甲磺酸沙奎拉韦在制备预防或治疗缺血性心脑血管疾病的药物中的应用

摘要

本发明涉及一种药物新用途，具体地涉及甲磺酸沙奎那韦通过抑制HMGB1的表达预防或治疗缺血性心脑血管疾病。在上述应用中，其口服使用剂量范围是120mg～6000mg，优选120～3000mg；注射使用剂量范围是30mg～2000mg，优选30～1000mg。

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物新用途，具体地涉及甲磺酸沙奎那韦通过抑制HMGB1的表达预防或治疗缺血性心脑血管疾病。 

背景技术

缺血性脑中风是严重危害人类健康的重大疾病，理论上的治疗手段包括：(1)发病后3-6h内溶栓治疗。(2)神经保护治疗缺血引起的继发性神经损害。(3)神经修复促进存活神经细胞突触重构和神经细胞新生，包括神经再生(neuroregeneration)和神经发生(neurogenesis)。早期溶栓治疗是目前公认的疗效最确切的方法，但治疗时间窗窄，且需严格控制适应症。目前仅约3％～5％的患者能得到溶栓治疗。因此神经保护成为缺血性脑中风治疗重要内容，直接关系到中风患者功能预后。 

冠心病(coronary heart disease，CHD)，是以动脉粥样硬化病变为基础，因冠状动脉狭窄、血栓形成而导致心肌组织病理和功能损害的一组疾病。冠心病的病因和发病机制尚未明确，可能与高脂血症、高血压、糖尿病、肥胖症及吸烟等因素有关。2003年至2006年美国健康与营养调查研究数据显示：约有1760万20岁以上的美国人患有冠心病，其发病率为7.9％，并且20岁以上的美国人患心肌梗死的发病率高达3.6％；美国心脏、肺和血液研究所的调查研究表明：2010年美国将新增78.5万冠心病患者，同时约有47万患者冠心病复发；2006年，美国每6个病逝的人中就会有1个冠心病患者。流行病学资料显示，目前全球心衰患者的数量已高达2250万，并且仍以每年200万的速度递增。Framingham Heart Study报告指出：目前导致心衰的主要疾病是冠心病而不是以往的高血压或心脏瓣膜疾病。在过去的40年，美国男性因冠心病而导致的心衰每10年的增长率为26％，而女性增长率高达48％[Gheorghiade M，Sopko G，De Luca L，Velazquez EJ，Parker JD，Binkley PF，Sadowski Z，Golba KS，Prior DL，Rouleau JL，Bonow RO.Navigating the Crossroads of Coronary Artery Disease and Heart Failure.Circulation.2006；114(11)：1202-1213.]。因此，控制冠心病病情、改善冠心病预后具有重要意义。 

高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein，HMGB1)是一种高度保守的核蛋白，广泛分布于哺乳动物细胞。随着其晚期促炎作用的发现，HMGB1成为近年来危重医学研究的热点靶点。研究显示HMGB1在急性脑缺血和急性心肌梗死进展扮演重要角色[Jiang WL，Fu FH，Tian JW，Zhu HB，Hou J.Curculigoside A attenuates experimental cerebral ischemia injury in  vitro and vivo.Neuroscience.2011，192：572-579.；Jiang WL，Zhang SP，Zhu HB，Hou J.Cardioprotection of Asperosaponin X on experimental myocardial ischemia injury.Int J Cardiol.2012，155：430-436.]。 

临床上甲磺酸沙奎拉韦(Saquinavirmesylate，Invirase)为一高效高选择性的HIV蛋白酶抑制剂，作用于HIV繁殖的后期，与HIV蛋白酶的激活点结合，使之失去结合和水解断裂多肽的功能，与其它药物合用治疗严重的HIV感染，增加CD4计数，降低血中HIV总量，但甲磺酸沙奎那韦在预防或治疗缺血性心脑血管疾病的药理作用未见报道。本发明人通过大量的研究发现甲磺酸沙奎那韦可以通过抑制HMGB1的表达从而在预防或治疗缺血性心脑血管疾病。基于此，本发明人发明了甲磺酸沙奎那韦通过抑制HMGB1表达从而减轻缺血性心脑血管疾病损伤。 

