雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-甲酰胺衍生物、其制备方法、包含其的药物制剂及其用于制备药物的用途

摘要

本发明涉及AKR1C3抑制剂及其制备方法，涉及其用于治疗和/或预防疾病的用途及其用于制备治疗和/或预防疾病、尤其是出血性问题和子宫内膜异位症的药物的用途。

说明书

本发明涉及AKR1C3抑制剂及其制备方法，涉及其用于治疗和/或预防疾病的用途并且还涉及其用于制备治疗和/或预防疾病、尤其是出血性病症和子宫内膜异位症的药物的用途。 

AKR1C3是多功能酶并尤其催化4-雄甾烯-3,17-二酮(弱雄激素)到睾酮(强雄激素)的还原以及雌酮(弱雌激素)到17β-雌二醇(强雌激素)的还原。此外，抑制了前列腺素(PG)H2到PGF2α的还原以及PGD2到9α,11β-PGF2的还原(T.M.Penning等人,2006,'Aldo-keto reductase(AKR)1C3:Role in prostate disease and the development of specific inhibitors',Molecular and Cellular Endocrinology248(1-2),182-191)。 

雌二醇(E2)的局部形成在乳腺癌病症和子宫内膜异位症的发生和发展中发挥主要作用。通过治疗性给药芳香酶抑制剂(用于抑制由雄激素形成雌激素)和硫酸酯酶抑制剂(用于阻断由硫酸雌酮形成雌酮)来实现雌激素的组织浓度的降低，尤其是雌二醇的组织浓度的降低。然而，两种治疗方法都具有劣势，即彻底降低了全身雌激素浓度(A.Oster等人,J.Med.Chem.2010,53,8176–8186)。最近，实验证明子宫内膜异位症病灶能局部合成雌二醇(B.Delvoux等人,J Clin Endocrinol Metab.2009,94,876-883)。对于卵巢子宫内膜异位症亚型，已描述了AKR1C3mRNA的过表达(T.Smuc等人,Mol Cell Endocrinol.2009Mar25;301(1-2):59-64)。 

亟需确定酶醛-酮还原酶1C3(AKR1C3)(同物异名：5型17β-羟基甾体脱氢酶或前列腺素F合成酶)的新抑制剂，因为抑制剂有治疗激素依赖性病症(例如子宫内膜异位症)以及治疗非激素依赖性病症的潜能(M.C.Byrns,Y.Jin,T.M.Penning,Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology(2010);A.L.Lovering et.al.,Cancer Res64(5),1802-1810)。除了子宫内膜异位症，这还包括前列腺癌(K.M.Fung等人,Endocr Relat Cancer13(1),169-180)、前列腺增生(R.O.Roberts等人,Prostate66(4), 392-404)、子宫内膜癌(T.L.Rizner等人,Mol Cell Endocrinol2006248(1-2),126-135)、多囊卵巢综合征(K.Qin等人,J Endocrinol Metab2006,91(1),270-276)、肺癌(Q.Lan等人,Carcinogenesis2004,25(11),2177-2181)、非霍奇金淋巴瘤(Q.Lan等人,Hum Genet2007,121(2),161-168)、脱发(L.Colombe等人,Exp Dermatol2007,16(9),762-769)、肥胖(P.A.Svensson等人,Cell Mol Biol Lett2008,13(4),599-613)、膀胱癌(J.D.Figueroa,Carcinogenesis2008,29(10),1955-1962)、慢性髓样细胞白血病(J.Birthwistle,Mutat Res2009,662(1-2),67-74)、肾细胞癌(J.T.Azzarello,Int J Clin Exp Pathol2009,3(2),147-155)、乳腺癌(M.C.Byrns,J Steroid Biochem Mol Biol2010,118(3),177-187)、过早性成熟(C.He,Hum Genet2010,128(5)、515-527)以及慢性阻塞性肺病(S.Pierrou,Am JRespir Crit Care2007,175(6),577-586)。 

已知AKR1C3的一些抑制剂(参阅:Joanna M Day,Helena J Tutill,Atul Purohit and Michael J Reed,Endocrine-Related Cancer(2008)15,665–692)。已经描述的甾体物质例如为EM-1404，其基于在17位具有螺内酯单元的雌甾三烯骨架(F.Labrie等人,美国专利第6,541,463号,2003)。 

在P.Bydal,Van Luu-The,F.Labrie,D.Poirier,European Journal of Medicinal Chemistry2009,44,632-644中记载了具有内酯单元的其他甾体物质。在D.Deluca,G.Moller,A.Rosinus,W.Elger,A.Hillisch,J.Adamski,Mol.Cell.Endocrinol.2006,248,218–224中已经描述了氟化雌甾三烯衍生物。 

本发明的化合物是基于在17-位被芳族杂环取代并且在3-位被氨基 羰基取代的雌甾-1,3,5(10),16-四烯骨架的物质。E.Barrie等人的US5604213描述了作为17α-羟化酶/C17-20裂解酶(Cyp17A1)抑制剂的17-(3-吡啶基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-醇衍生物。具体地，报道了物质17-(3-吡啶基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-醇。然而，US5604213没有描述任何在3-位被氨基羰基取代的17-(3-吡啶基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯衍生物。本文所要求保护的本发明化合物另外具有作为官能团的羧基，这产生与US5604213所述物质的进一步结构差异。令人惊讶地，现已发现本文所要求保护的本发明化合物是AKR1C3的有效抑制剂(参见实施例31)并同时仅非常微弱地(如果有的话)抑制Cyp17A1(参见实施例32)。 

在US2005/0203075中描述了在3-位被氨基羰基(-CONH₂)基团取代的雌甾-1,3,5(10),16-四烯衍生物。然而，这些衍生物在雌甾-1,3,5(10),16-四烯骨架的17-位没有被杂环取代。 

被描述为Cyp17A1抑制剂的17-吡啶基雄甾烷衍生物和17-嘧啶基雄甾烷衍生物的综述见于V.M.Moreira等人,Current Medicinal Chemistry,2008Vol.15,No.9。 

本发明的目的是提供用作AKR1C3抑制剂的替代物质。与已知的AKR1C3抑制剂EM-1404相比，本文所要求保护的新AKR1C3抑制剂另外表现出在水中的显著改善的溶解度(参见实施例33)。因此，在含水给药介质中配制本发明的化合物更容易。 

本发明提供式(I)的化合物，及其盐、溶剂合物以及所述盐的溶剂合物： 

其中 

R1和R2彼此独立地表示氢、氟、氯、腈、三氟甲基、五氟乙基、 甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、-OCH₂CF₃、CH₃SO₂-、CH₃CH₂SO₂-、-(C=O)CH₃、羧基、C₁-C₄-烷基、羟基、-CH₂OH、-C(CH₃)₂OH、-CONH₂、-(C=O)NH-烷基、-(C=O)N(CH₃)₂、-SO₂NH₂、-SO₂NHCH₃、-SO₂N(CH₃)₂、或吡啶环中C-H基团被氮原子代替，以及 

R3和R4表示氢，或者 

R3表示羟基、氟、甲氧基或乙氧基，并且R4表示氢，或者 

R3表示氢，并且R4表示羟基、氟、甲氧基或乙氧基，以及 

R5和R6表示氢，或者 

R5表示氟、羟基、甲氧基或乙氧基，并且R6表示氢，或者 

R5表示氢，并且R6表示氟，以及 

R7表示氢、C₁-C₄-烷基、C₃-C₆-环烷基、环丙基甲基、三氟甲基或2,2,2-三氟乙基，以及 

R8表示-CR^aR^b-COOH，其中 

R^a和R^b彼此独立地表示氢、甲基、乙基，或者 

R^a和R^b一起表示-(CH₂)_n-，其中n=2、3、4或5，其中所述CH₂基团的至多4个氢原子可以被氟原子代替，或者 

R^a和R^b一起表示-CH₂-O-CH₂-、-CH₂-NH-CH₂-、-CH₂-N(CH₃)-CH₂-、-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂-NH-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂-N(CH₃)-CH₂CH₂-，或者 

R^a表示氢、甲基或乙基，并且R^b连同R7表示-(CH₂)_n-，其中n=1、2、3、4，其中所述CH₂基团的单个氢原子或至多4个氢原子可以被氟原子取代，或者 

R^a连同R7表示-CH₂-O-CH₂CH₂-、-CH₂-N(CH₃)-CH₂CH₂-，并且R^b表示氢、甲基或乙基，或者 

R8表示-CR^cR^d-CR^eR^f-COOH，其中 

R^c、R^d、R^e、R^f表示氢，或者 

R^c、R^d彼此独立地表示甲基、乙基，或者一起表示-(CH₂)_n-，其中n=2、3、4、5，或者一起表示-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-，并且R^e、R^f表示氢，或者 

R^c、R^d表示氢，并且R^e、R^f彼此独立地表示甲基、乙基，或者一起 表示-(CH₂)_n-，其中n=2、3、4、5，或者一起表示-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂-NH-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂-N(CH₃)-CH₂CH₂-或-CH₂-O-CH₂-，或者 

R^c表示甲基、乙基、三氟甲基，并且R^d、R^e和R^f表示氢，或者 

R^c、R^d和R^f表示氢，并且R^e表示甲基、乙基、三氟甲基、羟基或甲氧基，或者 

R^c和R^e一起表示-(CH₂)_n-，其中n=1、2、3或4，并且R^d和R^f表示氢，或者 

R8表示-CH₂-CH₂-CHR^g-COOH，其中 

R^g表示氢，或者 

R^g和R7一起表示-CH₂-或-CH₂CH₂-。 

本发明还提供式(II)和式(III)的化合物，及其盐、溶剂合物以及所述盐的溶剂合物： 

其中 

R1表示氢、氟、氯、腈、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、甲基、乙 基、三氟甲基、-(C=O)CH₃，以及 

R3和R4表示氢，或者 

R3表示羟基，并且R4表示氢，或者 

R3表示氢，并且R4表示羟基，以及 

R5表示氢或氟，以及 

R7表示氢或C₁-C₄-烷基，以及 

R8表示-CR^aR^b-COOH，其中 

R^a和R^b彼此独立地表示氢、甲基或乙基，或者 

R^a和R^b一起表示-(CH₂)_n-，其中n=2、3、4或5，或者 

R^a表示氢，并且R^b连同R7表示-(CH₂)_n-，其中n=3或4，或者 

R8表示-CR^cR^d-CR^eR^f-COOH，其中 

R^c、R^d、R^e、R^f表示氢，或者 

R^c、R^d表示氢，并且R^e、R^f彼此独立地表示甲基、乙基，或者一起表示-(CH₂)_n-，其中n=2、3、4、5，或者一起表示-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-，或者 

R^c表示甲基或乙基，并且R^d、R^e和R^f表示氢，或者 

R^c和R^e一起表示-(CH₂)_n-，其中n=1、2、3或4，并且R^d和R^f表示氢，或者 

R8表示-CH₂-CH₂-CHR^g-COOH，其中 

R^g表示氢，或者 

R^g和R7一起表示-CH₂CH₂-。 

本发明还提供式(II)和式(III)的化合物，及其盐、溶剂合物以及所述盐的溶剂合物，其中 

R1表示氢、氟、氯、腈、甲氧基、三氟甲基，以及 

R3和R4表示氢，或者 

R3表示羟基，并且R4表示氢，或者 

R3表示氢，并且R4表示羟基，以及 

R5表示氢或氟，以及 

R7表示氢、甲基或乙基，以及 

R8表示-CR^aR^b-COOH，其中 

R^a和R^b彼此独立地表示氢、甲基或乙基，或者 

R^a表示氢，并且R^b连同R7表示-(CH₂)_n-，其中n=3或4，或者 

R8表示-CR^cR^d-CR^eR^f-COOH，其中 

R^c、R^d、R^e、R^f表示氢，或者 

R^c、R^d表示氢，并且R^e、R^f彼此独立地表示甲基或乙基，或者一起表示-(CH₂)_n-，其中n=2、4、5，或者一起表示-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-，或者 

