一种Kinsenoside及GoodyerosideA类似物的制备与用途

摘要

本发明公开如式I和式Ⅱ示化合物的制备方法与用途。确切讲本发明所涉及的是Kinsenoside或GoodyerosideA的类似物的制备，及其在某些疾病治疗医药方面的用途。

说明书

技术领域

本发明涉及一种化合物及这种化合物的制备方法与用途。确切讲本发明所涉及的是Kinsenoside或 Goodyeroside A的类似物的制备，及其在某些疾病治疗医药方面的用途。 

背景技术

金线莲，又名金线兰、金蚕等，是我国传统的珍稀药材，具有清热凉血、祛风利湿、强心等多种功效，民间多用于治疗糖尿病、支气管炎、肾炎等多种疾病。目前已有金线莲复方制剂上市使用。 

Kinsenoside是兰科 (Orchidaceae) 开唇兰属植物金线莲 Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl.中的高含量活性成分（J Nat Med，2008，62，132），其结构式如式一所示；而Goodyeroside A，其结构式如式二所示，是Kinsenoside的异构体，从三种斑叶兰属（Goodyera R. Br.）植物大斑叶兰(G. schlechtendaliana Reichb. fil. )、网脉斑叶兰(G. matsumurana Schlter. )和血叶兰(G. discolor Ker-Gawl.)中均分离得到该化合物单体（Biol. Pharm. Bull., 2000, 23，731）。斑叶兰属的一些植物从我国古代民间就用于发烧、疼痛、蛇咬、肺部疾病等（Formosan Sci., 1990, 47）。 

研究表明Kinsenoside和Goodyeroside A具有明显的抗糖尿病、保肝等药用活性（Formosan Sci., 1990, 47）。除此之外，Kinsenoside还具有减轻肝纤维化、高糖条件下的血管损伤水平、降低高血脂等药用活性（Biosci. Biotechnol. Biochem., 2010，74，781）。非常重要的是，Kinsenoside的多种药用活性和Kinsenoside的抗氧化应激能力相密切相关（Fitoterapia 2013，86，163）。构效关系的分析表明，Kinsenoside的糖基是药用活性的重要基团之一，不同糖基的取代具有很好的应用前景。 

  

    式一                             式二。

发明内容

本发明提供一种Kinsenoside或 Goodyeroside A的类似物，预期这类化合物可为临床治疗某些疾病提供更多的药物，本发明同时提供这种化合物的制备方法，及其用途。 

本发明的化合物如式三示，或如式四示， 

  

          式三                             式四

其中所示化合物的构型为3-S或3-R。

本发明的化合物的制备中的合成路线如式五： 

式五

即：

（1）D-半乳糖或D-木糖在吡啶的催化下，和乙酸酐在室温下反应24小时，得到乙酰基保护的D-吡喃糖1；

（2）1，2，3，4，6-五-氧-乙酰基-D-半乳糖或1，2，3，4-四-氧-乙酰基-D-木糖，在三氟化硼乙醚的催化下，与对甲苯硫酚反应，得到对甲苯基-氧-乙酰基-1-硫代-D-吡喃糖苷2；

（3）对甲苯基-氧-乙酰基-1-硫代-D-吡喃糖苷在甲醇钠的作用下，脱去乙酰基，得到对甲苯基-1-硫代-D-吡喃糖苷3；

（4）对甲苯基-1-硫代-D-吡喃糖苷，在氢化纳的催化下，与溴化苄反应，得到苄基保护的对甲苯基-氧-苄基-1-硫代-D-吡喃糖苷4；

（5）对甲苯基-氧-苄基-1-硫代-D-吡喃糖苷在N-碘代丁二酰亚胺和H₂SO₄-silica的作用下，脱去1位硫苷部分，得到氧-苄基-D-吡喃糖5；

（6）氧-苄基-D-吡喃糖与(S)-β-羟基-γ-丁内酯或(R)-β-羟基-γ-丁内酯，在三甲硅烷基三氟甲磺酸酯的催化下，-10℃反应2个小时得到4S/R-4-氧-(2, 3, 4, 6-四-氧-苄基-α/β-D-吡喃糖)-2(5H)-呋喃酮6；

（7）4S/R-4-氧-(2, 3, 4, 6-四-氧-苄基-α/β-D-吡喃糖)-2(5H)-呋喃酮在10%Pd-C催化氢化下得到目标化合物7。

在上述合成反应中所用的试剂及反应条件为：(i) 吡啶/Ac₂O, 室温24 h； (ii) 对甲苯硫酚/BF₃.Et₂O; (iii) NaOMe/MeOH；(iv) BnBr/NaH；(v) NIS/H₂SO₄-silica；(vi) 3-羟基-γ-丁内酯/TMSOTf/乙腈；(vii) Pd-C/H₂。 