发明内容

本发明提供了甲磺酸沙奎那韦在制备治疗或预防缺血性心脑血管疾病的药物中的应用。 

本发明提供了甲磺酸沙奎那韦在制备治疗或预防冠心病、心绞痛、心肌缺血的药物中的 

应用。 

本发明提供了甲磺酸沙奎那韦在制备治疗或预防心衰的药物中的应用。 

本发明提供了甲磺酸沙奎那韦在制备治疗或预防脑缺血的药物中的应用。 

本发明提供的药物在用于缺血性心脑血管疾病时，其口服使用剂量范围是120mg～6000mg，优选120～3000mg；注射使用剂量范围是30mg～2000mg，优选30～1000mg。 

本发明提出的药物可以和药学上可接受的载体或辅料组成的药物，该药物可以以药学常规方法制备成注射液、冻干粉针、片剂、胶囊剂、滴丸剂，优选以胶囊和冻干粉针形式存在。 

具体实施方式

实施例1甲磺酸沙奎那韦冻干粉针制备 

取甲磺酸沙奎那韦30.0g，加注射用水2000ml使其溶解，加甘露醇8g，搅拌溶解，超滤，得到无热源的澄清液，灌入10ml西林瓶中，2ml/只，按冻干粉针工艺冻干，制成每支含甲磺酸沙奎那韦30.0mg的冻干粉针。 

实施例2甲磺酸沙奎那韦胶囊制备 

称取200.0g甲磺酸沙奎那韦、和100.0g羧甲基淀粉钠充分混合均匀后过100目筛，加入适量的3％PVPK30水溶液适量制软材，20目筛制粒，60℃干燥3小时，18目筛整粒，加入2.0g 硬脂酸镁，混合均匀后装胶囊，胶囊重约300mg。 

具体试验例 

试验例1甲磺酸沙奎那韦对大鼠心肌缺血损伤的影响 

1.1实验材料 

甲磺酸沙奎那韦(纯度99.5％，购买于上海翰香生物科技有限公司) 

氯化硝基四氮唑蓝(N-BT)，由军事医学科学院药材供应站提供 

实验动物：普通级SD大鼠，雄性，体重280g-350g，雌雄各半，山东绿叶制药股份有限公司实验动物中心提供，合格证号：SYXK(鲁)20030020。 

1.2方法与结果： 

动物随机分为模型对照组(生理盐水)、硝苯地平组(6mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组1(12mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组2(50mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组3(300mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组4(600mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦注射剂量组1(3mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦注射剂量组2(15mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦注射剂量组3(100mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦注射剂量组4(200mg/kg)。每组10只。禁食12小时后，ip.乌拉坦(1.2g/kg)麻醉，测肢体II导联心电图。剪去左胸前皮毛，碘酒及酒精消毒，沿胸骨左缘1cm处，剪开胸壁肌肉及二条肋骨，迅速打开胸腔，暴露心脏，在动脉圆锥与左心耳之间结扎左冠状动脉，立即将心脏放回，排挤出胸腔空气，用止血钳闭合胸腔，造成大鼠急性心肌缺血模型。硝苯地平组在麻醉前灌胃给药，灌胃给药组连续给药3天，于第2天给药后禁食16h后，第3天给药30分钟后手术。记录给药前及给药后1.5h、3h心电图，测量心电图J点的升高值，6h后取出心脏，以冷生理盐水洗净后，-20℃冰箱冷冻过夜。次日，将冷冻的心脏由结扎处至心尖部等厚切成5片，浸入新鲜配制的0.25％N-BT磷酸缓冲液(pH7.4)中。37℃水浴振摇10～15min。用滤纸吸干切片表面的染色液，分离染色部分和未染色部分，称重，记算梗死面积。梗死面积(％)＝梗死部分重量/(非梗死部分重量+梗死部分重量)×100％。数据用 表示，以组间t检验进行统计学处理。 

