白术挥发油/β-环糊精包合物中挥发油含量的测定方法

摘要

本发明涉及白术挥发油包合物质量控制领域，具体是一种白术挥发油/β-环糊精包合物中挥发油含量的测定方法，该测定方法的步骤为：Ⅰ.包合物中挥发油乙醇脱包溶液的制备：精密称取白术挥发油/β-环糊精包合物，加无水乙醇，超声10min，冷藏24h；随后以2500r/min转速，离心10min，取上层清液；包合物与无水乙醇的质量体积比为3:1；Ⅱ.对上层清液进行荧光分析。本发明所述的白术挥发油/β-环糊精包合物中挥发油含量的测定方法，操作简单方便，分析快速，仅需极少量样品，测定灵敏度极高，重复性好，开展氧化分解前、后白术挥发油/β-环糊精包合物中挥发油荧光分析方法，从而得到包合物的包合率、含油率等指标。

说明书

技术领域

    本发明涉及白术挥发油包合物质量控制领域，具体是一种白术挥发油/β-环糊精包合物中挥发油含量的测定方法。

背景技术

传统上白术挥发油/环糊精包合物含量测定使用的是水蒸气蒸馏法。尽管该方法广为应用，但是其加热时间长，对挥发油中不稳定性成分影响大，需要的样品量也大，实验耗时长，操作相对复杂，实验误差大。

因此，亟需一种操作简单方便、分析快速、仅需极少量样品、测定灵敏度高以及重复性好的测定方法来对白术挥发油包合物实现质控。

发明内容

本发明针对白术挥发油具有挥发油类物质易挥发的共性，提供了这一种白术挥发油/β-环糊精包合物中挥发油含量的测定方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：白术挥发油/β-环糊精包合物中挥发油含量的测定方法，所述的白术挥发油为氧化分解前的挥发油或者是氧化分解后的挥发油，所述氧化分解后的挥发油为：氧化分解前的挥发油经氧化分解后，其中苍术酮的分解率达100%的白术挥发油；

该测定方法的步骤为：

Ⅰ.包合物中挥发油乙醇脱包溶液的制备：精密称取白术挥发油/β-环糊精包合物，加无水乙醇，超声10min，冷藏24h；随后以2500r/min转速，离心10min，取上层清液；包合物与无水乙醇的质量体积比为3:1；

Ⅱ.对上层清液进行荧光分析：

a.若白术挥发油为氧化分解前的挥发油，荧光条件为：以429nm为发射波长，以340～409nm范围内的任意波长为激发波长，狭缝宽度为5nm，荧光分析获得其荧光强度F；

①若激发波长为367nm，其荧光强度为F^，，根据式（1）求得其上层清液中挥发油含量C^，，通过计算获得包合物中挥发油百分含量；

F^， = 44.23 C^， + 9.30    （1）

式（1）中：F^，为上层清液的荧光强度；

           C^，为上层清液中挥发油的含量（W/V）；

②若激发波长为其他波长，其荧光强度为F^，，，降低倍数B= F^，/ F^，，，根据式（2）求得其上层清液中挥发油含量C^，，，通过计算获得包合物中挥发油百分含量；

F^，， = （44.23 C^，， + 9.30）/B    （2）

式（2）中：F^，，为上层清液的荧光强度；

           C^，，为上层清液中挥发油的含量（W/V）；

b.若白术挥发油为氧化分解后的挥发油，荧光条件为：以485nm为发射波长，以315～465nm范围内的任意波长为激发波长，狭缝宽度为5nm，荧光分析获得其荧光强度F；

①若激发波长为396nm，其荧光强度为F^，，根据式（3）求得其上层清液中挥发油含量C^，，通过计算获得包合物中挥发油百分含量；

F^，= 38.68 C^， + 7.01    （3）

式（3）中：F^，为上层清液的荧光强度；

           C^，为上层清液中挥发油的含量（W/V）；

②若激发波长为其他波长，其荧光强度为F^，，，降低倍数B= F^，/ F^，，，根据式（4）求得其上层清液中挥发油含量C^，，，通过计算获得包合物中挥发油百分含量；

F^，，=（ 38.68 C^，， + 7.01 ）/B   （4）

式（4）中：F^，，为上层清液的荧光强度；

       C^，，为上层清液中挥发油的含量（W/V）。

本发明中所述白术挥发油/β-环糊精包合物可通过本领域公知的研磨法或超声法等包合物制备方法获得。

所述氧化分解前的挥发油为自白术药材中提取出的挥发油。

步骤Ⅰ包合物与无水乙醇的质量体积比为3:1（W/V），该比例较于其他比例，根据其荧光强度计算出的挥发油含量数据准确性高；若为其他比例，则上层清液中挥发油的含量值可能会不在标准曲线的线性范围之内，若仍然按照本发明所述各公式计算包合物中挥发油的含量，会对计算结果的准确性造成影响。

本发明步骤Ⅰ，依据β-CD（β-环糊精）微溶于无水乙醇，白术挥发油易溶于无水乙醇，通过步骤Ⅰ中的参数将白术挥发油/β-环糊精包合物中的白术挥发油游离出来。

本发明步骤Ⅱ根据挥发油乙醇溶液具有强的荧光发射的特点，依据氧化分解前的挥发油和氧化分解后的挥发油不同性质特点，设置不同的荧光分析条件，并根据发明人潜心研究的公式，求得挥发油乙醇溶液（上层清液）中挥发油含量，进而获得包合物中挥发油含量。

