一种具有干预或改善糖尿病的组合物及其制备方法

摘要

本发明涉及一种具有干预或改善糖尿病的组合物及其制备方法，该组合物的原料含有DFEM培养基(药食同源食用菌发酵培养基)和食用菌发酵种子液。本发明提供的组合物降血糖量效明确，通过体外实验证明，与现有技术相比稳定性高。

说明书

技术领域

本发明涉及食品及其加工技术领域，具体涉及一种具有干预或改善糖 尿病的组合物及其制备方法。

背景技术

糖尿病是一种受遗传和环境因素影响的多因素内分泌疾病，当胰腺产 生不了足够的胰岛素或者靶细胞对胰岛素敏感性减低，人体无法有效地利 用所产生的胰岛素所引起的血糖水平升高，糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱。 长期的高血糖状态如果不加以控制，可损害心脏、血管、眼睛、肾脏和神 经系统，50％的糖尿病患者死于心血管病(主要是心脏病和中风)；糖尿病 位居肾衰竭主要病因之列；同时全球1％的盲症可归咎于糖尿病，视网膜病 变是失明的主要病因，它是视网膜小血管长期累积受损的结果。足部神经 病变(神经受损)与血流量减少可导致患足部溃疡、感染、坏死，最终不 得不截肢。

世界卫生组织将糖尿病分为两种类型：I型糖尿病(胰岛素依赖型，青 少年或儿童期发病型糖尿病)主要是由于胰岛β细胞受损引起的，特征是血 浆胰岛素分泌不足，需要每天注射胰岛素。症状包括多尿、口渴、常有饥 饿感、体重减轻、视力减退和疲乏。这些症状可突然出现。

II型糖尿病(非胰岛素依赖型或成人发病型糖尿病)是最常见的一类糖 尿病，占糖尿病患者总数的90％以上，是由于靶细胞对胰岛素敏感性减低， 主要是因体重过重和缺乏身体活动所致。症状可能与I型糖尿病相似，但 往往症状不明显。可能在发病多年之后才诊断出患有糖尿病，此时已出现 并发症。

糖尿病是一种慢性病，据世界卫生组织报道全世界有3.47亿人患有糖尿 病，患者死亡的总风险比未患糖尿病的同龄人至少增加一倍，严重威胁人 类的健康。糖尿病联盟的统计数据显示，2010年，中国成人糖尿病患病率 为9.7％，患者总数已超过9000万，成为世界第一糖尿病大国；同时，糖尿 病前期的糖耐量受损人群达到了1.48亿人，患病率为15.5％。在我国糖尿病 高患病率的同时，还呈现知晓率和控制率不足40％的低水平现状，糖尿病的 防治变得异常艰巨。

临床上治疗糖尿病的药物包括二甲双胍、磺脲类、二肽基肽酶IV(DPP4) 抑制药，PPAR-γ激动药、α-葡萄糖苷酶抑制剂、胰岛素、胰高血糖素样 肽-1(GLP-1)类似物等，这些药物虽有一定的疗效，但都存在耐用性低、 毒性大等问题，不适合长期服用。例如，磺脲类和胰岛素能增加体重，并 增加低血糖风险；二甲双胍和α-葡萄糖苷酶抑制剂有消化道反应；噻唑烷 二酮类可引起水肿、体重增加，并有可能增加心力衰竭和骨折风险。

因此，寻求量效明确、无不良反应的降糖新食品是目前国内外研究开 发的热点。

国内外研究表明，食用菌含有多种功能成分，如多糖、皂苷等，具有 降血糖、降血压、增强机体免疫力、抑制肿瘤、抗氧化和抗病毒的作用， 此外，有些食用菌还有润肺益气、健脾和胃、补肾利尿等医疗保健功能。

我国传统医学有药食同源之说，近年来研究发现，药食同源功能成分 降血糖、降血脂作用温和持久、副作用小，结合食用菌深层发酵和固体发 酵技术，进一步增效减毒，是开发新型糖尿病及三高人群临床营养食品的 有效途径。

