattcaag gattacccat caaaattaaa ctggagggaa cagctgtggc     2520

 cggaattaag atggaaactc acgtcagagg actcacctct ggaactcctg gtgttgtcaa     2580

 gttcttgcca agtttatcaa ctcaaataga tgcatttata ggttatgact gtcacattgt     2640

 tcgtgctgga attaagatga agaatcacat tgccacaaac tatggagcaa gcattaatgc     2700

 taaatacaca tctggtcaag gctttgaagt agaattagaa atgccagaga aaatggagtt     2760

 gctgaaagca cagagtgaaa cttaccttat gaagagagta aagggtcaac aggagaccaa     2820

 agttcatcct tcctctgtac agagcacacg attccagact cagtcttgtt taacgaaaat     2880

 ggaaccagtt cttggactca aactctgcta cgacgtcaac atgccaaaca ttttccgtag     2940

 tcaaggtctt ccacttggtc ctcctgctat tttcaaggtc gtcttagaga aggcggaatc     3000

 tggaatgaga ggattccttg taaagggcag agaagaacat gttggaggaa agaaggtgat     3060

 taaagtcgag ctagaaactc caggaacctc ctcacctaag aaagctactg ccatcattac     3120

 atcagctaat gaaggagagg aaaagaaaat atctgcaaca tttgaatgtg aacgtttggg     3180

 aggaatcagc atccatatga tgagaaagtg gactcagtca gaaaaacaag tcgagatgat     3240

 tgcctatttc agtgaaagca gacagtacaa tcctagtacg aagggcatgg aagctaaatt     3300

 cttatggaat ggcgaaggag aagaggttaa attggatatg gcattgaata cattagctgc     3360

 catcagagaa tgggtacaac tcaactttga agttagcgga gatctgaggt atcatgaatg     3420

 gtgcagaata cctcttccac aaagactgcg caaattcgaa actaaagtag cacttagaaa     3480

 ttggcacatc atttctttca tgagaaagga aggtgaatcc caatacaagt caactctcaa     3540

 gattggtcaa cgaggaaatg aaaagattga tataattggc aaccatgtca tggaaggaag     3600

 ttcatacaga gatatgacct tcaaatctaa catagaagct aaaattggaa atgccagata     3660

 caagaaaaac tttgttttat acaaccaaga aagtaaaatg ggagttgaat ggcaagtggc     3720

 ttcccaagaa ggtggaaagg ttattgaatt agaaatgatg ctaattcggt cgggagagac     3780

 atctcaagtc aaatttttgc ttgatattcc cgagcgcatg aagaaagtcc tgctcgaagc     3840

 ctctgcagca ggccaaggaa gctctcagta ccaagtcaga gcaatggcca agtatggaga     3900

 aagtcctatt ttccatgtag aaggaccagt caccgcaatg ctctcatcta aaaacactca     3960

 cctcaagacc gaattgagga ctgttttact tcgcagccaa ccctacacag tcacaacctc     4020

 tcttgtaatg atgcatggca aacaagccgt tgtctttgaa ctaaaagaca gagaagaaca     4080

 tctcattact gtgcaatgga atatggcgac tcgagatgga caggaaaccc atctggattt     4140

 taaaatgctc attccatcca tgatagaaaa gacaatgaat gccattgtca gtgagaaagt     4200

 ctttcacttg agtgtcaacc agctgatagg accaaagagc tcttccccac tgagaaggaa     4260

 aggtttcttg gatgttgatt tcgaaggcaa gagagcaaac gtcgaatttg cttgggacgc     4320

 tgatcgtaac ccaaataaga aaattaaggc tgaagtcaaa atggttaatc cactttcaac     4380

 tctacgagac tgtgttgtcc agggtaactg ggcctactta gagagacaac atcaattcaa     4440

 ggctgaactg aaactcagtg acatccgctc ttggtttgtt ggaaggaaca gcttgatgct     4500

 agaggtaaca aaccccaatc aacaaatgta caaaatgaat tctatcttaa tggtggagaa     4560

 aaagggatca ggaccaaaag taggggcaga cataaccttc aggacacctg aaaacagaga     4620

 gtataagtgg aattccgaaa gttctcttga gtgccgcgaa ggactacaga acgtgaggct     4680

 gatgaccaaa gcagatcttg tttggccaga aggtcgacaa tctatagtaa acttagaagc     4740

 aatgcatcgc tggacaccta gccaaaggga agctgaatta aagattgaag tgacctgccc     4800

 atcactccca caaccaatca agaccaaact tcagctgaat aatcaacagg gtgaatacag     4860

 taccaagtgg gtcattgaaa tgggctttcc agtaaatggt gcaatgtaca aactaaaatt     4920

 gtctcctgag catggagtac aagggttcga agtagaactt aacctagaag aagtacttaa     4980

 gctcctgaag gcgatagatc acctcatatc ttctagctct ttgtccatgt ctgatagccc     5040

 tcggcgtctg ctctttatcg tgctcactac aaacatcatg accaccattc ttattccctg     5100

 ttgcctgatg tcaccctctc gtacaatgga aggaggatgt ggatgcaata cttgcacagg     5160

 cccaagttgt gctgactgcc attgcagctt cgttcctcat aagggtttaa gtgattccaa     5220

 atatgagatt gccttccgcc gatctcattc cgattggagt ggagaatcca gatatgaagg     5280

 tcgtgtcagc catccaggac tagagaggga ccgtcgaatt gatattcagc ttagaagaga     5340

 ggaacagaag gtcacaggaa gtgttgagct cgatattttc ctcagaccag aagataagat     5400

 cactggaaag ttagaatcac tcatttatgc tcgaaacact gtcatcgttg aagcaaaact     5460

