用于脑生长和/或认知和/或心理运动发育的组合物

摘要

本发明公开了用于脑生长和/或认知和/或心理运动发育的组合物，其包含至少一种长链多不饱和脂肪酸、至少一种益生菌、和寡聚糖的混合物，所述的混合物含有至少一种N-乙酰化寡聚糖、至少一种唾液酸基化寡聚糖和至少一种中性寡聚糖。该组合物特别适合用于婴儿，尤其是早产的婴儿。

说明书

发明领域

本发明涉及用于脑生长和/或认知和/或心理运动发育的组合物。该组合物用于哺乳动物，优选用于人，更优选用于婴儿。

发明背景

在发育期间、特别是生命的最初几年，儿童表现出令人感兴趣的神经发育模式和高度的神经可塑性。脑发育和认知发育的关系是极其复杂的，并且自从1990年代以来是增长的研究领域。

某些新进展是为了证明在婴儿中和特别是在早产儿或极低胎龄新生儿(ELGAN)中的脑生长和认知发育之间的联系(J.Pediatr.2009;155:344-9)。

因此，对促进脑生长、特别是早产儿中的脑生长有极大的兴趣，以便有利于其认知和/或心理运动发育。

已经提出用长链多不饱和脂肪酸进行补充以促进认知和心理运动发育，并且大量临床试验已经研究了该假说。然而，结合这些数据的近期的荟萃分析表明，这种补充对神经发育没有显著作用(Schulzke SM,PatoleSK,Simmer K,Longchain polyunsaturated fatty acid supplementation inpreterm infants)(综述)The Cochrane Library2011,第2期)。

通过大量增加蛋白质和能量摄入也能够改善早产儿的认知发育(IBrandt,E.J.Sticker and M.J.Lentze,catch-up growth of headcircumference of very low birth weight,small for gestational age preterminfants and mental development to adulthood),J Pediatr2003;142:463-8)。然而，大量的肠内喂养体积和/或喂养物的高蛋白质/能量密度能够导致对喂养的不耐受。此外，导致尿素产生增加的高蛋白质摄入可能增加早产儿肾功能不全和代谢性酸中毒的风险。此外，在婴儿期的高蛋白质/能量摄入已经与代谢健康的长期改变有关(肥胖、II型糖尿病和心血管疾病的风险增加)(KK ONG&RJF LOOS,Rapid infancy weight gain and subsequentobesity:Systematic reviews and hopeful suggestions.Acta2006;95:904-908；J Rotteveel,MM van Weissenbruch,JWR Twisk,HADelemarre-Van de Waal,Infant and Childhood Growth Patterns,InsulinSensitivity,and Blood Pressure in Prematurely Born Young AdultsPediatrics)2008;122:313-321)。

需要用于脑生长和/或认知和/或心理运动发育的营养组合物，特别是用于早产或具有低出生体重(LBW)或经历子宫内生长迟缓(IUGR)的或者遭受由于营养不良(例如次优子宫内营养)和/或疾病引起的生长发育障碍的婴儿和幼儿，优选婴儿。

更普遍地需要在幼年哺乳动物、特别是婴儿和儿童、优选婴儿、以及幼年宠物中的营养干预。

发明概述

发明人已经令人惊讶地发现给予特定的寡聚糖的混合物以及至少1种长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)和至少1种益生菌在脑生长和/或认知和/或心理运动发育中特别有效。

因此，本发明提供包含至少1种LC-PUFA、至少1种益生菌和寡聚糖的混合物的组合物，所述的混合物含有至少一种N-乙酰化寡聚糖、至少一种唾液酸基化寡聚糖和至少一种中性寡聚糖，其用于脑生长和/或认知和/或心理运动发育。

根据本发明的组合物优选是营养组合物。

LC-PUFA优选在花生四烯酸(ARA)和二十二碳六烯酸(DHA)中进行选择，更优选LC-PUFA是ARA和DHA的混合物。

益生菌优选在益生菌菌株中进行选择，更优选的益生菌是乳杆菌或双歧杆菌。在优选的实施方案中，益生菌是乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)和罗伊乳杆菌(Lactobacillus reuteri)。