结果如表1所示，心肌缺血6小时后，模型组大鼠缺血面积达到24％左右。甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组1(12mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组2(50mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组3(300mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组4(600mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦注射剂量组1(3mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦注射剂量组2(15mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦注射剂量组3(100mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦注射剂量组4(200mg/kg)降低肢体导联心电图J点的升高、减少缺血面积(与模型组比较，p＜0.05或p＜0.01)；甲磺酸沙奎那韦灌胃组3(300mg/kg) 与甲磺酸沙奎那韦灌胃组4(600mg/kg)比较，对肢体导联心电图J点的升高及缺血面积无明显差异(p＞0.05)。甲磺酸沙奎那韦注射组3(100mg/kg)与甲磺酸沙奎那韦注射组4(200mg/kg)比较，对肢体导联心电图J点的升高及缺血面积无明显差异(p＞0.05)。 

表1甲磺酸沙奎那韦对大鼠心肌缺血损伤的影响(n＝10) 

与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。 

试验例2甲磺酸沙奎那韦对心肌缺血损伤导致的大鼠心衰的影响 

2.1实验材料 

甲磺酸沙奎那韦(纯度99.5％，购买于上海翰香生物科技有限公司) 

戊巴比妥钠，国药集团化学试剂有限公司，规格：25g，批号：F20041117。 

注射用盐酸地尔硫卓：天津田边制药有限公司，规格：10mg/支，批号：0903013 

单道心电图机，FX-2111，北京福田电子医疗仪器有限公司； 

16导生理记录仪，美国BIC公司； 

Millar导管，美国Millar公司 

实验动物：SPF级SD大鼠，雄性，初始体重260±20g，山东绿叶制药有限公司提供，动物合格证：SCXK(鲁)2009-0009。 

2.2方法与结果： 

2.2.1冠脉结扎致大鼠急性心肌梗死模型的制作 

将SD大鼠以0.5％戊巴比妥钠溶液(30mg/kg)腹腔麻醉后，立即仰位固定于手术台上，将心电图机针形电极插入大鼠四肢皮下，记录正常标准II导联心电图(ECG)。然后沿胸骨左缘3～4肋间开胸，暴露心脏，距左心耳下缘2mm水平处，结扎左冠状动脉前降支(假手术组的大鼠仅穿线不结扎)，结扎后立即挤出胸腔气体，关闭胸腔，术后5min立即记录心电图，以J点抬高＞0.1mv作为心肌梗死模型复制成功的标志。 

2.2.2动物分组及给药 

根据2h的J点抬高值进行分组：假手术组、模型组、注射用地尔硫卓1mg/kg组，甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组1(12mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组2(50mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组3(300mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组4(600mg/kg)，每天灌胃1次，连续14天，假手术组和模型组大鼠灌胃等体积的生理盐水。 

2.2.3指标测定 

末次给药24h后，以20％乌拉坦(1.2g/kg)腹腔注射麻醉，仰卧固定，常规剪毛、消毒，取颈部正中切口，暴露两侧颈总动脉，分离右颈总动脉，右颈总动脉逆行插入Millar导管，进而送至左心室。测定左室内压(LVSP)、左室内压变化最大速率(±dp/dt_max)。 

2.2.4数据处理 

数据以表示，组间T-Test检验。 

2.2.5试验结果 

结果如表2所示，与模型组比较，甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组1(12mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组2(50mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组3(300mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组4(600mg/kg)能够显著升高±dp/dt_max及心室内收缩压(P＜0.05或P＜0.01)。甲磺酸沙奎那韦灌胃组3(300mg/kg)与甲磺酸沙奎那韦灌胃组4(600mg/kg)比较，对升高+dp/dt_max、-dp/dt_max及心室内收缩压无明显差异(p＞0.05)。 

表2甲磺酸沙奎那韦对心肌梗死大鼠血流动力学的影响 

P＜0.05，^**P＜0.01与模型组比较；^#P＜0.01，与假手术组组比较。 

试验例3甲磺酸沙奎那韦对大鼠局部脑缺血损伤的影响 

3.1材料 

甲磺酸沙奎那韦(纯度99.5％，购买于上海翰香生物科技有限公司) 