本发明的化合物可在制备抗氧化应激干扰药物中的应用，或者在制备治疗糖尿病的药物中的应用，或者在制备治疗高血压的药物中的应用。 

氧化应激（oxidative stress）是机体遭受有害刺激时，体内或细胞内自由基的产生与抗氧化防御之间严重失衡，氧化程度超出机体自身清除能力后，活性氧簇（ROS）在体内或细胞内蓄积而引起细胞毒性，导致组织损伤的过程。近期大量的研究表明氧化应激与糖尿病及其并发症、动脉粥样硬化斑块的形成、发展及破裂、高血压等多种疾病的发生、发展相关。由于氧化应激干扰是治疗与氧化应激有关的各种疾病的有效途径，从低毒的天然抗氧化剂中寻找氧化应激干扰药物具有举足轻重的地位。关于这些内容可参见：“Oxidative Stress, Nitric Oxide, and Diabetes” Rev Diabet Stud2010; 7: 15-25；“Effect of antioxidants on amelioration of high-risk factors inducing hypertensive disorders in pregnancy ” Chin Med J 2010;123(18):2548-2554；“Non-invasive oxidative stress markers for liver fibrosis development in the evolution of toxic hepatitis. ” Acta Physiol Hung2011; 98: 195-204；“Pharmacology in Health Foods: Improvement of Vascular Endothelial Function by French Maritime Pine Bark Extract (Flavangenol)” Journal of Pharmacological Sciences J Pharmacol Sci 115, 461 – 465 (2011)；“Plant polyphenols as dietary antioxidants in human health and disease” Oxidative Medicine and Cellular Longevity 2:5, 270-278; November/December。 

体外实验表明，1A、1B、2A、2B与kinsenoside一样具有良好的抗氧化作用，此本发明在制备抗氧化应激干扰药物及制备由氧化应激引起病症的相关药物中极具前景。 

具体实施方式

（一）化合物的制备 

实施例1: 1，2，3，4，6-五-氧-乙酰基-D-吡喃糖（1）的制备，以半乳糖为原料制备的反应如式六示，

                           式六

以木糖为原料制备的反应式如式七，

                             式七

其具体制备过程如下：取D-吡喃糖（60毫摩尔）于反应瓶中，分别加入94毫升吡啶，47毫升乙酸酐。在室温下搅拌反应24小时，进行TLC检测（展开剂为石油醚：乙酸乙酯=3：1），反应基本完全。用旋转蒸发仪将反应液蒸干，得浆状物。在浆状物中加入150毫升乙酸乙酯将其溶解，转入分液漏斗中，用1 M盐酸萃取，有机相用蒸馏水洗涤两次。将有机相合并，加入适量无水硫酸钠干燥。干燥完全后用旋转蒸发仪蒸干，20.992克黄色浆状物1a，或15.132克白色粘稠物1b。

实施例2：对甲苯基-氧-乙酰基-1-硫代-D-吡喃糖苷（2）的制备 

以实施例1所得到的化合物1a或 1b制备对甲苯基-氧-乙酰基-1-硫代-D-吡喃糖苷（2），参见式八，

                           式八

其具体制备过程如下：取25.6毫摩尔的化合物1a于反应瓶中，氩气保护，加入110毫升干燥的二氯甲烷溶解。在冰浴条件下，依次加入对甲苯硫酚(4.77克，38.4毫摩尔），三氟化硼乙醚9.5毫升，反应10分钟后，逐渐升至室温，在室温条件下反应3小时，TLC检测（展开剂为石油醚：乙酸乙酯=3：1），反应完全。向反应液中加入一定量的二氯甲烷，分别用饱和的碳酸氢钠溶液、水以及饱和食盐水萃取。合并有机相，加入适量无水硫酸钠干燥。干燥后，用旋转蒸发仪蒸干，进行柱层析得4.973克白色固体2a（产率为40.6%），2.570克白色固体2b（产率为26.3%）。

实施例3：对甲苯基-1-硫代-D-吡喃糖苷（3）的制备 

以实施例2得到的2a或2b制备对甲苯基-1-硫代-D-吡喃糖苷（3）参见式九，

                            式九

其具体制备过程如下：取化合物2（6毫摩尔）于反应瓶中，氩气保护，加入42毫升无水甲醇。在冰浴条件下，加入甲醇钠/无水甲醇（0.5M）56毫升。加完后撤去冰浴，室温下反应1小时，TLC检测（展开剂为二氯甲烷：甲醇=20:1），反应完全后用732型强酸性阳离子交换树脂将pH调至酸性。过滤，滤液用旋转蒸发仪蒸干，1.851克白色固体3b（产率为98.0%），1.443克白色固体3c（产率为93.9%）。