中性寡聚糖优选在寡聚果糖(FOS)和半乳寡聚糖(GOS)中进行选择，优选GOS。

在1个实施方案中，寡聚糖混合物可以来源于动物乳，例如奶牛、山羊、绵羊或水牛乳中的1种或多种。例如，其通过奶牛的乳分馏并且进一步酶处理而获得。

在第二实施方案中，寡聚糖混合物可以使用酶、化学-酶和/或化学的方法进行制备。

在第三实施方案中，寡聚糖混合物可以使用酵母和/或细菌性发酵技术进行制备。例如，经基因修饰或未经基因修饰的表达合适的酶(例如糖苷酶和/或糖基转移酶)的酵母和/或细菌细胞可能用于此目的。

本发明的组合物优选用于早产或具有低出生体重(LBW)或经历子宫内生长迟缓(IUGR)的和/或遭受由疾病和/或营养不良引起的生长延迟的婴儿。

发明详述

如本文所用的，以下术语具有以下的含义。

术语“儿童”是指处于出生和青春期阶段之间的人。成人是比儿童更年长的人。

术语“婴儿”是指年龄在12个月以下的儿童。

术语“早产儿”是指在低于37周胎龄出生的婴儿。

术语“低出生体重婴儿”是指具有低于2,500g的出生体重的婴儿。

术语“幼儿”是指年龄在1和3岁之间的儿童。

术语“婴儿配方食品”是指针对在生命最初4至6个月期间的婴儿的特定营养应用并且自身满足该类人群营养需求的食品(1991年5月14日，the European Commission Directive91/321/EEC的第1.2条，关于婴儿配方食品和后续配方食品)。

术语“早产儿配方食品”是指针对早产儿的婴儿配方食品。

术语“人乳强化剂”是指用于增加喂给早产儿或低出生体重婴儿的母乳中的热量、蛋白质、矿物质和维生素的添加剂。

术语“后续配方食品”是指针对年龄超过4个月的婴儿的特定营养应用并且含有在这类人群的进行性的多样化膳食中的主要液体元素的食品。

术语“初始婴儿配方食品”是指针对在生命最初4个月期间的婴儿的特定营养应用的食品。

术语“婴儿食品”是指针对在生命最初几年期间的婴儿的特定营养应用的食品。

术语“婴儿谷物组合物”是指针对在生命最初几年期间的婴儿的特定营养应用的食品。

术语“成长乳”是指适合于幼儿的特定营养需要的基于乳的饮料。

术语“断奶期”是指在婴儿的膳食中母乳或婴儿配方食品部分地或完全地被其他食物取代的时期。

术语“脑生长和/或认知和/或心理运动发育”是指脑生长和/或认知和/或心理运动发育的支持。

术语“营养组合物”是指喂养个体的组合物。该营养组合物通常经口、经胃内或静脉内摄入，并且其通常包括脂质或脂肪源和蛋白质源。

术语“合成的混合物”是指通过化学和/或生物学方法获得的混合物，其能够与哺乳动物乳中天然存在的混合物在化学上相同。

术语“低过敏原组合物”是指不太可能引起变态反应的组合物。

术语“益生菌”是指对宿主的健康或幸福有益的微生物细胞制剂或微生物细胞的组分或微生物细胞代谢物(Salminen S,Ouwehand A.Benno Y.等人“益生菌:其应当如何被定义”Trends Food Sci.Technol.1999:10107-10)。

