法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2016-07-06
授权
授权
2014-07-16
实质审查的生效 IPC(主分类):C07D417/14 申请日:20140404
实质审查的生效
2014-06-25
公开
公开
技术领域
本发明涉及抗病毒剂领域,公开了含1-取代-5-氨基-4-吡唑联1,3,4-二唑硫醚或联1,3,4-二唑砜类衍生物在农业植物病毒病防治方面的应用。
背景技术
当前我国农业生产中,由于异常的气候条件、农业产业结构及其种植模式的改变,农林病虫害危害日益加重,食品安全和生态安全问题日益突出,农业产业发展很难得以保障,农业生态形势严峻。特别是传统农药的抗药性增强,导致常规药剂防效不理想;农产品残留超标对生态环境破坏严重;缺乏具有自主知识产权的创制品种,不能有效地防控粮食经济作物的重大病虫害,对国家粮食产业、蔬菜产业和经济作物产业的健康有序发展构成严重的威胁。而绿色新农药的创制成为当前农业行业中重点技术攻关的科学问题和现实课题。
目前我国烟叶产量约占世界总产量的30%,排名世界第一,烟草税收已经达到我国财政收入的1/10,是我国重要的经济作物。贵州省作为全国烤烟生产第二大省,烟草业是贵州省的支柱产业之一。当前影响烟草正常生长的病害主要是烟草花叶病毒病和黄瓜花叶病毒病,这些病害直接导致烟草产量和质量大幅下降,造成严重经济损失,威胁到贵州省烟草产业持续、稳定、健康发展及地方财政收入。因此,寻找高效防治烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒方法迫在眉睫。
烟草病毒病的防治方法常见的有农业防治、生物学方法防治、化学防治,其中化学防治是最快最简便的防治方法。目前生产上广泛应用的抗病毒药剂有病毒A、毒必克、毒胃、灭毒霜、金叶宝、植病灵2号、病毒灵、毒病灵等。其中大部分均为杂环类化合物,杂环类植物抗病毒剂化合物主要包括生物碱、吡啶衍生物、吡唑衍生物、咪唑衍生物、三唑衍生物、四唑衍生物、噻唑衍生物、噻二唑衍生物、吡唑衍生物、三嗪衍生物及喹啉肟醚等。
为了获得结构新颖、作用机制独特的高效低毒抗植物病毒剂,本发明在“1-取代吡唑环”结构基础上,吡唑环“5-位”引入“氨基”,“4-位”引入“1,3,4-唑”结构,设计合成了一系列吡唑联1,3,4-二唑硫醚和吡唑联1,3,4-二唑砜类衍生物。
发明内容
本发明的目的是:
为了研发高效低毒抗植物病毒剂,提供了一类结构新颖的4-吡唑联1,3,4-二唑硫醚或联1,3,4-二唑砜类化合物;通过在吡唑环“5-位”上引入“氨基”,增加化合物与靶标蛋白之间形成氢键的机率;通过实验证明本发明提供的化合物对烟草花叶病毒与黄瓜花叶病毒具有良好的治疗、钝化和保护活性。
本发明提供的化合物结构通式如I和II所示:
式中:
R1选自烷基、烯基、苯基、取代苯基、苄基、取代苄基、杂环基、取代杂环基;
X选自O,S。
所述烷基是指C1-C4的烷基、C1-C4的支链烷基、所述烯基是指C1-C3的烯基、所述取代苯基是指卤代苯基;
X选自O,S;
其中卤原子为F、Cl。
在通式I、II中:
R1中所指的取代苄基为甲苄基、硝基苄基、卤苄基、甲氧苄基、卤代甲基苄基;所指的杂环基为吡啶环基、噻唑环基、嘧啶基和喹唑啉基;所指的取代杂环基为卤代杂环基;
X选自O,S;
其中卤原子为F、Cl。
已合成的具体化合物如下:
本发明提供的化合物可作为在制备防治农作物植物病病毒病的农药和农药添加剂中的应用;所述农作病毒病优选为烟草花叶病毒病和黄瓜花叶病毒病。
本发明化合物I和II可以采用如下的方法进行制备:
采用1与各种肼反应闭环得到中间体2,经过肼解反应生成中间体3,与二硫化碳在适当的溶剂中反应完全后除去溶剂,加入硫酸反应得到中间体4,在碱性条件下与各种卤代化合物反应制得目标化合物I,进一步氧化得到目标化合物II;碱可以选自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、氢化钠、碳酸钾、碳酸钠、DMAP、三乙胺、吡啶、N,N-二甲基甲酰胺等;溶剂可以选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、DMF、乙腈、氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、苯、1,4-二氧六环、丙酮等。