实施例4：对甲苯基-氧-苄基-1-硫代-D-吡喃糖苷（4）的制备 

以实施例3得到的化合物3a或3b制备对甲苯基-氧-苄基-1-硫代-D-吡喃糖苷（4）参见式十，

                              式十

其具体制备过程如下：取化合物3（5.2毫摩尔）于反应瓶中，加入30毫升N,N-二甲基甲酰胺，在室温下加入60%氢化钠（1.2克），搅拌30分钟后，在冰浴条件下，缓慢滴加溴化苄4.5毫升，室温搅拌3小时后，重复以上操作，又室温搅拌3小时后，加入氢化钠0.9克，室温搅拌30分钟后，在冰浴条件下，缓慢滴加溴化苄2.6毫升，室温搅拌24小时，TLC检测（展开剂为石油醚：乙酸乙酯=12：1），反应完全后加入5毫升甲醇反应掉过量的氢化钠。往反应体系中加入适量的二氯甲烷，然后分别用蒸馏水和饱和食盐水进行萃取。合并有机相，加入适量无水硫酸钠干燥。干燥后，用旋转蒸发仪蒸干，进行柱层析4a（产率为69.1%）,1.851克白色固体4b（产率为67.6%）。

实施例5：氧-苄基-D-吡喃糖（5）的制备 

以实施例4得到的化合物4a或4b制备氧-苄基-D-吡喃糖（5）见式十一。

                                 式十一 

其具体制备过程如下：取化合物4（3毫摩尔）于反应瓶中，加入50毫升二氯甲烷，再加入5毫升蒸馏水。在冰浴条件下一次加入N-碘代丁二酰亚胺（1.12克，5毫摩尔）、H₂SO₄-silica（1.5克），在冰浴条件下反应30分钟，TLC检测（展开剂为石油醚：乙酸乙酯=3：1），反应完全后往反应体系中加入适量的二氯甲烷，然后分别用硫代硫酸钠溶液、饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水进行萃取。合并有机相，加入适量无水硫酸钠干燥。干燥后，用旋转蒸发仪蒸干，进行柱层析得1.040克白色固体5b（产率为64.2%），0.876克白色固体5c（产率为69.4%）。

实施例6：4S/R-4-氧-(2, 3, 4, 6-四-氧-苄基-α/β-D-吡喃糖)-2(5H)-呋喃酮（6）的制备 

（1）4S-4-氧-(2, 3, 4, 6-四-氧-苄基-α/β-D-吡喃糖)-2(5H)-呋喃酮（6S）的制备

以实施例5所得到的化合物5a或5b制备4S-4-氧-(2, 3, 4, 6-四-氧-苄基-α/β-D-吡喃糖)-2(5H)-呋喃酮（6S）参见式十二和式十三，

                          式十二

   

                              式十三

其具体制备过程如下：取化合物5（0.83毫摩尔）于反应瓶中，加入4埃分子筛，氩气保护，加入10毫升干燥乙腈，将(S)-β-羟基-γ-丁内酯（82毫克，0.8毫摩尔）溶于少量乙腈中加入反应体系，在-10℃反应20分钟，将三甲硅烷基三氟甲磺酸酯（222毫克，1毫摩尔）溶于少量乙腈后缓慢加入反应体系中，在-10℃反应2小时，TLC检测（展开剂为石油醚：乙酸乙酯=3：1），反应完全后加入3毫升三乙胺淬灭反应。过滤，滤液用旋转蒸发仪蒸干，进行柱层析得0.233克白色固体6Sa-1（产率为44.9%），0.106克白色固体6Sa-2（产率为20.4%），0.149克白色固体6Sb-1（产率为35.5%），0.107克白色固体6Sb-2（产率为25.5%）。

（2）4R-4-氧-(2, 3, 4, 6-四-氧-苄基-α/β-D-吡喃糖)-2(5H)-呋喃酮（6R）的制备 

以实施例5得到的化合物5a或5b制备4R-4-氧-(2, 3, 4, 6-四-氧-苄基-α/β-D-吡喃糖)-2(5H)-呋喃酮（6R）参见式十四和式十五，

                              式十四

                              式十五

其具体制备过程如下：取化合物5（0.83毫摩尔）于反应瓶中，加入4埃分子筛，氩气保护，加入10毫升干燥乙腈，将(R)-β-羟基-γ-丁内酯（82毫克，0.8毫摩尔）溶于少量乙腈中加入反应体系，在-10℃反应20分钟，将三甲硅烷基三氟甲磺酸酯（222毫克，1毫摩尔）溶于少量乙腈后缓慢加入反应体系中，在-10℃反应2小时，TLC检测（展开剂为石油醚：乙酸乙酯=3：1），反应完全后加入3毫升三乙胺淬灭反应。过滤，滤液用旋转蒸发仪蒸干，进行柱层析得0.240克白色固体6Sa-1（产率为46.3%），0.161克白色固体6Sa-2（产率为31.0%），0.225克白色固体6Sb-1（产率为53.7%），0.097克白色固体6Sb-2（产率为23.1%）。

