一种治疗髓细胞白血病的健脾泄毒的中药组合物

摘要

本发明涉及一种治疗髓细胞白血病的健脾泄毒的中药组合物，由以下重量份的原料药制成：栀子1500-1700份、陈皮3100-3300份、炒黄柏900-1100份、太子参2600-2800份、蜜炙甘草700-900份、黄连1500-1700份、腰黄3100-3300份、冰片300-500份、麸炒白术700-900份、人工牛黄1500-1700份、麝香0.7-0.9份、黄芩3100-3300份。本发明优点在于：配伍符合中药“君臣佐使”原则，以健脾泄毒法治疗髓细胞白血病疗效显著；通过提高患者的免疫能力，间接杀伤白血病细胞，促进正常造血干细胞生长。

说明书

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体地说，是一种治疗髓细胞白血病的健脾泄毒的中药组合物。

背景技术

髓细胞白血病分为急性髓细胞白血病(acute myelocytic leukemia，AML) 和慢性髓细胞白血病(也称慢性粒细胞白血病，简称慢粒，chronic myelocytic leukemia，CML)。

急性髓细胞白血病(AML)或急性非淋巴细胞白血病(ANLL)包括所有非淋巴细胞来源的急性白血病。它是多能干细胞或已轻度分化的前体细胞核型发生突变所形成的一类疾病是造血系统的克隆性恶性疾病。人群接受大剂量放射线或长期接触苯可增加这类疾病的发病率。AML是一个具有高度异质性的疾病群，它可以由正常髓系细胞分化发育过程中不同阶段的造血祖细胞恶性变转化而来，起源于不同阶段祖细胞的AML具有不同的生物学特征。对于AML的治疗除急性早幼粒细胞白血病外仍以联合化疗为主，AML患者总的完全缓解率仅50%～70%，长期无病生存率为25%～30%。

慢性髓细胞白血病（CML）是骨髓造血干细胞克隆性增殖形成的恶性肿瘤，占成人白血病的15%，绝大多数患者以慢性期（Chronic phase）起病，常无症状，或因偶然体检发现白细胞增高或左上腹包块而查出本病。常见症状包括乏力、食欲不振、腹部胀满、盗汗和体重降低。

中国专利文献CN1196263A公开了一种治疗白血病的中药制剂，其特征是它的主方及各组分重量份比例是：黄芪5-15、当归3-7、阿胶3-7、牛黄1-5、雪莲5-15、西红花2-6、灵芝2-7、羚羊角3-8、冬虫草3-8、青黛3-7、雄黄3-7、红景天5-15。中国专利文献CN102784315A公开了一种治疗慢性粒细胞白血病的中成药，包括A组分和B组分，所述A组分由以下原料药制成，生地10-30份、玄参10-30份、黄芩9-20份、栀子9-20份、山豆根9-20份、大青根9-20份、地骨皮10-30份、牡丹皮6-15份、茜草10-20份、泽泻6-15份、白茅根10-30份、水牛角10-20份、半枝莲10-20份、白花蛇舌草10-20份、甘草6-12份；所述B组分由以下原料药制成，青黛8-10份、雄黄1-2份。这些药物存在一定的疗效，但也存在一些问题，如药物起效慢，药味较多，不便于制备使用，效果不十分明显，服用时间长，疗效不稳定等等。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种治疗髓细胞白血病的健脾泄毒的中药组合物。

本发明的再一的目的是，提供一种治疗髓细胞白血病的健脾泄毒的中药组合物的应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种治疗髓细胞白血病的健脾泄毒的中药组合物，由以下重量份的原料药制成：栀子1500-1700份、陈皮3100-3300份、炒黄柏900-1100份、太子参2600-2800份、蜜炙甘草700-900份、黄连1500-1700份、腰黄3100-3300份、冰片300-500份、麸炒白术700-900份、人工牛黄1500-1700份、麝香0.7-0.9份、黄芩3100-3300份。

优选的，由以下重量份的原料药制成：栀子1550-1650份、陈皮3150-3250份、炒黄柏950-1050份、太子参2650-2750份、蜜炙甘草750-850份、黄连1550-1650份、腰黄3150-3250份、冰片350-450份、麸炒白术750-850份、人工牛黄1550-1650份、麝香0.75-0.85份、黄芩3150-3250份。

