一种采用加速溶剂萃取在线净化法测定食品或环境样品中抗生素含量的方法

摘要

本发明公开一种加速溶剂萃取在线净化法测定食品和环境样品中的抗生素，包括如下步骤：a、标准溶液的配制，b、配位聚合物的制备，c、配位聚合物在线净化-加速溶剂萃取以及d、标准溶液及样品的测定。本发明所制备的对苯二甲酸铜配位聚合物易于在实验室中进行合成，材料容易取得，该对苯二甲酸铜配位聚合物可以起到和现有商用的吸附剂同等的在线净化样品的基本能力，同时比现有的商用吸附剂效果更好，其运用于抗生素定量检测中，能够大大提高实验精度和检测精密性，以确保数据的实验和检测数据的准确性，该加速溶剂萃取在线净化法测定食品和环境样品中的抗生素为一种新型的抗生素定量定性检测方法。

说明书

  

技术领域

本发明涉及化学检测方法领域技术，尤其是指一种采用加速溶剂萃取在线净化法测定食品或环境样品中抗生素含量的方法。 

背景技术

现有技术中，用于加速溶剂在线净化的吸附剂多数采用如佛罗里硅土、硅胶、氧化铝等吸附剂，这些吸附剂可以吸附样品中的脂类基体成分等，从而减少了这些基体成分在仪器检测过程中对目标物分子（如抗生素）的影响，增大目标物的响应。 

抗生素在治疗疾病和农业生产中具有重要作用。但是过量的使用导致目前食品中残留有痕量抗生素，抗生素的常见提取方法主要有液液提取、超声辅助提取或者微波辅助提取等，但是这些方法中样品基体往往和目标物一起提取到有机溶剂中，对目标物的检测带来较大的干扰，不能对痕量物质进行高灵敏度的检测。 

发明内容

有鉴于此，本发明针对现有技术存在之缺失，其主要目的是提供一种采用加速溶剂萃取在线净化法测定食品或环境样品中抗生素含量的方法。 

为实现上述目的，本发明采用如下之技术方案：一种采用加速溶剂萃取在线净化法测定食品或环境样品中抗生素含量的方法，包括如下步骤， 

a、标准溶液的配制：取抗生素标样，置于容量瓶中，加一定量的溶剂后进行震荡溶解，用相同的溶剂进行定容形成抗生素标样母液；将抗生素标样母液采用逐级稀释的方法配制不同浓度的抗生素标准溶液；

b、配位聚合物的制备：将对苯二甲酸与氢氧化钠加入水中，待充分搅拌溶解后，加入三水硝酸铜，连续搅拌至溶液中有蓝色粉末状沉淀生成为止，冷却、过滤并风干以得到蓝色粉末的对苯二甲酸铜配合物，将该蓝色粉末置于棕色广口瓶中备用； 

c、配位聚合物在线净化-加速溶剂萃取：将样品用粉碎机粉碎，取一定量的样品和对苯二甲酸铜配合物混匀后，放入加速溶剂萃取仪的萃取池中，在设定好的温度和压力条件下进行自动萃取；萃取后的液体流入收集瓶中进行收集，并将该萃取液通过在50℃温度下、真空旋转蒸发后定容，得到样品萃取液； 

d、标准溶液及样品的测定：将步骤a所配制的抗生素标准溶液注入色谱分析系统中进行检测，得到抗生素标准溶液色谱图；然后将步骤c中的萃取液注入色谱分析系统中进行检测分析，并根据抗生素标准溶液色谱图所制得的标准方程换算得出样品中抗生素的含量。

