抗连接蛋白剂用于提高乙酰胆碱酯酶抑制剂的治疗作用的用途

摘要

本发明涉及使用乙酰胆碱酯酶抑制剂的治疗神经学和神经精神学治疗的改进。更具体地，本发明能够通过在本文称为连接蛋白阻断剂的某些分子加强可逆的乙酰胆碱酯酶抑制剂多奈哌齐的作用。所述连接蛋白阻断剂优选为甲氯芬那酸。

说明书

技术领域

本发明涉及使用乙酰胆碱酯酶抑制剂的疗法神经学和神经精神学 治疗的改进。更具体地，本发明能够通过某些分子(在本文称为连接 蛋白阻断剂)加强乙酰胆碱酯酶抑制剂的作用。

背景技术

认知障碍为主要影响学习、记忆、感知和问题解决的一类精神健 康障碍，其包括记忆缺失、痴呆和精神错乱。不同类型的障碍之间的 病因不同，但大多数包括对大脑的记忆部分的损坏。治疗取决于障碍 是如何引起的。药物和疗法为最普通的治疗，然而，对于一些类型的 障碍，如某些类型的记忆缺失，治疗可抑制症状，但目前不存在治愈。

当乙酰胆碱(Ach)的作用经由抑制其代谢酶(主要为乙酰胆碱酯 酶(AChE))而增加时，发生认知功能的提高。因此，增加胆碱能活 性以恢复认知功能的策略为主要且持久的治疗策略。

如今，数种乙酰胆碱酯酶抑制剂(ChEI，或AChEI或抗胆碱酯酶 剂)已显示为降低乙酰胆碱分解的速率，并因此增加其在脑中的浓度 (由此对抗由于胆碱能神经元的死亡而导致的Ach的丧失)。乙酰胆碱 酯酶抑制剂通过增加毒蕈硷和烟碱受体中的Ach的可得性而提高神经 传递。根据一些研究者的发现，这些ChEI可具有影响精神的作用，并 可在控制具有认知障碍的患者中的神经精神和行为紊乱中起到重要的 作用。这些试剂也可有助于管理具有胆碱能系统异常和神经精神病症 候(如视幻觉)的其他障碍。

多奈哌齐为公知的AChEI。已提出将其用于治疗许多认知障碍(路 易体痴呆症、血管性痴呆、睡眠呼吸中止症、轻度认知障碍、精神分 裂症、CADASIL综合征、注意力欠缺症、后冠状动脉旁路认知障碍、 与多发性硬化相关的认知障碍，和唐氏综合症)。已认可其用于治疗轻 度至中度阿兹海默氏症。

阿兹海默氏症(AD)为不可逆的渐进式障碍，其中脑细胞(神经 元)恶化，从而导致认知功能(主要是记忆、判断和推理、运动协调 和模式识别)的丧失。在疾病的晚期，可能丧失全部记忆和精神功能。 神经细胞的死亡在数年期间逐渐发生。其与老年性痴呆相关，所述老 年性痴呆为与老年相关的心智衰退(智能的丧失)。美国目前有530万 患有AD的人，这些个体中超过一半有可能被分类为具有中度或严重 的疾病。AD的这些晚期阶段延续数年的时间，并对于患者和看护人而 言这些晚期阶段通常是最困难的。超过30年以前认识到的AD的病理 生理学的一个重要组成是胆碱能系统的退化。显示胆碱能活性随着AD 发展而丧失的早期组织学研究得到使用先进的成像技术(包括正电子 成像技术(PET)和磁共振成像(MRI))的数个现代研究的支持。AD 中存在的胆碱能异常并不被视为障碍的原因，但胆碱能的参与的，因 为其是普遍的，与认知缺陷相关，并且是可使用目前认可的治疗方案 解决的少数病理生理现象之一。

然而，目前已认可的乙酰胆碱酯酶抑制剂(特别是多奈哌齐)在 治疗上前景较低，因为它们仅产生认知功能的中等改进，且引起的认 知增益(如果有的话)仅持续数月。

因此，迫切需要新的治疗，其对于遭受认知障碍的所有患者(尤 其是遭受晚期阿兹海默症的那些)而言能够更有效且更持久地降低和/ 或阻碍认知症状的丧失。

发明内容

本发明通过公开一种新的治疗产品而满足了该需要，相比于现有 的治疗，所述新的治疗产品显示出对记忆丧失的改进作用。

附图说明

图1显示了在联合或不联合1mg/kg的甲氯芬那酸(MFA)的情 况下在腹腔内给药0.1mg/kg或0.3mg/kg的多奈哌齐(DZP)之后，成 年小鼠(4-5月大的小鼠-前6个柱)和老年小鼠(17-18月大的小鼠- 后6个柱)的θ-海马分析。

图2显示了在腹腔内给药NaCl(空白对照)，或0.1mg/kg、0.3mg/kg 或1mg/kg的单独的多奈哌齐(DZP)，或1mg/kg的单独的甲氯芬那 酸(MFA)，或MFA和DZP的组合(最后的柱)之后，老年小鼠(17-18 月大的小鼠)的总交替。交替在T-迷宫装置中记录。

图3显示了在腹腔内给药NaCl(空白对照)，单独的多奈哌齐(0,1 mg/kg)，单独的MFA(1mg/kg)，以及多奈哌齐和MFA的组合(最后 一组柱)之后，通过两个连续试验的障碍的“老年”小鼠的交替。

具体实施方式

本发明人在下文显示，相比于更高剂量的单独的乙酰胆碱酯酶抑 制剂，甲氯芬那酸(MFA)与乙酰胆碱酯酶抑制剂(如多奈哌齐)的 联合出乎意料地产生定性上优越的临床前增益。

甲氯芬那酸已描述为具有非甾族抗炎活性的“连接蛋白阻断”剂。

在本发明的上下文中，“连接蛋白阻断”剂为能够直接和/或间接 地抑制连接蛋白的功能活性(更通常任何类型的细胞间连接)，和/或 能够直接或间接地功能性抑制涉及连接蛋白型蛋白质的任何细胞活性 的化学分子、蛋白质、蛋白质片段或核酸(例如RNAi)。这种试剂也 可称为“抗连接蛋白分子”。

已知各种分子用于阻断经由连接蛋白的间隙连接。其中，芬那酯 族包括如下化合物：甲氯芬那酸、甲灭酸、氟芬那酸、尼氟灭酸和托 芬那酸。这些化合物均具有非甾族抗炎活性，但该活性并不是它们阻 断间隙连接的能力的原因。相反，实际上已提出，芬那酯类建立了与 连接蛋白或与蛋白质膜界面的直接相互作用，这可影响连接蛋白的构 象，并因此影响其功能作用(Harks EG，The Journal of Pharmacology and  Experimental Therapeutics2001年9月，298(3)：1033-41)。