优选的，由以下重量份的原料药制成：栀子1600份、陈皮3200份、炒黄柏1000份、太子参2700份、蜜炙甘草800份、黄连1600份、腰黄3200份、冰片400份、麸炒白术800份、人工牛黄1600份、麝香0.814份、黄芩3200份。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：所述的中药组合物在制备治疗髓细胞白血病的药物中的应用。

本发明优点在于：

1、本发明的中药组合物，其配伍符合中药“君臣佐使”原则，以健脾泄毒法治疗髓细胞白血病疗效显著；

2、能使患者降低的CD₃、CD₄百分值及CD₄/>8比值明显上升，能明显降低SIL->

3、能明显抑制白血病患者CFU- L，浓度越高抑制作用越强，而对正常人骨髓CFU- GM无明显抑制作用，能促进正常造血干细胞生长。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

本发明提供一种髓细胞白血病的健脾泄毒的中药组合物，由以下重量份的原料药制成：栀子1500-1700份、陈皮3100-3300份、炒黄柏900-1100份、太子参2600-2800份、蜜炙甘草700-900份、黄连1500-1700份、腰黄3100-3300份、冰片300-500份、麸炒白术700-900份、人工牛黄1500-1700份、麝香0.7-0.9份、黄芩3100-3300份。

实施例1

栀子1500份、陈皮3300份、炒黄柏900份、太子参2800份、蜜炙甘草900份、黄连1500份、腰黄3300份、冰片300份、麸炒白术900份、人工牛黄1500份、麝香0.7份、黄芩3300份。

实施例2

栀子1520份、陈皮3280份、炒黄柏920份、太子参2780份、蜜炙甘草880份、黄连1520份、腰黄3280份、冰片320份、麸炒白术880份、人工牛黄1520份、麝香0.72份、黄芩3280份。

实施例3

栀子1540份、陈皮3260份、炒黄柏940份、太子参2760份、蜜炙甘草860份、黄连1540份、腰黄3260份、冰片340份、麸炒白术60份、人工牛黄1540份、麝香0.75份、黄芩3260份。

实施例4

栀子1550份、陈皮3250份、炒黄柏950份、太子参2750份、蜜炙甘草850份、黄连1550份、腰黄3250份、冰片350份、麸炒白术850份、人工牛黄1550份、麝香0.76份、黄芩3250份。

实施例5

栀子1580份、陈皮3220份、炒黄柏980份、太子参2720份、蜜炙甘草820份、黄连1580份、腰黄3220份、冰片380份、麸炒白术820份、人工牛黄1580份、麝香0.78份、黄芩3220份。

实施例6

栀子1600份、陈皮3200份、炒黄柏1000份、太子参2700份、蜜炙甘草800份、黄连1600份、腰黄3200份、冰片400份、麸炒白术800份、人工牛黄1600份、麝香0.8份、黄芩3200份。

实施例7

栀子1620份、陈皮3180份、炒黄柏1020份、太子参2680份、蜜炙甘草780份、黄连1620份、腰黄3180份、冰片420份、麸炒白术780份、人工牛黄1620份、麝香0.82份、黄芩3180份。

实施例8

栀子1650份、陈皮3150份、炒黄柏1050份、太子参2650份、蜜炙甘草750份、黄连1650份、腰黄3150份、冰片450份、麸炒白术750份、人工牛黄1650份、麝香0.84份、黄芩3150份。

实施例9

栀子1660份、陈皮3140份、炒黄柏1080份、太子参2640份、蜜炙甘草740份、黄连1660份、腰黄3140份、冰片460份、麸炒白术740份、人工牛黄1660份、麝香0.85份、黄芩3140份。

实施例10

栀子1680份、陈皮3120份、炒黄柏1100份、太子参2620份、蜜炙甘草720份、黄连1680份、腰黄3120份、冰片480份、麸炒白术720份、人工牛黄1680份、麝香0.88份、黄芩3120份。

实施例11

栀子1700份、陈皮3100份、炒黄柏1000份、太子参2600份、蜜炙甘草700份、黄连1700份、腰黄3100份、冰片500份、麸炒白术700份、人工牛黄1700份、麝香0.9份、黄芩3100份。

