成团泛菌新菌株XM2及其菌悬液的制备方法和对梨黑斑病的防治方法

摘要

本发明公开了一株成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2，于2014年2月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.8822。本发明详细描述了成团泛菌新菌株XM2的形态特征、生理生化指标及16SrDNA序列测定结果等。本发明新菌株XM2菌悬液的制备方法，包括种子液制备、发酵液制备和菌悬液制备三步骤完成。用本发明新菌株XM2菌悬液防治梨黑斑病的方法包括梨果采收前防治、梨果采收后立即防治和梨果预冷后防治三种，防治效果分别达到90%以上、82%以上和70%以上。防治机会多，生防效果好。如果将不同时期结合防治效果更好。

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体地说是涉及一种成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2及其对梨黑斑病的防治方法。

背景技术

梨黑斑病是一种危害严重的世界性气传真菌病害，由链格孢（Alternaria alternata）引起，在梨果采前和采后均有发生。我国是梨种植和出口大国，采后病原微生物的侵染造成采后腐烂损失严重，直接影响梨果贮运生产，梨黑斑病的有效防治成为梨产业中急待解决的问题。使用化学杀菌剂控制水果的采后病害一直被认为是最有效的控制方法。然而，随着病原菌抗药性的逐渐增加，及人们对水果质量要求的提高和环保意识的加强，果蔬采后生物防治方法作为一种控制采后病害的新途径，逐渐为人们所认可，并成为研究热点。近年有不少关于梨黑斑病生物防治的研究报道。齐东梅等筛选了一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）H110，其发酵液对梨采后黑斑病的防治率达到86.6%。谢莉从土壤中分离到金色链霉菌（Streptomyces aureus）B-105，其发酵液对梨黑斑病的抑制率67.4%。Benbow等研究了隐球酵母属的Cryptococcus informominiatus和红酵母属的Rhodotorula glutinis对梨病害的抑菌效果，Cryptococcus informominiatus和 Rhodotorula glutinis在采收前1 d对梨进行处理，能有效地控制梨的采后黑斑病。宋聪等分离到一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）J18，梨果在菌悬液中浸果30 s，晾干后喷施接种链格孢菌，梨黑斑病的发病率仅为16.57%，且菌株能在梨果上很好地定殖。

发明内容

本发明的目的是提供一株成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2及其对梨黑斑病的防治方法。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的。

一株成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2，于2014年2月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.8822 ，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

所述的成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2是从山西省太原市金滩村西梅果实表面分离并纯化得到。在溶菌肉汤（LB）培养基培养48 h~72 h。成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2呈革兰氏阴性菌，短杆状，大小为( 0.5 ~ 0.9) μm×( 1.0 ~ 2.5) μm，有鞭毛，具有运动性（见图1）。在LB培养基平板上好氧培养24 h ~ 48 h后，产生表面光滑、凸起、半透明、边缘整齐、直径为2.0 mm ~ 3.0 mm的黄色菌落。菌株XM2为兼性厌氧菌，生长pH范围为5.7 ~ 7.5，生长温度范围为4℃ ~ 40℃，NaCl浓度范围 0% ~ 7%。其它生理生化指标如表1所示：

表1 菌株XM2生理生化特征

经16S rDNA序列测定：PCR扩增得到菌株XM2的16S rDNA片段，测序长度为1386 bp，在GenBank中的序列登录号为KF150143。将16S rDNA序列与GenBank数据库中的序列进行BLAST比对，结果表明，菌株XM2与泛菌属Pantoea中的成团泛菌（P. agglomerans）的同源性达到99.8% ，结合形态特征和生理生化指标，确定菌株XM2为成团泛菌（P. agglomerans）。

所述的溶菌肉汤（LB）培养基由以下质量/体积份的原料组成：酵母粉5，蛋白胨10 ，NaCl 5 ，琼脂粉18 ，蒸馏水1000；pH 7.4-7.6。成团泛菌新菌株XM2菌悬液的制备方法，包括如下步骤：

(1) 种子液制备 从试管斜面上用接种针挑取一环新鲜成团泛菌XM2单菌落，接种于LB培养液中，28℃、160 rpm/min震荡恒温培养24 h，制得成团泛菌XM2的种子液；