2-[(2,6-二氯-3-苯基)氨基]苯甲酸(更通常地称为甲氯芬那酸 (MFA))为非甾族抗炎剂和芬那酯类的周围神经止痛剂、前列腺素 抑制剂，并被描述为是水溶性阻断剂中最有效用于可逆地阻断间隙连 接的一个。另外，甲氯芬那酸对连接蛋白的类型不具有特异性，因此 有效用于阻断大量脑连接蛋白(Pan F，Vis Neurosciences2007年7月 -8月；24(4)：609-18)。

甘草次酸衍生物指18-β-甘草次酸(BGA)(也称为“甘草亭酸”)、 18-α-甘草次酸和生胃酮酸，它们是已知用于抑制11-羟甾类脱氢酶的 三萜皂苷(triterpinoid saponins)。此外，这些化合物能够极有效地抑制 间隙连接(Pan F，Vis Neurosciences2007年7月-8月；24(4)：609-18)。

奎宁族的成员，如甲氟喹(LARIAM)、奎宁和奎尼丁也具有对 间隙连接的强拮抗作用(Snnivas M，PNAS2001，98：10942-10947； Pan F，Vis Neurosciences2007年7月-8月；24(4)：609-18)。

一些麻醉剂，如氟烷、安氟醚和异氟烷，具有快速且可逆的间隙 连接阻断作用(Burt JM等人，Circ Research.1989；65：829-37)。

此外，油酰胺(顺式-9-十八烯酸酰胺)(其为油酸的第一酰胺) 也具有对连接蛋白分子43和32的抑制作用(Guan X.等人，J.Cell Biol 1997；139：1785-92)。

另外，已证实环糊精(α-环糊精(α-CD)、β-环糊精(β-CD)和 γ-环糊精(γ-CD))(其为α-D-吡喃葡萄糖的天然周期性低聚糖)的 抗连接蛋白性质(Locke D.等人，J.Biol Chem2004；279：22883-92)。

也已提出亲脂性试剂和脂肪酸(如油酸、棕榈油酸、癸烯酸和肉 豆蔻油酸)、PKC抑制剂十字孢碱、强心苷(如毒毛旋花子甙元和哇 巴因)、δ-9-四氢大麻酚、2-氨基乙氧基二苯基硼酸醋酸和丙酸、12-O- 十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(TPA)、2,3丁二酮单肟、碳酰胆碱、去 甲肾上腺素、FGF-2、血管紧张素-II、心房利钠因子ANF、VEGF、1- 油烯基-2-乙酰基-sn-丙三醇、11,12-环氧二十碳三烯酸、利多卡因、托 那博沙、Nexagon和Peptagon(来自CoDa Therapeutics)作为急性解偶 联心血管间隙连接(Dhein S.，Cardiovascular Research，2004(62) 287-298)。

最后，2-氨基乙基二苯基硼酸盐(2-APB)为最近被指定为间隙连 接阻断剂的化合物(Bai D，J Pharmacol Exp Ther，2006年12月；319(3)： 1452-8)。然而，肌醇1,4,5-三磷酸盐受体的该调节剂相当特异性地靶 向某些连接蛋白，如连接蛋白26、30、36、40、45和50(Bai D，J  Pharmacol Exp Ther，2006年12月；319(3)：1452-8)。

类似地，最近已提出其他分子用于阻断细胞外连接蛋白结构域(其 为对于间隙连接的功能重要的结构域)。其特别地涉及旨在对抗细胞 外连接蛋白结构域的抗体(Hofer A等人，Glia1998；24：141-54；Meyer  RA，J.Cell.Biol1992；119：179-89)，或模拟由连接蛋白的细胞外环 E1和E2所保留的特异序列的小肽(Dahl G.等人，Biophys J，1994； 67：1816-22)；特别地，对应于细胞外序列的肽包括E1的保守模式 QPG和SHVR(间隙26)，和连接蛋白的E2的保守模式SRPTEK(间 隙27)，其更有效用于阻断间隙连接(Chaytor A T等人，J.Physiol1997； 503：99-110)。

此外，功能间隙连接的形成可通过连接蛋白磷酸化而调节。实际 上，取决于磷酸化位点，六聚体亚单元的某些蛋白质结构域的磷酸化 导致间隙连接的功能的抑制，该抑制通过关闭通道或通过降低膜处的 存在(亚单元的输送和半衰期的改变)实现。(Scemes E，Glia2008 年1月15日，56(2)：145-53；Postma FR，J Cell Biol1998年3月9日， 140(5)：1199-209；Shaw RM，Cell2007年2月9日，128(3)：547-60； Fabnzi GM，Brain2007年2月，130(Pt2)：394-403)。

因此，分子可经由连接蛋白的磷酸化水平而具有间接的间隙连接 阻断作用。它们特别地为：溶血磷脂酸、凝血酶和神经肽，如内皮素 (Postma FR，J Cell Biol1998年3月9日，140(5)：1199-209)。在本 发明的一个优选实施方案中，连接蛋白阻断剂对连接蛋白和间隙连接 具有间接作用，且其选自：溶血磷脂酸、凝血酶和神经肽，如内皮素。

在本发明的上下文中，连接蛋白阻断剂有利地选自：长链醇(例 如庚醇和辛醇)、芬那酯类(例如甲氯芬那酸、甲灭酸、氟芬那酸、 尼氟灭酸、托芬那酸)、芳基氨基苯甲酸酯、氨基磺酸酯(例如牛磺 酸)、甘草次酸衍生物(例如18-β-甘草次酸、18-α-甘草次酸和生胃酮)、 油酸酰胺(例如顺式-9-十八烯酸酰胺)，或四烷基铵离子和聚胺(如 精胺和亚精胺)、奎宁衍生物(如甲氟喹、奎宁、奎尼丁)、2-ABP、 麻醉剂(氟烷、安氟醚或异氟烷)、环糊精(α-环糊精(α-CD)、β- 环糊精(β-CD)和γ-环糊精(γ-CD))、旨在对抗连接蛋白的细胞外 结构域的抗体或具有模拟该特定结构域(特别是间隙26和间隙27)的 具有保守模式的肽、油酸、棕榈油酸、癸烯酸、肉豆蔻油酸、十字孢 碱、毒毛旋花子甙元、哇巴因、δ-9-四氢大麻酚、2-氨基乙氧基二苯基 硼酸醋酸、丙酸、12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(TPA)、2,3丁二 酮单肟、碳酰胆碱、去甲肾上腺素、FGF-2、血管紧张素-II、心房利钠 因子ANF、VEGF、1-油烯基-2-乙酰基-sn-丙三醇、11,12-环氧二十碳 三烯酸、利多卡因、托那博沙(SB-220453，(顺式-(-)-6-乙酰基-4S-(3- 氯-4-氟苯甲酰基氨基)-3,4-二氢-2,2-二甲基-2H-1-苯并吡喃-3S-醇)、 Nexagon和Peptagon(来自CoDa Therapeutics)。这些不同的分子具体 描述于如下文章中：Srivinas M，Connexins：A Guide，Humana Press 2009，第8章，第207-224页；Snnivas M，Molecular Pharmacology2003 年6月，63(6)：1389-97；Harks EG，The Journal of Pharmacology and  Experimental Therapeutics2001年9月，298(3)：1033-41；和Salameh A， Biochimica et Biophysica Acta1719(2005)36-58；Dhein S.， Cardiovascular Research，2004(62)287-298。