实施例12

栀子1600份、陈皮3200份、炒黄柏1000份、太子参2700份、蜜炙甘草800份、黄连1600份、腰黄3200份、冰片400份、麸炒白术800份、人工牛黄1600份、麝香0.814份、黄芩3200份。

实施例13>

采用中药汤剂常规的制作方法，即取实施例1-12任一所述的中药组合物加水煎煮成汤剂。

实施例14>

取实施例1-12任一所述的中药组合物，研细，煎煮，减压浓缩得浸膏，将浸膏干燥粉碎制成颗粒，加入制药辅料，压制成片剂或填充装胶囊。

实施例15>

取实施例1-12任一所述的中药组合物，研细，煎煮，减压浓缩得浸膏，将浸膏干燥粉碎制成颗粒。

实施例16>

取实施例1-12任一所述的中药组合物，研细，煎煮，取上清液，浓缩至稠浸膏；加适当制药辅料（白糖、蜂蜜、苯甲丙酸或羟苯乙酯等），制成合剂、口服液或糖浆剂。

实施例17>

1 临床资料

1.1 一般资料

30例患者均符合张之南主编《血液病诊断及疗效标准》中慢性粒细胞白血病(简称慢粒，CML)的国内诊断标准。所有患者均经外周血象、骨髓象，部分经分子生物学检测等确诊。30例中初治19例，部分缓解者11例，男性19例，女性11例，年龄15岁~80岁，病程3月~2.5年，有苯接触史者6例，发病前多次反复服用西药感冒药者3例，无明显诱因者21例。30例患者中瘀毒内结型9例，男性5例，女性4例，平均年龄45.1岁，病程1.15年；阴虚内热型9例，男性5例，女性4例，平均年龄37.9岁，病程7月，脾虚阴亏型12例，男性7例，女性5例，平均年龄44.4岁，病程5月。3型比较性别、年龄之间无明显差异(P>0.05)，但3型之间病程比较差异显著(P<0.05)。

1.2 分型标准

根据黄振翘教授长期临床经验将本病分为3型：瘀毒内结型：面色灰暗，发热延绵，骨节疼痛，腹部块，脘胁疼痛，皮肤瘀斑、紫癜或结节，舌紫暗或有瘀斑，脉涩或弦数。阴虚内热型：腰膝酸软，手心灼热，烦躁，头晕口干，或午后潮热，鼻衄或肌衄，舌红苔薄，脉细数或细弦数。脾虚阴亏型：面色少华，头晕耳鸣，口渴引饮，神倦乏力，心悸气短，时盗汗出，苔薄白，脉虚细。以上3型证侯病机均有瘀毒热结、脾虚阴亏，但各有侧重。

2 方法

2.1 治疗及用药

健脾养阴治本，清泄瘀毒治标，标本兼顾。

生血灵糖浆：黄芪、太子参、生白术、生地、麦冬、黄柏、陈皮、砂仁、黄连、丹皮、甘草等。20ml/次，每d3次，冲入温开水送服。

本发明的中药组合物采用实施例6的比例和实施例14的方法制成片剂(每片含生药0.1g)。治疗量12片~16片/次，每d3次，维持量4片/次，每d3次，据外周血白细胞数调整剂量，3个月为1疗程。

2.2 观察及检测

2.2.1 临床症状及体征

每疗程结束后，专卡记录病人贫血、出血、感染、骨痛、肝脾肿大等临床症状及体征的变化，观察患者持续缓解时间、生存时间及临床治愈情况，根据症状轻重分别用“- 、+ 、+ + 、+ + + ”表示。

2.2.2 实验指标

2.2.2.1 外周血象

每周检查血红蛋白、白细胞及其分类、血小板。采用东亚- K- 1000细胞分析仪比浊测定。

2.2.2.2 免疫学指标

治疗前后检测外周血T淋巴细胞亚群、IL- 2、SIL- 2R等免疫指标的变化。T淋巴细胞亚群的检测采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标染色技术(APAAP)法，试剂盒购自中国军事医学科学院，外周血IL- 2和SIL- 2R测定均采用酶联免疫法，试剂盒为美国Biomedical公司产品，以上指标检测均严格按说明书操作。取肝素抗凝全血5ml，淋巴细胞分离液常规分离外周血单个核细胞，6% RPMI1640培养液调整细胞浓度为2×10⁶/ml，加入PHA5μg/>2条件培养箱中培养72h，离心收集上清，-20℃冰箱储存以备检测IL->