对于氧化分解前的挥发油，发明人认为340～409nm范围内的任意波长为激发波长均可采用。因发射波长为429nm，若激发波长大于409nm，激发波长与发射波长值距太小，两者可能会相互干扰，影响荧光强度值的准确性；若激发波长小于340nm，则激发波长未在整个激发峰的范围之内，荧光强度值太小，达不到含量测定的要求。

对于氧化分解后的挥发油，发明人认为315～465nm范围内的任意波长为激发波长均可采用，该范围内的激发波长的取值理由同上。

本发明所述的白术挥发油/β-环糊精包合物中挥发油含量的测定方法，操作简单方便，分析快速，仅需极少量样品，测定灵敏度极高，重复性好，依据β-CD微溶于无水乙醇，白术挥发油易溶于无水乙醇，且挥发油乙醇溶液具有强的荧光发射的特点，开展氧化分解前、后白术挥发油/β-环糊精包合物中挥发油荧光分析方法，从而得到包合物的包合率、含油率等指标，是一种科学有价值的白术挥发油包合物质控方法，该问题的解决有望推动白术挥发油/β-环糊精包合物抗肿瘤新药制剂研发工作。

具体实施方式

实施例1

仪器与条件：

Varian Cary Eclipse荧光分光光度计， SK250H超声仪；KDC-1044低速离心机；FA-1004分析天平，GM-0.33Ⅱ隔膜真空泵，β-CD，无水乙醇，氧化分解前的挥发油/β-环糊精包合物。

发射波长：429nm；

激发波长分别为：340nm、367nm、409nm；

狭缝宽度为5nm；

F^， = 44.23 C^， + 9.30    （1）

F^，， = （44.23 C^，， + 9.30）/B    （2）。

实验步骤：

Ⅰ.包合物中挥发油乙醇脱包溶液的制备：

精密称取氧化分解前的挥发油/β-环糊精包合物30mg，加10mL无水乙醇，超声10min，冷藏24h；随后以2500r/min转速，离心10min，取上层清液；

Ⅱ.对上层清液进行荧光分析：

当激发波长为367nm时，荧光分析获得其荧光强度31.136，根据式（1），上层清液中挥发油含量为0.4937mg/mL，10mL挥发油乙醇溶液中含有4.937mg的氧化分解前的挥发油，即包合物中挥发油含量为16.45%；

当激发波长为340nm时，荧光分析获得其荧光强度6.742，B=31.136/6.742=4.62，

F^，， = （44.23 C^，， + 9.30）/B=9.57 C^，，+2.01     （2）

根据式（2），上层清液中挥发油含量为0.4947mg/mL，10mL挥发油乙醇溶液中含有4.947mg的氧化分解前的挥发油，即包合物中挥发油含量为16.49%；

当激发波长为409nm时，荧光分析获得其荧光强度16.755，B=31.136/16.755=1.87，

F^，， = （44.23 C^，， + 9.30）/B=23.65 C^，，+4.97     （2）

根据式（2），上层清液中挥发油含量为0.4983mg/mL，10mL挥发油乙醇溶液中含有4.983mg的氧化分解前的挥发油，即包合物中挥发油含量为16.61%。

包合物中挥发油含量的平均值为16.51%，RSD=0.504%。

实施例2

仪器与条件：

Varian Cary Eclipse荧光分光光度计， SK250H超声仪；KDC-1044低速离心机；FA-1004分析天平，GM-0.33Ⅱ隔膜真空泵，β-CD，无水乙醇，氧化分解后的挥发油/β-环糊精包合物。

发射波长：485nm；

激发波长分别为：315nm、396nm、465nm；

狭缝宽度为5nm；

F^，= 38.68 C^， + 7.01    （3）

F^，，=（ 38.68 C^，， + 7.01 ）/B   （4）。

实验步骤：

Ⅰ.包合物中挥发油乙醇脱包溶液的制备：

精密称取氧化分解后的挥发油/β-环糊精包合物30mg，加10mL无水乙醇，超声10min，冷藏24h；随后以2500r/min转速，离心10min，取上层清液；

Ⅱ.对上层清液进行荧光分析：

当激发波长为396nm时，荧光分析获得其荧光强度31.918，根据式（3），上层清液中挥发油含量为0.6440mg/mL，10mL挥发油乙醇溶液中含有6.440mg的氧化分解后的挥发油，即包合物中挥发油含量为21.46%；

当激发波长为315nm时，荧光分析获得其荧光强度0.602，B=31.918/0.602=53.02，

F^，，=（ 38.68 C^，， + 7.01 ）/B =0.73 C^，，+0.13     （4）

根据式（2），上层清液中挥发油含量为0.6466mg/mL，10mL挥发油乙醇溶液中含有6.466mg的氧化分解前的挥发油，即包合物中挥发油含量为21.55%；

当激发波长为465nm时，荧光分析获得其荧光强度2.573，B=31.918/2.573=12.40，

F^，，=（ 38.68 C^，， + 7.01 ）/B =3.12C^，，+0.57     （4）

根据式（2），上层清液中挥发油含量为0.6420mg/mL，10mL挥发油乙醇溶液中含有6.420mg的氧化分解前的挥发油，即包合物中挥发油含量为21.40%。

包合物中挥发油含量的平均值为21.47%，RSD=0.352%。