（3）4S-4-氧-(2, 3, 4, 6-四-氧-苄基-α-D-吡喃半乳糖)-2(5H)-呋喃酮（6Sa-1）的制备 

6Sa-1（产率44.9%）: [α]_D + 60.952; white solid, ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 7.41~7.27 (m, 20H, Ar-H), 4.96 (d, 1H, H-3, J = 11.6 Hz), 4.86 (dd, 2H, PhCH₂-H, J = 8.4, 12.4 Hz), 4.77(d, 1H, H-1’, J = 4 Hz), 4.74 (d, 1H, PhCH₂-H, J = 11.6 Hz), 4.59 (dd, 2H, H-4a and H-4b, J = 12, 14 Hz), 4.49~4.39 (m, 4H, PhCH₂-H), 4.36~4.33 (m, 1H, PhCH₂-H), 4.05 (dd, 1H, H-3’, J = 3.6, 10 Hz), ,3.94~3.88 (m, 3H, H-6’and H-5’), 3.52 (dd, 1H, H-4’, J = 6.8, 9.6 Hz), 3.44 (dd, 1H, H-2’, J = 6, 9.6 Hz), 2.66 (dd, 1H, H-2a, J = 6.4, 18Hz), 2.55 (dd, 1H, H-2b, J = 2.8, 18 Hz). ¹³C-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 175.1 (C4), 138.6 (C4), 138.5 (C4), 138.4 (C4), 137.8 (C4), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.2 (CH), 128.2 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.7 (CH), 127.6 (CH), 127.5 (CH), 127.4 (CH), 98.0 (CH), 78.6 (CH), 77.3 (CH), 75.0 (CH), 74.7 (CH₂), 73.8 (CH₂), 73.6 (CH), 73.4 (CH₂), 73.4 (CH₂), 73.2 (CH₂), 70.3 (CH), 69.2 (CH₂), 34.8 (CH₂). FAB-MS: m/z 642.4 [M+NH₄]⁺ 。

（4）4S-4-氧-(2, 3, 4, 6-四-氧-苄基-β-D-吡喃半乳糖)-2(5H)-呋喃酮（6Sa-2）的制备 

6Sa-2 (产率20.4%): [α]_D – 5.278; white solid, ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 7.34~7.29 (m, 20H, Ar-H), 4.95 (d, 1H, H-3, J = 11.6 Hz), 4.79~4.74 (m, 4H, PhCH₂-H), 4.64 (d, 1H, H-1’, J = 11.6 Hz), 4.62~4.31 (m, 6H, PhCH₂-H and H-4a, H-4b), 3.89 (d, 1H, H-3’, J = 2.8 Hz), 3.83 (dd, 1H, H-5’, J = 8, 10 Hz ), 3.58~3.51 (m, 4H, H-6’, H-4’ and H-2’), 2.82 (dd, 1H, H-2a, J = 2, 18Hz), 2.72 (dd, 1H, H-2b, J = 6.4, 18 Hz). ¹³C-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 175.0 (C4), 138.3 (C4), 138.2 (C4), 138.1 (C4), 137.7 (C4), 128.4 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.2 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.7 (CH), 127.5 (CH), 102.5 (CH), 82.2 (CH), 79.0 (CH), 75.5 (CH₂), 74.5 (CH₂), 73.8 (CH), 73.6 (CH₂), 73.2 (CH), 73.1 (CH₂), 72.9 (CH₂), 68.9 (CH₂), 35.9 (CH₂). FAB-MS: m/z 642.3 [M+NH₄]⁺ 。

（5）4S-4-氧-(2, 3, 4, 6-四-氧-苄基-α-D-吡喃木糖)-2(5H)-呋喃酮（6Sb-1）的制备 

6Sb-1 (产率35.5%): [α]_D + 26.667; white solid, ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 7.40~7.27 (m, 15H, Ar-H), 4.91 (d, 1H, H-1’, J = 4 Hz), 4.85 (d, 1H, H-3, J = 12 Hz), 4.79~4.36 (m, 8H, PhCH₂-H and H-4a, H-4b), 3.88 (t, 1H, H-3’, J = 8.4 Hz), 3.67~3.45 (m, 4H, H-5’, H-4’ and H-2’), 2.66 (dd, 1H, H-2a, J = 6, 18Hz), 2.57 (dd, 1H, H-2b, J = 2.8, 18 Hz). ¹³C-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 175.1 (C4), 138.7 (C4), 138.4 (C4), 138.3 (C4), 128.5 (CH), 128.3 (CH), 128.2 (CH), 128.1 (CH), 128.0 (CH), 128.0 (CH), 128.0 (CH), 127.8 (CH), 97.0 (CH), 81.1 (CH), 79.7 (CH), 77.9 (CH), 75.7 (CH₂), 74.0 (CH₂), 73.7 (CH₂), 73.3 (CH₂), 72.8 (CH), 60.9 (CH₂), 34.8 (CH₂). FAB-MS: m/z 522.3 [M+NH₄]⁺ 。