20世纪40年代美国弗吉尼亚大学生物工程专家Elmer L，Gaden.Jr设计出 培养微生物系统的生物反应器，成为液体深层发酵技术的创始人。我国是 在1958年开始研究蘑菇、侧耳等的深层发酵。1963年羊肚菌液体发酵开始 工业化生产试验。自此以后，采用液态大规模发酵生产食药用菌灵芝、蜜 环菌、银耳逐渐展开。70年代开始研究香菇、冬虫夏草、黑木耳、金针菇、 猴头、草菇等的液体发酵。液体发酵又称为液体深层发酵，主要是把菌丝 体加入培养基中，与药材混合后在一定温度条件下进行发酵，其发酵产品 包括菌丝体和发酵液。通过食药用菌液体发酵培养获得大量的菌丝体和生 理活性物质一般仅需要2-7天时间，液体发酵具有生产的机械化、自动化程 度高，物质传递效率高，可实现大规模工业化生产。

固体发酵是指没有或几乎没有自由水存在下，在一定湿度的固体基质 中，用一种或多种微生物进行生物反应的过程。固体基质常为大分子化合 物，如淀粉、纤维素、半纤维素、果胶、木质素、蛋白质和脂质等，真菌 常能分泌胞外分解酵素而利用其周围的培养基质作为碳源(低聚糖和多糖 等碳水化合物)及氮源(如黄豆饼粉、花生饼粉、水解植物蛋白、氨基酸、 酵母粉、麦麸等)。与液体发酵相比生产周期较长，但能产生不同的风味物 质，同时固体发酵具有低成本、低能耗、不易发生大面积污染等优点。

近年来研究发现，药食同源原材含有多种降血糖功能成分，包括多糖、 生物碱、黄酮类物质等，主要的作用机制如下：

(1)刺激正常胰岛β细胞分泌胰岛素，以及胰岛β细胞的再生，降低 胰高血糖素。

(2)增加胰岛素受体的数目和亲和力，改善胰岛素抵抗，增强胰岛细 胞对葡萄糖的敏感性，发挥降血糖的作用。

(3)含天然α-葡萄糖苷酶抑制剂。利用生物导向鉴定、色谱、质谱等 分析技术证明含有多糖、酚类物质、生物碱、糖苷、皂甙等植物具有α-葡 萄糖苷酶抑制作用。

(4)增加肝糖元含量，抑制肝脏糖降解。

(5)清除自由基，抗脂质过氧化，减轻自由基对胰岛β细胞的损害。 药食同源功能成分尤其是黄酮类物质，是一种天然的强抗氧化剂，能够清 除人体内多种自由基，对血浆及胰腺组织中脂质过氧化物均有明显的降低 作用。同时，具有降血压、软化血管，改善血液循环系统，有效防止脑中 风、脑血栓、祛风清热、凉血明目、利尿等作用。

食用菌发酵是在常温、常压等较为温和的条件下进行的生物转化，能 最大限度地保护药食同源原材中功能成分免遭破坏，特别是对热敏感物质 的有效保护。其中：

鸡腿菇，是近年来我国发展较快的一种珍稀食用菌，甘滑性平，具有 益脾胃、清心安神等功效，民间常用于治疗糖尿病。鸡腿菇可以改善胰岛 血液循环，提高胰岛β细胞的分泌功能。

相关报道为：CN01138147.7(公开号为CN1429576A)公开了一种治疗 高血压、糖尿病的食用菌方剂及其制备方法，由鸡腿菇、茯苓、长裙竹蒜、 短裙竹蒜、杏鲍菇、鲍鱼菇、猪苓、松茸、羊肚菌、冬虫夏草、红脚牛肝 菌等食用菌按一定比例配伍而成，富含有药效的生理性物质和氨基酸、维 生素、多种矿物质。

CN200810020889.4(公开号为CN101328487A)涉及鸡腿菇液体转化桑 叶的发酵液制备方法，以及由该方法获得的含有该发酵液的药物或保健品。 其以鸡腿菇为出发菌株，以桑叶为转化对象，进行液体摇瓶培养、一级种 子培养和发酵培养，得到转化桑叶后鸡腿菇深层发酵液。糖尿病病因复杂， 只有桑叶一种成分是不能解决问题，且在制备过程中外加了葡萄糖，容易 引起血糖波动，不适合糖尿病人使用。