这些化合物作为例子提供，且本发明涉及具有直接或间接地功能 性阻断连接蛋白或间隙连接的性质的任何分子。

此外，应注意，可通过对前列腺素合成酶的作用、对连接蛋白的 结构改变(连接蛋白表达水平或其磷酸化的调节特别地经由PI3和PKA 发生，PI3和PKA本身取决于Cox、NO和PG合成酶(其为抗炎剂的 靶标)的活性水平)而间接产生抗炎分子。就连接中连接蛋白存在的 降低而言，该改变间接导致类似于直接阻断连接蛋白的连接蛋白的功 能活性的降低。因此，这些分子的使用将产生所需的作用(连接蛋白 的阻断)，并且不会妨碍在低剂量下与作用于精神的试剂组合使用(Yao  J，Monoka T&Oite T.：Kidney Int.2000；57：1915-26。Yao J、Hiramatsu  N、Zhu Y等人：J Am Soc Nephrol.2005；16：58-67；Figueroa XF、 Alvma K、Martinez AD等人：Microvasc Res.2004；68：247-57Alldredge  BT.：J Clin Pathol.2008年5月12日；Lai-Cheong JE、Arita K&McGrath  JA.：J Invest Dermatol.2007；127：2713-25，和Giepmans BN.：Cardiovasc  Res.2004；62：233-45)。

然而，在本发明中涉及的低剂量下，抗连接蛋白剂(如甲氯芬那 酸)对Cox、NO和PG合成酶无作用，并仅显示出独立于这些酶的抗 连接蛋白活性。

具有直接或间接抗连接蛋白活性的所有抗炎分子涵盖于本发明 中。

因此，本发明涉及一种含有至少一种连接蛋白阻断剂和乙酰胆碱 酯酶抑制剂的新的组合产品，其作为在遭受认知障碍的患者中随时间 同时、分开或连续使用的组合产品。

连接蛋白阻断剂可有利地改进由内科医生指定的乙酰胆碱酯酶抑 制剂用于治疗遭受认知障碍的患者的治疗作用。

所述连接蛋白阻断剂已在如上描述。在一个优选实施方案中，其 选自：甲氯芬那酸、甲灭酸、氟芬那酸、尼氟灭酸、托芬那酸、18-β- 甘草次酸(也称为“甘草亭酸”)、18-α-甘草次酸、生胃酮酸、甲氟 喹、奎宁、奎尼丁、油酸酰胺(顺式-9-十八烯酸酰胺)、油酸、棕榈 油酸、癸烯酸、肉豆蔻油酸、十字孢碱、环糊精(α-环糊精(α-CD)、 β-环糊精(β-CD)和γ-环糊精(γ-CD))、托那博沙(SB-220453，(顺 式-(-)-6-乙酰基-4S-(3-氯-4-氟苯甲酰基氨基)-3,4-二氢-2,2-二甲基-2H- 苯并吡喃-3S-醇)、Nexagon和Peptagon(来自CoDa Therapeutics)。

在一个更优选实施方案中，其选自：甲氯芬那酸、甲氟喹、18-β- 甘草次酸和生胃酮。

在一个非常优选的实施方案中，所述连接蛋白阻断剂为甲氯芬那 酸(MFA)。

“乙酰胆碱酯酶抑制剂”(通常缩写为“AChEI”)或“抗胆碱酯 酶”为一种化学化合物，所述化学化合物抑制胆碱酯酶分解乙酰胆碱， 从而增加神经递质乙酰胆碱的水平和作用持续时间。它们作为毒液和 毒物天然存在，并药用使用以治疗重症肌无力、青光眼、阿兹海默氏 症、路易体痴呆症，或者作为抗胆碱中毒的解毒剂。

本发明的组合产品与现有技术的区别在于其含有胆碱能剂(其并 非乙酰胆碱能效应物，而是乙酰胆碱酯酶抑制剂)和连接蛋白阻断剂 作为有效成分。在一个优选实施方案中，本发明的组合产品含有作为 唯一的有效成分的所述乙酰胆碱酯酶抑制剂和所述连接蛋白阻断剂。 特别地，组合产品优选不含有有效量的酮体前体，如具有5-12碳链的 中链甘油三酯。在一个优选实施方案中，其不含有效量的磷酸二酯酶7 抑制剂(PDE7)。在另一优选实施方案中，其不含有效量的阿索马多。 在另一优选实施方案中，其不含有效量的丁氨苯丙酮。

然而，除了两种有效成分之外，所述组合物可包含任何药用载体、 稳定剂、佐剂等，如本领域通常所用。药学可接受的载体的例子包括 (但不限于)：水；水性载体(例如但不限于氯化钠溶液、林格氏溶 液、葡萄糖溶液、葡萄糖和氯化钠溶液，和乳酸林格氏溶液)；水可 溶混的载体(例如但不限于乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇)；以及非水 性载体(例如但不限于玉米油、棉花籽油、花生油、芝麻油、油酸乙 酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯)。本领域技术人员熟知可使用何 种载体。

根据一个优选实施方案，该组合物配制用于口服给药(包括口腔 或舌下给药)。其他令人关注的制剂包括用于腹腔内(i.p)、静脉内 (i.v.)、皮下(s.c)、肌肉内(i.m.)、经皮肤(transcutaneous)、经 皮(transdermal)、鞘内和颅内给药的制剂。其他制剂包括硬脑膜外、 粘膜下层、鼻内、眼结膜囊(ocular cul-de-sac)和直肠途径的给药，以 及通过肺吸入给药。本领域技术人员熟知在每种组合物中可使用何种 载体。

可使用多种给药方式(包括但不限于胶囊、片剂、糖浆剂、膏剂 和软膏剂、栓剂、贴剂或能够包含和分配两种有效成分的任何贮存器) 用于配制上述组合物。本领域技术人员熟知在每种情况中可使用何种 载体。