3 治疗结果

3.1 疗效标准

根据张之南主编《血液病诊断及疗效标准》的国内疗效标准评定。

3.2 总疗效分析

19例初治的CML患者治疗后完全缓解15例，部分缓解4例，11例治疗前部分缓解的CML患者治疗后完全缓解7例，2例仍部分缓解(阴虚内热型1例、瘀毒内结型1例)，2例进入加速期(为瘀毒内结型)，完全缓解率73.33%，总有效率93.33%，中位生存期为3.67年。各分型的疗效见表1。

表1 慢性粒细胞白血病辨证分型的临床疗效观察

注：治疗前后比较* P< 0.05，** P< 0.01。

3.3 治疗前后脾脏大小变化

30例CML患者治疗前脾脏肿大者20例，治疗后脾脏均明显缩小或消失，一般治疗2月后开始缩小，6月后明显缩小，与治疗前相比差异显著。见表2。

表2 30例CML患者治疗前后脾脏缩小情况

3.4 治疗前后外周血象变化

见表3。

表3 CML患者治疗前后外周血象变化

注：治疗前后比较* P<0.05，** P<0.01；与瘀毒内结型比较# P<0.05。

3.5 治疗前后骨髓象变化

30例患者治疗前骨髓增生极度活跃者19例，明显活跃者8例，增生减低者3例，治疗后骨髓象完全缓解者23例，未缓解者7例，完全缓解率为76.67%。

3.6 治疗前后T淋巴细胞亚群的变化

见表4。

表4 CML患者治疗前后T淋巴细胞亚群变化(±s)

注：治疗前后比较* P <0.05；与正常人比较^△P>△△>

3.7 治疗前后血清IL- 2、SIL- 2R的变化

见表5。

表5 CML患者治疗前后IL- 2、SIL- 2R的变化(±s)

4 讨论

白血病属于祖国医学“虚损”、“瘕”、“伏火”、“血证”等范畴。本发明采用益气健脾、养阴清热、清泄瘀毒的治则治疗慢粒，取得了较好的疗效，且无明显毒副作用，同时认为粒细胞白血病的病因为温热伏火毒邪侵淫，且最易耗气伤阴，损伤脾土，下及肾阴，火毒瘀结，故治疗上益气健脾、养阴泻火、清泄瘀毒。研究证实黄芪、太子参、生地均可诱导IL- 2、IFN的产生，从而介导肿瘤细胞发生凋亡或增加TNF以诱导发生肿瘤细胞凋亡的能力，太子参、黄芪、生地等能诱生IFN-γ，从而激活T淋巴细胞功能，加强对肿瘤细胞的杀伤作用。本发明的研究结果显示：患者治疗前IL- 2水平显著低于正常，SIL- 2R水平则明显高于正常对照组；经本发明的中药组合物健脾泄毒法治疗后，患者IL- 2水平明显升高，但仍低于正常水平；SIL- 2R则明显下降。

白血病细胞可直接抑制T淋巴细胞分化抗原表达，对白血病患者T淋巴细胞亚群的检测表明，患者发病期CD₃、CD₄百分值及CD₄/>8比值明显低于正常，且CD₄/>8比值越低患者的细胞免疫功能越差，这也是白血病患者易发生感染的重要原因之一。本发明观察了30例慢粒患者在使用本发明的中药组合物健脾泄毒法治疗前后的T淋巴细胞亚群变化情况，结果表明，治疗前CD₃、CD₄百分值及CD₄/>8比值显著低于正常组，治疗后CD₃、CD₄百分值及CD₄/>8比值显著上升。

综上研究结果表明，本发明的中药组合物健脾泄毒法能使患者降低的CD₃、CD₄百分值及CD₄/>8比值明显上升；能明显降低SIL->

实施例18>

一、材料与方法

1. 健脾养阴泄毒法药物组成及制备

生血灵糖浆：由黄芪、太子参、生白术、生地黄、麦门冬、黄柏、陈皮、砂仁、黄连、牡丹皮、甘草等组成。功能益气健脾、养阴泻火、清泄瘀毒。生药含量4g/ml。

本发明的中药组合物采用实施例6的比例和实施例14的方法制成片剂(每片含生药0.1g)。

2. 实验对象

髓细胞白血病患者12例，其中AML 6例，CML 6例，均为初治或骨髓象未缓解者，正常人骨髓为第二军医大学附属长海医院心胸外科患者手术取下的肋骨骨髓(排除肿瘤细胞的骨髓转移、未经放疗和化疗，造血系统正常)。