术语“寡聚糖”是指聚合度(DP)范围在2-20(包含端点)、但不包括乳糖的碳水化合物。

术语“中性寡聚糖”是指不带电荷并且没有N-乙酰基残基的寡聚糖。

术语“唾液酸基化寡聚糖”是指具有唾液酸(例如N-乙酰基神经氨酸和/或N-乙醇酰基神经氨酸)残基的寡聚糖。

术语“N-乙酰化的”寡聚糖是指具有至少一种载有N-乙酰残基的己糖的寡聚糖。

除非另有说明，所有百分比是按重量计。

在一个方面，本发明提供用于脑生长和/或认知和/或心理运动发育的组合物，其包含：

●至少一种LC-PUFA，

●至少一种益生菌，和

●寡聚糖混合物，该混合物含有至少一种选自GalNAcα1,3Galβ1,4Glc(=3’GalNAc-lac=N-乙酰-半乳糖胺基-乳糖)、Galβ1,6GalNAcα1,3Galβ1,4Glc(=6’Gal-3GalNAc-lac=半乳糖基-N-乙酰-半乳糖胺基-乳糖)、Galβ1,4GlcNAcβ1,3Galβ1,4Glc(乳-N-新四糖或LNnT)和Galβ1,3GlcNAcβ1,3Galβ1,4Glc(乳-N-四糖或LNT)的N-乙酰化寡聚糖，至少一种选自NeuAcα2,3Galβ1,4Glc(=3’-唾液酸基乳糖)和NeuAcα2,6Galβ1,4Glc(=6’-唾液酸基乳糖)的唾液酸基化寡聚糖，以及至少一种选自Galβ1,6Gal(=β1,6-二半乳糖苷);Galβ1,6Galβ1,4Glc(=6’Gal-lac);Galβ1,6Galβ1,6Glc;Galβ1,3Galβ1,3Glc;Galβ1,3Galβ1,4Glc(=3’Gal-lac);Galβ1,6Galβ1,6Galβ1,4Glc(=6’,6-diGal-lac);Galβ1,6Galβ1,3Galβ1,4Glc(=6’,3-diGal-lac);Galβ1,3Galβ1,6Galβ1,4Glc(=3’,6-diGal-lac);Galβ1,3Galβ1,3Galβ1,4Glc(=3’,3-diGal-lac);Galβ1,4Galβ1,4Glc(=4’Gal-lac)和Galβ1,4Galβ1,4Galβ1,4Glc(=4’,4-diGal-lac);和Fucα1,2Galβ1,4Glc(=2’岩藻糖基乳糖或FL)的中性寡聚糖。

在第二方面，本发明涉及用于脑生长和/或认知和/或心理运动发育的组合物，所述的组合物包含至少一种长链多不饱和脂肪酸、至少一种益生菌、和寡聚糖混合物，所述的寡聚糖混合物包含：

●相对于寡聚糖混合物的总重量，0.25-20重量%、优选0.3-10重量%、更优选0.3-5重量%和甚至更优选大约0.5重量%的至少一种N-乙酰化寡聚糖，

●相对于寡聚糖混合物的总重量，0.5-30重量%、优选0.75-15重量%、更优选0.75-10重量%和甚至更优选大约1重量%的至少一种唾液酸基化寡聚糖，和

●相对于寡聚糖混合物的总重量，50-99.3重量%、优选20-80重量%、更优选10-50重量%和甚至更优选大约50重量%的至少一种中性寡聚糖。

根据优选的实施方案，寡聚糖混合物是按组合物的总重计0.5-70%、更优选1-20%、甚至更优选2-5%的量存在。

寡聚糖化合物以其结构进行定义，其中GalNAc是N-乙酰半乳糖胺，GlcNAc是N-乙酰葡萄糖胺，Gal是半乳糖，NeuAc是N-乙酰神经氨酸，Glc是葡萄糖和Fuc是岩藻糖。

本发明组合物的寡聚糖混合物能够是组合物中的寡聚糖的唯一来源。

在第一实施方案中，中性寡聚糖优选地在FOS和GOS中进行选择，优选GOS，例如以上所引用的那些。

在第二实施方案中，独立于或不来源于第一实施方案，中性寡聚糖优选是2’-岩藻糖基乳糖(FL)。在这种情况中，在其制备期间FL优选包含在寡聚糖混合物中的中性寡聚糖的组中。

中性寡聚糖可以通过购买和混合各个组分而被制成混合物。例如合成的半乳寡聚糖(例如Galβ1,6Gal、Galβ1,6Galβ1,4Glc、Galβ1,6Galβ1,6Glc、Galβ1,3Galβ1,3Glc、Galβ1,3Galβ1,4Glc、Galβ1,6Galβ1,6Galβ1,4Glc、Galβ1,6Galβ1,3Galβ1,4Glc、Galβ1,3Galβ1,6Galβ1,4Glc、Galβ1,3Galβ1,3Galβ1,4Glc、Galβ1,4Galβ1,4Glc和Galβ1,4Galβ1,4Galβ1,4Glc及其混合物)可以以商标从FrieslandCampina,荷兰和购买得到。寡聚糖的其他供应商是DextraLaboratories、Sigma-Aldrich Chemie GmbH和Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd。或者，特定的糖基转移酶和/或糖苷酶(例如半乳糖基转移酶和/或岩藻糖基转移酶和/或半乳糖苷酶和/或岩藻糖苷酶)可以用于生产半乳寡聚糖和/或岩藻糖基化的寡聚糖。