在一个优选实施方案中，所述乙酰胆碱酯酶抑制剂选自高灭磷、 甲基谷赛昂、地散磷、硫线磷、氯氧磷(Chlorethoxyfos)、氯芬磷、 毒死蜱、甲基毒死婢、蝇毒磷、环沙林、内吸磷、S-甲基内吸磷、二 嗪农、敌敌畏、百治磷、氟磷酸二异丙酯(谷硫磷)、磷酸二异丙酯、 乐果、敌杀磷、乙拌磷、EA-3148、二乙氧膦酰硫胆碱、乙硫磷、灭克 磷、克线磷、杀螟硫磷、倍硫磷、噻唑磷、异氟磷酸(Isofluorophate)、 恶唑磷、马拉氧磷、马拉硫磷、甲胺磷、杀扑磷、美曲磷酯、速灭磷、 久效磷、二溴磷、诺维乔克试剂、氧乐果、乙酰甲胺磷、对氧磷、对 硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、伏杀磷、亚胺硫磷、丁基嘧啶磷 (Phostebupirim)、辛硫磷、甲基嘧啶磷、沙林、梭曼(Soman)、塔 崩、替美磷、特丁磷、杀虫畏、脱叶磷、敌百虫、地美溴铵、Onchidal (无对应中译文)、选自如下的乙酰胆碱酯酶抑制剂：涕灭威、恶虫 威、合杀威、西维因、多菌灵、长杀草、卡巴呋喃、氯炔灵、氯苯胺 灵、腈叉威(Ethienocarb)、乙硫苯威、仲丁威、苯氧威、伐虫脒、呋 喃丹、拉多替吉、甲硫威、灭多威、Miotine、草氨酰、甜菜宁、抗姆 威(Pinmicarb)、抗蚜威、霜霉威、苯胺灵、残杀威、更斯的明、新 斯的明、苯基丝氨酸及其对映异构体芬赛林、毒扁豆碱、吡斯的明、 卡巴拉汀、依斯的明(庚基毒扁豆碱)、阿考替胺、安贝氯铵、多奈 哌齐、腾喜龙、加兰他敏、其衍生物SPH1371、SPH1373、SPH1375 和SPH1286((-)N-(3-哌啶基丙基)-N-脱甲基加兰他敏)、石杉碱A、 其前药ZT1((5R,9R)-5-(r-氯-2-羟基-3-甲氧基苯亚甲基-氨 基)-11-ethuidene-7-甲基-1,2,5,6,9,10-六氢-5,9-甲醇环辛[b]吡啶-2-酮)、 米那普林、他克林、脱色林(tolserine)(3,4,8b-三甲基-2,3a-二氢-1H- 吡咯并[2,3-b]吲哚-7-基)N-(2-甲基苯基)氨基甲酸酯)、扎那哌齐 (Zanapezil)、ER127528(1-(3-氟苄基)-4-[(2-氟-5,6-二甲氧基-1-茚酮 -2-yl)甲基]哌啶盐酸盐)、硫代脱色林(thiatolserine)、RS1259(N,N- 二甲基氨基甲酸4-[1(S)-(甲基氨基)-3-(4硝基苯氧基)丙基]苯基酯半 富马酸盐)、伊匹达克林(NIK-247)、维纳克林(9-氨基-1,2,3,4-四氢 -1-吖啶酮)、齐罗硅酮(2,2,2-三氟-1-[3-(三甲基甲硅烷基)苯基]乙酮)、 T82(2-[2-(1-苄基哌啶-4-基)乙基]-2,3-二氢-9-甲氧基-1H-吡咯并[3,4-b] 喹啉-1-酮半富马酸盐)、CI1002(或PD142676，1,3-二氯-6,7,8,9,10,12- 六氢吖啶并[2,1-b]-喹唑啉)、CHF2060(N-庚基氨基甲酸2,4a,9-三甲 基-2,3,4,4a,9,9a-六氢-1,2-恶嗪并[6,5-b]吲哚-6-基酯-L-酒石酸酯)、MF 268(N-[8-(顺式-2,6-二甲基吗啉-4-基)辛基]氨基甲酸(3aS,8aR)-1,3a,8- 三甲基-l,2,3,3a,8,8a-六氢吡咯并[2,3-b]吲哚-5-基酯L-酒石酸氢盐水合 物)、TV3326(N-炔丙基-3R-氨基茚满-5-基-乙基甲基氨基甲酸酯)、 Latrepirdine(无对应中译文)(Dimebolin(无对应中译文))、(-)-12- 氨基-3-氯-9-乙基-6,7,10,11-四氢-7,11-甲醇环辛[b]喹啉盐酸盐(石杉碱 X)、3-(2-[1-(l,3-二氧丙氨酰-2-基甲基)哌啶-4-基]乙基)-3,4-二氢-2H-1,3- 苯并恶嗪-2,4-二酮盐酸盐(E2030)以及它们的药用盐。

所述乙酰胆碱酯酶抑制剂可具有可逆的或不可逆的作用。

在一个更优选的实施方案中，所述乙酰胆碱酯酶抑制剂为选自如 下的不可逆乙酰胆碱酯酶抑制剂：高灭磷、甲基谷赛昂、地散磷、硫 线磷、氯氧磷、毒虫畏、毒死蜱、甲基毒死婢、蝇毒磷、环沙林、内 吸磷、S-甲基内吸磷、二嗪农、敌敌畏、百治磷、氟磷酸二异丙酯(谷 硫磷)、二异丙基膦酸酯、乐果、敌杀磷、乙拌磷、EA-3148、二乙氧 膦酰硫胆碱、乙硫磷、灭克磷、克线磷、杀螟硫磷、倍硫磷、噻唑磷、 异氟磷酸、恶唑磷、马拉氧磷、马拉硫磷、甲胺磷、杀扑磷、美曲磷 酯、速灭磷、久效磷、二溴磷、诺维乔克试剂、氧乐果、乙酰甲胺磷、 对氧磷、对硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、伏杀磷、亚胺硫磷、丁基嘧 啶磷、辛硫磷、甲基嘧啶磷、沙林、梭曼、塔崩、替美磷、特丁磷、 杀虫畏、脱叶磷、敌百虫、地美溴铵、Onchidal(无对应中译文)以及 它们的药用盐。