 tgaaggaaag gtactgaagg atcaccccaa ggtcattgta cgtggagcct atggtccaag     5520

 caatgttgga tttgatatta aattgcacaa gactcactct tctcctacat ccttcaggat     5580

 gtcgggaaga tatgagaaga ggactgccag aaatgccgct gcttccttca tcatagagaa     5640

 tgaacatcaa aaaaccattg acatttctat agcacttcat cctcatcaga gtccttggtg     5700

 ttatggagta cgagctgaag ctaaggcaaa gtcgtccatc attggaactt acgacatcta     5760

 ttctgagctt tgcaagccag gatttgtatc attgaccaca aagaaacatg gaagtgacaa     5820

 gatgtacata actaaactcg gtatagaagg aatgaagaac atcgaagcca gtattttgga     5880

 agctaaccca caaaccatgg agaaaagacc acttggcatg gctcgtatgg tgctaacttc     5940

 tcccacaatg atgaagctgg aaactaagta tgaaggtgat aagctacatg aaatcaagag     6000

 tactgtacgc gatatgtggt ggaggcttgt ttcatctgca ggtaacggga tggattcttt     6060

 gtgcagtgaa gttttacaag agggctctgg atcaccttct ggccacatgt cttcggtatg     6120

 gcgggaaatt aagaatgaag cctcaagaat ctattctgat ttggaaaacg atttagtcat     6180

 tcctaaatat gagaagctca gggaatggct tcatggtggc attctctcta acattgccga     6240

 gggatgttca aaggtttggt ctcattatgc tcacttccaa agcagtttat catcatctgt     6300

 atccaacatg ataagaacta ttcgagagga attccctgga ttaactagag tagtcactga     6360

 agttgtaatg ggaactgctc gtggcctgca aactggtgaa atgccggagg tgttccgtcg     6420

 atggtggaac gatttccttg agagttcttt ctgcagggct atagcatctg actttgaatc     6480

 actctggagt gaacaccaag aggagtacca gggattgcag cagatctgga ggaaaatcaa     6540

 gaacactctt gcaaaggacg ttaacagaca gagacgtaat cttatgcact acaagaaacc     6600

 caggcatctt gttaactgga tcgtccacga catgaacttt gaacgaatgg ttttcaaggg     6660

 tgtagataag gttatcaaga atgttgtgca gaaagctctc ttcgtacctt ttcagatcga     6720

 tggtaaccac ttccagcttc agttacctat tcgtcgacca gtgcactcac ttcctcaagc     6780

 tttgtcttat gtatcaatga atccaactcc agttgttgac cgtgcattat ggtggtttga     6840

 agctcttatg cccactccag tcgataacat tgtatgggct tattataaat tccttcctcg     6900

 ccatgcacgt tatcttctgc caccctacaa tcacacagcc atggttgttg atggatcaga     6960

 gatcctcacc tttgatggag tagttctgcg agtacctcat tctccctgca aagtcttgct     7020

 tgcacagtac aagactcact ccttgattat gcaaaatcag cagcctggcc atttgccaca     7080

 cttcattttg aaggctgctg gagctacagt ggaggtcaag cctgacttcg ttgttaccgt     7140

 caatggaaat ccagtaagtg ggcccaggga agtgcaaggt gaagtcgtaa tcatgaaaga     7200

 aaatgagaag atcaaggtca ggactccatt cataacactc cgtgtctaca aagacagccg     7260

 caccgcttca gtcgaggtgt ctggctggac atttggtaga atagctggtc ttttgggcat     7320

 ctatgatggg gaaaaggcaa ctgataggtt gacacctcag ggtacaaggg catctaatct     7380

 tcaagagctg gtcaagtcct ggcaagagaa tcctcagtgc gagactcctc acgtagcccc     7440

 catgagtcct atgcaggttc cagtggtcca tatgctccac tgccaaaccc tcttcggagt     7500

 tcggtctcgc tgcaacccag tcgtccatcc agggccattc aggaagatgt gcttcgccag     7560

 caagaacgcc tgtcacgttg ctaaggccta tcgggccatg tgcgagacga agggcattaa     7620

 ggagaccttc cctctgggat gctaatgacc aaacctatcc atggaagtca ttgtgtaaat     7680

 gagtgactcc aagcctagtg acctcattgt tctagttttt aagaaatgca acgaaaatgt     7740

 acaaaaaata ataaatttct agatcgataa taaatatgag atgcataaca agaaaaaaaa     7800

 <210>  2

<211>  2536

<212>  PRT

<213>  vg-prt

 <400>  2

 Met Thr Ser Leu Ala Leu Leu Leu Leu Ala Ile Ala Ser Phe Ser Pro

1               5                   10                  15     

 Ala Pro Trp Pro Ser Gly Thr Asn Leu Cys Ser Lys Glu Cys Pro Val

            20                  25                  30         

 Ala Gly Ser Pro Lys Leu Phe Tyr Ala Pro Glu Lys Thr Tyr Val Tyr

        35                  40                  45             

 Ser Tyr Thr Gly Lys Ser Arg Ile His Leu Lys Asp Val Glu Gly Ala

    50                  55                  60                 

 Asn Val Asp Met Glu Trp Asn Ser Gln Val Glu Leu Ser Trp Leu Ser

65                  70                  75                  80 

 Pro Cys Asp Met Ala Ile Thr Met Lys Asn Pro Ser Ile Gly Gly Gly

                85                  90                  95     