桑叶、桑葚、苦瓜、南瓜、苦荞麦、大麦、决明子、菊苣和薏苡仁属 于药食同源原材，研究表明，桑叶、桑葚、苦瓜、南瓜、苦荞麦、大麦中 的植物多糖可促进β细胞分泌胰岛素，生物碱是天然的α-糖苷酶抑制剂； 黄酮类可降血脂、降胆固醇，清除自由基。决明子具有降血压、降血脂、 抑菌、血小板凝集的作用。菊苣富含膳食纤维，具有改善肠道功能、促进 钙、镁吸收，预防糖尿病引起的骨质疏松等功效。研究发现，糖尿病的预 防和治疗与微量元素密切相关。微量元素铬(Cr³⁺)是葡萄糖耐量因子的重 要组成成分，在人体内发挥重要的生理功能，提高胰岛素受体对糖的敏感 度并协同胰岛素参与糖、脂类、蛋白质和核酸的代谢，人体缺乏时会导致 一系列代谢障碍。缺铬人群可出现禁食性高血糖、葡萄糖耐量受损以及血 浆胰岛素、血清总胆固醇和甘油三酯水平升高等不良反应。适量的补充三 价铬可改善葡萄糖耐量，对非胰岛素依赖型糖尿病具有治疗作用。实验表 明，富铬鸡腿菇菌丝体发酵液能够大幅度降低血糖，降糖作用及显效时间 优于中成药“降糖舒”。开发针对糖尿病及其并发症的预防和治疗的新型 食用菌发酵营养食品，具有巨大的市场需求。

发酵药食同源原材，在加工工艺上是一个创举,利用超微粉碎技术，对 药食同源原材进行破壁使有效物质溶出，提高了加药培养基活性成分的浓 度。

研究表明，发酵过程中可能产生的各种酶及分解能力很强的微生物菌 群，能将不易为人体吸收的大分子有效物质降解为小分子活性物质，更易 于通过血脑屏障与人体细胞蛋白结合，大大提高药食同源原材的功效。同 时，生物转化体系的分解作用类似中药炮制，可将有毒物质进行分解，从 而降低毒副作用。此外，食用菌发酵改变了药食同源原材活性成分的含量， 使发酵产物的成分与原料成分有所不同，有望为这类药食同源功能成分的 获得提供新的途径。食用菌生物转化解决了目前提取降血糖功能成分工艺 中大量使用有机溶剂所致的残留和污染问题，更安全环保，利于糖尿病患 者长期食用和规模化生产。

发明内容

本发明的目的是提供一种食品来源、高安全性的食用菌发酵降血糖功 能组合物及产品的制备方法。

本发明提供了一种具有干预或改善糖尿病的组合物，该组合物的原料 含有食用菌发酵种子液和药食同源食用菌发酵培养基(即DFEM培养基)。

具体的，所述原料中食用菌发酵种子液与DFEM培养基的体积比为 5-15％。

优选地，所述原料中食用菌发酵种子液与DFEM培养基的体积比为 8-15％。

其中：

食用菌发酵种子液的制备方法为：

1)活化：取食用菌，将斜面原始菌种用接种钩取2-3环，转接到PDA 活化培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)上，在23-26℃下培养1-5天，得到 菌丝块；

2)取100ml液体培养基分装于250ml灭菌锥形瓶中，取1cm²步骤1)活 化得到的菌丝块转接入液体培养基中，置于26-28℃下振荡培养1-3天，得到 摇瓶种子液；

3)种子罐培养：将配制好的液体培养基装入种子罐中，将摇瓶种子液 按照液体培养基的5％-10％接种到种子罐中发酵培养，即得食用菌发酵种子 液。

上述食用菌发酵种子液中：

所述食用菌为鸡腿菇、猴头菇、灰树花、灵芝或姬松茸，优选鸡腿菇 或猴头菇。

所述步骤2)和步骤3)中的液体培养基由以下方法制备：去皮马铃薯 洗净后称取150-200g，切成小块，加入纯化水煮沸30分钟，过滤，趁热加入 葡萄糖15-20g，并加热使其溶解，最后用水补足至1000ml，pH自然，121℃ 下灭菌25-30分钟，即得液体培养基；

所述摇瓶种子培养中的震荡频率120rpm。

DFEM培养基的制备方法为：按照重量比为1-3：2称取药食同源原材和 谷物，经超微粉碎后，按麦芽汁培养基3％-10％添加量加入麦芽汁培养基中， 制成DFEM培养基；或，按照重量比为1-3：2称取药食同源原材和谷物，超 微粉碎后，加药食同源原材和谷物总重量3-8倍的水，在50-90℃条件下提取 20-40分钟，再浓缩至1/10-1/20体积后，按麦芽汁培养基3％-10％添加量加入 麦芽汁培养基中，制成DFEM培养基；