本发明过程中,所采用的中间体2的可以采用以下方式进行制备:
采用乙氧基甲叉氰乙酸乙酯1与不同的肼溶解在适当的溶剂中,在50~200℃的条件下反应5~24 小时,得到中间体2。溶剂可以选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、DMF、乙腈、氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、苯、1,4-二氧六环、丙酮等。
本发明过程中,所采用的中间体3的可以采用以下方式进行制备:
采用2与水合肼溶解在适当的溶剂中,在50~200℃的条件下反应5~48小时,得中间体3。溶剂可以选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、DMF、乙腈、氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、苯、1,4-二氧六环、丙酮等。
本发明过程中,所采用的中间体4的可以采用以下方式进行制备:
采用3与二硫化碳在碱性条件下溶解在适当的溶剂中,在20~120oC的条件下反应2~48小时后除去溶剂,加入硫酸,在0~120oC的条件下反应1~10小时,制得中间体4。碱可以选自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、氢化钠、碳酸钾、碳酸钠、DMAP、三乙胺、吡啶、N,N-二甲基甲酰胺等;溶剂可以选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、DMF、乙腈、氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃、甲苯、苯、1,4-二氧六环、丙酮等。
有益效果:
本发明所合成的含有1-取代-5-氨基-4-吡唑联1,3,4-唑类硫醚和砜类化合物的生物活性测试结果表明,化合物对烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒在治疗、钝化和保护方面有着良好的生物活性。
附图说明
图1为化合物A8(左图)和A19(右图)在500μg/mL浓度下对烟草花叶病毒的治疗活性,在左图中是叶片背面的情况,叶片左半边是未施药时(对照)出斑的情况,叶片右半边是施药后出斑的情况,图片表明化合物对叶片有良好的治疗活性;在右图中是叶片正面出斑的情况,叶片左半边是施过药的,叶片右半边是未施药的(对照)。图2为化合物A2(左图)和A7(右图)在500 μg/mL浓度下对烟草花叶病毒的钝化活性,图片中叶片的左面是施了药的,叶片的右边是对照,表明化合物A2和A7表现出良好的钝化活性;图3为化合物A1(左图)和A2(右图)在500 μg/mL浓度下对烟草花叶病毒的保护活性,在左图中是叶片背面的情况,叶片左半边是对照出斑的情况,叶片右半边是施药后出斑的情况,图片表明化合物对叶片有良好的保护活性;在右图中是叶片正面出斑的情况,叶片左半边是施过药的,叶片右半边是未施药的(对照)。图4为化合物A1(左图)和A7(左图)在500 μg/mL浓度下对黄瓜花叶病毒的治疗活性,图片中叶片的左面是施了药的,叶片的右边是对照,表明化合物A1和A7对黄瓜花叶病毒表现出良好的钝化活性。
具体实施方式
实施例1:1-(3-氯吡啶-2-基)-4-((5-甲硫基)-1,3,4-噻二唑基)-5-氨基-1H-吡唑(A1)的制备
1)1-(3-氯吡啶-2-基)- 5-氨基-1H- 4-吡唑酰肼的制备
在带有冷凝管、温度计的250 mL三口瓶中,依次加入乙氧基甲叉乙酸乙酯(62.1 mmol)、3-氯-2-吡啶肼(59.1 mmol),乙醇(50 mL),加热至80℃,反应24 h, TLC检测反应结束,降至常温,减压蒸馏出溶剂,剩余固体未经纯化直接溶于无水乙醇(200 mL),80%水合肼溶液(100 mmol)缓慢加入反应液中,加热回流2小时,TLC检测反应结束,将体系降至常温,抽滤,固体用乙醇洗涤、干燥后得产品,白色固体,收率 55.8%。
2)5-(5-氨基-1-(3-氯吡啶基-2-基)-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-硫醇的制备