 Ser Gly Ser Ala Glu Ala Arg Phe Leu Glu Arg Tyr Pro Leu Val Val

            100                 105                 110        

 Ser Ile Ile Asp Gly Arg Val Lys Ala Ala Cys Gly His Pro Asp Asp

        115                 120                 125            

 Asp Thr Trp Ser Ile Asn Leu Lys Lys Gly Ile Ala Ser Ala Phe Gln

    130                 135                 140                

 Asn Thr Leu Pro Ser Asn Ser Thr Ile Asn Ser Gly Leu Asn Phe Thr

145                 150                 155                 160

 Glu Thr Asp Ile Ile Gly Asn Cys Ser Thr Val Tyr Glu Val Gln His

                165                 170                 175    

 Glu Gly Glu Lys Val Val Val Thr Lys Leu Lys Asn His Arg Phe Cys

            180                 185                 190        

 Gln Asp His Tyr Ala Asn Arg Ala Glu Thr Pro Lys Ala Trp Met Lys

        195                 200                 205            

 Ala Pro Leu Pro Met Glu Glu Ser Tyr Ser Glu Cys Lys Gln Glu Ile

    210                 215                 220                

 Thr Asn Gly Ile Tyr Thr Ser Ile Thr Cys Lys Asp Lys Asn Val Ile

225                 230                 235                 240

 Lys Pro Ala Tyr Gly Ser Tyr Lys Tyr Val Glu Ala His Gln Glu Ser

                245                 250                 255    

 Val Leu Arg Phe Gln Ser Glu Thr Asp Gln Ile Pro Pro Ser Val Ser

            260                 265                 270        

 Gln Leu Pro Ser Arg Phe Ile Arg Lys Thr Leu Arg Tyr Asp Gln His

        275                 280                 285            

 Thr Leu Lys Lys Asp Pro Ser Met Ala Ala Lys Leu Asp Glu Met Leu

    290                 295                 300                

 Lys Gln Val Cys Glu Lys Val Lys His Gly Val His Glu His Ala Ala

305                 310                 315                 320

 Ser Gln Phe Ala Gln Ala Leu His Phe Leu Arg Arg Val Pro Glu Glu

                325                 330                 335    

 Ala Ile Pro Gln Thr Leu Glu Lys Ile Arg Gly Gly Gln Ile Cys Glu

            340                 345                 350        

 Gln Arg Gln Lys Met Glu Ser Met Phe Leu Asp Gly Leu Ala Phe Val

        355                 360                 365            

 Tyr Glu Ser Gly Ala Val Lys Val Met Val Gln Glu Leu Ile Ser Gly

    370                 375                 380                

 Lys Ala Thr Gly Gly Arg Ala Ala Leu Tyr Ala Ala Ser Met Tyr Phe

385                 390                 395                 400

 Met Pro Arg Pro Cys Ile His Ser Ile Glu Ala Leu Lys Pro Leu Phe

                405                 410                 415    

 Glu Asn Phe Gln Arg Phe Pro Arg Thr Thr Leu Ala Gly Ala Thr Met

            420                 425                 430        

 Val His Thr Tyr Cys Arg Gln Asn Pro Lys Cys Gln Glu Lys Ala Pro

        435                 440                 445            

 Val Arg Gln Leu Ala Glu Thr Leu Ser Ser Lys Val Gly Gln Met Cys

    450                 455                 460                

 Thr Ala Ser Pro Asn Glu Glu Thr Arg Glu His Ala Leu Ala Leu Leu

465                 470                 475                 480

 Lys Ser Leu Gly Asn Met Gly Val Met Asn Ser Glu Ile Ala Arg Pro

                485                 490                 495    

 Ile Leu Gln Cys Ile Glu Asn Pro Glu Ala Asp Lys Gly Ile Arg Arg

            500                 505                 510        

 Ala Ala Thr Gln Thr Phe Arg Asn Val His Cys His Gln Glu Ile His

        515                 520                 525            

 Pro Ile Met Lys Gln Leu Ile Asn Val Ala Leu Asp His Arg Lys Arg

    530                 535                 540                

 Thr Glu Val Arg Ile Gly Ser Tyr Leu Ala Ala Ile Lys Cys Ala Lys

545                 550                 555                 560