上述DFEM培养基的制备方法中：

所述药食同源原材为桑叶、桑葚、苦瓜、南瓜、决明子或薏苡仁中的 一种或几种，优选地，所述药食同源原材由桑叶、桑葚、苦瓜、南瓜、决 明子和薏苡仁按照重量比为6：1：2：1：1：1组成的混合物；

所述谷物为大麦、苦荞麦或麦芽中的一种或几种，优选地，所述谷物 由大麦、苦荞麦和麦芽按照重量比为1：2：1组成；

所述麦芽汁培养基由以下方法制备：取麦芽粉50-80克，加纯化水1000 毫升，置于50-70℃恒温水浴中糖化6h，用碘液滴定至无色即为糖化已完全， 过滤收取麦芽汁，121℃灭菌25-30分钟，即得麦芽汁培养基。

所述超微粉碎，粉碎后的粒径不超过100μm。

本发明还提供了上述组合物的制备方法，该方法为液体培养或固体培 养。

所述液体培养包括以下步骤：

1)多菌种混合发酵培养：首先将500-1000L的发酵罐灭菌，待温度降 到30℃以下时，按照原料的配比将食用菌发酵种子液与药食同源食用菌发 酵培养基置于发酵罐中培养，培养温度为26-28℃，发酵培养周期为4-7天；

2)功能组分的处理

发酵培养结束，获得的发酵物经提取、过滤、浓缩、喷雾干燥，即为 组合物。

所述步骤2)提供的提取方法具体为：发酵混合物均质后，采用热水浸 提法，热水的温度为50℃-90℃，浸提时间为40-80min，减压浓缩，喷雾干 燥。

步骤1)中：发酵罐培养发酵1-2天后，可以再将另外一种食用菌按照上 面所述食用菌发酵种子液进行补料发酵，接种量为5％-10％。

所述固体发酵的方法包括以下步骤：

1)固体发酵培养基为：按照熟化谷物800g，超微麦麸200g，制成谷物 固体培养基，制成1kg的菌袋；其中：

熟化谷物的制备方法为：在500g薏苡仁、大麦、苦荞麦或麦芽中加入 300g麦芽汁培养基，用灭菌锅于120-122℃加热10-20分钟；

超微麦麸的制备方法为：将麦麸烘干，水分控制在3％-5％，超微粉碎 灭菌后备用；

2)食用菌发酵种子液按5-15％的量加入DFEM培养基中，然后注入菌 袋，控制含水量40％-65％，于18-37℃条件下进行黑暗培养12-18d，菌丝长 满菌袋后停止发酵；

3)将菌丝连同可食用培养基一起进行提取、过滤、浓缩、喷雾干燥， 制成组合物。

所述步骤3)提供的提取方法具体为：采用热水浸提法，热水的温度为 50℃-90℃，浸提时间为40-80min，减压浓缩，喷雾干燥。

本发明还提供了含上述组合物的制剂或食品，所述制剂由上述组合物 单独制成或由上述组合物和辅料组成。

所述制剂或食品为谷物食品、糖果、营养棒、饼干、粉剂、颗粒剂、 片剂和胶囊剂。

本发明还提供了上述组合物在制备降血糖的医用食品、保健食品或药 物中的应用。

本发明还提供了一种复方，该复方由上述组合物和有机铬组成，比例 500:1-2500:1。

食用量，每日10g-100g，优选15g-60g。

本发明提供的具有干预或改善糖尿病的组合物具有以下优点：

1、糖尿病病因复杂，现有技术中单一的使用药食同源原材、食用菌是 不能解决问题，本发明是强调多种成分的配比使用，最终的产物具有降血 糖的效果。多糖含量5％-10％，含多种多糖，分子量不同，范围30，000-80， 000Da比例5％-10％，100,000-500,000Da比例50％-80％。