R^c表示甲基，并且R^d、R^e和R^f表示氢，或者 

R^c和R^e一起表示-(CH₂)_n-，其中n=3或4，并且R^d和R^f表示氢，或者 

R8表示-CH₂-CH₂-CHR^g-COOH，其中 

R^g表示氢，或者 

R^g和R7一起表示-CH₂CH₂-。 

此外，本发明提供式(II)和式(III)的化合物，及其盐、溶剂合物以及所述盐的溶剂合物，其中 

R1表示氢、氟、甲氧基、三氟甲基，以及 

R3和R4表示氢，或者 

R3表示羟基，并且R4表示氢，或者 

R3表示氢，并且R4表示羟基，以及 

R5表示氢或氟，以及 

R7表示氢或甲基，以及 

R8表示-CR^aR^b-COOH，其中 

R^a和R^b彼此独立地表示氢或甲基，或者 

R^a表示氢，并且R^b连同R7表示-(CH₂)₃-，或者 

R8表示-CR^cR^d-CR^eR^f-COOH，其中 

R^c、R^d、R^e、R^f表示氢，或者 

R^c和R^d表示氢，并且R^e和R^f表示甲基，或者一起表示-(CH₂)_n-，其中n=2或4，或者一起表示-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-，或者 

R^c表示甲基，并且R^d、R^e和R^f表示氢，或者 

R^c和R^e一起表示-(CH₂)₃-，并且R^d和R^f表示氢，或者 

R8表示-CH₂-CH₂-CHR^g-COOH，其中 

R^g表示氢，或者 

R^g和R7表示-CH₂CH₂-。 

此外，本发明提供以下化合物，及其盐、溶剂合物以及所述盐的溶剂合物： 

4-[({[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)甲基]-3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-4-羧酸 

N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-N-甲基-β-丙氨酸 

1-[({[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)甲基]环丙烷-1-羧酸 

1-[({[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)甲基]环戊烷-1-羧酸 

3-({[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)-2,2-二甲基丙酸 

1-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}哌啶-4-羧酸 

N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-2-甲基丙氨酸 

4-({[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)丁酸 

N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-β-丙氨酸 

N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}甘氨酸 

(1R*,2S*)-2-({[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)环戊烷-1-羧酸 

(S)-3-({[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)丁酸 

(R)-3-({[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)丁酸 

3-({[17-(5-甲氧基吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)-2,2-二甲基丙酸 

N-{[17-(5-甲氧基吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-β-丙氨酸 

N-{[17-(5-甲氧基吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-N-甲基-β-丙氨酸 

N-{[17-(嘧啶-5-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-β-丙氨酸 

4-({[17-(嘧啶-5-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)丁酸 

N-甲基-N-{[17-(嘧啶-5-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-β-丙氨酸 

2,2-二甲基-3-({[17-(嘧啶-5-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)丙酸 

N-({17-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基}羰基)-β-丙氨酸 

N-甲基-N-({17-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基}羰基)-β-丙氨酸 

N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-L-脯氨酸 

N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-D-脯氨酸 

4-({[11β-氟-17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)丁酸 

N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)-15α-羟基雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-N-甲基-β-丙氨酸 

N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)-15β-羟基雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-N-甲基-β-丙氨酸 

N-甲基-N-{[17-(6-甲基哒嗪-4-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-β-丙氨酸 

N-甲基-N-{[17-(3-吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-β-丙氨酸 

4-({[17-(5-甲氧基吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)丁酸。 

已经发现由本发明提供的雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羰基氨基衍生物发挥AKR1C3抑制剂的作用。对于所要求保护的结构范围的大部分，这 些物质表现出对AKR1C3的体外强抑制(IC₅₀值小于50nM)，并且甚至大部分表现出IC₅₀值<20nM。此外，这些衍生物仅呈现对Cyp17A1(如果有的话)非常低的抑制。 

本发明的化合物是式(I)的化合物及其盐、溶剂化合物以及所述盐的溶剂合物，由式(I)所包括的以下提及的各式的化合物及其盐、溶剂合物以及所述盐的溶剂合物，以及以下作为实施例提及的并由式(I)所包括的化合物及其盐、溶剂合物以及所述盐的溶剂合物，条件是以下提及的并由式(I)所包括的化合物不是盐、溶剂合物以及所述盐的溶剂合物。 

根据它们的结构，本发明的化合物可以以立体异构体形式(非对映异构体)存在。在式(I)的化合物中，立体中心可以存在于基团R8(并且，如果R7和R8一起形成环，则还存在于该环中)。因此，本发明包括非对映异构体及其相应混合物。从非对映异构体的此类混合物，可以以已知方式分离立体异构体均一的组分。 

如果本发明的化合物可以互变异构体形式存在，则本发明包括所有互变异构体形式。 

在本发明的情形中，优选的盐是本发明化合物的生理学可接受的盐。然而，本发明还包括如下的盐，所述盐本身不适于药学应用，但其可用于例如分离或纯化本发明的化合物。 

本发明化合物的生理学可接受的盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，例如以下酸的盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、乙酸、甲酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸和苯甲酸。 

本发明化合物的生理学可接受的盐还包括常用碱的盐，例如且优选碱金属盐(例如钠盐和钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐和镁盐)以及得自氨或具有1至16个碳原子的有机胺的铵盐，所述有机胺例如且优选为乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二异丙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己胺、二甲基氨基乙醇、普鲁卡因、二苄胺、N-甲基吗啉、精氨酸、赖氨酸、乙二胺和N-甲基哌啶。 

在本发明的情形中，溶剂合物是本发明化合物的以下形式，即，其处于固态或液态且通过与溶剂分子配位形成络合物。水合物是特定形式 的溶剂合物，其中所述配位是与水配位。在本发明的情形中，优选的溶剂合物是水合物。 

此外，本发明还包括本发明化合物的前药。术语“前药”包括如下化合物，所述化合物自身可以是生物活性的或惰性的，但它们在它们于身体中所度过的时间期间(例如，代谢地或水解地)转化成本发明的化合物。 

在本发明的情形中，除非不同地指出，否则取代基具有以下含义： 

C₁-C₄-烷基表示具有1至4个碳原子的直链或支链烷基，例如且优选地为甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、叔丁基、异丁基。 

C₃-C₆-环烷基表示具有3至6个碳原子的环烷基，其中所述环还可以是部分不饱和的，例如且优选地为环丙基、环丁基、环戊基和环己基。 

此外，本发明提供了用于制备本发明式(I)的化合物的方法。可以通过以下合成路线来例示本发明的化合物(I)的制备： 

可以由17-氧代雌甾-1,3,5(10)-三烯-3-羧酸甲酯起始（其从文献已知(Steroids,1995,60,3,299–306)）制备本发明的一些化合物(合成路线1)： 

通过在碱如吡啶、2,6-二甲基吡啶或2,6-二叔丁基吡啶的存在下，或在叔胺如三乙胺或二异丙基乙胺的存在下，使用三氟甲磺酸酐或N,N-双(三氟甲磺酰基)苯胺进行向中间体1的转化，或通过使用碱金属六甲基硅氮烷或二异丙基氨基锂(LDA)进行向中间体1的转化(J.Med.Chem.,1995,38,2463–2471,J.Org.Chem.,1985,50,1990–1992,JACS,2009,131,9014–9019,Archiv der Pharmazie(Weinheim,Germany),2001,334,12,373-374)。优选的是在二氯甲烷中在2,6-二叔丁基吡啶的存在下与三氟甲磺酸酐反应。 

使用本领域技术人员已知的Suzuki反应来制备中间体2。为此，使中间体1与含氮的芳族硼酸（boronic acid）、硼酸酯如硼酸频哪醇酯、MIDA硼酸酯反应(D.M.Knapp等人,J.Am.Chem.Soc.2009,131,6961)，或与三氟硼酸盐反应(G.A.Molander等人,J.Org.Chem.2009,74,973)。合适的催化剂是大量的含钯催化剂，例如四(三苯基膦)钯(0)、双(三苯基膦)二氯化钯(II)或[1,3-双(2,6-二异丙基苯基)咪唑-2-亚基](3-氯吡啶基)二氯化钯(II)(CAS905459-27-0)。或者，可以使用含钯的源如乙酸钯(II)、氯 化钯(II)或Pd(dba)₂与含磷的配体如三苯基膦、SPhos(D.M.Knapp等人,J.Am.Chem.Soc.2009,131,6961)或RuPhos(G.A.Molander,J.Org.Chem.2009,74,973)的组合。优选使所述硼酸在四(三苯基膦)钯(0)或[1,3-双(2,6-二异丙基苯基)咪唑-2-亚基](3-氯吡啶基)二氯化钯(II)的存在下反应。 

根据本领域技术人员已知的方法通过水解甲酯来制备中间体3。为此，在诸如四氢呋喃(THF)、甲醇或二甲基亚砜(DMSO)的溶剂中或在甲醇和THF混合物中，将中间体2与氢氧化钠水溶液或氢氧化锂水溶液混合。若需要，加热该混合物。在40℃下、在氢氧化钠水溶液或氢氧化锂水溶液的存在下于THF和甲醇中的反应是优选的。 

由中间体3起始，通过与氨基酸的酯的酰胺偶联并通过随后羧酸酯到羧酸的转化，以两个步骤进行示例性化合物的制备。适于酰胺偶联(步骤A)的是本领域技术人员已知的试剂，例如N,N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、N-[3-(二甲基氨基)丙基]-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)[CAS25952-53-8]或HATU(O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐)。此外，还可以采用例如1H-苯并三唑-1-醇水合物(HOBt水合物[CAS123333-53-9])或4-二甲基氨基吡啶(DMAP)的试剂作为添加剂。适于用作碱的是例如吡啶、三乙胺或二异丙基乙胺。优选的是使用EDC、HOBt水合物和三乙胺的反应。对于羧酸酯到羧酸的转化(步骤B)，如果所述酯是例如甲酯、乙酯或苄酯，则可以使用关于中间体3的制备所述的水解法。如果所述酯是羧酸叔丁酯，则可以通过本领域技术人员已知的方法，例如通过在二氯甲烷或氯仿中与三氟乙酸反应或者通过在1,4-二噁烷中与氯化氢反应，将其转化成羧酸。在二氯甲烷中与三氟乙酸的反应是优选的。 

可以如合成路线2所述制备其中R5=F且R6=H的本发明式(I)的化合物的子集： 

在二氯甲烷中，在4-二甲基氨基吡啶(DMAP)的存在下使用乙酸酐和吡啶，将3,11α-二羟基雌甾-1,3,5(10)-三烯-17-酮转化成中间体4。在甲醇中使用碳酸氢钠进行到中间体5的转化。中间体5与1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟 丁烷-1-磺酰氟和碳酸钾的反应产生中间体6，其在一氧化碳气氛下、于高压釜中、在甲醇和DMSO中与乙酸钯(II)、1,3-双(二苯基膦基)丙烷、三乙胺一起转化成中间体7。使用关于中间体1的制备所述的方法进行向中间体8的转化。使用关于中间体2的制备所述的方法进行中间体8到中间体9的转化。使用碳酸钾和甲醇，将中间体9水解以产生中间体10。在THF中使用1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯和1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁烷-1-磺酰氟来进行向中间体11的转化。使用关于中间体3的制备所述的条件进行中间体11的水解，以产生中间体12。优选的是在氢氧化锂水溶液的存在下于THF和甲醇中的反应。与在合成路线1中所述的由中间体3起始制备示例性化合物类似地，进行由中间体12起始制备示例性化合物的子集。 

可以如在合成路线3中所例示地制备取代基定义为R3=OH且R4=H或R3=H且R4=OH的本发明式(I)的化合物的子集。使用微生物，例如允许区域选择性或立体选择性羟基化的某些合适的真菌菌株来进行反应。以该方式，可以例如以区域选择性和立体选择性方式将羟基引入甾体骨架的15-位。所得的15-OH衍生物是用于本发明目的的示例性化合物，并且在随后的化学反应中还可以进一步被修饰。 