 His Glu Glu Leu His Lys Ile Thr Glu Lys Ile Ala Lys Glu Glu Asn

                565                 570                 575    

 Thr Gln Val Arg Ser Phe Ile Leu Ser His Leu His Asn Ile Lys Glu

            580                 585                 590        

 Ser Thr Val Pro Tyr Lys Ala Asn Leu Lys Ser Arg Leu Glu Ser Ile

        595                 600                 605            

 Val Leu Pro Ser Asn Phe Thr Lys Asp Trp Arg Lys His Ser Arg Asn

    610                 615                 620                

 Ile Asp Leu Ser Tyr Tyr Ala Pro Thr Phe Gly Val Gly Ala Gly Val

625                 630                 635                 640

 Glu Ser Asn Val Ile Tyr Ala Pro Gly Ser Tyr Val Pro Arg Ser Val

                645                 650                 655    

 Asn Leu Asn Leu Thr Ala Ala Leu Gly Ala Thr Pro Phe Asn Ile Gly

            660                 665                 670        

 Glu Ile Gly Ala Arg Phe Glu Gly Leu Glu Thr Ile Ile Glu Glu Leu

        675                 680                 685            

 Phe Gly Pro His Ser Tyr Phe Lys Arg Thr Pro Ala Arg Gln Ile Trp

    690                 695                 700                

 Glu Asp Leu Lys Glu Thr Leu Ser Lys Ile Ser Glu Arg Leu Glu Gly

705                 710                 715                 720

 Ser Phe Arg Gln Arg Arg Ser Ile Asp Leu Ser Gln Ile Ser His Leu

                725                 730                 735    

 Phe Asp Lys Leu Tyr Gly Asn Arg His Met Gln Lys Ala Asp Ile Tyr

            740                 745                 750        

 Ala Arg Ile Asn Asn Gln Glu Met Ala Phe Gly Ser Trp Glu Gly Asn

        755                 760                 765            

 Met Lys Asn Ile Lys Ile Asp Glu Leu Ile Asn Asn Leu Phe Asp Lys

    770                 775                 780                

 Phe Asp Asn Val Ile Asn Arg Ala Ala Thr Thr Asn Ile Asp Thr Val

785                 790                 795                 800

 Arg Thr Ala Gln Phe Tyr Met Asn Asn His Leu Pro Thr Ile Gln Gly

                805                 810                 815    

 Leu Pro Ile Lys Ile Lys Leu Glu Gly Thr Ala Val Ala Gly Ile Lys

            820                 825                 830        

 Met Glu Thr His Val Arg Gly Leu Thr Ser Gly Thr Pro Gly Val Val

        835                 840                 845             

 Lys Phe Leu Pro Ser Leu Ser Thr Gln Ile Asp Ala Phe Ile Gly Tyr

    850                 855                 860                

 Asp Cys His Ile Val Arg Ala Gly Ile Lys Met Lys Asn His Ile Ala

865                 870                 875                 880

 Thr Asn Tyr Gly Ala Ser Ile Asn Ala Lys Tyr Thr Ser Gly Gln Gly

                885                 890                 895    

 Phe Glu Val Glu Leu Glu Met Pro Glu Lys Met Glu Leu Leu Lys Ala

            900                 905                 910        

 Gln Ser Glu Thr Tyr Leu Met Lys Arg Val Lys Gly Gln Gln Glu Thr

        915                 920                 925            

 Lys Val His Pro Ser Ser Val Gln Ser Thr Arg Phe Gln Thr Gln Ser

    930                 935                 940                

 Cys Leu Thr Lys Met Glu Pro Val Leu Gly Leu Lys Leu Cys Tyr Asp

945                 950                 955                 960

 Val Asn Met Pro Asn Ile Phe Arg Ser Gln Gly Leu Pro Leu Gly Pro

                965                 970                 975    

 Pro Ala Ile Phe Lys Val Val Leu Glu Lys Ala Glu Ser Gly Met Arg

            980                 985                 990        

 Gly Phe Leu Val Lys Gly Arg Glu  Glu His Val Gly Gly  Lys Lys Val

        995                 1000                 1005            

 Ile Lys  Val Glu Leu Glu Thr  Pro Gly Thr Ser Ser  Pro Lys Lys

    1010                 1015                 1020            

 Ala Thr  Ala Ile Ile Thr Ser  Ala Asn Glu Gly Glu  Glu Lys Lys