岩藻糖基乳糖是岩藻糖基化的寡聚糖(即具有岩藻糖残基的寡聚糖)。该岩藻糖基化的寡聚糖可以通过色谱或过滤技术从天然来源(例如动物乳)分离出来。或者，其可以通过生物技术手段使用特定的岩藻糖基转移酶和/或岩藻糖苷酶或者通过使用基于酶的发酵技术(重组的或天然的酶)或微生物发酵技术来生产。在后一种情形中，微生物可以表达其天然酶和底物或者可以被设计为产生相应的底物和酶。可以使用单一的微生物培养物和/或混合的培养物。岩藻糖基化的寡聚糖形成能够被起始于任意聚合度(DP)(从DP=1向前)的受体底物启动。或者，岩藻糖基化的寡聚糖可以通过化学合成从乳糖和游离的岩藻糖进行生产。岩藻糖基化的寡聚糖也可以从例如日本的Kyowa,Hakko,Kogyo获得。

根据本发明，唾液酸基化寡聚糖能够选自3’-唾液酸基乳糖和6’-唾液酸基乳糖。优选地，唾液酸基化寡聚糖包含3’-唾液酸基乳糖和6’-唾液酸基乳糖。在该实施方案中，3'-唾液酸基乳糖和6'-唾液酸基乳糖之间的比例优选位于5:1和1:2之间的范围。

唾液酸基乳糖的3’-和6’-形式可以通过向组合物中加入天然来源(例如动物乳)来获得，或者可以通过色谱或过滤技术从这些天然来源分离出来。或者，其可以通过生物技术手段使用特定的唾液酸基转移酶或唾液酸酶、神经氨酸酶、通过基于酶的发酵技术(重组的或天然的酶)、通过化学合成或通过微生物发酵技术来生产。在后一种情形中，微生物可以表达其天然酶和底物或者可以被设计为产生相应的底物和酶。可以使用单一的微生物培养物和/或混合的培养物。唾液酸基-寡聚糖形成能够被起始于任意聚合度(DP)(从DP=1向前)的受体底物启动。或者，唾液酸基乳糖可以通过化学合成从乳糖和游离的N’-乙酰神经氨酸(唾液酸)进行生产。唾液酸基乳糖也可以从例如日本的Kyowa Hakko Kogyo购买获得。

N-乙酰化的寡聚糖可以通过向组合物加入天然来源(例如动物乳)来获得。或者，其可以通过氨基葡糖苷酶和/或氨基半乳糖苷酶对N-乙酰-葡萄糖和/或N-乙酰半乳糖的作用来进行制备。同样地，N-乙酰-半乳糖基转移酶和/或N-乙酰-糖基转移酶可以用于该目的。N-乙酰化的寡聚糖也可以通过使用相应的酶(重组或天然的)的发酵技术和/或微生物发酵的应用来生产。在后一种情形中，微生物可以表达其天然的酶和底物或者可以被设计为产生相应的底物和酶。可以使用单一的微生物培养物和/或混合的培养物。N-乙酰化寡聚糖形成能够被起始于任意聚合度(DP)(从DP=1向前)的受体底物启动。如Wrodnigg,T.M.;Stutz,A.E.(1999)Angew.Chem.Int.Ed.38:827-828中所述，另一种选择是将游离的或者结合到寡聚糖(例如乳果糖)上的酮己糖(例如果糖)进行化学转化为N-乙酰己糖胺或者含寡聚糖的N-乙酰己糖胺。

例如，如US专利号5,288,637和WO96/10086中所述，LNnT和LNT可以通过使用糖基水解酶和/或糖基转移酶将糖单元从供体部分向受体部分进行酶转移来合成。或者，如Wrodnigg,T.M.;Stutz,A.E.(1999)Angew.Chem.Int.Ed.38:827-828中所述，LNnT可以通过将游离的或者结合到寡聚糖(例如乳果糖)上的酮己糖(例如果糖)进行化学转化为N-乙酰己糖胺或者含寡聚糖的N-乙酰己糖胺来进行制备。以这种方法产生的N-乙酰-乳糖胺然后可以被转移到作为受体部分的乳糖。

优选地，N-乙酰化寡聚糖选自乳-N-新四糖(或LNnT)和乳-N-四糖(或LNT)。优选地，LNnT和/或LNT包含于在其制备期间的寡聚糖混合物中的唾液酸基化的寡聚糖的组之中。