在带有冷凝管、温度计的250 mL三口瓶中,分别加入1-(3-氯吡啶-2-基)- 5-氨基-1H-4-吡唑酰肼 (13.1 mmol),氢氧化钾(13.1mol),二硫化碳(26.1mmol)和乙醇(100 mL),室温搅拌24小时,TCL检测反应结束,除去溶剂,未进一步纯化,直接加入100 mL浓H2SO4中,搅拌24小时后,TLC检测结束反应,往反应体系加入100 mL水,析出大量黄色固体,抽滤,滤饼用水洗涤,干燥后得黄色固体,收率 85.2%。
3)1-(3-氯吡啶-2-基)-4-((5-甲硫基)-1,3,4-噻二唑基)-5-氨基-1H-吡唑(A1)的制备
在25 mL 的反应瓶中,分别加入5-(5-氨基-1-(3-氯吡啶基-2-基)-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-硫醇(1.6 mmol)、碘甲烷(1.6 mmol)和50%氢氧化钾水溶液(20 mL),室温搅拌,反应24小时,TLC检测结束反应,过滤,得粗产品,经柱层析(二氯甲烷/乙酸乙酯= 20:1)纯化,的目标化合物A1,白色固体,收率 98.0%,熔点 157~159℃。1H NMR (DMSO-d6) δ: 8.58 (d, 1H, J = 4.6 Hz, pyridine H), 8.24 (d, 2H, J = 8.0 Hz,pyridine H),7.88 (s, 1H, pyrazole H), 7.63 (q, 1H, pyridine H), 6.69 (s, 2H, NH2), 2.77 (s, 3H, CH3); IR (KBr): ν3443, 3412, 3066, 2928, 1600, 1552, 1506, 1452, 1386, 1336, 709 cm-1; MS(ESI) m/z: 325 [M+H]+; Anal. Calcd (C11H9ClN6S2): C, 40.68; H, 2.79; N, 25.87. Found: C, 41.18; H, 3.19; N, 26.19。
实施例2:1-(3-氯吡啶-2-基)-4-((5-乙硫基)-1,3,4-噁二唑基)-5-氨基-1H-吡唑(A22)的制备
1)1-(3-氯吡啶-2-基)- 5-氨基-1H- 4-吡唑酰肼的制备
其中1-(3-氯吡啶-2-基)- 5-氨基-1H- 4-吡唑酰肼的制备与实施例1中完全相同。
2)5-(5-氨基-1-(3-氯吡啶基-2-基)-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噁二唑-2-硫醇的制备
在带有冷凝管、温度计的250 mL三口瓶中,分别加入1-(3-氯吡啶-2-基)- 5-氨基-1H-4-吡唑酰肼 (13.1 mmol),氢氧化钾(13.1mol),二硫化碳(26.1mmol)和乙醇(100 mL),室温搅拌24小时,TCL检测反应结束,除去溶剂,未进一步纯化,直接加入50%氢氧化钾水溶液(100 mL)中,50oC搅拌24小时后,TLC检测结束反应,抽滤,滤饼用水洗涤,干燥后得红褐色固体,收率 90.2%。
3)1-(3-氯吡啶-2-基)-4-((5-甲硫基)-1,3,4-噁二唑基)-5-氨基-1H-吡唑(A22)的制备
1-(3-氯吡啶-2-基)-4-((5-甲硫基)-1,3,4-噁二唑基)-5-氨基-1H-吡唑的制备与实施例1中1-(3-氯吡啶-2-基)-4-((5-甲硫基)-1,3,4-噻二唑基)-5-氨基-1H-吡唑的制备相同,只是将反应中5-(5-氨基-1-(3-氯吡啶基-2-基)-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-硫醇换成5-(5-氨基-1-(3-氯吡啶基-2-基)-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噁二唑-2-硫醇。淡黄色固体,收率 80.9%,熔点 112~113 oC。1H NMR (DMSO-d6): 8.58 (d, 1H, J = 3.5 Hz, pyridine H), 8.23 (d, 2H, J = 6.9 Hz, pyridine H), 7.88 (s, 1H, pyrazole H), 7.63 (m, 1H, pyridine H), 6.50 (s, 2H, NH2), 2.73 (s, 3H, CH3).