3. 实验方法

(1)药物血清制备

①实验用动物：雄性Wister大鼠，清洁级(合格证号023-5)，体重250~300g，由上海中医药大学实验动物中心提供。②动物分组：将大鼠随机分为对照组(A)、本发明片剂组(B)、本发明片剂加生血灵组(C)、羟基脲组(D)。③给药剂量：B组每日每只大鼠喂本发明片剂3片，C组每日除给予以上剂量的本发明片剂外，另给予生血灵糖浆7ml，D组每日每只大鼠喂羟基脲0.1g，给药剂量相当于成人用量的20倍，A组每日每只大鼠喂生理盐水7ml。④给药方式：喂药3d，每天分两次给药，第4d上午喂药后2h抽血，抽血前禁食12h。⑤采血方法：无菌条件下自下腔静脉采血，离心(3000r/min，20min，4℃)，分离血清(即药物血清)，将同一条件的动物血清混匀，56℃，30分钟灭活，-70℃冷藏备用。每只大鼠可采全血9~10ml，离心后血清3ml左右，培养时血清稀释成5%、10%、20%。

(2)细胞培养

半固体造血祖细胞培养：正常人骨髓CFU-GM培养为双层琼脂半固体培养法，底层为外周血白细胞条件培养层，CFU-L培养为单层琼脂半固体培养法。CFU-GM培养体系：2M Mccoy’5A 0.78ml，3%谷氨酰胺0.2ml，0.6%琼脂1ml，骨髓单个核细胞悬液(2×10⁶/ml)>

CFU-L培养体系：BPA 0.2ml，0.6%琼脂0.5ml，骨髓单个核细胞悬液(1×10⁷/ml) 0.1ml，2M Mccoy’5A>

取3ml肝素抗凝骨髓液，淋巴细胞分离液常规无菌分离，提取单个核细胞层，调整细胞浓度，分别加入有底层的培养皿(CFU-GM培养)或24孔培养板(CFU-L培养)每组分别做三个孔取平均值，置37℃、CO₂培养箱中培养7d计数CFU-GM集落，培养10d计数CFU-L集落由大于40个细胞组成的集落为CFU-L，计算抑制率(IR)：

IR=[(空白对照组集落-实验组集落) / 空白对照组集落] ×100%

(3)分组观察

观察不同种类及不同浓度的药物血清对正常人骨髓CFU-GM及髓细胞白血病患者CFU-L集落的影响。分为空白对照组、正常血清组、本发明片剂组、本发明片剂加糖浆组、羟基脲组。

二、实验结果

1. 不同药物血清对白血病患者CFU- L的影响

正常血清对CFU- L无明显抑制作用，本发明片剂组、本发明片剂加生血灵组及羟基脲组药物血清对CFU- L均有明显的抑制作用，并呈一定的量一效关系，各组之间比较无显著差异(见表1)。

2. 不同药物血清对正常人骨髓CFU- GM的影响

正常血清对正常人骨髓CFU- GM无明显抑制作用，本发明片剂组及羟基脲组药物血清对正常人骨髓CFU- GM均有明显的抑制作用，且有一定量-效关系，而本发明片剂加生血灵组药物血清只在高浓度时才对正常人骨髓CFU- GM有轻度的抑制作用，明显弱于本发明片剂组及羟基脲组(见表1)。

表1 不同药物血清对CFU- L和CFU- GM的抑制率比较(%)

注: 与正常血清组比较，* P < 0.05，** P < 0.01；与羟基脲组比较，△ P< 0.05；与本发明片剂组比较， # P< 0.05。

三、讨论

有研究表明，砷剂在癌细胞和正常细胞之间有选择性，即使长期用药对骨髓造血功能亦无抑制，反而刺激造血功能。李晶等研究发现As₂O₃及As₂S₂均能诱导NB4凋亡，抑制其细胞增殖，对NB4细胞CFU->

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

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