存在于本发明组合物中的益生菌菌株可以选自符合益生菌定义并且在其所添加的组合物中具有可接受的贮存期限的任意菌株。例如，如果将该成分加入婴儿配方食品中，所述的婴儿配方食品需要在长达12个月保持稳定和有效。益生菌菌株优选地是乳杆菌或双歧杆菌。

优选的双歧杆菌物种的实例包括乳双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌和婴儿双歧杆菌。特别优选的菌株是尤其由丹麦的Christian Hansen公司以商标Bb12销售的乳双歧杆菌CNCM I-3446、由日本的MorinagaMilk Industry有限公司以商标BB536销售的长双歧杆菌ATCCBAA-999、由Danisco公司以商标Bb-03销售的短双歧杆菌的菌株、由Morinaga公司以商标M-16V销售的短双歧杆菌的菌株、由Procter&Gamble公司以商标Bifantis销售的婴儿双歧杆菌的菌株和由InstitutRosell(Lallemand)以商标R0070销售的短双歧杆菌的菌株。

优选的乳杆菌物种的实例是鼠李糖乳杆菌、副干酪乳杆菌和罗伊乳杆菌。特别优选的菌株是鼠李糖乳杆菌ATCC53103、鼠李糖乳杆菌CGMCC1.3724、罗伊乳杆菌DSM17938和副干酪乳杆菌CNCM I-2116。甚至更优选地，益生菌是罗伊乳杆菌DSM17938。

罗伊乳杆菌DSM17938由BioGaia A.B公司以商标Reuteri销售。

根据本发明，益生菌选自益生菌菌株，优选的益生菌是乳杆菌或双歧杆菌，更优选的益生菌是乳双歧杆菌或罗伊乳杆菌。

如果益生菌发挥上述的作用，益生菌能够以宽范围的百分比存在于组合物中。然而，优选地，对于每克组合物，益生菌以相当于从10e2至10e12cfu(=菌落形成单位)、更优选在10e6和10e9cfu之间的益生菌菌株的量存在于组合物中。这种表述包括细菌是活的、灭活的或者死的或者甚至以片段(例如DNA、细胞壁物质、细胞内物质或细菌代谢产物)存在的可能性。换句话说，组合物包含的细菌的量是以假设全部细菌是活的时细菌量的菌落形成能力来表达，而不论其实际上是否是活的、灭活的或死的、片段的或者任意或全部这些状态的混合物。

组合物含有至少一种LC-PUFA，其通常是n-3或n6LC-PUFA。n-3LC-PUFA能够是C20或C22n-3脂肪酸。组合物中存在的C20或C22n-3LC-PUFA的量优选是全部脂肪酸的至少0.1重量%。优选地，n-3LC-PUFA是二十二碳六烯酸(DHA,C22:6,n-3)。n-6LC-PUFA能够是C20或C22n-6脂肪酸。组合物中存在的C20或C22n-6LC-PUFA的量优选是全部脂肪酸的至少0.1重量%。优选地，n-6LC-PUFA是花生四烯酸(ARA,C20:4,n-6)。LC-PUFA的来源可以是例如蛋脂质、真菌油、低EPA鱼油或藻油。本发明的组合物的LC-PUFA可以以小量的含有高含量已形成的花生四烯酸和二十二碳六烯酸的油(例如鱼油或微生物油)来提供。

根据本发明的组合物优选地是营养组合物、更优选地是合成营养组合物。在这种情况中，其能够是通常在住院期间使用的和/或在出院之后使用的早产儿配方食品、人乳强化剂、初始婴儿配方食品、后续配方食品、婴儿食物配方食品、婴儿谷物配方食品、成长乳、用于临床营养的医疗食品、或补充剂。补充剂能够针对早产儿或儿童或成人。所述的组合物优选是针对早产喂养的产品，例如早产儿配方食品、人乳强化剂或早产儿补充剂。根据实施方案，组合物优选是早产儿配方食品、人乳强化剂或补充剂。根据本发明的组合物也能够是针对儿童或成人的产品，例如酸乳、医疗食品、以及宠物食品。

根据特别优选的实施方案，根据本发明的组合物用于早产或具有LBW或经历IUGR的或者遭受由疾病和/或营养不良引起的生长发育障碍的婴儿和幼儿，优选早产儿。

本发明的组合物能够在断奶期之前和/或期间和/或之后使用。

本发明也包括根据本发明的组合物作为合成营养剂用于脑生长和/或认知和/或心理运动发育的用途。

在人的情形中，上述的所有用途特别地针对婴儿和幼儿、优选婴儿。但是这些用途也针对年幼的宠物。按照本发明的组合物和用途特别适合于早产或具有LBW或经历IUGR的或者特别是在婴儿期遭受由疾病和/或营养不良引起的生长延迟的婴儿和儿童、优选婴儿。