在一个更优选的实施方案中，所述乙酰胆碱酯酶抑制剂为选自如 下的可逆乙酰胆碱酯酶抑制剂：涕灭威、恶虫威、合杀威、西维因、 多菌灵、长杀草、卡巴呋喃、氯炔灵、氯苯胺灵、腈叉威、乙硫苯威、 仲丁威、苯氧威、伐虫脒、呋喃丹、拉多替吉、甲硫威、灭多威、Miotine (无对应中译文)、草氨酰、甜菜宁、抗姆威、抗蚜威、霜霉威、苯 胺灵、残杀威、更斯的明、新斯的明、苯基丝氨酸及其对映异构体芬 赛林、毒扁豆碱、吡斯的明、卡巴拉汀、依斯的明(庚基毒扁豆碱)、 阿考替胺、安贝氯铵、多奈哌齐、腾喜龙、加兰他敏、其衍生物SPH1371、 SPH1373、SPH1375和SPH1286((-)N-(3-哌啶基丙基)-N-脱甲基加兰 他敏)、石杉碱A、其前药ZT1((5R,9R)-5-(r-氯-2-羟基-3-甲氧基苯 亚甲基-氨基)-11-ethuidene(无对应中译文)-7-甲基-1,2,5,6,9,10-六氢 -5,9-甲醇环辛[b]吡啶-2-酮)、米那普林、他克林、脱色林(3,4,8b-三 甲基-2,3a-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吲哚-7-基)N-(2-甲基苯基)氨基甲酸 酯)、(-)-12-氨基-3-氯-9-乙基-6,7,10,11-四氢-7,11-methanocycloocta (无对应中译文)[b]盐酸喹啉(石杉碱X)、扎那哌齐以及它们的药 用盐。

在另一优选的实施方案中，所述乙酰胆碱酯酶抑制剂选自：ER 127528(1-(3-氟苄基)-4-[(2-氟-5,6-二甲氧基-1-茚酮-2-yl)甲基]哌啶盐酸 盐)、硫代脱色林、RS1259(N,N-二甲基氨基甲酸4-[1(S)-(甲基氨 基)-3-(4硝基苯氧基)丙基]苯基酯半富马酸盐)、伊匹达克林 (NIK-247)、维纳克林(9-氨基-1,2,3,4-四氢-1-吖啶酮)、依斯的明(庚 基毒扁豆碱)、齐罗硅酮(2,2,2-三氟-1-[3-(三甲基甲硅烷基)苯基]乙酮)、 T82(2-[2-(1-苄基哌啶-4-基)乙基]-2,3-二氢-9-甲氧基-1H-吡咯并[3,4-b] 喹啉-1-酮半富马酸盐)、CI1002(或PD142676，1,3-二氯-6,7,8,9,10,12- 六氢吖啶并[2,1-b]-喹唑啉)、CHF2060(N-庚基氨基甲酸2,4a,9-三甲 基-2,3,4,4a,9,9a-六氢-1,2-恶嗪并[6,5-b]吲哚-6-基酯-L-酒石酸酯)、MF 268(N-[8-(顺式-2,6-二甲基吗啉-4-基)辛基]氨基甲酸(3aS,8aR)-1,3a,8- 三甲基-l,2,3,3a,8,8a-六氢吡咯并[2,3-b]吲哚-5-基酯L-酒石酸氢盐水合 物)、TV3326(N-炔丙基-3R-氨基茚满-5-基-乙基甲基氨基甲酸酯) 和Latrepirdine(Dimebolin)以及它们的药用盐。

在一个相当优选的实施方案中，所述乙酰胆碱酯酶抑制剂为多奈 哌齐(一种可逆的乙酰胆碱酯酶抑制剂)或其药用盐。

“药学可接受的盐”意指例如通过碱性残基(如胺)的无机酸或 有机酸加合；酸性残基(如羧酸)的碱(alkali)或有机加合物而获得 的盐，以及包含前述盐中的一种或多种的组合。药学可接受的盐包括 例如由非毒性无机酸或有机酸形成的母化合物的非毒性盐和季铵盐。 例如，非毒性酸盐包括衍生自无机酸(如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基 磺酸、磷酸、硝酸等)的那些；其他可接受的无机盐包括金属盐(如 钠盐、钾盐、铯盐等)和碱土金属盐(如钙盐、镁盐等)，以及包含 前述盐中的一种或多种的组合。药学可接受的有机盐包括由有机酸(如 乙酸、三氟乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、 酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、帕莫酸、马来酸、羟基马来酸、苯基乙 酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、甲磺酸(mesylic)、乙磺酸(esylic)、 苯磺酸(besylic)、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯 磺酸、甲基磺酸、乙基二磺酸、草酸、羟乙磺酸、HOOC～(CH₂)_n～COOH (其中n为0-4)等)制得的盐；有机胺盐(如三乙胺盐、吡啶盐、甲 基吡啶盐、乙醇胺盐、三乙醇胺盐、二环己胺盐、Ν,Ν'-二苄基乙二胺 盐等)；和氨基酸盐(如精氨酸盐、天冬精氨酸盐(asparginate)、谷 氨酸盐等)；以及包含前述盐中的一种或多种的组合。用于多奈哌齐 的特定的盐公开于WO2006/030249中。

多奈哌齐(2,3-二氢-5,6-二甲氧基-2-[[1-(苯基甲基)-4-哌啶基]甲 基]-1H-茚-1-酮)为哌啶基可逆非竞争性ChEI，显示其用于管理具有轻 度至重度严重程度的阿兹海默氏症的患者。初步观察表明了多奈哌齐 在减轻具有阿兹海默氏型(DAT)痴呆、路易体痴呆的患者和遭受帕 金森氏病的患者的精神症状中的价值(Bergman等人，Clin. Neuropharmacol.2002；25(2)：107-110，Birks J.，Cochrane Database Syst  Rev.2006，(1)：CD001190，Johanssen P.等人，CNS drugs2006；20(4)： 311-25，Gauthier S.等人，Curr Med.Res.Opinion2002；18(6)：347-54)。 已提出多奈哌齐用于治疗许多其他认知障碍(血管性痴呆、睡眠呼吸 中止症、轻度认知障碍、精神分裂症、CADASIL综合征、注意力欠缺 症、后冠状动脉旁路认知障碍、与多发性硬化相关的认知障碍，和唐 氏综合症)。

尽管一些临床研究是结论性的，但对多奈哌齐的作用仍然存在争 论，因为治疗作用较小，且并不总是明显的。对于疾病晚期的患者(其 改进幅度被认为是有限的)，该胆碱能剂药物对疾病晚期的患者的临 床益处是特别不确定的，认为对于这些患者改善的幅度是有限的 (Nieoullon A.，Psychol.Neuropsychiatr.Vieil.2010；8(2)：123-31)。 更重要地，一些患者对这些治疗不起反应。

本发明特别地靶向一种治疗物质组合产品，其含有至少一种连接 蛋白阻断剂和一种乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)，其中所述连接蛋白 阻断剂为甲氯芬那酸，且其中所述乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)为多 奈哌齐或其药用盐。

更精确地，本发明靶向一种治疗物质组合产品，其作为用于治疗 遭受认知障碍的患者的药物，所述组合产品含有至少一种连接蛋白阻 断剂和乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)，其作为同时、分开或连续使用 的组合产品，其中所述连接蛋白阻断剂为甲氯芬那酸，且其中所述乙 酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)为多奈哌齐或其药用盐。