(2) 发酵液制备 将成团泛菌XM2的种子液按照1%的比例接入LB培养液中，28℃ 160 rpm/min震荡恒温培养72 h，制得成团泛菌XM2的发酵液；

(3) 菌悬液制备 将成团泛菌XM2的发酵液经10000 rpm/min离心10 min，弃上清液；向沉淀中加入灭菌水，再次经10000 rpm/min离心10 min，弃上清液；再次向沉淀中加入无菌水，混匀，获得成团泛菌XM2的菌悬液。

成团泛菌新菌株XM2对梨黑斑病的防治试验

1.成团泛菌新菌株XM2的不同处理菌液对梨黑斑病的防治试验

(1) 试验方法  将成团泛菌新菌株XM2配制成以下4种菌液：

A：配制成浓度为1×10⁶ cfu/mL的发酵原液；

B：发酵原液经0.22 μm滤膜过滤后的过滤液；

C： 发酵原液离心后，弃上清液，沉淀经灭菌水清洗2次，制备成浓度为1×10⁶ cfu/mL的菌悬液；

D：发酵原液在121℃ 100KPa高压灭菌20 min，制备成浓度为1×10⁶ cfu/mL的热杀死液；

梨黑斑病菌孢子悬浮液配制：

新鲜的梨黑斑病菌平板中加入10 mL无菌水，用灭菌涂布器轻轻刮洗菌饼表面，洗下新鲜病原菌的分生孢子，收集洗液。用灭菌的四层纱布过滤制成孢子悬浮液。光学显微镜镜检悬浮液中孢子情况，配置成所需浓度。

将上述4种成团泛菌新菌株XM2处理液分别取30 μl接种于梨果伤口（3 mm×3 mm），对照为加等量无菌水，晾干后，分别取1×10⁵个孢子/mL梨黑斑病菌孢子悬浮液15 μl接种于梨果伤口，晾干，套袋保湿，25℃恒温培养7 d，每个处理10个梨果，重复3次，统计发病情况。

梨果实发病程度分级标准：

0 级 —— 无病;

1 级 —— 病斑占果表面积的1%以下；

3 级 —— 病斑占果表面积的2% ~ 3% ；

5 级 —— 病斑占果表面积的4% ~ 6% ；

7 级 —— 病斑占果表面积的7% ~ 10% ；

9 级 —— 病斑占果表面积的11% 以上；

(2) 试验结果  试验结果表明，接种于伤口处的不同处理液的成团泛菌XM2对梨黑斑病菌均有保护作用（见图2），防病效果由强到弱依次是：菌悬液、发酵液、过滤液和热杀死液。菌悬液防效最高达到为97.73%，热杀死液的防效仅为56.82%，说明成团泛菌XM2菌株菌体细胞的防病最好，代谢产物次之，详见表2。

表2  成团泛菌XM2不同处理液对采后梨黑斑病的影响

处理液病情指数防治效果/%菌悬液2.22  d97.73  a发酵液12.22  c87.50  b过滤液17.78  c81.82  b热杀死液42.22  b56.82  c

注：不同小写字母表示处理间差异显著（P <0.05），下同。

2. 成团泛菌新菌株XM2菌悬液不同接种浓度对梨黑斑病的防治试验

(1) 试验方法  将成团泛菌新菌株XM2菌悬液浓度分别配制为1×10⁸ cfu/mL、1×10⁶ cfu/mL、1×10⁴ cfu/mL，梨黑斑病菌孢子浓度分别配制为1×10⁶个孢子/mL、1×10⁵个孢子/mL、1×10⁴个孢子/mL。将不同浓度的菌悬液各取30 μl加入梨果伤口，晾干后，接种不同浓度梨黑斑病菌孢子悬浮液15 μl，晾干，套袋保湿，25℃恒温培养7 d，统计发病情况（方法同前）。每个处理10个梨果，重复3次。

(2)试验结果  试验结果表明，接种成团泛菌XM2菌悬液的梨果伤口，其病情指数低于各自对照；伤口上的XM2菌悬液使用浓度越大，病原菌接种浓度越低，其防效越高。相同XM2菌悬液浓度时，其防效随病原菌浓度的增大而减小；相同梨黑斑病菌孢子悬浮液浓度时，防效随XM2菌悬液浓度的增大而增大（见图3、图4、图5）。梨黑斑病菌孢子悬浮液低浓度（1×10⁴ cfu/mL）时，XM2菌悬液可以有效抑制病害发生，三个浓度的防效均在95%以上，且在0.05水平上差异不显著；梨黑斑病菌孢子悬浮液高浓度（1×10⁶ cfu/mL）时，XM2菌悬液只能降低病害的发生程度，三个浓度的防效均在40%以下，且在0.05水平上差异不显著，详见表3。