不希望受限于理论，发明人相信上述组合物中的寡聚糖混合物的组合在脑生长和/或认知和/或心理运动发育中的功效可能是由益生菌菌株和LC-PUFA通过使用特定的寡聚糖混合物的刺激作用引起的免疫调节剂效应的协同组合的结果。

寡聚糖混合物、LC-PUFA和益生菌菌株可以在同一组合物中进行施用或者可以先后进行施用。

如果针对早产和LBW婴儿组，组合物优选是营养组合物，例如以液体形式食用的。其可以是完全营养配方食品，例如(早产)婴儿配方食品、补充剂、人乳强化剂、后续配方食品或成长乳。或者，对于幼小的哺乳动物组，组合物可以是宠物食品。

根据本发明的组合物也能够含有蛋白质源。认为蛋白质的类型对于本发明不重要，只要满足必需氨基酸含量的最低需求和保证令人满意的生长即可。因此，可以使用基于乳清蛋白、酪蛋白及其混合物的蛋白质源以及基于大豆的蛋白质源。考虑乳清蛋白时，蛋白质源可以基于酸乳清蛋白或甜乳清蛋白或其混合物，并且可以包括任意需要的比例的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白。为了增强对变应原、特别是食物变应原的口服耐受，蛋白质能够至少部分地被水解。在这种情况中，组合物是低过敏原组合物。

根据本发明的组合物也能够含有除寡聚糖混合物之外的碳水化合物源。这在本发明的组合物是婴儿配方食品的情形中是特别优选的。在这种情形中，可以使用在婴儿配方食品中常见的任意碳水化合物源，例如乳糖、蔗糖、麦芽糊精、淀粉及其混合物，但优选的碳水化合物源是乳糖。在任何情况中，寡聚糖混合物优选是本发明组合物中的益生元的单一来源。

根据本发明的组合物也能够含有除LC-PUFA之外的脂质源。如果本发明的营养组合物是婴儿配方食品，这是特别相关的。在这种情形中，脂质源可以是适合用于婴儿配方食品的任意的脂质或脂肪。优选的脂肪源包括棕榈油酸、高油酸葵花籽油和高油酸红花油。也可以加入必需脂肪酸亚油酸和α-亚麻酸。在组合物中，脂肪源(包括LC-PUFA，例如ARA和/或DHA)优选具有约1:2至约10:1、优选约3:1至约8:1的n-6与n-3脂肪酸的比例。

本发明的组合物也能够含有被认为在每日饮食中必需的并且以营养上显著量的全部维生素和矿物质。已经证实了对某些维生素和矿物质的最低需求。任选地存在于本发明的组合物中的矿物质、维生素和其他营养素的实例包括维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素E、维生素K、维生素C、维生素D、叶酸、肌醇、烟酸、生物素、泛酸、胆碱、钙、磷、碘、铁、镁、铜、锌、锰、氯、钾、钠、硒、铬、钼、牛磺酸和L-肉碱。矿物质通常以盐形式添加。特定的矿物质和其他的维生素的存在和量根据目标人群而有所不同。

如果需要，本发明的组合物可以含有乳化剂和稳定剂，例如大豆、卵磷脂、单和二甘油酯的柠檬酸酯等。

本发明的组合物也可以含有可具有有益作用的其他物质，例如乳铁蛋白,核苷酸、核苷、神经节苷脂、聚胺等。

本发明组合物的制备将以举例的方式进行描述。

配方食品可以以任意合适的方式进行制备。例如，其可以通过将蛋白质源、碳水化合物源(不同于寡聚糖混合物)和包括LC-PUFA的脂肪源以合适的比例混合在一起来进行制备。如果使用，此刻也可以包括乳化剂。维生素和矿物质可以此刻加入，但通常其在后面加入从而避免热降解。在混合前可以将任意的亲脂性维生素、乳化剂等溶解于脂肪源中。然后可以将水(优选已经经过反渗透的水)混入其中从而形成液体混合物。水的温度范围通常在约50℃和约80℃之间，从而帮助成分的分散。可商购获得的液化剂可以用于形成液体混合物。如果最终产品具有液体形态，在该阶段将加入寡聚糖混合物。如果最终产品将是粉末，如果需要也可以在此阶段加入寡聚糖。液体混合物然后进行匀化，例如以2个阶段。