2、本发明提供的制备方法中，发酵过程不外加葡萄糖，以目前的技术 发酵后葡萄糖残留较多，不适合糖尿病人使用。

3、药食同源原材必须经过超微粉碎是本发明的关键工艺，破碎后有效 成分的溶出和食用菌的利用率较高，所以发酵时间短，而现有技术整体工 艺长达20天。

4、本发明提供的组合物降血糖量效明确，通过体外实验证明，与现有 技术相比稳定性高。

5、选取包括但不限于药食同源原材：桑叶、桑葚、苦瓜、南瓜、苦荞 麦、大麦、决明子、菊苣和薏苡仁等，经食用菌发酵转化而成的药食同源 降血糖功能组合物(HDF-X)，复配有机铬等微量元素，特别制成各种食 品形式，以发挥干预或改善糖尿病或糖尿病并发症的效果。一般而言，对 于成人，该组合物可有效使用的范围为每日0.5g-50g，优选1g-30g。本发明 的固体产品按需要还可含有新资源食品、益生菌、营养强化剂、功能性配 料等，以及糖尿病患者特需的微量元素和复合氨基酸等，产品具有α-葡萄糖 苷酶抑制活性，改善糖尿病患者糖耐量，同时提供丰富的营养素。

6、选取包括但不限于药食同源原材：桑叶、桑葚、苦瓜、南瓜、苦荞 麦、大麦、决明子、菊苣和薏苡仁等，经食用菌发酵转化制成的药食同源 降血糖功能组合物(HDF-X)，易溶于水，制成的液体产品实例包括饮料 (茶饮料、乳饮料、植物蛋白饮料、功能饮料、其他饮料)和混悬液。以 普洱茶、红茶和乌龙茶为典型例子的茶粉可通过常规技术便利地生产速溶 茶粉和功能饮料。预包装食品含该组合物0.5g-10g，按需要还可含有新资源 食品、益生菌、营养强化剂、功能性配料等，以及糖尿病患者特需的微量 元素和复合氨基酸等，产品具有α-葡萄糖苷酶抑制活性，改善糖尿病患者糖 耐量，富含膳食纤维，改善肠道功能。

7、优取三种药食同源原材：桑叶、桑葚、决明子，三种谷物：苦荞麦、 大麦、薏苡仁，经过三种食用菌：鸡腿菇、猴头菇和灰树花，按照科学配 比组方药食同源原材：谷物：食用菌为3:2:1，通过食用菌混合发酵，富集 天然多糖、多酚和黄酮类物质，制成的药食同源降血糖功能组合物，复配 有机铬等微量元素，产品具有α-葡萄糖苷酶抑制活性，改善糖尿病患者糖耐 量，富含优质蛋白及膳食纤维，长期食用可改善糖尿病或糖尿病并发症的 效果。

附图说明

图1：具有干预或改善糖尿病的组合物的固体发酵的工艺流程图；

图2：具有干预或改善糖尿病的组合物的液体发酵的工艺流程图；

图3：α-葡萄糖苷酶抑制活性。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

药食同源原材添加量与培养基的比例为质量体积比，如按麦芽汁培养 基的5％添加药食同源原材的细粉，是按照培养基的体积ml添加细粉g；食用 菌发酵种子液的接种量是食用菌发酵种子液与培养基的体积比ml/ml，特此 说明。

实施例1：药食同源食用菌发酵培养基(DFEM培养基)制备

麦芽汁培养基的制备：麦芽粉800克，加纯化水10升，置于70℃恒温 水浴中糖化6h，用碘液滴定至无色时表示糖化已完全；过滤，121℃，灭菌 30分钟后，即得麦芽汁培养基。

将桑叶150g、桑葚25g、苦瓜50g、南瓜25g、决明子25g、薏苡仁25g； 大麦50g、苦荞麦100g和麦芽50g(药食同源原材与谷物的重量合计分别 为300g、200g)，超微粉碎后，粉碎后的粒径为不超过100μm，按麦芽汁 培养基体积的5％添加细粉，制成发酵培养基。

实施例2：药食同源食用菌发酵培养基(DFEM培养基)制备

麦芽汁培养基的制备为：同实施例1。

将桑叶150g、桑葚25g、苦瓜50g、南瓜25g、决明子25g、薏苡仁25g； 大麦50g、苦荞麦100g、麦芽50g(药食同源原材与谷物的重量合计分别为 300g、200g)，超微粉，粉碎后的粒径不超过100μm，然后按照料水的重 量比为1:6提取，提取温度为80℃，提取时间为40分钟，过滤，浓缩至 1/10体积，按麦芽汁培养基体积的5％将提取物添加，制成发酵培养基。

实施例3：药食同源降血糖功能组合物的多种食用菌固体发酵制备(工艺 流程图见附图1)