实施例3:1-(3-氯吡啶-2-基)-4-((5-乙磺酰基)-1,3,4-噻二唑基)-5-氨基-1H-吡唑(B2)的制备
在带有冷凝管、温度计的25 mL三口瓶中,依次加入1-(3-氯吡啶-2-基)-4-((5-乙硫基)-1,3,4-噻二唑基)-5-氨基-1H-吡唑(615.8μmol)、钨酸钠(307.9μmol),乙酸(3 mL)和30% H2O2 (3.7 mmol),常温反应24小时,TLC检测结束反应,调节pH值至7~8,抽滤,粗产品经柱层析(二氯甲烷:乙酸乙酯=10:1)纯化,的目标化合物B2。白色固体,收率 76.3%。1H NMR (DMSO-d6) δ: 8.60 (d, 1H, J = 3.5 Hz, pyridine H)8.27(d, 1H, J = 8.1 Hz, pyridine H), 8.12 (s, 1H, pyrazole H), 7.66 (q, 1H, J = 8.1 Hz,pyridine H), 7.00 (s, 2H, NH2), 3.71 (q, 2H, J = 7.5 Hz, CH2), 1.30 (t, 3H, J = 6.9 Hz, CH3) ; IR (KBr): ν3404, 3288, 3074, 2974, 2935, 1602, 1550, 1456, 1317, 1147, 1082, 1041, 908, 808, 705, 601; MS (ESI): m/z 371 [M+H]+。
实施例4:1-(3-氯吡啶-2-基)-4-((5-甲磺酰基)-1,3,4-噁二唑基)-5-氨基-1H-吡唑(B15)的制备
1-(3-氯吡啶-2-基)-4-((5-甲磺酰基)-1,3,4-噁二唑基)-5-氨基-1H-吡唑的制备与实施例3中1-(3-氯吡啶-2-基)-4-((5-乙磺酰基)-1,3,4-噻二唑基)-5-氨基-1H-吡唑的制备相同。红褐色固体,收率 64.5%,熔点 115~116 oC。1H NMR (DMSO-d6): 8.44 (d, 1H, J = 3.5 Hz, pyridine H), 8.01 (d, 2H, J = 6.9 Hz, pyridine H), 7.95 (s, 1H, pyrazole H), 7.36 (m, 1H, pyridine H), 6.51 (s, 2H, NH2), 3.10 (s, 3H, CH3).
利用类似的合成方法,合成了本发明的其它化合物,部分化合物的核磁共振氢谱(1H NMR)数据、物化性质与元素分析数据如表1所示:
表1 部分化合物熔点、核磁共振氢谱及元素分析结果
生物活性测试实例
实施例5:对烟草花叶病毒(TMV)的生物活性测试
1)钝化活性测试
选长势一致的心叶烟,用磷酸缓冲液将TMV稀释至6x10-3 mg/mL,将化合物与等体积的病毒汁液混合钝化30分钟,用毛笔人工摩擦接种于撒有金刚砂的适龄心叶烟左半叶(每叶片均匀涂抹病毒一次),对应剂量的溶剂与病毒汁液混合接种于撒有金刚砂的适龄心叶烟右半叶;接种后均用清水冲洗。随后在光照培养箱中保湿培养,控制温度23±1 ℃,光照10000 Lux,3~4天后观察并记录产生枯斑的数目。每药剂处理设3株,每株3~4片叶。按上述方法每药剂进行3次重复。
2)治疗活性测试
选长势一致的心叶烟,用磷酸缓冲液将TMV粗提液稀释至适宜的浓度,用毛笔人工摩擦接种于撒有金刚砂的适龄叶片上(全叶接种病毒,每叶片均匀涂抹病毒一次),接种后用清水冲洗。待叶片干后2小时,在左半叶涂施化合物溶液,右半叶涂施对应剂量的溶剂作对照。随后在光照培养箱中保湿培养,控制温度23±1℃,光照10000 Lux,3~4天后观察并记录产生枯斑的数目。每药剂处理设3株,每株3~4片叶。按上述方法每药剂进行3次重复。
3)保护活性测试