该组合产品例如为一种试剂盒，所述试剂盒在相同容器中或在两 个不同容器中含有MFA和多奈哌齐或其药用盐。

本发明的组合产品优选含有1μg/kg/天至1mg/kg/天的多奈哌齐或 其药用盐。在一个优选实施方案中，本发明的组合产品含有100μg/kg/ 天至1mg/kg/天之间，甚至更优选250μg/kg/天至1mg/kg/天之间的多 奈哌齐或其药用盐。在这些高剂量下，与MFA的组合能够延长多奈哌 齐在时间过程中的作用，并避免当使用这种高剂量时通常发生的继发 作用。

在一个优选实施方案中，本发明的组合产品含有1μg/kg/天至 100μg/kg/天之间，更优选10μg/kg/天至100μg/kg/天之间，甚至更优选 10μg/kg/天至40μg/kg/天之间的多奈哌齐或其药用盐。在这些低剂量 下，与MFA的组合能够获得多奈哌齐的足够的作用而不引起继发作 用。

在大约5mg/kg/天的剂量下在活体内观察MFA的抗炎作用(参见 Wagner C.等人，Am.J.Physiol Regul.Integr.Comp.Physiol.2932007； R1781-6)。然而，当用于本发明的组合产品中时，MFA的量低得多， 通常为0.5μg/kg/天至0.5mg/kg/day之间，更优选25μg/kg/天至0.5 mg/kg/day之间，甚至更优选125μg/kg/天至0.5mg/kg/day之间。

该组合产品与现有技术的区别在于，由于所用的MFA的极低剂 量，其不影响Αβ蛋白质(Αβ38、Αβ40或Αβ42)的积聚，且其不涉及环 氧酶(COX)途径。因此，在本发明的组合中MFA的使用完全不涉及 其作为“非甾族抗炎药物”(NSAID)描述的作用，所述作用在更高 剂量下观察到(通常5mg/kg以上，参见Wagner C.等人，Am.J.Physiol. Regul.Integr.Comp.Physiol.2932007；R1781-6)。

重要地，本发明人已证实MFA，尤其是以低剂量给药时，加强了 多奈哌齐，并产生出乎意料的协同作用：尽管其本身在该低剂量下没 有作用，但MFA实际上将多奈哌齐的作用增强超过了所预期的多奈哌 齐的最大作用(Bontempi B.等人，Neuropsjchopharmacology282003； 1235-46)。而且，MFA加速了多奈哌齐的作用，刚刚治疗后30分钟 就观察到多奈哌齐的作用，而当单独给药时在治疗后3天之前不会预 期有多奈哌齐的作用(参见例如Joo Y.等人，Molecular Pharmacology 2006；69：76-84)。

如本文所用，术语“认知障碍”意指特征在于与思考、学习或记 忆相关的精神活动的不足的任何状况。这种障碍的例子包括认识不能、 记忆缺失、失语症、运动不能、精神错乱、痴呆和学习障碍。在一些 情况中，认知障碍的原因未知或不确定。在其他情况中，认知障碍可 与特征在于神经元或神经元之间的信号传导中所涉及的其他结构的损 坏或丧失的其他状况相关(即由所述其他状况导致或在所述其他状况 存在的情况下发生)。因此，认知障碍可与神经变性疾病(如阿兹海 默氏症、皮质基底核退化症、库贾氏症、额颞叶变性、亨廷顿病、多 发性硬化、常压性水脑、器质性慢性脑综合征、帕金森氏病、皮克病、 渐进性核上性麻痹或老年性痴呆(阿兹海默型))相关；可与对大脑 的创伤(如由慢性硬膜下血肿、脑震荡、脑内出血所导致的对大脑的 创伤)相关，或与对大脑的其他伤害(如由感染(例如脑炎、脑膜炎、 败血症)或药物中毒或滥用所导致的对大脑的其他伤害)有关；以及 可与唐氏综合症和脆性X染色体综合症相关。

认知障碍也可与损坏中枢神经系统的正常功能的其他状况(包括 精神障碍，如轻度认知障碍、后冠状动脉旁路认知障碍、CADASIL综 合征、焦虑性障碍、解离性障碍、心境障碍、精神分裂症和躯体和人 为障碍)相关；其也可与外周神经系统的状况(如慢性痛和神经性疼 痛)相关。

痴呆的例子为：AIDS痴呆综合征、宾斯万格病、路易体痴呆、额 颞叶痴呆、多发脑梗死性痴呆、皮克氏病、词义性痴呆、老年性痴呆、 睡眠呼吸暂停痴呆和血管性痴呆。学习障碍的例子为：艾斯伯格综合 症、注意缺失紊乱、注意力不足过动症、孤独症、儿童期崩解症和雷 特氏症。最后，失语症的例子为进行性非流利性失语。

在一个优选实施方案中，本发明的组合产品能够治疗选自如下的 特定认知障碍：阿兹海默氏症、帕金森氏病、血管性痴呆和老年性痴 呆。

根据另一方面，本发明也涉及该组合产品在遭受认知障碍的患者 中同时、分开或连续的使用。

在同时使用的情况中，治疗的两个组分同时给药至患者。根据本 发明的该实施方案，两个组分可以以混合物的形式包装在一起，或者 分开包装，然后在一起给药至患者之前自发混合。更通常地，两个组 分同时但分开地给药。它们可例如以一定时间间隔给药，所述时间间 隔通常为数分钟至数小时之间，优选1分钟至5小时之间，更优选1 分钟至2小时之间。

特别地，两个组分的给药途径可为不同的。给药也可在不同的部 位进行。在另一实施方案中，两个组分连续给药或随时间间隔给药， 例如在同一天或以数小时至数周或甚至数月的间隔给药。

本发明也涉及至少一种连接蛋白阻断剂(如MFA)用于制备药物 的用途，所述药物旨在在乙酰胆碱酯酶抑制剂(如多奈哌齐)之前、 同时或之后给药，以治疗遭受认知障碍的患者。

根据另一方面，本发明包括至少一种连接蛋白阻断剂(如MFA) 用于加强乙酰胆碱酯酶抑制剂(如多奈哌齐)在遭受认知障碍的患者 中的作用的用途。

本发明也靶向至少一种连接蛋白阻断剂(如MFA)用于加强乙酰 胆碱酯酶抑制剂(如多奈哌齐)在遭受认知障碍的患者中的作用的用 途。

根据另一方面，本发明因此包括一种连接蛋白阻断剂(如MFA)， 其用于加强乙酰胆碱酯酶抑制剂(如多奈哌齐)在遭受认知障碍的患 者中的作用。因此涵盖涉及乙酰胆碱酯酶抑制剂、连接蛋白阻断剂和 认知障碍的所有实施方案。