    1025                 1030                 1035            

 Ile Ser  Ala Thr Phe Glu Cys  Glu Arg Leu Gly Gly  Ile Ser Ile

    1040                 1045                 1050            

 His Met  Met Arg Lys Trp Thr  Gln Ser Glu Lys Gln  Val Glu Met

    1055                 1060                 1065            

 Ile Ala  Tyr Phe Ser Glu Ser  Arg Gln Tyr Asn Pro  Ser Thr Lys

    1070                 1075                 1080             

 Gly Met  Glu Ala Lys Phe Leu  Trp Asn Gly Glu Gly  Glu Glu Val

    1085                 1090                 1095            

 Lys Leu  Asp Met Ala Leu Asn  Thr Leu Ala Ala Ile  Arg Glu Trp

    1100                 1105                 1110             

 Val Gln  Leu Asn Phe Glu Val  Ser Gly Asp Leu Arg  Tyr His Glu

    1115                 1120                 1125            

 Trp Cys  Arg Ile Pro Leu Pro  Gln Arg Leu Arg Lys  Phe Glu Thr

    1130                 1135                 1140             

 Lys Val  Ala Leu Arg Asn Trp  His Ile Ile Ser Phe  Met Arg Lys

    1145                 1150                 1155            

 Glu Gly  Glu Ser Gln Tyr Lys  Ser Thr Leu Lys Ile  Gly Gln Arg

    1160                 1165                 1170            

 Gly Asn  Glu Lys Ile Asp Ile  Ile Gly Asn His Val  Met Glu Gly

    1175                 1180                 1185            

 Ser Ser  Tyr Arg Asp Met Thr  Phe Lys Ser Asn Ile  Glu Ala Lys

    1190                 1195                 1200            

 Ile Gly  Asn Ala Arg Tyr Lys  Lys Asn Phe Val Leu  Tyr Asn Gln

    1205                 1210                 1215            

 Glu Ser  Lys Met Gly Val Glu  Trp Gln Val Ala Ser  Gln Glu Gly

    1220                 1225                 1230            

 Gly Lys  Val Ile Glu Leu Glu  Met Met Leu Ile Arg  Ser Gly Glu

    1235                 1240                 1245            

 Thr Ser  Gln Val Lys Phe Leu  Leu Asp Ile Pro Glu  Arg Met Lys

    1250                 1255                 1260            

 Lys Val  Leu Leu Glu Ala Ser  Ala Ala Gly Gln Gly  Ser Ser Gln

    1265                 1270                 1275            

 Tyr Gln  Val Arg Ala Met Ala  Lys Tyr Gly Glu Ser  Pro Ile Phe

    1280                 1285                 1290            

 His Val  Glu Gly Pro Val Thr  Ala Met Leu Ser Ser  Lys Asn Thr

    1295                 1300                 1305             

 His Leu  Lys Thr Glu Leu Arg  Thr Val Leu Leu Arg  Ser Gln Pro

    1310                 1315                 1320            

 Tyr Thr  Val Thr Thr Ser Leu  Val Met Met His Gly  Lys Gln Ala

    1325                 1330                 1335             

 Val Val  Phe Glu Leu Lys Asp  Arg Glu Glu His Leu  Ile Thr Val

    1340                 1345                 1350            

 Gln Trp  Asn Met Ala Thr Arg  Asp Gly Gln Glu Thr  His Leu Asp

    1355                 1360                 1365             

 Phe Lys  Met Leu Ile Pro Ser  Met Ile Glu Lys Thr  Met Asn Ala

    1370                 1375                 1380            

 Ile Val  Ser Glu Lys Val Phe  His Leu Ser Val Asn  Gln Leu Ile

    1385                 1390                 1395            

 Gly Pro  Lys Ser Ser Ser Pro  Leu Arg Arg Lys Gly  Phe Leu Asp

    1400                 1405                 1410            

 Val Asp  Phe Glu Gly Lys Arg  Ala Asn Val Glu Phe  Ala Trp Asp

    1415                 1420                 1425            

 Ala Asp  Arg Asn Pro Asn Lys  Lys Ile Lys Ala Glu  Val Lys Met

    1430                 1435                 1440            

 Val Asn  Pro Leu Ser Thr Leu  Arg Asp Cys Val Val  Gln Gly Asn

    1445                 1450                 1455            

 Trp Ala  Tyr Leu Glu Arg Gln  His Gln Phe Lys Ala  Glu Leu Lys

    1460                 1465                 1470            