选长势一致的心叶烟.在左半叶涂施化合物溶液,右半叶涂施对应剂量的溶剂作对照.并在光照培养箱中保湿培养,控制温度23±1℃,光照10000 Lux,12小时后用磷酸缓冲液将TMV病毒粗提液稀释至适宜的浓度,用毛笔人工摩擦接种于撤有金刚砂的适龄叶片上(全叶接种病毒,每叶片人工均匀涂抹病毒一次),接种后用清水冲洗.随后在光照培养箱中保湿培养,控制温度23±1℃,光照10000 Lux,3~4天后观察并记录产生枯斑的数目.每药剂处理设3株,每株3~4片叶。按上述方法每药剂进行3次重复。
4) 抑制活性的计算公式
Y=(C-A)/C×100%
(Y 为化合物对植物病毒的抑制率,%;C为对照组枯斑个数; A为化合物处理组枯斑个数)
部分化合物对烟草花叶病毒的治疗、钝化和保护活性见表2。
注:“a” 每处理重复三次;
从表2可以看出,在500 μg/mL浓度下,化合物对烟草花叶病毒有良好的活性,其中有16个化合物(A1、A2、A7、A5、A4、A8、A11、A13、A10、A17、A20、B1、B5、B6、B10、B13)的治疗活性达到40%以上,其中化合物A1(54.2±2.0%) 和A11(52.1±5.6%)抑制率略低于宁南霉素( 57.1±2.2 % ),在硫醚化合物中,短链烷烃比长链烷烃活性高,苯环对位上的吸电子基团比给电子基团活性高,而砜类活性相对下降。
在浓度为500 μg/mL下,保护抑制率达到60%以上的有11个化合物(A1、 A5、A6、A16、A18、A19、A20、B6、B11、B13、B14),其中A19(75.2±3.9 %)与宁南霉素(73.8±3.4 %)相当。由数据分析可以发现,化合物结构中硫醚位取代基是烷烃时,短链烷烃比支链烷烃活性低;取代基是杂环时活性较其它取代基时好。在浓度为500 μg/mL下,钝化抑制率达到80%以上的有化合物B7、B13,均低于宁南霉素(92.1±3.4%)。化合物结构中硫醚位接烷烃时,短链烷烃比长链烷烃活性好;取代基是芳环时,环上取代基为吸电子基时活性提高。
实施例6:对黄瓜花叶病毒(CMV)的生物活性测试
测试方法与实施例5相同,只是将测试所用的“心叶烟”用“苋色藜”取代,“烟草花叶病毒”替换成“黄瓜花叶病毒”。部分化合物对黄瓜花叶病毒的治疗和保护活性见表3。
从表3可以看出,在浓度为500 μg/mL时,该类硫醚和砜类化合物对CMV病毒具有很好的抑制活性。在此浓度下,治疗抑制率达到50%有7个化合物(A1、A2、A8、A11、B6、B9、B13),其中化合物A8、B5、A19的治疗活性与宁南霉素相当,化合物A2 (64.7±8.5%)的治疗活性明显优于宁南霉素。经分析可以发现,结构中硫醚位上取代基为短链烷烃时比长链烷烃活性要好。
在浓度为500 μg/mL时,保护抑制率达到60%以上的有5个化合物(A1、A2、A7、A16、 A19),其中化合物A2 (67.7±2.1%)与A7 (62.2±7.9%)的保护活性与宁南霉素(64.2±5.8%)相当,A19 (75.2±3.9%)的保护活性优于宁南霉素。
机译: 改进的2-(甲基乙氧基)转化过程改进的2-(甲氧基甲基)-5-(三氟甲基)-1,3,4-噻二唑(TDA)的转化过程)-5-(三氟甲基)-1,3, 4-噻二唑(TDA)转化为2-(甲基亚磺酰基)-5-(三氟甲基)-1,3,4-噻吩2-(甲基亚磺酰基)-5-(三氟甲基)-1,3,4-噻二唑(TDA砜)二唑(TDA砜)
机译: 除草和杀真菌的1-(1,3,4-噻二唑-2-基)-3-取代。尿素-制备由2-氨基-5-取代-1,3,4-噻二唑和N,N'-羰基二咪唑
机译: 1-%5-烷基-1,3,4-噻二唑-2-YL <-1,3-二烷基脲类1-%5-烷基-1,3,4-噻二唑-2-YL <-1,3-二烷基脲