以不可预见的方式，本发明的化合物呈现有用的药理学活性谱和有利的药代动力学性质。因此，它们适于用作用于治疗和/或预防人类和动物的疾病的药物。出于本发明的目的，术语“治疗”包括预防。本发明化合物的药学功效可以由其作为AKR1C3抑制剂的作用来解释。因此，本发明的化合物特别适于治疗和/或预防子宫内膜异位症、子宫平滑肌瘤、子宫出血性病症、痛经、前列腺癌、前列腺增生、痤疮、皮脂溢、脱发、过早性成熟、多囊卵巢综合征、乳腺癌、肺癌、子宫内膜癌、肾细胞癌、膀胱癌、非霍奇金淋巴瘤、慢性阻塞性肺病(COPD)、肥胖或炎性疼痛。 

此外，本发明提供本发明的化合物用于制备治疗和/或预防病症、特别是上述病症的药物的用途。 

此外，本发明提供用于治疗和/或预防病症、特别是上述病症的方法， 其使用有效量的本发明的化合物。 

此外，本发明提供本发明化合物用于治疗和/或预防病症、特别是上述病症的用途。 

此外，本发明提供在用于治疗和/或预防上述病症的方法中使用的本发明的化合物。 

此外，本发明提供包含至少一种本发明的化合物以及至少一种或多种其他活性化合物、特别用于治疗和/或预防上述病症的其他活性化合物的药物。可以以例示且优选的方式提及以下适于组合的活性化合物：选择性雌激素受体调节剂(SERM)、雌激素受体(ER)拮抗剂、芳香酶抑制剂、17βHSD1抑制剂、甾体硫酸酯酶(STS)抑制剂、GnRH激动剂和拮抗剂、kisspeptin受体(KISSR)拮抗剂、选择性雄激素受体调节剂(SARM)、雄激素、5α-还原酶抑制剂、选择性孕酮受体调节剂(SPRM)、促孕激素、抗促孕激素(antigestagens)、口服避孕药、丝裂原活化蛋白(MAP)激酶的抑制剂和MAP激酶激酶(Mkk3/6、Mek1/2、Erk1/2)的抑制剂、蛋白激酶B(PKBα/β/γ;Akt1/2/3)的抑制剂、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)的抑制剂、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK1/2)的抑制剂、缺氧诱导的信号转导途径的抑制剂(HIF1α抑制剂、脯氨酰羟化酶的活化剂)、组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂、前列腺素F受体(FP)(PTGFR)拮抗剂和非甾体抗炎药(NSAID)。 

本发明还涉及包含至少一种通式I的化合物(或其与有机或无机酸的生理可接受的加成盐)的药物制剂以及这些化合物用于制备药物、特别是用于上述适应症的药物的用途。 

所述化合物在口服给药之后和胃肠外给药之后可以用于上述适应症。 

本发明的化合物可具有全身和/或局部作用。对此，它们可以以适当的方式给药，例如口服给药、胃肠外给药、肺部给药、鼻部给药、舌下给药、含服给药、直肠给药、皮肤给药、经皮给药、结膜给药、耳部给药，或作为植入物或支架给药。 

对于这些施用途径，可以以合适的剂型给药本发明的化合物。 

适于口服给药的是包含结晶和/或非结晶(amorphisized)和/或溶解形式的本发明化合物的剂型，所述剂型根据现有技术发挥作用且迅速释放 和/或调节释放本发明化合物，例如片剂(未包衣或包衣的片剂，例如肠溶包衣或用溶出延迟的包衣或不溶性包衣的包衣，所述包衣控制本发明化合物的释放)、在口腔中迅速崩解的片剂或膜/糯米纸囊剂(wafer)、膜/冻干产物、胶囊(例如硬明胶胶囊或软明胶胶囊)、糖衣片剂、颗粒剂、小丸、散剂、乳剂、混悬剂、气雾剂或溶液。 

可以进行胃肠外给药，避免了吸收步骤(例如静脉内给药、动脉内给药、心脏内给药、椎管内给药或腰内给药)或包括了吸收(例如肌内给药、皮下给药、皮内给药、经皮给药或腹膜内给药)。适于胃肠外给药的剂型尤其是溶液、混悬剂、乳剂、冻干产物或无菌粉末形式的注射制剂和输注制剂。 

适于其他给药途径的剂型例如是用于吸入的药剂形式(尤其是粉末吸入器、喷雾器)、滴鼻剂、溶液和喷雾剂；用于舌部给药、舌下给药或含服给药的片剂，膜/糯米纸囊剂或胶囊、栓剂、耳部或眼部制剂、阴道胶囊、水性混悬剂(洗液、振烫合剂(shaking mixture))、亲脂性混悬剂、软膏、乳膏、经皮治疗系统(例如贴剂)、乳制剂(milk)、糊剂、泡沫剂、扑粉、植入物、子宫内系统、阴道环或支架。 

本发明的化合物可被转化成所述的剂型。这可以以本领域已知的方式，通过与惰性、无毒的、药学合适的辅剂混合来进行。这些辅剂尤其包括载剂(例如微晶纤维素、乳糖、甘露醇)、溶剂(例如液体聚乙二醇)、乳化剂和分散剂或湿润剂(例如十二烷基硫酸钠、聚氧脱水山梨糖醇油酸酯(polyoxysorbitan oleate))、粘合剂(例如聚乙烯吡咯烷酮)、合成和天然聚合物(例如白蛋白)、稳定剂(例如抗氧化剂，诸如抗坏血酸)、着色剂(例如无机颜料，诸如氧化铁)以及味道和/或气味矫正剂。 

本发明还涉及包含至少一种本发明化合物并通常连同一种或多种惰性、无毒的药学合适的辅剂的医药产品，及其用于上述目的的用途。 

在口服给药的情况下，每日的量是约0.01-100mg/kg体重。待给药的通式I的化合物的量在宽泛的范围内变化并可覆盖每一有效量。根据待治疗的病症和给药方法，给药的化合物的量可以是0.01-100mg/kg体重/天。 

然而，任选地，可能需要偏离所述的量，这主要取决于体重、给药 途径、对活性物质的个体反应、制剂类型以及进行给药的时点或间隔。因此，在一些情况下，使用小于上述最小量可能是足够的，而在其他情况下，必须超过所述的上限。在相对大量的给药的情况下，可以建议将其分成一整天内的多个单独剂量。 

除非另有规定，以下试验和实施例中的百分比是重量百分比；份是重量份。在每一情况下，溶剂比例、稀释比和与液体/液体溶液的浓度相关的信息指的是体积。 

缩写(化学)列表

缩写和首字母缩略词 

DMAP>4-二甲基氨基吡啶>DMF>二甲基甲酰胺>DMSO>二甲基亚砜>h>小时>HPLC>高压高效液相色谱>LC-MS>液相色谱-质谱联用>ES-MS>电喷射质谱>min>分钟>MS>质谱>NMR>核磁共振波谱>RT>室温>TFA>三氟乙酸>THF>四氢呋喃>

本发明化合物的纯化

在一些情况下，可以通过制备型HPLC，例如使用来自Waters的自动纯化器设备(通过UV检测和电喷射离子化来检测化合物)与市售预包装的HPLC柱(例如XBridge柱(来自Waters)，C18,5μm,30×100mm)的组合，来纯化本发明的化合物。所用的溶剂体系是乙腈/添加有甲酸的水。可以使用本领域技术人员已知的其他添加剂，例如氨、乙酸铵或三氟乙酸。 还可以使用例如甲醇替代乙腈。 

在一些情况下，使用以下方法进行制备型HPLC分离： 

使用冻干或真空离心以去除HPLC溶剂混合物。如果所得的化合物以TFA盐或甲酸盐形式存在，则可以通过本领域已知的标准实验室程序它们转化成相应的游离碱。 

在一些情况下，本发明的化合物可以通过硅胶色谱纯化。为此目的，例如，使用预包装的硅胶柱(例如，来自Separtis,Flash silica gel)与Flashmaster II色谱仪(Argonaut/Biotage)和色谱溶剂或溶剂混合物(如己烷、乙酸乙酯和二氯甲烷及甲醇)的组合。 

本发明化合物的结构分析

在一些情况下，通过LC-MS分析本发明的化合物： 

在一些情况下，使用以下分析方法： 

仪器：Waters Acquity UPLC-MS SQD3001；柱：Acquity UPLC BEH C181.750×2.1mm；流动相A：水+0.1体积%甲酸，流动相B：乙腈；梯度：0-1.6min1-99%B,1.6-2.0min99%B；流速0.8ml/min；温度：60℃；进样：2μl；DAD扫描：210-400nm 

以下符号用于本发明化合物的NMR数据： 

s>单峰>d>双重峰>t>三重峰>q>四重峰>quin>五重峰>m>多重峰>br>宽峰>mc>中心多重峰>

本发明化合物的合成 

中间体1 

17-{[(三氟甲基)磺酰基]氧基}雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯 

向5.00g(16.0mmol)17-氧代雌甾-1,3,5(10)-三烯-3-羧酸甲酯(Steroids,1995,60,3,299–306)于100ml二氯甲烷和5.3ml2,6-二叔丁基吡啶中的混合物滴加3.2ml三氟甲磺酸酐，并且将混合物在RT搅拌20h。将混合物小心地倾入250ml饱和碳酸氢钠水溶液中，并搅拌40min，将各相分离，用二氯甲烷萃取水相两次并用饱和碳酸氢钠溶液和氯化钠溶液洗涤合并的有机相，在硫酸钠上干燥，并浓缩。用己烷研磨，产生4.55g的固体形式的标题化合物。 

¹H-NMR(300MHz,氯仿-d):δ[ppm]=1.01(s,3H),1.37-1.74(m,5H),1.81(td,1H),1.88-2.02(m,2H),2.05-2.19(m,1H),2.27-2.55(m,3H),2.83-3.11(m,2H),3.90(s,3H),5.63(dd,1H),7.32(d,1H),7.68- 7.90(m,2H)。 

中间体2-a 

17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯 

首先将8.00g(2.25mmol)17-{[(三氟甲基)磺酰基]氧基}雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯和3.55g(1.4当量)5-氟吡啶-3-硼酸加到60ml甲苯和40ml乙醇中。然后，添加1.53g(2.0当量)氯化锂、24ml2M碳酸钠水溶液和1.04g(5mol%)的四(三苯基膦)钯(0)，并且将混合物在100℃加热3.5h。添加水，用乙酸乙酯萃取混合物三次，并且用饱和碳酸氢钠水溶液和氯化钠水溶液洗涤萃取物，并浓缩。通过硅胶柱色谱(己烷/乙酸乙酯)纯化，产生5.5g(理论的78%)的标题化合物。 

¹H-NMR(400MHz,氯仿-d):δ[ppm]=1.06(s,3H),1.47-1.63(m,1H),1.63-1.78(m,3H),1.84(td,1H),1.98-2.06(m,1H),2.13-2.26(m,2H),2.35-2.51(m,3H),2.98(dd,2H),3.90(s,3H),6.10(dd,1H),7.32-7.44(m,2H),7.76-7.86(m,2H),8.36(br.s.,1H),8.48(s,1H)。 

中间体2-b 

17-(5-甲氧基吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯 

与中间体2-a的制备类似，在100℃下，使2.00g(4.50mmol)中间体1在260mg四(三苯基膦)钯(0)的存在下与0.96g(1.4当量)(5-甲氧基吡啶-3-基)硼酸反应过夜，产生1.4g(理论的76%)的标题化合物。 

¹H-NMR(300MHz,氯仿-d):δ[ppm]=1.05(s,3H),1.43-1.60(m,1H),1.62-1.89(m,4H),1.95-2.08(m,1H),2.10-2.25(m,2H),2.30-2.53(m,3H),2.98(dd,2H),3.88(s,3H),3.90(s,3H),6.00-6.08(m,1H),7.16-7.22(m,1H),7.35(d,1H),7.75-7.83(m,2H),8.20(d,1H),8.28(d,1H)。 

中间体2-c 

17-(嘧啶-5-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯 

与中间体2-a的制备类似，在100℃下，使3.00g(6.75mmol)中间体1在390mg四(三苯基膦)钯(0)的存在下与1.17g(1.4当量)嘧啶-5-基 硼酸反应过夜，产生1.70g(理论的64%)的标题化合物。 