尼莫地平注射液(尼膜同，50ml∶10mg德国拜耳医药) 

红四氮唑：美国Sigma公司产品，临用前用生理盐水配成4％溶液 

实验动物：SPF级SD大鼠，雄性，初始体重260±20g，山东绿叶制药有限公司提供，动物合格证：SCXK(鲁)2009-0009。 

3.2方法与结果： 

动物随机分为模型对照组(生理盐水)、尼莫地平组(NIM，1.0mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组1(12mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组2(50mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组3(300mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组4(600mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦注射剂量组1(3mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦注射剂量组2(15mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦注射剂量组3(100mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦注射剂量组4(200mg/kg)。每组10只。禁食12小时后，水合氯醛(350mg/kg，i.p.)麻醉，分离右侧颈总动脉，夹闭颈内、颈总动脉，颈外动脉近心端及远心端结扎，中间剪断。将颈外动脉游离端拉至与颈内动脉成一条直线，将栓线(选用直径0.24mm尼龙线，长度5.0cm)由颈外动脉插入至颅内，遇轻微阻力时停止，插入深度约为2cm。结扎颈外动脉开口，并打开颈总动脉动脉夹，消毒缝合伤口，造成右侧大脑中动脉缺血模型；假手术组仅进行右侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉的分离(以上实验均在23℃～25℃进行)。灌胃给药组连续给药3天，于第2天给药后禁食16小时后，第3天给药30分钟后手术，其余各组术后静脉注射相应药物。24小时后按文献【刘小光，徐理纳，一种能评价溶栓和抗溶栓的大鼠脑中动脉模型，药学学报，1995，30：662】所述方法及标准观察并记录大鼠的行为障碍：(A)提鼠尾观察前肢屈曲情况，如双前肢对称伸向地面，计为0分，如手术对侧前肢出现腕屈曲计为1分，肘屈曲计为2分，肩内旋计为3分，既有腕屈曲和/或肘屈曲，又有肩内旋者，计为4分。(B)将动物置于平地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力，计为0分，如向手术对侧推动时阻力下降者，根据下降程度不同分为轻、中、重三度，分别计为1，2和3分。(C)将动物双前肢置一金属网上，观察双前肢的肌张力。双前肢肌张力对等且有力者计为0分。同样根据手术对侧肌张力下降程度不同计为1，2和3分。(D)动物有不停地向一侧转圈者，计为1分。根据标准评分，满分为11分，分数越高，表示动物行为障碍越严重。行为评分后处死大鼠，取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冠状切成5片，脑片用红四氮唑(TTC)染色，正常组织经染色后呈红色，梗塞组织呈白色，染色后照相，用中国航空航天大学病理图像分析软件求梗塞面积比。数据用表示，以组间t检验进行统计学处理。 

表3甲磺酸沙奎那韦对大鼠脑缺血损伤的影响(n＝10) 

与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01。 

结果如表3所示，缺血24小时后，模型组大鼠表现出明显的行为障碍，大鼠脑组织也出现明显的灶状缺血区，达到全脑27％左右。甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组1(12mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组2(50mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组3(300mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦灌胃剂量组4(600mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦注射剂量组1(3mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦注射剂量组2(15mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦注射剂量组3(100mg/kg)、甲磺酸沙奎那韦注射剂量组4(200mg/kg)显著改善大鼠行为障碍、减少缺血面积(与模型组比较，p＜0.05或p＜0.01)；甲磺酸沙奎那韦灌胃组3(300mg/kg)与甲磺酸沙奎那韦灌胃组4(600mg/kg)比较，对改善大鼠行为障碍、减少缺血面积无明显差异(p＞0.05)。甲磺酸沙奎那韦注射组3(100mg/kg)与甲磺酸沙奎那韦注射组4(200mg/kg)比较，对改善大鼠行为障碍、减少缺血面积无明显差异(p＞0.05)。