表3  XM2不同浓度菌悬液对采后梨黑斑病的影响

3. 成团泛菌新菌株XM2菌悬液不同接种时间对梨黑斑病的防治试验

(1) 试验方法  在接种15 μl浓度为1×10⁵个孢子/mL的梨黑斑病菌孢子悬浮液前24 h、前12 h、前4 h、0 h、后4 h、后12 h、后24 h的不同时间在梨果伤口（3 mm×3 mm）分别接种30 μl浓度为1×10⁸ cfu/mL成团泛菌XM2菌悬液，对照为先在伤口接30 μl无菌水，3 h后接入梨黑斑病菌悬浮液，晾干，套袋保湿，25℃恒温培养7 d，统计发病情况（方法同前）。每个处理10个梨果，重复3次。

(2)  试验结果  成团泛菌新菌株XM2菌悬液在不同相对接种时间接种于梨果伤口（3 mm×3 mm），对梨黑斑病均有防治效果，成团泛菌和梨黑斑病菌孢子的相对接种时间影响防治效果，XM2菌悬液接种时间相对早的处理防效显著优于相对时间晚的处理，说明成团泛菌新菌株XM2菌悬液预防效果优于治疗效果。随着XM2 菌悬液相对接种时间的推迟，防效呈下降趋势（见图6）。提前24 h接种XM2菌悬液的处理防效最高，达到94.94%；同时接种XM2菌悬液和梨黑斑病菌孢子悬浮液的处理防效已降到70.85%；XM2菌悬液相对梨黑斑病菌孢子悬浮液晚接种的处理，防效均在50%左右，且在0.05水平上差异不显著，详见表4。

表4 XM2和病原孢子接种时间对梨黑斑病的影响

接种时间病情指数防治效果%B 24h5 d94.94 aB 12h12.22 c87.64 bB 4h17.56 c82.24 b028.89 c70.85 bA 4h46.33 b53.15 cA 12h46.78 b52.69 cA 24h48.89 b50.56 cCK98.89 a-

4 . 成团泛菌新菌株XM2在梨果伤口上的生长动态

(1) 试验方法  取30 μl1×10⁸ cfu/mL的XM2发酵液接种于梨果伤口（3 mm×3 mm）内，l h后测定的XM2细菌数为起始值（0 h）。将接种XM2的梨果分别保湿贮于28℃、20℃、4℃和0℃下。每处理10个果实，试验重复3次。28℃下的梨果每天测定一次，20℃下的梨果每3天测定一次，4℃和0℃下的梨果每6天测定一次。测定方法是用无菌打孔器从梨果伤口处取直径和深度均为10mm的果肉组织，放于己加1.0 mL的0.05 mol/L pH7.0的磷酸缓冲液的无菌研钵内，在无菌操作台内研磨后用稀释平板法记数。将所得拮抗菌的cfu转化成log₁₀^cfu。

(2) 试验结果  在28℃、20℃、4℃和0℃下，成团泛菌新菌株XM2在梨果伤口呈先增长后平稳的繁殖趋势，均能在伤口较好定殖。成团泛菌XM2在梨果伤口起始数均为2.7×10⁷ cfu/mL，28℃下接种1 d时，梨果伤口细菌数是起始的3×10⁸倍~2.7×10⁹倍，接种4 d时，梨果伤口细菌数达到最大值，是起始的3×10¹⁶倍~1.27×10¹⁸倍，接种12 d时，梨果伤口细菌数仍是起始菌数的1.3×10¹⁰倍~4×10¹¹倍（图7）；20℃下接种3 d时，梨果伤口细菌数达到最大，是起始细菌数的3×10¹⁴倍~1.25×10¹⁵倍，12 d之后保持平稳，接种36 d时，梨果伤口细菌数是起始细菌数的6×10⁹倍~1×10¹¹倍（图8）；4℃下接种6 d时，梨果伤口细菌数达到最大，之后基本维持水平，接种66 d时，梨果伤口细菌数是起始细菌数的3.2×10¹²倍~5×10¹⁰倍；0℃下梨果伤口细菌数增长幅度不大，低温抑制梨黑斑病生长的同时也抑制了成团泛菌XM2的生长，但到第66 d时，梨果伤口细菌数仍能保持1.08×10⁸ cfu/mL~5.4×10⁸ cfu/mL，是起始细菌数的4倍~20倍（图9）。