所述色谱分析系统中流动相的选择为：乙腈∶ 0.5％磷酸水溶液＝ 20：80。 

所述配位聚合物在线净化-加速溶剂萃取的萃取温度为40℃-90℃、压力为1400 p.s.i。 

所述色谱分析系统为高效液相色谱分析系统。 

所述萃取池中的萃取剂为甲醇。 

所述对苯二甲酸、氢氧化钠、三水硝酸铜的质量比为1:2:1。 

所述样品与对苯二甲酸铜配合物的质量比为5:1~4。 

本发明与现有技术相比具有明显的优点和有益效果，本发明所制备的对苯二甲酸铜配位聚合物易于在实验室中进行合成，材料容易取得，该对苯二甲酸铜配位聚合物可以起到和现有商用的吸附剂同等的在线净化样品的基本能力，同时比现有的商用吸附剂效果更好，其运用于抗生素定量检测中，能够大大提高实验精度和检测精密性，以确保数据的实验和检测数据的准确性，该采用加速溶剂萃取在线净化法测定食品或环境样品中抗生素含量的方法为一种新型的抗生素定量定性检测方法，该方法大大降低了对目标物的检测的干扰，能够对痕量物质进行高灵敏度的检测。 

说明书附图

图1是本发明之实施例中三种样品中抗生素的色图谱；

图2是本发明之实施例中配位聚合物用量对抗生素测定的影响分析图；

图3是本发明之实施例中不同吸附剂对抗生素含量测定的比较图。

具体实施方式

一种采用加速溶剂萃取在线净化法测定食品或环境样品中抗生素含量的方法，包括如下步骤， 

a、标准溶液的配制：称取抗生素标样10mg，置于10ml 容量瓶中，加一定量的溶剂后进行震荡溶解，用相同的溶剂进行定容形成抗生素标样母液；将抗生素标样母液采用逐级稀释的方法配制不同浓度的抗生素标准溶液；

b、配位聚合物的制备：将对苯二甲酸与氢氧化钠加入水中，待充分搅拌溶解后，加入三水硝酸铜，连续搅拌至溶液中有蓝色粉末状沉淀生成为止，冷却、过滤并风干以得到蓝色粉末的对苯二甲酸铜配合物，将该蓝色粉末置于棕色广口瓶中备用；所制得的对苯二甲酸铜配合物也称异烟酸铜（Ⅱ），该对苯二甲酸铜配合物的铜为二价铜。

c、配位聚合物在线净化-加速溶剂萃取：将样品用粉碎机粉碎，取一定量的样品和一定量的苯二甲酸铜配合物混匀后，放入加速溶剂萃取仪的萃取池中，在设定好的温度和压力条件下进行自动萃取；该萃取池中的萃取剂为甲醇，该萃取温度为70℃、压力为1400 p.s.i。萃取后的液体流入收集瓶中进行收集，并将该萃取液通过在50℃温度下、真空旋转蒸发后定容，得到样品萃取液； 当然该萃取温度还可选用40℃、50℃、60℃、65℃、80℃、90℃等，在此不做赘述。 

d、标准溶液及样品的测定：将步骤a所配制的抗生素标准溶液注入色谱分析系统中进行检测；然后将步骤c中的萃取液注入色谱分析系统中进行检测分析。该色谱分析系统为高效液相色谱分析系统，该色谱分析系统中流动相的选择为：乙腈∶ 0.5％磷酸水溶液＝ 20：80。 

现采用加速溶剂萃取在线净化法测定食品和环境样品中的四环素为例，具体实施如下： 

首先，配制四环素标准溶液及绘制四环素浓度标准曲线，

四环素标准溶液的配制：称取四环素标样10mg，置于10ml 容量瓶中，加一定量的溶剂后进行震荡溶解，用相同的溶剂进行定容形成四环素标样母液；将四环素标样母液采用逐级稀释的方法配制不同浓度的四环素标准溶液。

四环素浓度标准曲线的绘制：将四环素标样母液采用逐级稀释的方法配制不同浓度的四环素标准溶液注入色谱分析系统中进行检测分析，标准溶液的浓度和所检测到的色谱图中四环素的峰面积如表1所示，由表1制得的四环素标准曲线方程为y=0.2658x+0.0426，R²=0.9997；y代表四环素浓度，x代表色谱图中四环素相应的峰面积。 