¹H-NMR(400MHz,氯仿-d):δ[ppm]=1.06(s,3H),1.47-1.59(m,1H),1.65-1.80(m,3H),1.85(td,1H),1.98-2.06(m,1H),2.12-2.25(m,2H),2.36-2.53(m,3H),2.98(dd,2H),3.90(s,3H),6.14(dd,1H),7.35(d,1H),7.76-7.85(m,2H),8.76(s,2H),9.09(s,1H)。 

中间体2-d 

17-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯 

与中间体2-a的制备类似，在100℃下，使1.66g(3.75mmol)中间体1在216mg四(三苯基膦)钯(0)的存在下与1.00g(1.4当量)[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]硼酸反应过夜，产生1.20g(理论的73%)的标题化合物。 

¹H-NMR(300MHz,氯仿-d):δ[ppm]=1.08(s,3H),1.49-1.89(m,6H),1.97-2.09(m,1H),2.09-2.28(m,2H),2.35-2.54(m,3H),2.98(dd,2H),3.90(s,3H),6.15(dd,1H),7.36(s,1H),7.77-7.85(m,2H),7.88(s,1H),8.83(s,2H)。 

中间体2-e 

17-(6-甲基哒嗪-4-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯 

与中间体2-a的制备类似，在100℃下，使180mg(3.74mmol)中间体1在14mg双(三苯基膦)氯化钯(II)的存在下与125mg(1.4当量)3-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)哒嗪反应。如在中间体2-a的制备中所述的水性后处理(aqueous work-up)产生201mg的粗制产物，其在不进一步纯化的情况下用于制备中间体3-e。 

中间体2-f 

17-(吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯 

与中间体2-a的制备类似，在100℃下，使500mg(1.13mmol)中间体1在39mg双(三苯基膦)氯化钯(II)的存在下与194mg(1.4当量)吡啶-3-基硼酸反应18h。水性后处理产生462mg粗制产物，其在不进一步纯化的情况下用于制备中间体3-f。 

中间体3-a 

17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸 

首先将372mg(0.95mmol)中间体2-a加到50ml THF和3ml甲醇中。添加120mg氢氧化锂于3ml水中的溶液，并且将混合物在RT搅拌18h。添加另外的5当量氢氧化锂并且将混合物在RT搅拌24h且在40℃搅拌18h。用水稀释混合物，使用10%浓度柠檬酸水溶液酸化至pH4，添加乙酸乙酯并滤出固体，在用乙酸乙酯和水洗涤固体并干燥之后，产生153mg(理论的43%)的标题化合物。将滤液的有机相分离并用乙酸乙酯萃取水相两次。用氯化钠溶液洗涤合并的有机相，在硫酸钠上干燥并浓缩，产生残留物，将其用乙醚研磨。干燥产生另外143mg(理论的40%)的标题化合物。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=0.99(s,3H),1.38-1.78(m,5H),1.83-1.97(m,1H),2.05-2.21(m,2H),2.25-2.43(m,3H),2.89(dd,2H),6.27(dd,1H),7.36(d,1H),7.58-7.72(m,3H),8.43(d,1H),8.49(t,1H)。 

中间体3-b 

17-(5-甲氧基吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸 

将1.4g(3.47mmol)17-(5-甲氧基吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯于30ml THF、4ml甲醇和8.7ml2M氢氧化钠水溶液中的溶液在RT搅拌过夜，然后在40℃温热8.5h。用水稀释混合物，用10%浓度柠檬酸溶液酸化至pH=4，并且用乙酸乙酯萃取三次，并且用氯化钠溶液洗涤有机相，并浓缩。用乙醚研磨粗制产物，产生1.2g(理论的89%)的标题化合物。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=0.98(s,3H),1.34-1.81(m,5H),1.84-1.97(m,1H),2.03-2.19(m,2H),2.21-2.43(m,3H),2.89(dd,2H),3.81(s,3H),6.12–6.20(m,1H),7.20-7.29(m,1H),7.36(d,1H),7.59-7.70(m,2H),8.15(d,1H),8.20(d,1H)。 

中间体3-c 

17-(嘧啶-5-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸 

将1.70g(4.54mmol)17-(嘧啶-5-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯、40ml THF、11.3ml2M氢氧化钠水溶液和5ml甲醇的混合物在RT搅拌过夜，然后在40℃搅拌8.5h，然后在RT搅拌过夜。用水稀释混合物，并且用10%浓度柠檬酸溶液酸化至pH=4，并且添加乙酸乙酯。将不溶性固体滤出并干燥。这产生1.3g(理论的79%)的标题化合物。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=0.99(s,3H),1.39-1.79(m,5H),1.84-1.97(m,1H),2.06-2.21(m,2H),2.26-2.44(m,3H),2.89(dd,2H),6.28-6.33(m,1H),7.36(d,1H),7.59-7.69(m,2H),8.83(s,2H),9.04(s,1H),12.7(br.s.,1H)。 

中间体3-d 

17-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸 

首先将1.2g17-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯加到12ml THF中，添加0.23g氢氧化锂于12ml水中的溶液，并且将混合物在40℃搅拌过夜。用水稀释混合物，用10%浓度柠檬酸溶液酸化至pH=4，并且用乙酸乙酯萃取三次。用氯化钠溶液洗涤萃取物，并浓缩，并且用乙醚研磨残留物。这产生850mg固体形式的标题化合物。 

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=1.01(s,3H),1.37-1.50(m,1H),1.50-1.69(m,3H),1.76(td,1H),1.86-1.95(m,1H),2.08-2.19(m,2H),2.27-2.44(m,3H),2.90(dd,2H),6.36(dd,1H),7.36(d,1H),7.61-7.68(m,2H),8.04(s,1H),8.82-8.86(m,1H),8.90(d,1H),12.7(br.s., 1H)。 

中间体3-e 

17-(6-甲基哒嗪-4-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸 

首先将201mg17-(6-甲基哒嗪-4-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯(粗制产物)加到3ml THF和0.5ml甲醇中，添加1.3ml的2M氢氧化钠水溶液，并且将混合物在40℃搅拌过夜。用水稀释混合物，用10%浓度柠檬酸溶液酸化至pH=4，并且用乙酸乙酯萃取三次，并且浓缩萃取物。通过制备型HPLC纯化残留物，产生42mg粗制产物形式的标题化合物。 

C₂₄H₂₆N₂O₂(374.5)。实测的MS-ES+质量:374.20。 

中间体3-f 

17-(吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸 

将462mg17-(吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯(粗制产 物)溶解在4ml THF和1ml甲醇中，添加3ml的2M氢氧化钠水溶液，并且将混合物在40℃搅拌过夜。用水稀释混合物，并且用10%浓度柠檬酸溶液酸化至pH=4，并且添加乙酸乙酯。过滤残留的不溶性固体，用水和乙酸乙酯洗涤，并减压干燥。这产生375mg(理论的84%)的标题化合物。 

C₂₄H₂₅NO₂(359.47)。实测MS-ES+质量：359.00。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=0.99(s,3H),1.35-1.78(m,6H),1.84-1.96(m,1H),2.03-2.18(m,2H),2.21-2.44(m,4H),2.89(dd,2H),6.10-6.14(m,1H),7.29-7.39(m,2H),7.57-7.68(m,2H),7.77(dt,1H),8.42(dd,1H),8.59(d,1H)。 

中间体4 

17-氧代雌甾-1,3,5(10)-三烯-3,11α-二基二乙酸酯 

在RT下，向10.0g(34.9mmol)3,11α-二羟基雌甾-1,3,5(10)-三烯-17-酮于100ml二氯甲烷中的溶液滴加13.2ml(4.0当量)乙酸酐，并且将反应混合物冷却至5℃。然后，滴加14.1ml吡啶，并且在10min之后，使混合物升温至RT并搅拌4h。添加一药匙尖的DMAP，并且将混合物在RT搅拌72h。将混合物倾入500ml水中，将各相分离，用二氯甲烷萃取水相并且用1M盐酸、水和氯化钠溶液洗涤合并的有机相，在硫酸钠上干燥并浓缩。这产生12.9g(理论的99%)的白色固体。 

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=0.81(s,3H),1.29(t,1H),1.43-1.72(m,4H),1.79-2.00(m,2H),2.00-2.06(m,3H),2.06-2.19(m,2H),2.19-2.25(m,3H),2.42–2.57(m,被DMSO信号叠覆),2.76(t,2H),5.26(td,1H),6.82-6.89(m,2H),6.97(d,1H)。 

中间体5 

3-羟基-17-氧代雌甾-1,3,5(10)-三烯-11α-基乙酸酯 

向于100ml甲醇中的12.9g(34.7mmol)17-氧代雌甾-1,3,5(10)-三烯-3,11α-二基二乙酸酯添加14.6g(5当量)碳酸氢钠，并且将混合物在RT搅拌过夜。添加100ml水和1ml1M盐酸，并且将混合物搅拌30min。用乙酸乙酯萃取混合物四次。固体从有机相沉淀，抽滤该固体并干燥。这产生3.74g(理论的33%)的标题化合物。此外，通过用饱和氯化钠溶液洗涤有机相，在硫酸钠上干燥，浓缩，用乙酸乙酯研磨残留物，抽滤并减压干燥，从而分离6.39g(理论的56%)的标题化合物。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=0.79(s,3H),1.25(t,1H),1.36-1.69(m,4H),1.75-1.98(m,2H),1.98-2.18(m,5H),2.34-2.43(m),2.68(t,2H),5.16(td,1H),6.43-6.55(m,2H),6.76(d,1H),9.07(s,1H)。 

中间体6 

3-{[(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基)磺酰基]氧基}-17-氧代雌甾-1,3,5(10)-三烯-11α-基乙酸酯 

向10.1g(31mmol)3-羟基-17-氧代雌甾-1,3,5(10)-三烯-11α-基乙酸 酯于20ml THF中的溶液添加12.8g(3当量)碳酸钾和6.5ml(1.2当量)1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁烷-1-磺酰氟，并且将混合物在回流下加热4h，并且在RT搅拌18h。添加另外1ml的1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁烷-1-磺酰氟，并且将混合物在回流下加热3h。添加水和饱和氯化钠溶液，将混合物搅拌20min，将各相分离，并且在每一情况下用50ml乙酸乙酯萃取水相三次。在每一情况下用50ml水洗涤合并的有机相两次，并且用50ml饱和氯化钠溶液洗涤两次，在硫酸钠上干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱(己烷/乙酸乙酯)纯化，产生18.1g(理论的96%)3-{[(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基)磺酰基]氧基}-17-氧代雌甾-1,3,5(10)-三烯-11α-基乙酸酯。 

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=0.85(s,3H),1.26-1.37(m,1H),1.47-1.76(m,4H),1.83-2.02(m,2H),2.03-2.25(m,5H,在2.06ppm包含s),2.41–2.47(m),2.59(t,1H),2.77-2.95(m,2H),5.29(td,1H),7.15(d,1H),7.23-7.29(m,2H)。 

中间体7 

11α-乙酰氧基-17-氧代雌甾-1,3,5(10)-三烯-3-羧酸甲酯 

首先，在氩气下，将10.0g(16.4mmol)3-{[(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基)磺酰基]氧基}-17-氧代雌甾-1,3,5(10)-三烯-11α-基乙酸酯、230mg(6mol%)乙酸钯(II)和440mg(6mol%)1,3-双(二苯基膦基)丙烷装载在高压釜中，并且添加36ml甲醇、54ml DMSO和6ml三乙胺。用一氧化碳冲刷反应混合物三次，并且在7.5巴一氧化碳压力下于RT搅拌30min。然后，将高压釜排气并抽空，在6.8巴一氧化碳压力下将混合物于70℃搅拌3.5h。浓缩混合物并将残留物溶解在水和乙酸乙酯中。将各相分离 并用乙酸乙酯萃取水相两次。用1M盐酸和饱和碳酸氢钠溶液洗涤合并的有机相，在硫酸钠上干燥，并浓缩。通过硅胶柱色谱(己烷/乙酸乙酯)纯化，产生5.96g(理论的98%)固体形式的标题化合物。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=0.81(s,3H),1.29(t,1H),1.40-1.76(m,4H),1.78-2.00(m,2H),2.00-2.21(m,5H,在2.03ppm包含s),2.37–2.52(m,被DMSO信号遮蔽),2.59(t,1H),2.72-2.93(m,2H),3.79(s,3H),5.29(td,1H),5.23-5.38(m,1H),7.08(d,1H),7.68-7.75(m,2H)。 