1、食用菌种子液的培养：

1)菌种活化：选取鸡腿菇、猴头菇、灰树花、灵芝、姬松茸等食用菌 中的任何一种：将斜面原始菌种用接种钩取2环，转接到活化培养基(PDA 培养基)上，在26℃下培养3天；

2)液体培养基的制备和摇瓶培养：

液体培养基的制备：去皮马铃薯洗净后称取150g，切成小块，加入纯 化水煮沸30分钟，纱布过滤，趁热加入葡萄糖15g，并加热使其溶解，最 后用水补足至1000ml，pH自然，121℃下灭菌30分钟，即得液体培养基；

摇瓶种子液：取配好的液体培养基分装于250ml灭菌锥形瓶中，每瓶 约100ml，将步骤1活化的1cm²左右菌丝块转接入液体培养基中，置于26℃ 下振荡(震荡速度为120rpm)培养3天，得到摇瓶种子液；

3)种子罐培养：将配制好的液体培养基装入种子罐中，然后将摇瓶种 子液按照步骤2)中液体培养基的5％-10％接种到种子罐中发酵培养，即得 食用菌发酵种子液；

2、谷物培养基的制备：由熟化谷物800g和超微麦麸200g组成谷物固体 培养基，制成1kg的纯谷物菌袋。其中：

熟化谷物的制备方法为：在500g薏苡仁、大麦、苦荞麦或麦芽加入300g 麦芽汁培养基，用灭菌锅于121℃加热15分钟；

超微麦麸制备方法为：将麦麸烘干，水分控制在3％，超微粉碎灭菌后 备用；

3、取步骤1得到的食用菌发酵种子液按10％的量加入DFEM培养基中， 然后注入菌袋，含水量45％，于25℃条件下进行黑暗培养18d，菌丝长满菌 袋后停止发酵；4、将菌丝连同可食用培养基一起进行提取，具体提取方法 为：均质后，采用热水浸提法，热水的温度为85℃，浸提时间为80min，减 压浓缩，喷雾干燥，制成降血糖药食同源功能组合物。

实施例4：药食同源降血糖功能组合物的起始食用菌液体发酵制备

1、食用菌种子液的制备

1)菌种活化：选取以下食用菌中的任何一种：鸡腿菇、猴头菇、灰树 花、灵芝或姬松茸，将斜面原始菌种用接种钩取3环，转接到活化培养基 (PDA培养基)上，在26℃下培养3天；

2)液体培养基的制备和摇瓶培养：同实施例3；

3)种子罐培养：同实施例3；

2、起始菌种发酵培养：采用500L发酵罐进行发酵培养，实施例1的 DFEM培养基装料系数为40％，发酵罐灭菌后，待温度降到30℃以下后， 接发酵步骤1得到的发酵种子培养液，接种量为DFEM培养基的10％；接 种至发酵罐后，于26-28℃条件下进行发酵培养，发酵培养周期为6天。

3、将获得的发酵原液均质后，采用热水浸提法，热水温度为85℃，浸 提时间为60min，减压浓缩，喷雾干燥，制成降血糖药食同源功能组合物。

实施例5：药食同源降血糖功能组合物的多种食用菌液体发酵制备(工艺 流程图见附图2)

1、食用菌种子液的制备

1)菌种活化：

选取以下食用菌中的任意一种作为起始菌种：鸡腿菇、猴头菇、灰树 花、灵芝或姬松茸，将斜面原始菌种用接种钩取2环，转接到活化培养基 (PDA培养基)上，在26℃下培养3天。

2)液体培养基的制备和摇瓶培养：同实施例3；

3)种子罐培养：同实施例3；

2、多菌种发酵培养：采用1000L发酵罐进行发酵培养，首先，DFEM 培养基装料系数为40％，将发酵罐灭菌，待温度降到30℃以下后，接发酵 种子培养液，起始菌种为鸡腿菇、猴头菇、灰树花、灵芝或姬松茸中的一 种，接种量为10％；接种至发酵罐后，于26℃条件下进行发酵培养，在起 始菌种发酵2天后，再加入除起始菌种外的食用菌发酵种子液(如灵芝或 姬松茸，食用菌种子液的制备方法同步骤1)，接种量为10％，同时按接 种量比例加入DFEM培养基，进行补料发酵，总发酵培养周期为7天。