液体混合物然后可以进行热处理从而降低细菌载量，例如通过快速加热液体混合物至约80℃-约150℃之间的温度范围持续约5秒至约5分钟之间。这可以通过蒸汽喷射、高压锅或热交换器(例如板式热交换器)的方法进行。

然后，例如通过快速冷却，可以将液体混合物冷却至约60℃和约85℃之间。液体混合物然后可以再进行匀化，例如以2个阶段，在第一阶段在约10MPa和约30MPa之间和在第二阶段在约2MPa和约10MPa之间。然后可以将匀化的混合物进一步冷却从而加入任意的热敏感的组分，例如维生素和矿物质。此刻方便地调节匀化的混合物的pH和固体含量。

将匀化的混合物转移至合适的干燥设备(例如喷雾干燥器或冷冻干燥器)并且转化为粉末。粉末应当具有按重量计低于约5％的含水量。在该阶段可以通过与益生菌菌株一起干法混合、或者通过与益生菌菌株一起以结晶的糖浆形式进行混合并喷雾干燥(或冷冻干燥)，从而加入寡聚糖混合物。

如果优选液体的组合物，匀化的混合物可以进行灭菌、然后在无菌条件下填充到合适的容器中，或者可以先填充到容器中、然后进行灭菌。

在另一个实施方案中，本发明的组合物可以是足以在个体中达到所需效果的量的补充剂。该施用形式通常更适合于早产或LBW或IUGR婴儿、较大的儿童和成人。

在补充剂中所包含的寡聚糖、LC-PUFA和益生菌菌株的量将根据补充剂的施用方式进行选择。

补充剂可以是例如粉末、片剂、胶囊、锭剂或液体的形式。补充剂可以进一步含有保护性水胶体(例如树胶、蛋白质、改性淀粉)、粘合剂、成膜剂、包囊剂/材料、壁/壳材料、基质化合物、包衣、乳化剂、表面活性剂、增溶剂(油、脂肪、蜡、卵磷脂等)、吸附剂、载体、填充剂、辅助化合物、分散剂、润湿剂、加工助剂(溶剂)、助流剂、掩味剂、增重剂、凝胶剂和胶凝剂。补充剂也可以含有常规的药物添加剂和辅料、赋形剂和稀释剂，其非限制性地包括水、任意来源的明胶、植物胶、木素磺酸盐、滑石粉、糖、淀粉、阿拉伯胶、植物油、聚亚烷基二醇、调味剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂、缓冲剂、润滑剂、着色剂、润湿剂、填充剂等。

补充剂能够被加入到可被使用者(其是人或动物)接受的产品中，例如分别是可摄食的载体或支持物。这些载体或支持物的实例是药物或食物或宠物食品组合物。这些组合物的非限制性实例是乳、酸乳、凝乳、乳酪、发酵乳、基于乳的发酵产品、发酵的基于谷物的产品、基于乳的粉末、人乳、早产儿配方食品、婴儿配方食品、口服补充剂和管喂食品(tube-feeding)。

进一步地，补充剂可以含有适合于肠内或胃肠外给药的有机或无机的载体材料以及根据政府机构(例如USRDA)推荐的维生素、矿物质、微量元素和其他微量营养素。

当考虑了结合附图详细描述的说明性实验时，本发明的优点、性质和各种其他特征将展现得更全面。在附图中：

图1是解释实验流程的图表。

图2是关于在出生后天数(=PND)为35天时的脑重量(g)的描述实验结果的柱状图。

图3是关于在出生后天数(=PND)为26天时的脑重量(g)的描述实验结果的柱状图。

实施例

在幼年动物上进行关于补充寡聚糖混合物的效果的实验，所述的寡聚糖混合物是富含半乳寡聚糖(脱矿物质、脱乳糖的乳清蛋白渗透物或DDWP)的牛乳寡聚糖(CMOS)、LC-PUFA(花生四烯酸-ARA-和二十二碳六烯酸