5. 成团泛菌新菌株XM2发酵液对梨黑斑病菌菌丝形态的影响

(1) 试验方法  将10⁶个/mL梨链格孢菌孢子悬浮液1 mL接种于100 mL马铃薯葡萄糖（PDB）培养基中, 25℃静置恒温培养。待梨链格孢菌孢子长出均匀的菌丝悬浮液后，加入1×10⁸ cfu/mL成团泛菌XM2菌悬液1mL；对照为在梨链格孢菌丝悬浮液中加入1mL无菌水，72 h后在光学显微镜下分别观察处理与对照的菌丝形态变化。

 (2) 试验结果  肉眼观察发现，链格孢菌菌丝在对照组中分布均匀，生长旺盛（见图10）；链格孢菌菌丝在处理组中分布不均，皱缩成团，生长稀疏（见图11）。通过光学显微镜观察发现，链格孢菌菌丝在对照组中菌丝粗壮、连续、表面光滑（见图12）；链格孢菌菌丝在处理组中部分断裂，细胞内含物外溢，扭曲变形，集结成团（见图13、图14）。

总之，成团泛菌XM2为梨采后黑斑病生物防治提供了新的菌株，通过试验得出结论：成团泛菌XM2的抑菌机理是菌体和代谢产物共同的作用，既存在营养与空间的竞争，又有对病原菌菌丝的破坏作用；成团泛菌XM2的防病效果与浓度有关，成团泛菌XM2浓度越大、梨采后黑斑病原菌接种浓度越低，其防效越好；成团泛菌XM2和梨采后黑斑病原孢子的接种时间影响生物防治效果，先接种成团泛菌XM2的抑菌效果显著地好于同时或后于病菌接种的效果。

用成团泛菌新菌株XM2的菌悬液对梨黑斑病的防治方法是： 

(1) 梨果采收前防治方法  梨果采收前3 d~5 d，用喷雾器在果实表面喷施浓度为1×10⁶ cfu/mL~1×10⁸ cfu/mL的成团泛菌XM2菌悬液，对梨采后黑斑病的防效达到97%以上；

(2) 梨果采收后立即防治方法  梨果采收后立即在浓度为1×10⁶ cfu/mL~1×10⁸ cfu/mL的成团泛菌XM2菌悬液中浸泡2 min ~3 min，待果实自然晾干后入保鲜库贮藏，对梨采后黑斑病的防效达到82%以上；

(3) 梨果预冷后防治方法  梨果预冷后，在浓度为1×10⁶ cfu/mL~1×10⁸ cfu/mL的成团泛菌XM2菌悬液中浸泡2 min ~3 min，待自然晾干后，进行梨果装箱工作，对梨采后黑斑病的防效达到70%以上。

以上三种方法各有利弊：梨果采前喷施成团泛菌XM2菌悬液的方法简单易行，减少采后工作量，防治效果最好，但在喷施过程中果面的菌悬液可能会分布不均，给病原菌侵染带来机会，同时还存在在田间感染其他病害的可能性；梨果采后立即用成团泛菌新菌株XM2菌悬液浸泡的方法菌悬液在果面的分布均匀，对梨采后黑斑病的防效较高，但因实际生产中梨果采收时间较集中，可能会增加每日劳动强度；梨果预冷后用成团泛菌新菌株XM2菌悬液浸泡的方法较前两种方法时间上充裕许多，但在低温下成团泛菌XM2的定植能力不如在常温下，故对梨采后黑斑病的防效较前两种方法低。在实际生产应用成团泛菌XM2菌悬液对梨采后黑斑病进行生物防治时，应因地制宜，选用适合的防治方法或者三种方法相结合的办法，使成团泛菌XM2发挥最大的生防作用。