5、将获得的发酵原液：均质后，采用热水浸提法，热水的温度为85 ℃，浸提时间为80min，减压浓缩，喷雾干燥，制成降血糖药食同源功能 组合物。

实验例1：药食同源降血糖功能组合物及产品的α-葡萄糖苷酶抑制活性的 测定

本发明提供的α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定是参考张冉的方法(应用 α-葡萄糖苷酶抑制剂高通量筛选模型筛选降血糖中药，Vol.42No.10，2007 (5)，740-743)，具体实验方法如下：

1、缓冲液配制：称取Na₂HPO₄·12H₂O，0.878g；NaH₂PO₄·2H₂O，0.398g 溶解，定容于100mL容量瓶中，配制成浓度0.1mol/L，pH6.8的缓冲液。

2、模拟胃液的配制(模拟胃液的配制方法根据李英华的方法略有改动 (外源蛋白在模拟胃肠环境中稳定性测定模型初探，卫生研究，Vol.33 No.4，2004,433-436)：称取胃蛋白酶，0.8g；NaCl，0.4g；浓盐酸，1.75ml 用纯化水溶解并定容于250mL容量瓶中，pH控制在1.2左右。胃蛋白酶 的活力为9000U/g pro。

3、试剂配制：用缓冲液配制5.0U/ml的α-葡萄糖苷酶；30mmol/L麦 芽糖底物；对照组1：20mg/mL的拜唐苹(规格10mg/片)；对照组2：20 mg/mL的组合物；20mg/mL的药食同源降血糖功能组合物(HDF-X)。

其中：对照组2的具体制备方法参照实施例3，不同点在于所用的发酵 培养基为麦芽汁培养基，得到食用菌发酵原液后，再与药食同源原材、谷 物混合提取、浓缩、喷雾干燥制得组合物。

4、实验方法：

1)分别量取20mg/mL的对照组1，2和实施例3-5制备的HDF-X溶 液，梯度稀释至0.1mg/mL，1mg/mL，5mg/mL，10mg/mL。

2)将对照组2和实施例3-5制备的HDF-X溶液用模拟胃液处理，梯度 稀释浓度同1)，分别取100μL上述样品置于不同离心管中，37℃水浴，1 小时后加入0.168mol/L的Na₂CO₃25μL终止反应。

3)分别取1)和2)中的样品各10μL于不同离心管中，加入10μL的α- 葡萄糖苷酶，再各加入底物溶液10μL，反应20分钟，取出，加入1.5mL 的葡萄糖检测试剂盒的工作液，继续反应15min，反应结束，取各样品于 96孔板中，酶标仪测定492nm的吸光值，计算抑制率。

5、实验结果：见表1、表2和图3

表1：HDF-X的α-葡萄糖苷酶抑制率

样品 0.1mg/ml 1mg/ml 5mg/ml 10mg/ml 对照组1 29.8％ 75.1％ 88.8％ 93.0％ 对照组2 11.3％ 26.3％ 31.6％ 33.9％ HDF-X(实施例3) 19.2％ 38.3％ 48.7％ 52.1％ HDF-X(实施例4) 24.1％ 47.9％ 60.9％ 64.9％ HDF-X(实施例5) 32.1％ 63.9％ 81.2％ 86.6％

图3和表1结果显示：

1)随着样品浓度的升高，对α-葡萄糖苷酶的抑制活性也分别提高，呈 现明确的量效趋势。

2)在相同浓度下，对α-葡萄糖苷酶的抑制活性：对照组1＞HDF-X(实 施例5)＞HDF-X(实施例4)＞HDF-X(实施例3)＞对照组2。

3)其中HDF-X(实施例5)与对照组1的抑制活性基本等效，说明混 合发酵工艺优于单菌种发酵和固体发酵。

表2：模拟胃液条件下的α-葡萄糖苷酶抑制率

样品 非模拟胃液 模拟胃液 对照组2 33.9％ 22.4％ HDF-X(实施例3) 52.1％ 50.9％ HDF-X(实施例4) 64.9％ 63.5％ HDF-X(实施例5) 86.6％ 87.0％

注：样品浓度为10mg/ml。

表2结果显示：

1)按照本发明工艺制成的降血糖功能组合物HDF-X，在模拟胃液环 境中也非常稳定，对α-葡萄糖苷酶抑制效果没有差异。

2)对照组2，在模拟胃液环境中的抑制活性降低，稳定性较差，可能 与药食同源功能成分未经过发酵有关。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作 了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本 领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所 做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。