（6）4S-4-氧-(2, 3, 4, 6-四-氧-苄基-β-D-吡喃木糖)-2(5H)-呋喃酮（6Sb-2）的制备 

6Sb-2 (产率25.5%): [α]_D – 35.000; white solid, ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 7.34~7.29 (m, 15H, Ar-H), 4.88~4.36 (m, 10H, H-1’, H-3, H-4a, H-4b and PhCH₂-H), 3.90 (dd, 1H, H-3’, J = 4.8, 11.6 Hz), 3.65~3.50 (m, 2H, H-5’), 3.38~3.34 (m, 1H, H-4’), 3.19 (dd, 1H, H-2’, J = 9.6, 11.6 Hz), 2.75~2.74 (m, 2H, H-2a and H-2b). ¹³C-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 175.2 (C4), 138.5 (C4), 138.0 (C4), 138.0 (C4), 128.5 (CH), 128.4 (CH), 128.4 (CH), 128.1 (CH), 127.9 (CH), 127.9 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.7 (CH), 103.0 (CH), 83.7 (CH), 81.5 (CH), 77.7 (CH), 75.6 (CH₂), 75.4 (CH₂), 74.1 (CH), 73.4 (CH₂), 73.0 (CH₂), 64.0 (CH₂), 36.0 (CH₂). FAB-MS: m/z 522.3 [M+NH₄]⁺ 。

（7）4R-4-氧-(2, 3, 4, 6-四-氧-苄基-α-D-吡喃半乳糖)-2(5H)-呋喃酮（6Ra-1）的制备 

6Ra-1 (产率46.3%): [α]_D + 101.770; white solid, ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 7.41~7.30 (m, 20H, Ar-H), 4.98 (d, 1H, H-3, J = 11.6 Hz), 4.81~4.77 (m, 4H, PhCH₂-H), 4.74~4.61 (m, 2H, H-4a and H-4b), 4.53 (dd, 1H, H-1’, J = 2.4, 10.4 Hz), 4.46~4.39 (m, 4H, PhCH₂-H), 3.91 (d, 1H, H-3’, J = 2.8 Hz), 3.86 (dd, 1H, H-5’, J = 8, 10 Hz ), 3.61~3.53 (m, 4H, H-6’, H-4’ and H-2’), 2.70 (dd, 1H, H-2a, J = 6.4, 18Hz), 2.62 (dd, 1H, H-2b, J = 2.8, 18 Hz). ¹³C-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 175.4 (C4), 138.6 (C4), 138.6 (C4), 138.5 (C4), 137.9 (C4), 128.5 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.2 (CH), 128.0 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.7 (CH), 97.9 (CH), 78.7 (CH), 77.4 (CH), 76.8 (CH), 76.5 (CH₂), 75.0 (CH₂), 74.8 (CH₂), 73.9 (CH₂), 73.5 (CH), 73.2 (CH₂), 70.3 (CH), 69.1 (CH₂), 35.5 (CH₂). FAB-MS: m/z 642.4 [M+NH₄]⁺ 。

（8）4R-4-氧-(2, 3, 4, 6-四-氧-苄基-β-D-吡喃半乳糖)-2(5H)-呋喃酮（6Ra-2）的制备 

6Ra-2 (产率31.0%): [α]_D + 43.600; white solid, ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 7.37~7.28 (m, 20H, Ar-H), 4.95 (d, 1H, H-3, J = 11.6 Hz), 4.79~4.72 (m, 4H, PhCH₂-H), 4.65~4.60 (m, 2H, H-4a and H-4b), 4.51 (dd, 1H, H-1’, J = 2, 10.4 Hz), 4.43~4.36 (m, 4H, PhCH₂-H), 3.88 (d, 1H, H-3’, J = 2.8 Hz), 3.83 (dd, 1H, H-5’, J = 7.6, 9.6 Hz ), 3.58~3.49 (m, 4H, H-6’, H-4’ and H-2’), 2.69 (dd, 1H, H-2a, J = 6.4, 18Hz), 2.61 (dd, 1H, H-2b, J = 3.2, 18 Hz). ¹³C-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 175.0 (C4), 138.3 (C4), 138.2 (C4), 138.1 (C4), 137.7 (C4), 128.4 (CH), 128.4 (CH), 128.3 (CH), 128.2 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.7 (CH), 127.5 (CH), 102.6 (CH), 82.1 (CH), 79.0 (CH), 75.6 (CH₂), 74.5 (CH₂), 74.1 (CH₂), 73.9 (CH), 73.7 (CH), 73.5 (CH₂), 73.1 (CH₂), 73.1 (CH), 68.9 (CH₂), 34.9 (CH₂). FAB-MS: m/z 642.4 [M+NH₄]⁺ 。