本发明的有益效果

(1) 本发明的成团泛菌XM2发酵液的各种处理均能抑制梨黑斑病，其中接种菌悬液的处理抑病效果显著优于其他处理，成团泛菌XM2是梨采后黑斑病生物防治的高效菌株；

(2) 本发明的成团泛菌XM2对梨黑斑病的防治是多种成分和因素发挥作用，病害难以产生抗药性：成团泛菌XM2的抑菌机理是活菌体和代谢产物共同作用起到防治梨采后黑斑病的效果，此外，根据细菌产生的抑菌活性物质(如细菌素)能同时影响敏感菌的多种代谢途径，推断出因病原菌发生突变而对细菌素产生抗性的可能性不容易出现；

 (3) 本发明的成团泛菌XM2的菌悬液制备工艺简单，成团泛菌XM2的发酵条件不苛刻，可实现工业化生产，可制成干粉菌剂应用到工业化生产当中，商业价值大；

(4) 用本发明的成团泛菌XM2的菌剂对梨黑斑病的防治效果更加持久由于成团泛菌XM2是从西梅果实表面分离出来，具有与梨采后黑斑病相同或相近的生态适应性及对寄主植物的亲和性，定植容易，再加上细菌繁殖迅速，使得成团泛菌XM2对梨采后黑斑病的防效更加持久；

(5) 生防作用效率高  成团泛菌XM2属于生防细菌，繁殖速度快，在适宜条件下，几十分钟分裂繁殖依次，具有很高的生防效率；

(6) 有利于维持有益微生物的生态平衡  成团泛菌XM2所产生的抑菌物质直接针对梨黑斑病起作用，特异性强，依次不会对农业生态系统中其它有益微生物产生不利影响，有助于维持有益微生物的生态平衡。

（7）用本发明的成团泛菌XM2的菌剂防治梨黑斑病可在梨果采收前防治、梨果采收后立即防治和梨果预冷后防治三种方法，防治效果分别达到90%以上、82%以上和70%以上。防治机会多，生防效果好。如果将不同时期结合防治效果更好。

附图说明

图1是本发明成团泛菌XM2在透射电镜下的形态特征。

图2是本发明成团泛菌新菌株XM2的不同处理菌液对梨黑斑病的防治效果。

图3是本发明成团泛菌XM2菌悬液不同接种浓度对梨黑斑病(1×10⁴ cfu/mL)的防治效果。

图4是本发明成团泛菌XM2菌悬液不同接种浓度对梨黑斑病(1×10⁵ cfu/mL)的防治效果

图5是本发明成团泛菌XM2菌悬液不同接种浓度对梨黑斑病(1×10⁶ cfu/mL)的防治效果

图6是本发明成团泛菌XM2菌悬液不同接种时间对梨黑斑病的防治效果。

图7是本发明成团泛菌XM2在梨果伤口上的生长动态（28℃）。

图8是本发明成团泛菌XM2在梨果伤口上的生长动态（20℃）。

图9是本发明成团泛菌XM2在梨果伤口上的生长动态（4℃和0℃）。

图10是梨黑斑病菌菌丝培养形态。

图11是本发明成团泛菌XM2菌悬液对梨黑斑病菌菌丝形态的影响。

图12是显微镜下梨黑斑病菌菌丝形态。

图13是显微镜下本发明成团泛菌XM2菌悬液对梨黑斑病菌菌丝形态的影响Ⅰ。

图14是显微镜下本发明成团泛菌XM2菌悬液对梨黑斑病菌菌丝形态的影响Ⅱ。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

一株成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2，于2014年2月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心( 简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，分类命名为成团泛菌（Pantoea agglomeran），保藏号为CGMCC No.8822。 

本发明的成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2是从山西省太原市金滩村西梅果实表面分离并纯化得到。在溶菌肉汤（LB）培养基(酵母粉5 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂粉18 g，蒸馏水1000mL，pH 7.4-7.6)培养48 h~72 h。成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2呈革兰氏阴性菌，短杆状，大小为( 0.5 ~ 0.9) μm×( 1.0 ~ 2.5) μm，有鞭毛，具有运动性（见图1）。在溶菌肉汤培养基平板上好氧培养24 h ~ 48 h后，产生表面光滑、凸起、半透明、边缘整齐、直径为2.0 mm ~ 3.0 mm的黄色菌落。菌株XM2为兼性厌氧菌，生长pH范围为5.7 ~ 7.5，生长温度范围为4℃ ~ 40℃，NaCl浓度范围 0% ~ 7%；其他生理生化指标如表1所示：