-DHA-)和乳双歧杆菌(BL)、以及任选的2’-岩藻糖基乳糖(FL)或者2’-岩藻糖基乳糖(FL)和乳-N-新四糖(LNNT)的组合的混合物。

1、方法学

实验流程

实验遵循瑞士动物保护法(重量程度1)进行并且被Office VétérinaireCantonal(洛桑,瑞士,授权编号2028)批准。从Janvier(法国)购买繁殖雄性和未经交配的雌性Long-Evans Hooded大鼠，在交配前2周到达动物护理机构。

怀孕的雌性随意进食食物(Kliba3437)和水，在恒温和恒湿下饲养，并且保持处于12:12黑暗:明亮周期。在整个实验流程期间保持饲养条件。在出生(B)后的出生后2天(=PND)，从其生产笼移除母畜并且确定幼崽的性别。在通过体重随机化之后，分配标准化的每窝8只雄性幼崽用于哺育。母畜和幼崽被分配到2种饲养条件之一：1)母爱剥夺组，在PND2至PND14接受180min周期的每日母子分离(MS)，或者2)未经处理的对照组(NS)。

MS幼崽在PND15断乳(W)。其通过体重和哺育母畜进行随机化并且被分配到16只用对照饮食(改良的AIN93G,MS-Cont组)或采用含有LC-PUFA、乳双歧杆菌CNCM I-3446(BL)和寡聚糖(DDWP)的相似饮食喂养到PND26的动物的组中。MS动物(MS-对照组)以8只幼崽的组饲养直至PND21从而降低早产儿断奶的应激负担，然后单独饲养直至实验结束。来自NS组的动物在PND21断奶改吃对照饮食(NS-对照组)并且单独饲养直至实验结束。

在PND26或PND26在异氟烷麻醉下通过放血处死(?)动物。记录脑重量：在开颅之后收集脑并且在天平中称重。

2、处理和饮食

以下用于实验的管饲法和饮食组合物的功能性成分包含占98.8%的干物质的DDWP成分，其组成详见下表1。

表1.DDWP混合物的组成

DDWP通常根据WO2007/101675或WO2007/090894的公开内容获得，并且通常含有大约30重量%的GalNAcα1,3Galβ1,4Glc和Galβ1,6GalNAcα1,3Galβ1,4Glc；50重量%的Galβ1,6Galβ1,4Glc和Galβ1,3Galβ1,4Glc；20重量%的NeuAcα2,3Galβ1,4Glc和NeuAcα2,6Galβ1,4Glc的混合物。

动物从断乳到实验结束用营养上调节的半合成饮食(改进的AIN93G)进行喂养，所述半合成饮食的组成见表2、3和4。

表2：饮食食谱(每100g饮食)

¹DDWP(脱矿物质、脱乳糖的乳清蛋白渗透物);²LNNT=乳-N-新四糖;³FL=2-岩藻糖基-乳糖;⁴乳双歧杆菌=BL=乳双歧杆菌CNCM I-3446,喷雾干燥的;

表3：脂肪混合物(g/100g的脂肪混合物)

表4：饮食的营养组成

⁵根据营养组成预计的(1g可消化的碳水化合物=4Kcal;1g寡聚糖=2Kcal;1g蛋白质=4Kcal;1g脂肪=9Kcal);⁶通过Kjeldhal分析的;⁷通过Soxhlet分析的;⁸AA=花生四烯酸,⁹DHA=二十二碳六烯酸;¹⁰通过标准培养法和PCR分析的;NA=未分析的;ND=在检测限下(小于1.00E+03)

平衡四种饮食的脂肪酸谱，从而提供相似的n-6/n-3的比例和相似的饱和、单不饱和和多不饱和的脂肪酸的比例。因此，从脂肪酸谱来讲，四种饮食的脂肪酸组成几乎相同。

动物在出生后26或35天(PND)处死。

3、脑重量

根据图2和3的结果，其表明本发明的第一组合物PUFA-BL-DDWP表现出脑重量优于对照MS-对照的组合物所获得的脑重量。

此外，根据本发明的第三组合物PUFA-BL-DDWP-FL-LNNT表现出比在PND26时的组合物PUFA-BL-DDWP更优的脑重量。实际上，其表明，如果在PND26的DDWP-BL-PUFA是有效的，在PND35更长的补充施用表现出更显著的作用。在PND26的DDWP-BL-PUFA-FL-LNNT已经表现出显著的作用。

本发明的所有组合物证实导致比MS-对照组更重的脑重量。这是根据本发明的组合物的真正优点。