 Leu Ser  Asp Ile Arg Ser Trp  Phe Val Gly Arg Asn  Ser Leu Met

    1475                 1480                 1485            

 Leu Glu  Val Thr Asn Pro Asn  Gln Gln Met Tyr Lys  Met Asn Ser

    1490                 1495                 1500            

 Ile Leu  Met Val Glu Lys Lys  Gly Ser Gly Pro Lys  Val Gly Ala

    1505                 1510                 1515            

 Asp Ile  Thr Phe Arg Thr Pro  Glu Asn Arg Glu Tyr  Lys Trp Asn

    1520                 1525                 1530             

 Ser Glu  Ser Ser Leu Glu Cys  Arg Glu Gly Leu Gln  Asn Val Arg

    1535                 1540                 1545            

 Leu Met  Thr Lys Ala Asp Leu  Val Trp Pro Glu Gly  Arg Gln Ser

    1550                 1555                 1560             

 Ile Val  Asn Leu Glu Ala Met  His Arg Trp Thr Pro  Ser Gln Arg

    1565                 1570                 1575            

 Glu Ala  Glu Leu Lys Ile Glu  Val Thr Cys Pro Ser  Leu Pro Gln

    1580                 1585                 1590             

 Pro Ile  Lys Thr Lys Leu Gln  Leu Asn Asn Gln Gln  Gly Glu Tyr

    1595                 1600                 1605            

 Ser Thr  Lys Trp Val Ile Glu  Met Gly Phe Pro Val  Asn Gly Ala

    1610                 1615                 1620            

 Met Tyr  Lys Leu Lys Leu Ser  Pro Glu His Gly Val  Gln Gly Phe

    1625                 1630                 1635            

 Glu Val  Glu Leu Asn Leu Glu  Glu Val Leu Lys Leu  Leu Lys Ala

    1640                 1645                 1650            

 Ile Asp  His Leu Ile Ser Ser  Ser Ser Leu Ser Met  Ser Asp Ser

    1655                 1660                 1665            

 Pro Arg  Arg Leu Leu Phe Ile  Val Leu Thr Thr Asn  Ile Met Thr

    1670                 1675                 1680            

 Thr Ile  Leu Ile Pro Cys Cys  Leu Met Ser Pro Ser  Arg Thr Met

    1685                 1690                 1695            

 Glu Gly  Gly Cys Gly Cys Asn  Thr Cys Thr Gly Pro  Ser Cys Ala

    1700                 1705                 1710            

 Asp Cys  His Cys Ser Phe Val  Pro His Lys Gly Leu  Ser Asp Ser

    1715                 1720                 1725             

 Lys Tyr  Glu Ile Ala Phe Arg  Arg Ser His Ser Asp  Trp Ser Gly

    1730                 1735                 1740            

 Glu Ser  Arg Tyr Glu Gly Arg  Val Ser His Pro Gly  Leu Glu Arg

    1745                 1750                 1755             

 Asp Arg  Arg Ile Asp Ile Gln  Leu Arg Arg Glu Glu  Gln Lys Val

    1760                 1765                 1770            

 Thr Gly  Ser Val Glu Leu Asp  Ile Phe Leu Arg Pro  Glu Asp Lys

    1775                 1780                 1785             

 Ile Thr  Gly Lys Leu Glu Ser  Leu Ile Tyr Ala Arg  Asn Thr Val

    1790                 1795                 1800            

 Ile Val  Glu Ala Lys Leu Glu  Gly Lys Val Leu Lys  Asp His Pro

    1805                 1810                 1815            

 Lys Val  Ile Val Arg Gly Ala  Tyr Gly Pro Ser Asn  Val Gly Phe

    1820                 1825                 1830            

 Asp Ile  Lys Leu His Lys Thr  His Ser Ser Pro Thr  Ser Phe Arg

    1835                 1840                 1845            

 Met Ser  Gly Arg Tyr Glu Lys  Arg Thr Ala Arg Asn  Ala Ala Ala

    1850                 1855                 1860            

 Ser Phe  Ile Ile Glu Asn Glu  His Gln Lys Thr Ile  Asp Ile Ser

    1865                 1870                 1875            

 Ile Ala  Leu His Pro His Gln  Ser Pro Trp Cys Tyr  Gly Val Arg

    1880                 1885                 1890            

 Ala Glu  Ala Lys Ala Lys Ser  Ser Ile Ile Gly Thr  Tyr Asp Ile

    1895                 1900                 1905            

 Tyr Ser  Glu Leu Cys Lys Pro  Gly Phe Val Ser Leu  Thr Thr Lys

    1910                 1915                 1920            