表1 菌株XM2生理生化特征

特征结果葡萄糖 Glucose+L-阿拉伯糖 L-arabinose+蔗糖 Sucrose+海藻糖 Trehalose-鼠李糖 Rhamnose+木糖 Xylose+淀粉 Starch-甘露糖 Mannitose+肌醇 Inositol-甘露醇 mannitol+明胶液化 Gelatin liquification-吲哚试验 Indole>-H₂S试验>2S>-柠檬酸盐 Utilization of citrate+苯丙氨酸脱氨酶 Phenylalanine deaminase-赖氨酸脱羟酶 Lysine deaminase-接触酶 Catalase test+氧化酶 Oxidase test-精氨酸双水解酶 Arginine dihndrolase-硝酸盐还原 Nitrate reduction+KOH反应 KOH test-石蕊牛奶 Litmus milk胨化、产酸甲基红试验 Methyl red test-

经16S rDNA序列测定：PCR扩增得到菌株XM2的16S rDNA片段，测序长度为1386 bp，在GenBank中的序列登录号为KF150143。将16S rDNA序列与GenBank数据库中的序列进行BLAST比对，结果表明，菌株XM2与泛菌属Pantoea中的成团泛菌（P. agglomerans）的同源性达到99.8% ，结合形态特征和生理生化指标，确定菌株XM2为成团泛菌（P. agglomerans）。

实施例2

采用本发明的成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2的菌悬液防治梨黑斑病。

成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2菌悬液的制备方法如下：

在无菌条件下，从试管斜面上用接种针挑取一环新鲜成团泛菌XM2单菌落，接种于装有20mL LB培养液的三角瓶，28℃ 160rpm/min震荡培养24h后制得成团泛菌XM2的种子液；将种子液按照1%的比例接入装有LB培养液的发酵容器中，28℃、 160rpm/min震荡培养72h，制得成团泛菌XM2的发酵液；将发酵液经10000 rpm/min离心10 min，弃上清液，再加入灭菌水，再次经10000 rpm/min离心10 min，弃上清液，向沉淀中加入无菌水，混匀，获得成团泛菌XM2的菌悬液；将该菌悬液配置成浓度为1×10⁶ cfu/mL~1×10⁸ cfu/mL的成团泛菌XM2的菌悬液，用于防治梨采后黑斑病。

在梨果采收前3 ~5 d用喷雾器在果实表面喷施浓度为1×10⁶ cfu/mL~1×10⁸ cfu/mL的成团泛菌XM2的菌悬液，要选择天气晴朗、日照充足的时间段实施防治。此法可有效预防梨果田间病原菌对采后贮藏期的侵染，减少贮期梨采后黑斑病的发生。经抽样调查，对梨采后黑斑病的防治效果达到97%以上。

实施例3

采用本发明的成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2的菌悬液防治梨黑斑病。

成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2菌悬液的制备方法同实施例2。

将成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2菌悬液配置成浓度为1×10⁶ cfu/mL~1×10⁸ cfu/mL的成团泛菌XM2的菌悬液，梨果采摘后立即用该菌悬液浸泡2 min ~3 min，置于塑料周转箱，待果实自然晾干后再入保鲜库预冷、贮藏。注意在自然晾干过程中，避免将梨果与土壤等其他可能携带病原菌的物质接触。此法亦可有效预防梨果田间病原菌对采后贮藏期的侵染，减少贮期梨采后黑斑病的发生。经抽样调查，对梨采后黑斑病的防治效果达到82%以上。

实施例4

采用本发明的成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2的菌悬液防治梨黑斑病。

成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2菌悬液的制备方法同实施例2。

首先将成团泛菌（Pantoea agglomeran）新菌株XM2菌悬液配置成浓度为1×10⁶ cfu/mL~1×10⁸ cfu/mL的成团泛菌XM2的菌悬液，当梨果在保鲜库预冷24 h后，将没有机械伤的梨果用该菌悬液浸泡2 min ~3 min，置于塑料周转箱，待果实自然晾干后再进行梨果的装箱工作。注意整个浸泡和晾干过程均需要在保鲜库中进行，防治梨果温度升高，出现冷凝水。此法可有效预防梨果田间病原菌对采后贮藏期的侵染，减少贮期梨采后黑斑病的发生。抽样调查结果是对梨采后黑斑病的防治效果达到70%以上。