中间体8 

11α-乙酰氧基-17-{[(三氟甲基)磺酰基]氧基}雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯 

与中间体1的制备类似，将2.96g(7.99mmol)11α-乙酰氧基-17-氧代雌甾-1,3,5(10)-三烯-3-羧酸甲酯转化成5.13g粗制产物(包含残留的2,6-二叔丁基吡啶)形式的标题化合物。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=0.93(s,3H),1.41-1.71(m,3H),1.71-1.87(m,1H),1.87-2.16(m,5H,在2.03ppm包含s),2.16-2.40(m,2H),2.67(t,1H),2.74-2.93(m,2H),3.79(s,3H),5.34(td,1H),5.75–5.82(m,1H),7.03(d,1H),7.67-7.75(m,2H)。 

中间体9 

11α-乙酰氧基-17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯 

与中间体2-a类似，在回流温度下，将2.50g(4.98mmol)11α-乙酰氧基-17-{[(三氟甲基)磺酰基]氧基}雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯在170mg(5mol%)[1,3-双(2,6-二异丙基苯基)咪唑-2-亚基](3-氯吡啶基)二氯化钯(II)(PEPPSI^TM-IPr,CAS905459-27-0)的存在下与981mg(1.4当量)5-氟吡啶-3-硼酸反应5h的时间。这产生2.62g粗制产物形式的标题化合物。 

中间体10 

17-(5-氟吡啶-3-基)-11α-羟基雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯 

向于40ml甲醇中的2.62g(5.83mmol)11α-乙酰氧基-17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯添加4.0g(5当量)碳酸钾，并且将混合物在RT搅拌3h。用水和1M盐酸稀释混合物并用乙酸乙酯萃取三次。用水和饱和氯化钠溶液洗涤合并的有机相，在硫酸钠上干燥，并浓缩。硅胶柱色谱(己烷/乙酸乙酯)产生1.19g(理论的50%)的标题化合 物。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆,所选信号):δ[ppm]=0.95(s,3H),1.40-1.61(m,3H),2.78-2.97(m,2H),3.79(s,3H),4.06–4.21(m,1H),4.79–4.92(m,1H),6.26(br.s.,1H),7.59-7.74(m,3H),8.07(d,1H),8.39-8.54(m,2H)。 

中间体11 

11β-氟-17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯 

向531mg(3.49mmol)17-(5-氟吡啶-3-基)-11α-羟基雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯于15ml THF中的冰冷溶液滴加0.52ml(1.65当量)1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯和0.58ml(1.5当量)1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁烷-1-磺酰氟，并且在冰浴冷却下将混合物搅拌3h。浓缩混合物并且通过硅胶柱色谱(己烷/乙酸乙酯)纯化产物。这产生747mg(理论的84%)的粗制产物形式的标题化合物。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆,所选信号):δ[ppm]=2.86–2.97(m,2H),5.57–5.83(m,1H),6.26–6.32(m,1H),7.45–7.53(m,1H),7.65-7.78(m,3H),8.39-8.53(m,2H)。 

中间体12 

11β-氟-17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸 

向862mg(2.11mmol)11β-氟-17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸甲酯于10ml THF中的混合物添加5ml甲醇和于5ml水中的442mg氢氧化锂一水合物，并且将混合物在室温搅拌过夜。添加水，并且用10%浓度柠檬酸水溶液调节反应混合物至pH=4。抽滤所得沉淀物，用乙酸乙酯洗涤，并干燥。这产生498mg(理论的60%)的白色固体。 

¹H-NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=1.19(s,3H),1.44-1.59(m,1H),1.80-1.96(m,2H),1.96-2.08(m,2H),2.18-2.29(m,1H),2.32-2.42(m,1H),2.59(td,1H),2.74(dd,1H),2.77(br.s.,1H),2.86-3.00(m,2H),5.66–5.80(m,1H),6.32(dd,1H),7.48(d,1H),7.65-7.78(m,3H),8.47(d,1H),8.54(t,1H)。 

实施例1 

4-[({[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)甲基]-3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-4-羧酸 

步骤A：首先将100mg(0.26mmol)17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸加到1ml DMF和3ml THF中。然后，添加119mg(2.0当量)4-(氨基甲基)-3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-4-羧酸乙酯盐酸盐、41mg(2.0当量)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、102mg(2.0当量)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.11ml三乙胺，并且将混合物在RT搅拌过夜。 

步骤B：然后，添加0.66ml2M氢氧化钠水溶液和0.50ml甲醇，并且将混合物在RT搅拌过夜。添加水，并且用10%浓度柠檬酸水溶液将反应混合物酸化至pH3-4。用乙酸乙酯萃取水相三次，浓缩合并的有机相，并通过制备型HPLC(乙腈/水/甲酸)纯化残留物。这产生76mg(理论的55%)的固体。 

C₃₁H₃₅FN₂O₄(518.6)。实测MS-ES+质量：518.26。 

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆,所选信号)δppm0.99(s,3H),1.36-1.99(m,10H),2.05-2.21(m,2H),2.25-2.44(m,3H),2.82-2.95(m,2H),3.39(d,2H),3.67–3.76(m,2H),6.25–6.29(m,1H),7.31(d,1H),7.49-7.60(m,2H),7.68(dt,1H),8.27(t,1H),8.43(d,1H),8.49(s,1H),12.5(br.s)。 

实施例2 

N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-N-甲基-β-丙氨酸 

步骤A：向4.00g(10.6mmol)17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和3.38g(2当量)N-甲基-β-丙氨酸叔丁酯于100ml THF和5 ml DMF中的混合物添加1.62g(1.0当量)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、4.06g(2.0当量)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和4.4ml三乙胺，并且将混合物在RT搅拌18h。用水稀释混合物并用乙酸乙酯萃取三次，并且用氯化钠溶液洗涤萃取物，并浓缩。用硅胶(己烷/乙酸乙酯)纯化残留物，产生5.1g固体形式的N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-N-甲基-β-丙氨酸叔丁酯(理论的93%)。 

步骤B：首先将1.00g(1.93mmol)N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-N-甲基-β-丙氨酸叔丁酯加到15ml二氯甲烷中，添加1.5ml三氟乙酸，并将混合物在40℃搅拌过夜，倾入冰水中，短暂搅拌并用二氯甲烷萃取三次。用饱和氯化钠溶液洗涤合并的有机相，通过拒水过滤器过滤并浓缩。向粗制产物添加乙醚，将混合物搅拌并抽滤，并且用乙醚洗涤产物并干燥。这产生0.79g(理论的89%)N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-N-甲基-β-丙氨酸。 

C₂₈H₃₁FN₂O₃(462.6)。实测MS-ES+质量：462.23。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ[ppm]=1.00(s,3H),1.33–1.79(m,5H),1.82-1.99(m,1H),2.08–2.21(m,2H),2.21-2.43(m,3H),2.50(s),2.74–2.88(5H,在2.88ppm包含s),3.36-3.71(m),6.27(s.,1H),6.99-7.16(m,2H),7.28(d,1H),7.68(dt,1H),8.43(d,1H),8.49(s,1H),8.48-8.56(m,1H),12.28(br.s.)。 

实施例3 

1-[({[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)甲基]环丙烷-1-羧酸 

与实施例1类似，将100mg(0.26mmol)17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和88mg(2.0当量)1-(氨基甲基)环丙烷-1-羧酸甲酯盐酸盐转化成72mg(理论的57%)的标题化合物。 

C₂₉H₃₁FN₂O₃(474.6)。实测MS-ES+质量：474.23。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ[ppm]=0.82-0.90(m,2H),0.95-1.06(m,5H),1.33-1.81(m,5H),1.56(d,3H),1.84-1.97(m,1H),1.84-1.97(m,1H),2.05-2.44(m),2.80-2.94(m,2H),3.44-3.54(m,2H),6.27(s.,1H),7.31(d,1H),7.50-7.60(m,2H),7.68(dt,1H),8.18(t,1H),8.43(d,1H),8.49(s,1H),12.3(s,1H)。 

实施例4 

1-[({[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)甲基]环戊烷-1-羧酸 

与实施例1类似(在50℃过夜进行步骤B，并且在添加另外的5当量2M氢氧化钠水溶液之后，通过在60℃搅拌过夜进行)，将100mg(0.26mmol)17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和103mg(2.0当量)1-(氨基甲基)环戊烷-1-羧酸甲酯盐酸盐转化成63mg(理论的48%)的标题化合物。 

C₃₁H₃₅FN₂O₃(502.6)。实测MS-ES+质量：502.26。 

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ[ppm]=0.99(s,3H),1.36–1.66(m),1.73(td,1H),1.81-1.95(m,3H),2.07-2.20(m,2H),2.25-2.44(m),2.83-2.95(m,2H),3.45(d,2H),6.25-6.29(m,1H),7.31(d,1H),7.49-7.56(m,2H),7.69(dt,1H),8.14(t,1H),8.43(d,1H),8.49(s,1H),12.2(s)。 

实施例5 

3-({[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)-2,2-二甲基丙酸 

与实施例1类似(在50℃过夜进行步骤B，并且在添加另外的5当量2M氢氧化钠水溶液之后在于60℃搅拌的同时过夜进行)，将100mg(0.26mmol)17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和89mg(2.0当量)3-氨基-2,2-二甲基丙酸甲酯盐酸盐转化成63mg(理论的50%)的标题化合物。 

C₂₉H₃₃FN₂O₃(476.6)。实测MS-ES+质量：476.25。 

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ[ppm]=0.99(s,3H),1.06(s,6H),1.36-1.66(m,4H),1.73(td,1H),1.86-1.95(m,1H),2.07-2.20(m,2H),2.25-2.45(m,3H),2.84-2.92(m,2H),3.37(d,被水信号叠覆),6.25-6.29(m,1H),7.31(d,1H),7.50-7.57(m,2H),7.69(dt,1H),8.15(t,1H),8.43(d,1H),8.49(t,1H),12.2(s)。 

实施例6 

1-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}哌啶-4-羧酸 

与实施例1类似(步骤B于50℃进行5h的时间)，将100mg(0.26mmol)17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和83mg(2.0当量)哌啶-4-羧酸乙酯转化成65mg(理论的50%)的标题化合物。 

C₃₀H₃₃FN₂O₃(488.6)。实测MS-ES+质量：488.25。 

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=1.00(s,3H),1.33-1.96(m,10H),2.03-2.22(m,2H),2.24-2.43(m,3H),2.79-2.94(m,3H),3.02(br.s.,1H),3.57(br.s.,1H),4.26(br.s.,1H),6.25-6.29(m,1H),7.00-7.11(m,2H),7.29(d,1H),7.69(dt,1H),8.43(d,1H),8.47-8.51(m,1H),12.3(s)。 

实施例7 

N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-2-甲基丙氨酸 

与实施例1类似(通过在50℃加热而过夜进行步骤B，并且在添加另外的5当量2M氢氧化钠水溶液之后，在60℃搅拌过夜)，将100mg(0.26mmol)17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和81mg(2.0当量)3-氨基-2,2-二甲基丙酸甲酯盐酸盐转化成81mg(理论的66%)的标题化合物。 

C₂₈H₃₁FN₂O₃(462.6)。实测MS-ES+质量：462.23。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ[ppm]=0.99(s,3H),1.39(s,6H),1.4-1.82(m),1.86–1.98(m,1H),2.05-2.43(m,2H),2.20-2.50(m),2.83-2.94(m,2H),6.27(s,1H),7.31(d,1H),7.52-7.61(m,2H),7.65-7.72(m,1H),8.29(s,1H),8.43(d,1H),8.46-8.53(m,1H),12.1(s)。 

实施例8 

4-({[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)丁酸 

与实施例1类似，将100mg(0.26mmol)17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和81mg(2.0当量)4-氨基丁酸甲酯盐酸盐转化成58mg(理论的48%)的标题化合物。 