本发明也靶向一种用于加强乙酰胆碱酯酶抑制剂(如多奈哌齐) 在遭受认知障碍的患者中的作用的方法，所述方法使用至少一种连接 蛋白阻断剂，例如MFA。

在此情况中，术语“加强”意指显著增加在抗连接蛋白剂之前、 同时或之后给药的胆碱能剂的作用。特别地，胆碱能剂与抗连接蛋白 剂的组合有可能将所述胆碱能剂的治疗作用提高至高于由单独的胆碱 能剂所获得的治疗作用的程度，而无论所考虑的其浓度为何。例如当 胆碱能剂的作用相比于单独的胆碱能剂的作用提高至少约25％，优选 至少约40％，更优选至少约50％时，获得胆碱能剂的作用的“显著增 加”。所述作用可例如通过分析EEG分布或相对于实验室动物中空白 对照的交替百分比而测得，如以下实验部分中所述。

该提高作用(“加强”)也能够降低所述胆碱能剂的使用剂量， 并因此限制所述胆碱能剂的潜在的副作用，和/或降低失败和戒断作用。

因此，本发明也涉及至少一种连接蛋白阻断剂用于降低所述胆碱 能剂的剂量和/或限制所述胆碱能剂的副作用和/或降低失败和戒断作 用的用途。

多奈哌齐通常以对于成年个体5mg/天至10mg/天之间(这意味着 大约100μg/kg/天至200μg/kg/天之间)的剂量使用。如上所公开，本 发明的组合能够将所述剂量通常降低至小于100μg/kg/天，优选降低至 小于50μg/kg/天(例如多奈哌齐的剂量可为1μg/kg/天至100μg/kg/天 之间，优选10μg/kg/天至100μg/kg/天之间，更优选10μg/kg/天至40 μg/kg/天之间)，或者使多奈哌齐随时间的作用达到最大而不引起继发 作用(当多奈哌齐以较高剂量(即100μg/kg/天至1mg/kg/天之间，优 选100μg/kg/天至100μg/kg/天之间，或250μg/kg/天至1mg/kg/天之间) 使用时)。

根据最后一个方面，本发明描述了一种用于治疗遭受认知障碍的 患者的方法，其包括给药至所述患者：

a)至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂和

b)至少一种连接蛋白阻断剂，

且其中所述产品a)和b)同时、分开或随时间分布给药。

该方法的所有实施方案如上所述。

实施例

1.材料和方法

1.1.小鼠中的脑电图记录。

如之前在WO2010/029131中所述，通过分析海马脑电图活性 (EEG)而评价多奈哌齐的电生理学作用。

简言之，试验如下：

电极的预植入：两组雄性C57bl/6小鼠(4至5个月大的七只小鼠 和17至18个月大的七只小鼠)在异氟烷麻醉下预植入双侧海马双极 电极。在记录之前实现两周时间的恢复。

注射：通过每次治疗7只小鼠的循环组合，进行不同的腹腔内治 疗(多奈哌齐0.1和0.3mg/kg，甲氯芬那酸1mg/kg，多奈哌齐0.1mg/kg +MFA1mg/kg)。1mg/kg MFA的剂量在之前已描述为不影响啮齿动 物中的脑电图信号。

EEG测量：在注射之后两小时通过记录而在不同批次的清醒小鼠 (之前植入并驯服)上进行EEG测量。光谱分析通过傅里叶变换(FFT) 进行，并允许计算每赫兹和每秒的相对功率。随后每分钟平均FFT数 据，并相对于其在前一天在严格相同实验条件下所获得的对照溶剂记 录进行报告。然后在3赫兹与12赫兹之间平均两个海马电极的光谱功 率，并以每小时进行表示。

在第1天，将盐水腹腔内给药至“成年”或“老年”小鼠(n＝7)， 测量θ-海马活性连续两小时。在第2天，注射单独的多奈哌齐或与MFA 组合的多奈哌齐，使θ-海马活性与在第1天测得的θ-海马活性相关。 结果示于图1中(*：p<0,05(单向ANOVA)。

1.2.工作记忆的行为学测试-小鼠中的T-迷宫方案

交替顺序测试广泛用于评价小鼠中的空间工作记忆(Beracochea  D.J.和Jaffard R.，Behav.Neurosci.101(1987)187-97)。自发交替为啮 齿动物在连续的试验中交替它们的选择进入T-迷宫装置以到达隔间的 先天趋势。为了在给定试验N的过程中交替，动物必须记住在测试N-1 中选择性进行的选择，因此交替的下降将反映遗忘现象。交替中的反 应为行为测量。连续交替更具体地评价对干扰(遗忘的一个主要因素) 的敏感性。

实验在T-迷宫(50cm x10cm x25cm)中进行。为所有受试者 (C57bl/6雄性小鼠，17-18个月大，n＝9)提供间隔90-s赏试间隔的7 个连续试验。为了开始试验，在打开门杆之前，将小鼠置于起始盒中 90s。当受试者进入目标臂之一时，关闭通向所述臂的门。记录所选的 臂和在打开门与到达所选的臂的终点之间消耗的时间(任务实现时 间)。在所选的臂中的30-s隔离期间之后，取出动物并将其置于起始 盒中以用于新的试验。在每次测试之间，用水和醇清洁单元，以避免 嗅觉探查。每当受试者进入与之前试验中到访的臂相对的臂时，认为 是一个交替反应。交替率考虑6个连续试验而进行计算，并以相对于 100％的最大交替率(对于两个连续试验，当受试者从未返回至相同的 臂时获得)的百分比表示。

在T-迷宫实验之前30分钟，17至18个月(“老年”小鼠)的C57BL/6 小鼠腹腔内注射NaCl(空白对照)溶液、多奈哌齐(DZP)、甲氯芬 那酸(MFA)或后两种化合物的组合。

在治疗(NaCl、多奈哌齐、MFA)之后30分钟，将“老年”小鼠 置于T-迷宫装置中。测量7个连续试验的交替的百分比，50％对应于 随机交替。结果示于图2和3中(**：p<0,01；*：p<0,05(ANOVA))。

1.3.统计分析

统计分析通过SigmaPlot软件(Systat Software Inc)确定。

2.实验结果

2.1.通过脑电图学研究多奈哌齐加强

由于已知在脑电图(EEG)上测得的CNS增加的电活性在一些情 况中反映作用于精神的药物的治疗益处(Galderisi S.等人，Methods Find. Exp.Clin.Pharmacol.24Suppl D(2002)79)，对于两小时θ-海马活性 和两组小鼠(“成年”和“老年”)评价组合多奈哌齐/MFA的作用， 如图1所示。

已观察到：

·4-5个月大的小鼠不明显响应多奈哌齐0.1mg/kg和0.3mg/kg的 给药，而17-18个月大的小鼠的记录显示了在2小时记录的过程中0.3 mg/kg的多奈哌齐的作用。这与描述的“成年”和“老年”小鼠之间对 多奈哌齐的不同响应一致(Tranche C.等人，Behav.Brain.Res.2010； 215：255-260)。