（9）4R-4-氧-(2, 3, 4, 6-四-氧-苄基-α-D-吡喃木糖)-2(5H)-呋喃酮（6Rb-1）的制备 

6Rb-1 (产率53.7%): [α]_D + 99.667; white solid, ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 7.35~7.31 (m, 15H, Ar-H), 4.90 (d, 1H, H-1’, J = 2.4 Hz), 4.87~4.84 (m, 2H, PhCH₂-H), 4.76 (d, 1H, H-3, J = 11.6 Hz), 4.65~4.42 (m, 4H, PhCH₂-H), 4.32~4.31 (m, 2H, H-4a and H-4b), 3.87 (t, 1H, H-3’, J = 9.2 Hz), 3.67~3.44 (m, 4H, H-5’, H-4’ and H-2’), 2.72~2.71 (m, 2H, H-2a and H-2b). ¹³C-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 175.0 (C4), 138.7 (C4), 138.3 (C4), 138.1 (C4), 128.5 (CH), 128.5 (CH), 128.4 (CH), 128.0 (CH), 128.0 (CH), 127.8 (CH), 127.8 (CH), 127.6 (CH), 96.9 (CH), 81.0 (CH), 79.6 (CH), 77.7 (CH), 75.7 (CH₂), 73.9 (CH₂), 73.6 (CH₂), 72.7 (CH₂), 72.6 (CH), 60.7 (CH₂), 35.3 (CH₂). FAB-MS: m/z 522.3 [M+NH₄]⁺

（10）4R-4-氧-(2, 3, 4, 6-四-氧-苄基-β-D-吡喃木糖)-2(5H)-呋喃酮（6Rb-2）的制备

6Rb-2 (产率23.1%): [α]_D + 42.250; white solid, ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 7.35~7.11 (m, 15H, Ar-H), 4.95 (d, 1H, H-1’, J = 10.8 Hz), 4.81 (dd, 3H, PhCH₂-H, J = 2.8, 10.8Hz), 4.71 (d, 1H, H-3, J = 3.6 Hz), 4.56 (dd, 2H, H-4a and H-4b, J = 5.2, 12 Hz), 4.47~4.26 (m, 3H, PhCH₂-H), 3.92 (t, 1H, H-3’, J = 9.2 Hz), 3.72~3.53 (m, 4H, H-5’, H-4’ and H-2’), 2.72~2.61 (m, 2H, H-2a and H-2b). ¹³C-NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 174.8 (C4), 138.5 (C4), 138.0 (C4), 138.0 (C4), 128.5 (CH), 128.5 (CH), 128.4 (CH), 128.1 (CH), 127.9 (CH), 127.9 (CH), 127.9 (CH), 127.8 (CH), 127.7 (CH), 103.3 (CH), 83.7 (CH), 81.6 (CH), 77.7 (CH), 75.6 (CH₂), 75.4 (CH₂), 74.3 (CH), 74.2 (CH₂), 73.4 (CH₂), 64.0 (CH₂), 35.0 (CH₂). FAB-MS: m/z 522.3 [M+NH₄]⁺。

实施例7：4S/R-4-氧-(β-D-吡喃糖)-2(5H)-呋喃酮（7）的制备 

（1）4S-4-氧-(β-D-吡喃糖)-2(5H)-呋喃酮（7S）的制备

以实施例6制备的6Sa或6Sb制备4S-4-氧-(β-D-吡喃糖)-2(5H)-呋喃酮（7S）参见式十六，

式十六

其具体制备过程如下：取化合物6（0.16毫摩尔）于高压釜中，先加入0.5毫升乙酸乙酯将化合物6溶解后，再加入4.5毫升乙醇，往反应液中投入0.15克10%Pd-C。然后往高压釜中通入氢气，在5atm下反应24h，反应完毕用硅藻土过滤掉Pd-C，滤液用旋转蒸发仪蒸干，经出层析得目标化合物。