表1 四环素的标准曲线 

接着，制备对苯二甲酸铜配合物：将1mol 的对苯二甲酸和2mol 的氢氧化钠加入去离子水中，待充分搅拌溶解后，加入1mol 三水硝酸铜，连续搅拌3 小时至溶液中有蓝色粉末状的物质沉淀生成为止，冷却、过滤并风干后形成蓝色粉末，将该蓝色粉末置于棕色光口瓶中备用；制得对苯二甲酸铜配合物。

接着，配位聚合物在线净化-加速溶剂萃取：采用A-污泥，B-鸡肉，C-花甲肉为样品，取A-污泥（5g）或B-鸡肉（5g）或C-花甲肉（5g）分别与2.0 g苯二甲酸铜配合物粉碎搅拌混匀后，放入加速溶剂萃取仪的34mL 萃取池中，以甲醇为萃取剂，在温度为60℃、压力为1400 p.s.i的条件下进行自动萃取，萃取后的液体流入收集瓶中收集。 

最后，将收集到的萃取液在50℃真空旋转蒸发后定容到5 ml直接进色谱系统中检测分析，得到色谱图，如图1所示，根据图1的色谱图换算得到三种样品中四环素的峰面积，根据峰面积由四环素标准曲线方程换算得到三种样品中四环素的含量，如表2所示： 

表2 三种样品中四环素的含量及精密度、回收率

 

详述对苯二甲酸铜配合物在实际检测中的应用及其效果，具体如下：

如图3所示，为配位聚合物用于净化样品基体的能力考察：分别取0、1、2、3、5g的配位聚合物分别与5份等同质量（质量为5g）的检测样品形成不同的5份待测混合物，每份混合物混匀后装入萃取池中，再经过加速溶剂萃取及旋转蒸发浓缩后进样，发现加入配位聚合物后检测的四环素的浓度均比不加配位聚合物萃取的高，这表明配位聚合物在样品处理过程能有效地吸附脂类等基体成分，从而提高了痕量目标物四环素的响应。但研究也发现，随着对苯二甲酸铜配位聚合物的加入量的增加，四环素的检出值反而降低，这表明了过量的对苯二甲酸铜配位聚合物对目标物业有一定的吸附能力，因此必须通过实验来确定使用的最优量，该对苯二甲酸铜配位聚合物的最优使用量为2g，即对苯二甲酸铜配位聚合物：检测样品=2:5。

如图3所示，为配位聚合物和文献报道的其它吸附剂比较：分别选择硅胶、佛罗里硅土、氧化铝等文献报道过的已用于加速溶剂在线净化的吸附剂进行比较，硅胶、佛罗里硅土、氧化铝的用量也是经过优化实验得出的最优使用量。结果发现这些在线净化吸附剂均比不加吸附剂直接萃取样品时，四环素的响应要高。在这四种吸附剂中，配位聚合物和硅胶的净化能力相当，本发明所制备的对苯二甲酸铜配位聚合物在四个吸附剂中是最优的，其次是氧化铝和硅胶。 

本发明所制备的对苯二甲酸铜配位聚合物易于在实验室中进行合成，材料容易取得，该对苯二甲酸铜配位聚合物可以起到和现有商用的吸附剂同等的在线净化样品的基本能力，同时比现有的商用吸附剂效果更好，其运用于抗生素定量检测中，能够大大提高实验精度和检测精密性，以确保数据的实验和检测数据的准确性，该采用加速溶剂萃取在线净化法测定食品或环境样品中抗生素含量的方法为一种新型的抗生素定量定性检测方法，其他抗生素的检测方法与四环素的检测方法雷同，同样能够对其他抗生素进行精准地检测，在此不做赘述。 

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明的技术范围作任何限制，故凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何细微修改、等同变化和修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。