C₂₈H₃₁FN₂O₃(462.6)。实测MS-ES+质量：462.23。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ[ppm]=0.99(s,3H),1.39-1.78(m,7H),1.83-1.99(m,1H),2.05–2.50(m,被DMSO信号叠覆),3.1–3.4(m,被水信号叠覆),2.79-2.98(m,2H),6.26(s.,1H),7.31(d,1H),7.52-7.59(m,2H),7.67(dt,1H),8.32(t,1H),8.43(d,1H),8.49(s,1H),12.0(s)。 

实施例9 

N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-β-丙氨酸 

与实施例1类似，将100mg(0.26mmol)17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和81mg(2.0当量)β-丙氨酸乙酯盐酸盐转化成 59mg(理论的50%)的标题化合物。 

C₂₇H₂₉FN₂O₃(448.5)。实测MS-ES+质量：448.22。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ[ppm]=0.99(s,3H),1.38-1.78(m,5H),1.83-1.98(m,1H),2.05-2.21(m,2H),2.25–2.44(m,被DMSO信号叠覆),2.80-2.94(m,2H),3.35-3.51(m,被水信号叠覆),6.26(s.,1H),7.31(d,1H),7.50-7.58(m,2H),7.62-7.74(m,1H),8.36(t,1H),8.43(d,1H),8.49(s,1H),12.2(s)。 

实施例10 

N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}甘氨酸 

与实施例1类似，将100mg(0.26mmol)17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和67mg(2.0当量)甘氨酸甲酯盐酸盐转化成58mg(理论的50%)的标题化合物。 

C₂₆H₂₇FN₂O₃(434.5)。实测MS-ES+质量：434.20。 

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=1.00(s,3H),1.37-1.67(m,4H),1.74(td,1H),1.85-1.97(m,1H),2.07-2.21(m,2H),2.26-2.5(m,被DMSO信号叠覆),2.84-2.94(m,2H),3.86(d,2H),6.25-6.29(m,1H),7.34(d,1H),7.55-7.61(m,2H),7.64-7.72(m,1H),8.43(d,1H),8.49(t,1H),8.64(t,1H),12.5(s)。 

实施例11 

(1R*,2S*)-2-({[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)环戊烷-1-羧酸 

与实施例1类似，将100mg(0.26mmol)17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和103mg(2.0当量)(1R*,2S*)-2-氨基环戊烷-1-羧酸乙酯盐酸盐转化成63mg(理论的49%)的标题化合物。 

C₃₀H₃₃FN₂O₃(488.6)。实测MS-ES+质量：488.25。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=1.00(s,3H),1.39-1.66(m,5H),1.68-1.96(m,7H),2.02-2.21(m,2H),2.24-2.41(m),2.78-2.98(m,3H),4.42–4.57(m,1H),6.27(s.,1H),7.30(d,1H),7.46-7.58(m,2H),7.68(dt,1H),8.03(d,1H),8.43(d,1H),8.46-8.52(m,1H),11.9(s)。 

实施例12 

(S)-3-({[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)丁酸 

与实施例1类似(在步骤B中，添加另外5当量2M氢氧化钠水溶液，将混合物搅拌4h，添加另外5当量的2M氢氧化钠水溶液，将混合物在110℃/300瓦的微波炉中搅拌30min，添加10当量2M氢氧化钠水溶液，然后将混合物在120℃/300瓦的微波炉中加热60min，并且在130℃/300瓦的微波炉中加热60min)，将100mg(0.26mmol)17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和84mg(S)-3-氨基丁酸叔丁酯转化成24mg(理论的20%)的标题化合物。 

C₂₈H₃₁FN₂O₃(462.6)。实测MS-ES+质量：462.23。 

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=1.02(s,3H),1.16(d,3H),1.38-1.68(m,4H),1.76(td,1H),1.87-2.01(m,1H),2.09-2.24(m,2H),2.27-2.46(m,4H),2.51-2.61(m,1H),2.82-3.00(m,2H),4.31(spt,1H),6.27-6.31(m,1H),7.34(d,1H),7.50-7.61(m,2H),7.70(dt,1H),8.16(d,1H),8.46(d,1H),8.50–8.54(m,1H),12.2(br.s.,1H)。 

实施例13 

(R)-3-({[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)丁酸 

与实施例1类似(在步骤B中，添加另外5当量2M氢氧化钠水溶液，并且将混合物在50℃搅拌30h)，将100mg(0.26mmol)17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和84mg(R)-3-氨基丁酸叔丁酯转化成34mg(理论的28%)的标题化合物。 

C₂₈H₃₁FN₂O₃(462.6)。实测MS-ES+质量：462.23。 

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=1.02(s,3H),1.16(d,3H), 1.39-1.69(m,4H),1.76(td,1H),1.88-2.00(m,1H),2.09-2.23(m,2H),2.27-2.47(m,4H),2.51-2.61(m,1H),2.82-2.98(m,2H),4.32(spt,1H),6.24-6.34(m,1H),7.34(d,1H),7.52-7.60(m,2H),7.70(dt,1H),8.15(d,1H),8.46(d,1H),8.50-8.54(m,1H),12.1(br.s.,1H)。 

实施例14 

3-({[17-(5-甲氧基吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)-2,2-二甲基丙酸 

与实施例1类似(通过在50℃搅拌7h来进行步骤B)，将100mg(0.26mmol)17-(5-甲氧基吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和75mg(0.51mmol)3-氨基-2,2-二甲基丙酸乙酯转化成12mg(理论的10%)的标题化合物。 

C₃₀H₃₆N₂O₄(488.63)。实测MS-ES+质量：488.27。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ[ppm]=0.98(s,3H),1.06(s,6H),1.31-1.82(m,5H),1.84–1.97(m,1H),2.00-2.19(m,2H),2.20-2.40(m),2.80–2.95(m,2H),3.36–3.38(m,被水信号部分遮蔽),3.81(s,3H),6.16(s.,1H),7.20-7.37(m,2H),7.46-7.63(m,2H),8.09-8.27(m,3H)。 

实施例15 

N-{[17-(5-甲氧基吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-β-丙氨酸 

与实施例1类似(通过在50℃搅拌7h来进行步骤B)，将100mg(0.26mmol)17-(5-甲氧基吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和79mg(0.51mmol)β-丙氨酸乙酯盐酸盐转化成64mg(理论的54%)的标题化合物。 

C₂₈H₃₂N₂O₄(460.58)。实测MS-ES+质量：460.24。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=0.98(s,3H),1.38-1.78(m,5H),1.85-1.96(m,1H),2.04-2.18(m,2H),2.21-2.41(m,3H),2.76-2.98(m,2H),3.34-3.50(m,2H),3.81(s,3H),6.14-6.18(m,1H),7.23-7.28(m,1H),7.31(d,1H),7.46-7.63(m,2H),8.16(d,1H),8.20(d,1H),8.38(t,1H),12.2(br.s.,1H)。 

实施例16 

N-{[17-(5-甲氧基吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-N-甲基-β-丙氨酸 

向100mg(0.26mmol)17-(5-甲氧基吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和82mg(2当量)N-甲基-β-丙氨酸叔丁酯于3ml THF和1mlDMF中的混合物添加39mg(1.0当量)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、98mg(2.0当量)1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.11ml三乙胺，并且将混合物在RT搅拌72h。用水稀释混合物并用乙酸乙酯萃取三次，并且浓缩萃取物。向残留物添加4ml二氯甲烷和1ml三氟乙酸，并且将混合物在室温搅拌17h。浓缩混合物，在通过制备型HPLC纯化残留物之后，产生66mg的标题化合物。 

C₂₉H₃₄N₂O₄(474.61)。实测MS-ES+质量：474.25。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=0.99(s,3H),1.38-1.78(m,5H),1.82–1.96(m,1H),2.03-2.18(m,2H),2.21-2.43(m,3H),2.79-2.93(m,5H),3.42(br.s.,1H),3.57(br.s.,1H),3.81(s,3H),6.16(s,1H),6.99-7.14(m,2H),7.23-7.31(m,2H),8.13-8.22(m,2H),12.3(br.s.,1H)。 

实施例17 

N-{[17-(嘧啶-5-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-β-丙氨酸 

与实施例1类似(通过在50℃搅拌18h来进行步骤B)，将100mg(0.28mmol)17-(嘧啶-5-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和85mg(2.0当量)β-丙氨酸乙酯盐酸盐转化成63mg(理论的50%)的标题化合物。 

C₂₆H₂₉N₃O₃(431.5)。实测MS-ES+质量：431.22。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=0.99(s,3H),1.36-1.79(m,5H),1.84-1.97(m,1H),2.06-2.20(m,2H),2.25-2.41(m,4H),2.82-2.93(m,2H),3.35-3.45(m,2H),6.28-6.33(m,1H),7.31(d,1H),7.50-7.58(m,2H),8.38(t,1H),8.83(s,2H),9.04(s,1H),12.19(br.s.,1H)。 

实施例18 

4-({[17-(嘧啶-5-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)丁酸 

与实施例1类似(通过在50℃搅拌18h来进行步骤B)，将100mg(0.28mmol)17-(嘧啶-5-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和85mg(2.0当 量)4-氨基丁酸甲酯盐酸盐转化成61mg(理论的47%)的标题化合物。 

C₂₇H₃₁N₃O₃(445.6)。实测MS-ES+质量：445.24。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=0.99(s,3H),1.39-1.79(m,7H),1.85-1.98(m,1H),2.05-2.26(m,4H),2.26-2.41(m,3H),2.81-2.95(m,2H),3.15-3.25(m,2H),6.27-6.34(m,1H),7.31(d,1H),7.50-7.61(m,2H),8.34(t,1H),8.83(s,2H),9.04(s,1H),12.04(br.s.,1H)。 

实施例19 

N-甲基-N-{[17-(嘧啶-5-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-β-丙氨酸 

向100mg(0.26mmol)17-(嘧啶-5-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和88mg(2当量)N-甲基-β-丙氨酸叔丁酯于3ml THF和1ml DMF中的混合物添加42mg(1当量)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、106mg(2.0当量)1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.12ml三乙胺，并且将混合物在RT搅拌72h。用水稀释混合物并用乙酸乙酯萃取三次，并且浓缩萃取物。向残留物添加3ml二氯甲烷和1ml三氟乙酸，并且将混合物在室温搅拌72h。浓缩混合物，在通过制备型HPLC纯化残留物之后，产生56mg的标题化合物。 

C₂₇H₃₁N₃O₃(445.6)。实测MS-ES+质量：445.24。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=1.00(s,3H),1.36-1.77(m,5H),1.85-1.94(m,1H),2.07-2.20(m,2H),2.26-2.5(m,被遮蔽),2.80-2.92(m,5H),3.42(br.s.,1H),3.57(br.s.,1H),6.27–6.33(m,1H),7.02-7.11(m,2H),7.29(d,1H),8.83(s,2H),9.04(s,1H),12.3(br.s,1H)。 

实施例20 

2,2-二甲基-3-({[17-(嘧啶-5-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)丙酸 

与实施例1类似(通过在50℃搅拌5h来进行步骤B)，将100mg(0.28mmol)17-(嘧啶-5-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和81mg(0.55mmol)3-氨基-2,2-二甲基丙酸乙酯转化成10mg(理论的8%)的标题化合物。 

C₂₈H₃₃N₃O₃(459.6)。实测MS-ES+质量：459.25。 

¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=1.02(s,3H),1.09(s,6H),1.42-1.50(m,1H),1.53–1.68(m,3H),1.77(td,1H),1.91-1.97(m,1H),2.13-2.20(m,2H),2.31-2.39(m,2H),2.41-2.47(m,1H),2.89-2.94(m,2H),3.40(d,2H),6.33(dd,1H),7.34(d,1H),7.53-7.59(m,2H),8.16–8.21(m.,1H),8.85(s,2H),9.07(s,1H),12.25(br.s.,1H)。 

实施例21 

N-({17-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基}羰基)-β-丙氨酸 

与实施例1类似(通过在50℃搅拌18h来进行步骤B)，将100mg(0.23mmol)17-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和72mg(2.0当量)β-丙氨酸乙酯盐酸盐转化成65mg(理论的56%)的标题化合物。 