（2）4R-4-氧-(β-D-吡喃糖)-2(5H)-呋喃酮（7R）的制备 

以实施例6得到的化合物6Ra或6Rb制备4R-4-氧-(β-D-吡喃糖)-2(5H)-呋喃酮（7R）参见式十七，其具体的制备方法同上。

                           式十七 

（3）4S-4-氧-(β-D-吡喃半乳糖)-2(5H)-呋喃酮（1A）的制备

¹H-NMR (D₂O, 400 MHz) δ 5.10 (d, 1H, H-1’, J = 3.2 Hz), 4.63 (d, 2H, H-4a and H-4b, J = 2.8 Hz), 4.01 (br s, 2H, H-6’a and H-6’b), 3.86 (t, 2H, H-3’and H-5’, J = 2.4Hz), 3.78 (d, 2H, H4’and H2’, J = 6.8Hz), 3.01 (dd, 1H, H-2a, J = 6.4, 18.4Hz), 2.77 (dd, 1H, H-2b, J = 0.8, 18 Hz). ¹³C-NMR (D₂O, 400 MHz) δ 182.5 (C4), 100.2 (CH), 77.6 (CH₂), 76.1 (CH), 74.1 (CH), 71.8 (CH), 70.5 (CH), 63.8 (CH₂), 37.4 (CH). FAB-HRMS m/z 287.0740 (calcd for C₁₀H₁₆NaO₈, 287.0737 ). IR(KBr) ν_max: 3400 (OH), 2928 (CH), 1770 (γ-lactone) 。

（4）4S-4-氧-(β-D-吡喃木糖)-2(5H)-呋喃酮（2A）的制备 

¹H-NMR (D₂O, 400 MHz) δ 4.60 (m, 1H, H-1’), 4.48 (d, 2H, H-4a and H-4b, J = 4 Hz), 3.60 (d, 1H, H-5’b, J = 4.8 Hz), 3.55~3.47 (m, 3H, H-2’, H3’and H4’), 3.38 (dd, 1H, H-5a’, J = 3.6, 9.2Hz), 2.84 (dd, 1H, H-2a, J = 6, 18Hz), 2.65 (d, 1H, H-2b, J = 17.2 Hz). ¹³C-NMR (D₂O, 400 MHz) δ 178.4(C4), 100.1 (CH), 75.4 (CH₂), 75.2 (CH), 74.9 (CH), 73.2 (CH), 71.4 (CH), 63.6 (CH₂), 35.8 (CH₂). FAB-HRMS m/z 257.0634 (calcd for C₉H₁₄NaO₇, 257.0632 ). IR(KBr) ν_max: 3416 (OH), 2950 (CH), 1773 (γ-lactone)。

（5）4R-4-氧-(β-D-吡喃半乳糖)-2(5H)-呋喃酮（1B）的制备 

¹H-NMR (D₂O, 400 MHz) δ 5.11 (d, 1H, H-1’, J = 2.4 Hz), 4.57 (d, 2H, H-4a and H-4b, J = 2.8 Hz), 3.99 ~ 3.95 (m, 2H, H-6’a and H-6’b), 3.84 (d, 2H, H-3’and H-5’, J = 2.4 Hz), 3.75 (d, 2H, H4’and H2’, J = 6.4 Hz), 3.04 (dd, 1H, H-2a, J = 6.4, 18.4Hz), 2.79 (dd, 1H, H-2b, J = 0.8, 18.4 Hz). ¹³C-NMR (D₂O, 400 MHz) δ 182.6 (C4), 100.1 (CH), 77.0 (CH₂), 75.7 (CH), 74.0 (CH), 71.7 (CH), 70.5 (CH), 63.7 (CH₂), 38.0 (CH). FAB-HRMS m/z 287.0738 (calcd for C₁₀H₁₆NaO₈, 287.0737 ). IR(KBr) ν_max: 3397 (OH), 2929 (CH), 1770 (γ-lactone) 。

（6）4R-4-氧-(β-D-吡喃木糖)-2(5H)-呋喃酮（2B）的制备 

¹H-NMR (D₂O, 400 MHz) δ 4.54~4.51 (m, 1H, H-1’), 4.42~4.34 (m, 2H, H-4a and H-4b), 3.52 (dd, 1H, H-5’b, J = 1.2, 5.2 Hz), 3.49~3.439 (m, 3H, H-2’, H3’and H4’), 3.33~3.29 (m, 1H, H-5a’), 2.83 (dd, 1H, H-2a, J = 6, 17.6 Hz), 2.56 (d, 1H, H-2b, J = 18 Hz). ¹³C-NMR (D₂O, 400 MHz) δ 178.5(C4), 100.0 (CH), 75.0 (CH₂), 74.9 (CH), 73.2 (CH), 71.4 (CH), 63.6 (CH), 63.6 (CH₂), 35.8 (CH₂). FAB-HRMS m/z 257.0634 (calcd for C₉H₁₄NaO₇, 257.0632 ). IR(KBr) ν_max: 3397 (OH), 2930 (CH), 1771 (γ-lactone) 。