·在第一和第二小时过程中，甲氯芬那酸显著加强多奈哌齐的药理 学作用。

因此，EEG显示，尽管MFA本身不具有作用，但与多奈哌齐的组 合治疗比单独的多奈哌齐更有效。如通过ANOVA所表明，相比于经 空白对照和多奈哌齐(0.1和0.3mg/kg)治疗的小鼠，MFA+多奈哌 齐将θ频率增加了超过50％(每组n＝7；p＝0.034)。

2.2.通过行为分析研究多奈哌齐加强

多奈哌齐为被描述为改进小鼠在T-迷宫装置中的表现的一种抗记 忆错误(promnesiant)分子(Spowart-Manning L.，Behav.Brain.Res.151 (2004)37-46)。

由图2可推定：

·多奈哌齐在0.3和1mg/kg下具有显著的抗记忆错误作用，这通 过由于想起在之前测试中所进行的选择的记忆而导致的交替增加而确 定。该分子在0.1mg/kg下无显著的抗记忆错误作用。

·甲氯芬那酸在1mg/kg下无抗记忆错误作用。

·在0.1mg/kg下的多奈哌齐由甲氯芬那酸加强

也使用两个试验的组分析小鼠的交替(组1：试验2和3/组2： 试验4和5/组3：试验6和7)。结果示于表3中：

·甲氯芬那酸在试验的三个组上不显示显著的作用。

·对照小鼠(“空白对照”)的表现在第三组中退化，从而反映了 记忆干扰作用。

·在0.1mg/kg下的多奈哌齐部分抵消了在试验的第三组中的干扰 现象。

·甲氯芬那酸在第三组中主要加强了多奈哌齐的作用，并通过降低 干扰现象而提高了记忆的回想。

更精确地，相比于单独的多奈哌齐以及更低剂量的多奈哌齐 (0.1mg/kg，参见图2，最后的柱)所观察到的最大作用，与甲氯芬那 酸的组合允许达到更高的作用(几乎85％)。换言之，相比于最高剂 量的单独的多奈哌齐(即0.3和1mg/kg)，MFA+0.1mg/kg的多奈哌 齐的组合治疗显示为更有效用于扭转年龄导致的损害(每组n＝9； p<0.01)。

而且，相比于由多奈哌齐引起的遗忘(mnesic)干扰抗性，与甲氯 芬那酸的组合允许获得更高的遗忘(mnesic)干扰抗性。这样的多奈哌 齐作用的改进到目前为止从未被观察到。

这些结果是出乎意料的。事实上，如在文献(参见例如Bontempi B. 等人(Neuropsychopharmacology2003；28；1235-12460)中可以看出， 对于0.2mg/kg s.c.、或在如上所示实验(0.3mg/kg i.p.)的剂量，多奈 哌齐在0.2-0.3mg/kg下显示出其最大效率(参见图2：对于0.3mg/kg 和1mg/kg的单独的多奈哌齐，获得大约75％)。即使在更高剂量下， 使用单独的多奈哌齐无法获得更高的效率。

总体结论：

如下表1恢复了脑电图学(EEG)和行为(SA-任务)结果。

EEG结果表示为相比于空白对照注射的小鼠，每一组的海马θ节律 的相对功率。SA-任务结果表示为在七个试验中相对于空白对照的平均 交替百分比。*:p<0.05；**：p<0.01。

已首次显示，多奈哌齐的电生理学活性和抗记忆错误活性由甲氯 芬那酸大大加强，所述甲氯芬那酸出乎意料地允许多奈哌齐的最大药 理学作用。

另外，甲氯芬那酸改变了多奈哌齐的药理学特性，从而改变了多 奈哌齐对记忆的时间演化和强度作用。

重要的是注意，在急性治疗过程中，MFA本身对本文所用的临床 前模型无作用，从而考虑MFA的活性独立于Αβ积聚：

·Αβ与NSAID活性之间的独立性。

本文所用的临床前模型(中年野生型17-18个月小鼠)为并非特征 在于Αβ积聚的认知障碍的病理学模型。实际上，尽管在17-18个月显 示认知下降(参见Beracochea D.等人，Psychopharmacology(Berl)193 2007；63-73)，但即使超过24个月，在野生型小鼠中也不存在Αβ积 聚(参见Walther T等人，PloS One2009；e4590的图2)。另外，在1 mg/kg下单独的MFA无显著的认知作用，(本申请的图2和3)，而 这样的剂量加强多奈哌齐。

对于其抗Cox活性，MFA以5mg/kg以上的剂量给药(参见Wagner C.等人，Am.J.Physiol.Regul.Integr.Comp.Physiol.2932007； R1781-6)。然而，MFA在本发明中以比为了获得其NSAID活性所发 布的那些剂量更低的剂量使用。

这一点构成了与现有技术文献(如Mc Gleenon等人，British Journal  of Clinical Pharmacology，1999；48，471-480，和Gasparini L.等人， Journal of Neurochemistry2004；91，521-536)的主要区别，因为现有 技术文献明确指出Αβ剂量类似于抗-Cox剂量。因此，MFA对多奈哌 齐的加强作用独立于其潜在的抗Αβ_1-40或抗Αβ_1-42的作用。

·本发明不特异地靶向阿兹海默氏症，而是靶向所有的认知损害。

本发明广泛解决所有的认知障碍。这种障碍由在许多痴呆(阿兹 海默氏症、路易体痴呆、与帕金森氏病相关的痴呆、老年性痴呆、血 管性痴呆、脑积水、科萨科夫综合征、库贾氏症等)中存在的具体认 知功能(如注意力、记忆、语言)的交替定性。因此，本发明不特异 地靶向具有Αβ积聚的疾病，而是靶向所有类型的认知障碍，且独立于 它们的病因学(事实上，多奈哌齐也描述为靶向独立于Αβ的机制，如 胆碱能系统)。

·在低剂量下，在如上示例的临床前模型中的MFA给药加强了多 奈哌齐，其为出乎意料的作用：

○该作用并非加和作用，而是出乎意料的协同作用。事实上，MFA 在测试剂量下本身无作用，多奈哌齐被加强超过其最大作用(Bontempi  B.等人，Neuropsychopharmacology282003；1235-46)(相对于抗记忆 干扰性尤为显著，所述记忆干扰性在人类痴呆中发生改变(Hanseeuw B.J.等人，Brain Cogn.72325-31)。

○本发明的组合的活性的动力学为新的和意料不到的。事实上， 刚刚治疗后30分钟就观察到多奈哌齐效率的加强，而现有技术文献(如 Joo Y.等人，Molecular Pharmacology2006；69：76-84)中描述的作用 仅在3天治疗之后才看到。