C₂₈H₂₉F₃N₂O₃(498.6)。实测MS-ES+质量：498.21。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=1.01(s,3H),1.35-1.69(m,4H),1.76(td,1H),1.84-2.00(m,1H),2.03-2.21(m,2H),2.24-2.41(m),2.78-2.96(m,2H),3.35-3.53(m,2H),6.33–6.38(m,1H),7.31(d,1H),7.47-7.62(m,2H),8.03(s,1H),8.35(t,1H),8.78-8.86(m,1H),8.86-8.97(m,1H),12.2(br.s.,1H)。 

实施例22 

N-甲基-N-({17-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基}羰基)-β-丙氨酸 

步骤A：向100mg(0.23mmol)17-[5-(三氟甲基)吡啶-3-基]雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和74mg(2当量)N-甲基-β-丙氨酸叔丁酯于3ml THF中的混合物添加36mg(1当量)1-羟基-1H-苯并三唑水合物、90mg(2.0当量)1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和98微升三乙胺，并且将混合物在RT搅拌4h。用水稀释混合物并用乙酸乙酯萃取三次，并且浓缩萃取物。 

步骤B：添加2ml二氯甲烷和180微升三氟乙酸，并且将混合物在40℃的浴温搅拌18h。添加另外90微升三氟乙酸，并且将混合物在40℃搅拌5h。添加水，将各相分离并且用二氯甲烷萃取水相两次。浓缩有机相并且通过HPLC(乙腈/水/甲酸)纯化残留物。这产生83mg(理论的69%)的标题化合物。 

C₂₉H₃₁F₃N₂O₃(512.58)。实测MS-ES+质量：512.23。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=1.01(s,3H),1.36-1.51(m,1H),1.52-1.81(m,4H),1.84-1.98(m,1H),2.04-2.21(m,2H),2.25-2.40(m),2.79-2.96(m,5H),3.42(br.s.),3.55(br.s.),6.35(s,1H),7.00-7.15(m,2H),7.28(d,1H),8.03(s,1H),8.81-8.87(m,1H),8.87-8.95(m,1H),12.3(br.s.,1H)。 

实施例23 

N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-L-脯氨酸 

与实施例22类似，将100mg(0.26mmol)17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸与91mg(2.0当量)L-脯氨酸叔丁酯反应。通过制备型HPLC纯化，产生65mg(理论的50%)的标题化合物。 

C₂₉H₃₁FN₂O₃(474.6)。实测MS-ES+质量：474.23。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=1.00(s,3H),1.39-1.94(m),2.05-2.43(m),2.77–2.94(m,2H),3.40-3.59(m,2H),4.27-4.40(m,1H),6.27(s.,1H),7.04-7.34(m,3H),7.64-7.73(m,1H),8.43(d,1H),8.49(s,1H),12.5(br.s.,1H)。 

通过分析型HPLC分析标题化合物： 

系统>Waters:Alliance2695,DAD996>柱:>Chiralpak AS-RH5μm150×4.6mm>溶剂:>H₂O(0.1体积%的甲酸)/乙腈50:50(v/v)>流速:>1.0ml/min>温度:>25℃>溶液:>1.0mg/ml乙醇/甲醇2:1>进样:>5.0μl>检测:>DAD254nm>峰>Rt，以分钟计>1>8.15>

实施例24 

N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-D-脯氨酸 

与实施例22类似，将100mg(0.26mmol)17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸与91mg(2.0当量)D-脯氨酸叔丁酯反应。通过制备型HPLC纯化，产生66mg(理论的52%)的标题化合物。 

C₂₉H₃₁FN₂O₃(474.6)。实测MS-ES+质量：474.23。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=1.00(s,3H),1.34-1.97(m),2.05-2.43(m),2.75–2.94(m,2H),3.42-3.59(m,2H),4.25-4.40(m,1H),6.27(s.,1H),7.02-7.36(m,3H),7.68(d,1H),8.43(d,1H),8.49(s,1H),12.5(br.s.,1H)。 

通过分析型HPLC分析标题化合物： 

系统>Waters:Alliance2695,DAD996>柱:>Chiralpak AS-RH5μm150×4.6mm>溶剂:>H₂O(0.1体积%的甲酸)/乙腈50:50(v/v)>流速:>1.0ml/min>温度:>25℃>溶液:>1.0mg/ml乙醇/甲醇2:1>进样:>5.0μl>检测:>DAD254nm>峰>Rt，以分钟计>2>9.50>

实施例25 

4-({[11β-氟-17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)丁酸 

与实施例1类似，将100mg11β-氟-17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和78mg(2.0当量)4-氨基丁酸甲酯盐酸盐转化成80mg(理论的66%)的标题化合物。 

C₂₈H₃₀F₂N₂O₃(480.6)。实测MS-ES+质量：480.22。 

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=1.14(s,3H),1.40–1.55(m,1H),1.70(quin,2H),1.74-2.03(m,4H),2.13-2.27(m,3H),2.27-2.37(m,1H),2.49-2.60(m,1H),2.60–2.77(m,1H),2.81-2.97(m,2H),3.22(q,2H),5.58-5.80(m,1H),6.21-6.34(m,1H),7.40(d,1H),7.48-7.61(m,2H),7.72(dt,1H),8.36(t,1H),8.45(d,1H),8.50(s,1H),12.0(br.s.,1H)。 

实施例26 

N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)-15α-羟基雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-N-甲基-β-丙氨酸 

将Calonectria decora菌株(ATCC No.14767)的0.2ml DMSO/冰培养物接种在100ml锥形烧瓶中，其包含已在121℃的高压灭菌器中消毒20分钟的20ml营养物水溶液(调节至pH6.2)的100ml锥形烧瓶，所述营养物水溶液含有1%玉米浸泡液和1%大豆粉，并且将所述锥形烧瓶在21℃以165转/分钟在旋转振荡器上振荡48小时。将8ml的该预培养物接种在填充有100ml无菌培养基(最终组成与关于预培养物所述的组成相同)的500ml锥形烧瓶中。将该烧瓶在21℃以165转/分钟在旋转振荡器上振荡48小时。分别将50ml的该预培养物接种在各自含有1l无菌营养物溶液的两个2l锥形烧瓶中，所述无菌营养物溶液包含3%一水合葡萄糖、1%氯化铵、0.2%硝酸钠、0.1%磷酸二氢钾、0.2%磷酸氢二钾、0.05%氯化钾、0.05%七水硫酸镁和0.002%七水硫酸亚铁(II)。在27℃温度下于165转/分钟的旋转振荡器上的6小时27℃生长期之后，将50mg N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-N-甲基-β-丙氨酸于10ml DMF中的溶液分到在这两个烧瓶中。将烧瓶再振荡43小时，然后后处理。合并两个培养肉汤，并且在5l玻璃萃取容器中用1l异丁基甲基酮以40转/分钟萃取19小时。将有机相在硫酸钠上干燥并且浓缩至干燥。用甲醇洗涤残留物以除去硅油。这产生328mg粗制产物。将粗制产物吸附到硅藻土上并进行色谱分析：方法：Biotage Isolera,10g SNAP柱,溶剂:梯度为在乙酸乙酯(添加1%冰醋酸)中从2%到20% 甲醇。这产生42mg的目标化合物。 

HPLC Rt=4.8min 

HPLC条件：A:具有0.05%甲酸的水;B:具有0.1%甲酸的乙腈;梯度:0min:60:40A/B;12min:30:70A/B;流速:0.8ml/min;柱:Luna C18(2)5μ125×4.6;检测波长:244nm 

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ[ppm]=1.08(s,3H),1.50–1.58(m,2H),1.61–1.67(m,2H),1.76–1.85(m,1H),2.08–2.12(m,1H),2.30–2.35(m,2H),2.40–2.45(m,1H),2.55(2H被DMSO信号叠覆),2.85–2.89(m,2H),2.91(s,3H),3.45(br.s,1H),3.62(br.s,1H),4.62(d,1H),4.95(br.s,1H),6.15(s,1H),7.05(s,1H),7.11(d,1H),7.31(d,1H),7.71(d,1H),8.49(d,1H),8.51(s,1H),12.1(br.s,1H)。 

实施例27 

N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)-15β-羟基雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-N-甲基-β-丙氨酸 

将密从毛霉(Mucor plumbeus)菌株(CBS No.29563)的0.2ml DMSO/冰培养物接种在100ml锥形烧瓶中，其包含已在121℃的高压灭菌器中消毒20分钟的20ml营养物水溶液(调节至pH6.0)，所述营养物水溶液含有3%一水合葡萄糖、1%玉米浸泡液、0.2%硝酸钠、0.1%磷酸二氢钾、0.2%磷酸氢二钾、0.05%氯化钾、0.05%七水硫酸镁和0.002%七水硫酸亚铁(II)，并且将所述锥形烧瓶在27℃以165转/分钟在旋转振荡器上振荡65小时。将8ml的该预培养物接种在填充有100ml无菌培养基(最 终组成与关于预培养物所述的组成相同)的500ml锥形烧瓶中。将该烧瓶在27℃以165转/分钟在旋转振荡器上振荡72小时。分别将50ml的该预培养物接种在各自包含1l无菌营养物溶液的两个2l锥形烧瓶中，所述无菌营养物溶液包含3%一水合葡萄糖、1%氯化铵、0.2%硝酸钠、0.1%磷酸二氢钾、0.2%磷酸氢二钾、0.05%氯化钾、0.05%七水硫酸镁和0.002%七水硫酸亚铁(II)。在27℃温度下于165转/分钟的旋转振荡器上的6小时27℃生长期之后，将50mg N-{[17-(5-氟吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-N-甲基-β-丙氨酸于10ml DMF中的溶液分到两个这烧瓶中。将烧瓶再振荡43小时，然后后处理。合并两个培养肉汤，并且在5l玻璃萃取容器中用1l异丁基甲基酮以40转/分钟萃取19小时。将有机相在硫酸钠上干燥并且浓缩至干燥。用甲醇洗涤残留物以除去硅油。这产生236mg棕色油形式的粗制产物。将粗制产物吸附到硅藻土上并进行色谱分析：仪器：Biotage Isolera,10g SNAP柱,溶剂:梯度为在乙酸乙酯(添加1%冰醋酸)中从2%到20%甲醇。这产生35mg的目标化合物。HPLC Rt=5.4min 

HPLC条件：A:具有0.05%甲酸的水;B:具有0.1%甲酸的乙腈;梯度:0min:60:40A/B;12min:30:70A/B;流速:0.8ml/min;柱:Luna C18(2)5μ125×4.6;检测波长:244nm 

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ[ppm]=1.28(s,3H);1.38–1.60(m,4H);1.69–1.78(m,1H);2.01–2.08(m,1H);2.20–2.28(m,1H);2.30–2.40(m,1H);2.55(2H被DMSO信号叠覆);2.85–2.90(m,5H),3.10(s,1H);3.45(br.s,1H);3.57(br.s,1H);4.50(s,1H);4.69(br.s,1H);6.30(s,1H);7.05(s,1H);7.08(d,1H);7.28(d,1H);7.71(d7,1H);8.47(d,1H);8.52(s,1H);12.1(br.s,1H)。 

实施例28 

N-甲基-N-{[17-(6-甲基哒嗪-4-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-β-丙氨酸 

将42mg17-(6-甲基哒嗪-4-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸(不纯的)和36mg N-甲基-β-丙氨酸叔丁酯(2当量)溶解在2.5ml THF和0.5mlDMF中。添加43mg1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、17mg1-羟基-1H-苯并三唑水合物和0.047ml三乙胺，并且将混合物在室温搅拌18h。用水稀释反应混合物并且用乙酸乙酯萃取三次。浓缩合并的有机相，向残留物添加2ml二氯甲烷和0.5ml三氟乙酸，并且将混合物在室温搅拌6h。浓缩混合物并通过制备型HPLC纯化产物。这产生18mg的标题化合物。 