 Lys His  Gly Ser Asp Lys Met  Tyr Ile Thr Lys Leu  Gly Ile Glu

    1925                 1930                 1935            

 Gly Met  Lys Asn Ile Glu Ala  Ser Ile Leu Glu Ala  Asn Pro Gln

    1940                 1945                 1950             

 Thr Met  Glu Lys Arg Pro Leu  Gly Met Ala Arg Met  Val Leu Thr

    1955                 1960                 1965            

 Ser Pro  Thr Met Met Lys Leu  Glu Thr Lys Tyr Glu  Gly Asp Lys

    1970                 1975                 1980             

 Leu His  Glu Ile Lys Ser Thr  Val Arg Asp Met Trp  Trp Arg Leu

    1985                 1990                 1995            

 Val Ser  Ser Ala Gly Asn Gly  Met Asp Ser Leu Cys  Ser Glu Val

    2000                 2005                 2010             

 Leu Gln  Glu Gly Ser Gly Ser  Pro Ser Gly His Met  Ser Ser Val

    2015                 2020                 2025            

 Trp Arg  Glu Ile Lys Asn Glu  Ala Ser Arg Ile Tyr  Ser Asp Leu

    2030                 2035                 2040            

 Glu Asn  Asp Leu Val Ile Pro  Lys Tyr Glu Lys Leu  Arg Glu Trp

    2045                 2050                 2055            

 Leu His  Gly Gly Ile Leu Ser  Asn Ile Ala Glu Gly  Cys Ser Lys

    2060                 2065                 2070            

 Val Trp  Ser His Tyr Ala His  Phe Gln Ser Ser Leu  Ser Ser Ser

    2075                 2080                 2085            

 Val Ser  Asn Met Ile Arg Thr  Ile Arg Glu Glu Phe  Pro Gly Leu

    2090                 2095                 2100            

 Thr Arg  Val Val Thr Glu Val  Val Met Gly Thr Ala  Arg Gly Leu

    2105                 2110                 2115            

 Gln Thr  Gly Glu Met Pro Glu  Val Phe Arg Arg Trp  Trp Asn Asp

    2120                 2125                 2130            

 Phe Leu  Glu Ser Ser Phe Cys  Arg Ala Ile Ala Ser  Asp Phe Glu

    2135                 2140                 2145            

 Ser Leu  Trp Ser Glu His Gln  Glu Glu Tyr Gln Gly  Leu Gln Gln

    2150                 2155                 2160            

 Ile Trp  Arg Lys Ile Lys Asn  Thr Leu Ala Lys Asp  Val Asn Arg

    2165                 2170                 2175             

 Gln Arg  Arg Asn Leu Met His  Tyr Lys Lys Pro Arg  His Leu Val

    2180                 2185                 2190            

 Asn Trp  Ile Val His Asp Met  Asn Phe Glu Arg Met  Val Phe Lys

    2195                 2200                 2205             

 Gly Val  Asp Lys Val Ile Lys  Asn Val Val Gln Lys  Ala Leu Phe

    2210                 2215                 2220            

 Val Pro  Phe Gln Ile Asp Gly  Asn His Phe Gln Leu  Gln Leu Pro

    2225                 2230                 2235             

 Ile Arg  Arg Pro Val His Ser  Leu Pro Gln Ala Leu  Ser Tyr Val

    2240                 2245                 2250            

 Ser Met  Asn Pro Thr Pro Val  Val Asp Arg Ala Leu  Trp Trp Phe

    2255                 2260                 2265            

 Glu Ala  Leu Met Pro Thr Pro  Val Asp Asn Ile Val  Trp Ala Tyr

    2270                 2275                 2280            

 Tyr Lys  Phe Leu Pro Arg His  Ala Arg Tyr Leu Leu  Pro Pro Tyr

    2285                 2290                 2295            

 Asn His  Thr Ala Met Val Val  Asp Gly Ser Glu Ile  Leu Thr Phe

    2300                 2305                 2310            

 Asp Gly  Val Val Leu Arg Val  Pro His Ser Pro Cys  Lys Val Leu

    2315                 2320                 2325            

 Leu Ala  Gln Tyr Lys Thr His  Ser Leu Ile Met Gln  Asn Gln Gln

    2330                 2335                 2340            

 Pro Gly  His Leu Pro His Phe  Ile Leu Lys Ala Ala  Gly Ala Thr

    2345                 2350                 2355            

 Val Glu  Val Lys Pro Asp Phe  Val Val Thr Val Asn  Gly Asn Pro