（二）抗氧化体外实验及结果：

1. 实验方法：

1）清除·OH 效果的测定

3mL反应液中含9.00 mmol/ L FeSO₄（1 mL），9.00 mmol/ L水杨酸（溶解在50%乙醇中，1 mL）及不同浓度的药物1mL，最后加8.8 mmol/ L H₂O₂（1 mL），在37℃的条件下反应0.5 h，测510 nm 处的吸光值。吸光值越低，清除·OH效果越好。

清除率= [A0-(Ai-Ai0 ) ] /A0 ×100 % (A0 为对照，不加药物的吸收度；Ai为某质量浓度的药物时的吸收度，Ai0为无水杨酸时的药物吸收度值) 

2）清除O^-₂ 效果的测定

0.05 mol / L Tirs-Hcl (pH 8.2) 4.6 ml，预热25℃ 20 min后，加不同浓度的药物1ml ，再加10 mmol/L 0.4ml 邻苯三酚（用10 mmol/L HCL配制）迅速摇匀。25℃ 准确反应4 min后，立即用8 mol/ L HCL 0.1ml 终止反应。325nm处测吸光值。

空白组：Tirs-Hcl (pH 8.2) 4.6 ml，蒸馏水1ml，10 mmol/ L 0.4 ml HCL 

对照组：Tirs-Hcl (pH 8.2) 4.6 ml，蒸馏水1ml，10 mmol/ L 0.4ml 邻苯三酚

给药组：Tirs-Hcl (pH 8.2) 4.6 ml，药物1ml，10 mmol/ L 0.4 ml 邻苯三酚

以空白组调零，清除率= [A0-(Ai-Ai0 ) ] /A0 ×100 %。

 3）对生成 MDA（脂质过氧化）抑制作用的测定

取5% (w/ v) 的组织匀浆。在1.0ml 的匀浆中加入浓度不同的药物，温育2h，然后加入1.0ml 三氯醋酸( TCA，28 %，w/ v) 和1.5ml TBA(0. 67 %，w/ v)，沸水浴15min，离心沉淀，上清液用721型分光光度计(上海分析仪器厂产品) 在532nm 测定吸光度值 。

抑制率=（A0-Ai）/A0 ×100 % 

2. 实验结果

实验结果以表示，进行组间 t 检验，以 P < 0.05为差异有显著性，P < 0.01为差异有高度显著性。。

化合物1A: 

表1 化合物1A对·OH 的清除作用 (，n=6)

与对照组比较， *p＜0.05，**p＜0.01

表2化合物1A提取物对O^-₂·的清除率(，n=6)

与对照组比较， *p＜0.05，**p＜0.01。

表3 化合物1A对小鼠肾MDA的抑制作用(，n=6) 

与对照组比较， *p＜0.05，**p＜0.01。

表4化合物1A对小鼠肝MDA的抑制作用(，n=6) 

与对照组比较， *p＜0.05，**p＜0.01。

化合物1B: 

表5 化合物1B对·OH 的清除作用 (, n=7)

与对照组比较， *p＜0.05，**p＜0.01。

表6 化合物1B对O^-₂·的清除率(, n=7) 

与对照组比较， *p＜0.05，**p＜0.01。

表7 化合物1B对小鼠肾MDA的抑制作用(，n=6) 

与对照组比较， *p＜0.05，**p＜0.01。

表8 化合物1B对小鼠肝MDA的抑制作用(，n=6) 

与对照组比较， *p＜0.05，**p＜0.01。

  

化合物2A

表9 化合物2A对·OH的清除作用 (X±SD，n = 4)

与对照组比较，* p<0.05，  ** p <0.01。

表10 化合物2A对 O^-₂·的清除作用 (X±SD，n = 3) 

与对照组比较，* p<0.05，  ** p <0.01。

表11 化合物2A对小鼠肾MDA的抑制作用(，n=6) 

与对照组比较，* p<0.05，  ** p <0.01。

表12 化合物2A对小鼠肝MDA的抑制作用(，n=7) 

与对照组比较， *p＜0.05，**p＜0.01。

  

化合物2B:

表13 化合物2B对·OH的清除作用(x±s，n=7)

^*P <0.05，^** P <0.01 与 对照组比。

表14 化合物2B对O^-₂ 的清除作用(x±s，n=6) 

^*P <0.05，^** P <0.01 与 对照组比。

表15 化合物2B对小鼠肾MDA的抑制作用(x±s，n=7) 

^*P <0.05，^** P <0.01 与 对照组比。

表16 化合物2B对小鼠肝MDA的抑制作用（x±s，n=7) 

^*P <0.05，^** P <0.01 与 对照组比。 

结论: 化合物1A、1B、2A、2B对O^-₂ 和·OH的清除及脂质过氧化物（MDA）生成测定实验结果显示，化合物1A、1B、2A、2B均能显著清除O^-₂ 和·OH，并明显降低MDA的生成。提示，化合物1A、1B、2A、2B有良好抗氧化活性。