C₂₈H₃₃N₃O₃(459.59)。实测MS-ES+质量：459.25。 

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ[ppm]=1.02(s,3H),1.35-1.77(m,5H),1.84–1.95(m,1H),2.07-2.42(m,6H),2.58(s,3H),2.78-2.95(m,5H),3.41(br.s),3.57(br.s),6.54–6.59(m,1H),7.02-7.13(m,2H),7.29(d,1H),7.49(d,1H),9.10(d,1H),12.3(br.s,1H)。 

实施例29 

N-甲基-N-{[17-(吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}-β-丙氨酸 

将100mg17-(吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和89mg N-甲基-β-丙氨酸叔丁酯(2当量)溶解在3ml THF和0.5ml DMF中。添加107mg1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、43mg1-羟基-1H-苯并三唑水合物和0.116ml三乙胺，并且将混合物在室温搅拌18h。用水稀释反应混合物并且用乙酸乙酯萃取三次。浓缩合并的有机相，向残留物添加3ml二氯甲烷和1ml三氟乙酸，并且将混合物在室温搅拌20h。浓缩混合物并通过制备型HPLC纯化产物。这产生78mg的标题化合物。 

C₂₈H₃₂N₂O₃(444.58)。实测MS-ES+质量：444.24。 

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=0.99(s,3H),1.37-1.67(m,4H),1.73(td,1H),1.86-1.94(m,1H),2.06-2.17(m,2H),2.24-2.45(m,3H),2.80-2.93(m,5H),3.42(br.s.),3.57(br.s.),6.12(dd,1H),7.02-7.11(m,2H),7.26-7.35(m,2H),7.77(dt,1H),8.42(dd,1H),8.59(d,1H),12-3(br.s.,1H)。 

实施例30 

4-({[17-(5-甲氧基吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-基]羰基}氨基)丁酸 

与实施例1类似，将100mg(0.26mmol)17-(5-甲氧基吡啶-3-基)雌甾-1,3,5(10),16-四烯-3-羧酸和79mg4-氨基丁酸甲酯盐酸盐转化成64mg(理论的53%)的标题化合物。 

C₂₉H₃₄N₂O₄(474.61)。实测MS-ES+质量：474.25。 

¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=0.99(s,3H),1.38-1.78(m,7H),1.86-1.96(m,1H),2.04-2.43(m,7H),2.83-2.92(m,2H),3.15-3.26(m,2H),3.81(s,3H),6.16(s,1H),7.23-7.34(m,2H),7.51-7.59(m,2H),8.16(d,1H),8.20(d,1H),8.33(t,1H),12.0(br.s.,1H)。 

本发明化合物体外药理学检验

实施例31(AKR1C3抑制活性) 

在下面段落所述的AKR1C3测定中测量本发明的物质的AKR1C3抑制活性。 

基本上，通过定量来自Coumberone的Coumberol来测量酶活性(Halim,M.,Yee,D.J.和Sames,D.,J.AM.CHEM.SOC.130,14123–14128(2008)，以及Yee,D.J.,Balsanek,V.,Bauman,D.R.,Penning,T.M.和Sames,D.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA103,13304–13309(2006))。在该试验中，可以测定由AKR1C3进行NADPH-(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐)-依赖性还原非荧光Coumberone而导致的高荧光Coumberol的增加。 

所用的酶是重组人AKR1C3(醛-酮还原酶家族1成员C3)(GenBank 登记号NM_003739)。其在大肠杆菌(E.coli)中表达为GST(谷胱甘肽S转移酶)融合蛋白，并由谷胱甘肽琼脂糖亲合色谱纯化。通过用凝血酶消化并随后进行尺寸排阻色谱来除去GST(Dufort,I.,Rheault,P.,Huang,XF.,Soucy,P.,and Luu-The,V.,Endocrinology140,568-574(1999))。 

对于该测定，将受试物质于DMSO中的50nl100倍浓缩溶液用移液器转移到黑色小体积384孔微量滴定板(Greiner Bio-One,Frickenhausen,Germany)中，添加AKR1C3于测定缓冲液[50mM磷酸钾缓冲液pH7、1mM DTT、0.0022%(w/v)Pluronic F-127、0.01%BSA(w/v)和蛋白酶抑制剂混合物(来自Roche的完整的不含EDTA蛋白酶抑制剂混合物)]中的溶液(2.0μl)，并且将混合物孵育15min以使在酶反应之前所述物质与酶预结合。然后，通过添加NADPH(16.7μM→在5μl测定体积中的最终浓度为10μM)和Coumberone(0.5μM→在5μl测定体积中的最终浓度为0.3μM)于测定缓冲液中的溶液（3μl）来启动酶反应，并且将所得混合物在22℃孵育90min的反应时间。使AKR1C3的浓度适于酶制剂的相应活性，并进行调节以使测定在线性范围内进行。典型的浓度处于1nM的区域。通过添加由抑制剂EM-1404[F.Labrie等人,美国专利6,541,463,2003](2μM→在5μl测定体积中的最终浓度为1μM)组成的5μl终止液来终止反应。然后，使用合适的测量仪器(来自BMGLabtechnologies的Pherastar)，在520nm(在380nm激发)测量Coumberole的荧光。荧光强度用作所形成的Coumberole的量的量度，因此用作AKR1C3的酶活性的量度。将数据归一化(没有抑制剂的酶反应=0%抑制；有所有其他测定组分但没有酶=100%抑制)。通常，受试物质在相同微量滴定板上以20μM至96.8pM范围内的11种不同浓度(20μM、5.9μM、1.7μM、0.5μM、0.15μM、44nM、12.9nM、3.8nM、1.1nM、0.3nM和96.8pM，在测定前，基于100倍浓缩溶液的水平用100%DMSO通过连续1:3稀释来制备稀释系列)来试验，每一浓度测试两次，并且使用4-参数拟合来计算IC₅₀值。 

如所述的那样，检验了所要求保护的药理学物质对AKR1C3酶的抑制活性(参见表1)。对于所要求保护的结构范围的大部分，这些化合物表现出对AKR1C3的体外强抑制(IC₅₀值<50nM)，并且甚至大部分表现 出IC₅₀值<20nM。 

表1：本发明化合物的AKR1C3抑制 

(对于大部分化合物，示出两次试验测定的值) 

实施例32(Cyp17A1的抑制) 

CYP17A1(同物异名：17α-羟化酶/17.20-裂解酶)是向孕烯醇酮和孕酮的甾体D环的17-位添加羟基并由此形成17α-羟基孕酮和17α-羟基孕烯醇酮的酶。随后，形成脱氢表雄酮和雄烯二酮。已知的CYP17A1抑制剂阿比特龙例如用于在基于多西他赛的化疗失败之后的转移性去势难治性前列腺癌的疗法(Urologe2010,49,64–68)。阿比特龙阻断雄整个身体的雄激素合成和雌激素合成，并由此以非组织特异性的方式降低激素产生，这导致不期望的副作用(参见2001年4月28日的FDA,U.S.Food and Drug Admistration的通讯稿)。 

令人惊讶地，已经发现本发明的化合物仅非常弱地抑制CYP17A1(如果有的话)，然而它们在甾体骨架的17-位具有芳族含氮杂环。 

测定法描述： 

使用重组酶来评价受试化合物对CYP17A1的抑制。人CYP17A1在大肠杆菌中表达(Ehmer,P.B.等人;J.Steroid Biochem.Mol.Biol.,75,57–63(2000))。在37℃下，用孕酮(24.95μM)和³H-孕酮(0.05μM,101.3Ci/mmol)、50μM NADPH再生系统(在具有10mM NADP+、100mM葡萄糖6-磷酸和2.5U葡萄糖6-磷酸脱氢酶的磷酸盐缓冲液中)以及合适的受试物质(在5μl DMSO中)的混合物分别预孵育微粒体部分和140μL磷酸盐缓冲液(50mM磷酸钠、1mM MgCl₂、0.1mM EDTA、0.1mM二硫苏糖醇，pH7.4)5分钟。通过添加酶启动反应，并且在37℃孵育30分钟之后，通过添加50μl的1N盐酸终止反应。 

用乙酸乙酯萃取甾体。在蒸发有机相之后，将甾体溶解在乙腈中。将乙腈/水(45:55)用作流动相，在HPLC系统(Agilent1100Series,Agilent Technologies,Waldbronn,Germany)上的C18反相色谱柱(Nucleodur C18Gravity,3μm,Macherey-Nagel,Düren,Germany)上分离16α-羟基孕酮、17α-羟基孕酮和孕酮。使用辐射流检测器(radio flow detector)(Berthold Technologies,Bad Wildbad,Germany)进行甾体的检测和定量。使用下式计算抑制： 

由至少三次独立实验计算每一值。最终IC₅₀值计算为3或4个独立IC₅₀值的平均值。 

本发明的化合物不表现出或仅表现出显著性非常弱的对CYP17A1的抑制(表2)，并且与已知的CYP17A1抑制剂阿比特龙(用作游离碱)相比，IC₅₀值大于10μM。 

表2：对人CYP17的抑制 

^a在200μM物质浓度下的%抑制 

实施例33(在pH6.5的水性缓冲液中的溶解度)： 

测定在pH6.5的水性缓冲液中的热力学溶解度(振荡烧瓶法) 

根据振荡烧瓶法(shake-flask method)[文献:Edward H.Kerns和Li Di(2008)Solubility Methods in:Drug-like Properties:Concepts,Structure Design and Methods,p276-286.Burlington,MA,Academic Press]测定热力学溶解度。 

此处，制备活性化合物在pH6.5的缓冲液中的饱和溶液并搅拌24h，以确保在固体与溶液中的物质之间形成平衡。然后，离心分离溶液，并且在校准线的辅助下定量所获得的溶液的浓度。 

对于样品，将2mg固体物质精确称重并放入4ml玻璃瓶中。添加1ml pH6.5的磷酸盐缓冲液。在室温下，在搅拌器上搅拌该溶液24h。然后离心分离溶液。为制备用于校准的对照，将2mg固体物质精确称重并溶解在30ml乙腈中。在短暂超声处理之后，用水将溶液稀释至50ml。 

使用具有UV检测的HPLC定量样品和对照。每一样品在每一进样体积(5μl和50μl)下注射三次。对于对照，注射三个进样体积(5μl、10μl和20μl)。 

选择以下色谱条件： 

HPLC柱：    XterraMSC182.5μm4.6×30mm 

进样体积:   样品:3×5μl和3×50μl 

            对照:5μl、10μl、20μl 

流速:       1.5ml/min 

流动相:     酸梯度: 

            A:水/0.01%三氟乙酸(TFA) 

            B:乙腈/0.01%TFA 

            0min→95%A  5%B 

            0-3min→35%A  65%B,线性梯度 

            3-5min→35%A  65%B,等度 

            5-6min→95%A  5%B,等度 

UV检测器：  波长接近于吸收最大值(在200nm和400nm之间) 

使用HPLC软件(Waters Empower 2 FR)测定样品和对照进样的面积以及溶解度的计算(以mg/l计)。 

对于本发明实施例2的化合物，测量到溶解度为354mg/l；已知的AKR1C3抑制剂EM-1404表现出0.1mg/l的溶解度。 

实施例34 (子宫内膜异位症模型) 

为检验示例性实施例2化合物的体内功效，使用绢毛狨的子宫内膜异位症模型。采用4-8岁雌性绢毛狨(体重为340g至460g)。在这些动物中，通过在剖腹手术期间刺穿子宫，并用无菌培养基冲洗以使子宫细胞通过上导管进入腹部，从而诱发子宫内膜异位症[Einspanier等人,MolHum Reprod 2006]。在3个月后，重复所述程序。在实际开始治疗之前，对动物进行剖腹手术并检验子宫内膜异位症病灶于膀胱、子宫和卵巢上的存在。6周后，开始治疗。采用两个治疗组，每组规模为n=6只动物/组。组1仅用载剂(草莓/香蕉汁)治疗，组2用在载剂中给药的受试物质 治疗。每天一次口服给药30mg/kg受试物质。治疗期为6周。在结束治疗之后立即进行第2次腹腔镜检查，并且再次测定在子宫、卵巢和膀胱上的病灶的数量和大小。由于在治疗之前和之后，在卵巢上几乎未发现任何病灶，所以在评价期间未考虑卵巢型病灶。