    2360                 2365                 2370            

 Val Ser  Gly Pro Arg Glu Val  Gln Gly Glu Val Val  Ile Met Lys

    2375                 2380                 2385            

 Glu Asn  Glu Lys Ile Lys Val  Arg Thr Pro Phe Ile  Thr Leu Arg

    2390                 2395                 2400             

 Val Tyr  Lys Asp Ser Arg Thr  Ala Ser Val Glu Val  Ser Gly Trp

    2405                 2410                 2415            

 Thr Phe  Gly Arg Ile Ala Gly  Leu Leu Gly Ile Tyr  Asp Gly Glu

    2420                 2425                 2430             

 Lys Ala  Thr Asp Arg Leu Thr  Pro Gln Gly Thr Arg  Ala Ser Asn

    2435                 2440                 2445            

 Leu Gln  Glu Leu Val Lys Ser  Trp Gln Glu Asn Pro  Gln Cys Glu

    2450                 2455                 2460             

 Thr Pro  His Val Ala Pro Met  Ser Pro Met Gln Val  Pro Val Val

    2465                 2470                 2475            

 His Met  Leu His Cys Gln Thr  Leu Phe Gly Val Arg  Ser Arg Cys

    2480                 2485                 2490            

 Asn Pro  Val Val His Pro Gly  Pro Phe Arg Lys Met  Cys Phe Ala

    2495                 2500                 2505            

 Ser Lys  Asn Ala Cys His Val  Ala Lys Ala Tyr Arg  Ala Met Cys

    2510                 2515                 2520            

 Glu Thr  Lys Gly Ile Lys Glu  Thr Phe Pro Leu Gly  Cys

    2525                 2530                 2535    

 <210>  3

<211>  39

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  3

taatacgact cactataggt gccaagaaaa agctcctgt                              39

 <210>  4

<211>  39

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  4

taatacgact cactataggg ccaaaggttg gtgcatagt                              39

 <210>  5

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  5

tctggcgaca gcctcagctg gt                                                22

 <210>  6

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  6

ctggagcagt caaggttatg gt                                                22

 <210>  7

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  7

gccagagaaa atggagttgg tg                                                22

 <210>  8

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  8

gtcaggcgaa acatcacaag tc                                                22

 <210>  9

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  9

ctgttgcttg atgtcaccct ctc                                               23

 <210>  10

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  10

ttgatgacag tgaacgttcc tga                                               23

 <210>  11

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  11

tacagagcac acgattccag ac                                                22

 <210>  12

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  12

ttggtactga gagcttcctt gg                                                22

 <210>  13

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  13

cctgtgacct tctgttcctc tc                                                22

 <210>  14

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  14

accgtgcatt atggtggctt ga                                                22

 <210>  15

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  15

tcttgttaac tggatcgtcc acg                                               23

 <210>  16

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  16

aagctctctt cgtacctgtt cag                                               23

 <210>  17

<211>  24

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  17

attacaggtg tgcagagttc cctc                                              24

 <210>  18

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

 <400>  18

aagtacccta cctgaaccac ct                                                22