一类吲哚接枝噻唑腙类衍生物及其制备方法和对癌细胞微管蛋白聚合的抑制作用

摘要

一类吲哚接枝噻唑腙类衍生物，它具有如下通式。实验证明，本发明的新型吲哚接枝噻唑腙类衍生物对癌细胞微管蛋白的聚合具有明显的抑制作用。因此本发明的吲哚接枝噻唑腙类衍生物可以应用于制备抗癌药物。本发明公开了吲哚接枝噻唑腙类衍生物的制法

说明书

技术领域

本发明涉及一类吲哚接枝噻唑腙类衍生物及其制备方法与抑制肿瘤细胞微管蛋白聚合的功能。 

背景技术

吲哚类药物能抑制肿瘤细胞微管蛋白的解聚和聚合，即通过破坏微管在体内和体外的形态和功能来抑制癌细胞的活性，从而发挥抗癌作用。有些吲哚类药物可以促进和稳定微管蛋白的聚合形式(最近的研究表明，药物对微管解聚的抑制作用是由于它们对微管动力学的干扰，而不是微管蛋白聚合物量的改变。)；而有些吲哚类药物通过与秋水仙碱结合位点强烈的结合来抑制微管的聚合。 

近年来，含噻唑环化合物在药物研究和生物学等方面显示出越来越重要的作用，其中氨基噻唑类化合物具有较强生理活性，尤其受到研究者的重视。噻唑类化合物可与生物体内多种酶和受体等靶点结合从而表现出多种生物活性。肿瘤的发生与肿瘤细胞本身凋亡信号的抑制息息相关，因此细胞凋亡在肿瘤的化疗中起着重要的作用，很多的药物都是通过重建细胞凋亡来达到治疗肿瘤的目的。过量的ROS(intracellular reactive oxygen species)可以诱导线粒体膜电位(MMP)崩溃，使线粒体中的死亡因子释放，诱导细胞死亡；同时ROS的积累会造成脂质过氧化，蛋白质、酶的氧化失活和DNA的氧化损伤。研究表明，肿瘤细胞具有比正常细胞更高的ROS水平，对ROS的攻击更敏感，因此ROS相关的药物开发成为抗肿瘤药物研究开发的一个热点。开发它具有一定的理论意义和实际的价值，因此，我们设计合成了一系列以(E)-4-(4-甲氧基)-2-(2-((1-甲基-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)噻唑为母环的吲哚接枝噻唑腙类衍生物。 

发明内容

本发明的目的在于提供一类吲哚接枝噻唑腙类衍生物及其制备方法。 

本发明的技术方案如下： 

1.一类吲哚接枝噻唑腙类衍生物，其特征是它们有如下通式： 

式中，R₁、R₂选自氢、C1-10烷基、环烷基、C1-5烷氧基、卤素、卤素取代的C1-5烷基、硝基、氨基； 

R₃、R₄、R₅选自氢、C1-5烷基、C1-5烷氧基、卤素、卤素取代的C1-5烷基、硝基、氨基。 

2.一种制备权利要求1所述的一类吲哚接枝噻唑腙类衍生物制法，它们由下列步骤合成： 

步骤1.在通风橱中，低温条件下，烧瓶中加入有机溶剂DMF一定体积后，缓慢滴加相同体积的POCl₃，再将溶于相同体积有机溶剂的化合物1滴加到上述烧瓶中，搅拌反应一段时间后，升高温度至室温，经TLC跟踪反应，待反应完全后，反应液倒入一定体积的冰水中，用碱调节pH值到微碱性，再用有机溶剂萃取，旋干得到黄色粉末2。 

步骤2.将上面得到的化合物2和氨基硫脲混合，加入一定量的有机溶剂溶解，在室温下搅拌反应，TLC跟踪反应，反应完全后，过滤，经纯化得黄色粉 末3。 

步骤3.将上面得到的化合物3，含各种取代基的α-溴代苯乙酮溶解于适量有机溶剂中，经TLC跟踪反应，反应完全后，过滤，经纯化得到本发明的目标物吲哚类衍生物。 

3.实验结果表明，本发明的新型吲哚接枝噻唑腙类衍生物对癌细胞微管的聚合具有明显的抑制作用。因此本发明的吲哚接枝噻唑腙类衍生物可以应用于制备抗癌药物。 

具体实施方式：

实施例一：(E)-4-(4-甲氧基苯基)-2-(2-((1-甲基-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)噻唑的制备 

在通风橱中，低温条件下，100mL单口圆底烧瓶中加入10mL的DMF，将5mL POCl₃缓慢滴加至烧瓶中，再将溶于10mL DMF的1-甲基吲哚(1.32g，10.0mmoL)缓慢滴加到烧瓶中，搅拌反应约2h后，升高温度至室温，反应约2-3h，反应结束后，静置待其冷却后，将反应物加入到20mL冰水中，用Na₂CO₃或K₂CO₃调节PH值至9，用乙酸乙酯萃取，旋干得到黄色粉末。取上述得到的固体(0.61g，3.8mmoL)加入到50mL单口圆底烧瓶中，加25mL异丙醇溶解，再加入0.35g的氨基硫脲，室温下搅拌反应，TLC跟踪反应，约24h后结束反应，过滤，得到黄色固体。取上述黄色固体(0.1g，0.43mmoL)置于50mL的单口圆底烧瓶中，加25mL异丙醇溶解，再加入等物质量(77.9mg，0.43mmoL)的对甲氧基-α-溴代苯乙酮，室温下搅拌反应，TLC跟踪，约24h后反应完全，过滤得到黄色粉末状目标化合物。产率82.3％.m.p.205～207℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：3.84(s，3H)，3.74(s，3H)，6.92～7.07(m，2H)，7.16～7.35 (m，2H)，7.50～7.56(m，2H)，7.64～7.76(m，2H)，7.92(s，1H)，8.21(d，J＝5.76Hz，1H)，8.55(s，1H).MS(ESI)：363.12([M+H]⁺).Anal.calc.for C₂₀H₁₈N₄OS：C，66.28；H，5.01；O，4.41％；N，15.46％；found：C，66.26；H，5.02；O，4.42％；N，15.46％。 

实施例二：(E)-2-(2-((1-甲基-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-苯基噻唑的制备 

制备方法同实施例一，以α溴代苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率69.5％.m.p.207～208℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：3.83(s，3H)，7.21～7.33(m，4H)，7.42(t，J＝7.58Hz，2H)，7.52(d，J＝8.08Hz，1H)，7.77(s，1H)，7.87(d，J＝7.28Hz，2H)，8.23～8.27(m，2H)，11.84(s，1H).MS(ESI)：333.11([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₉H₁₆N₄S：C，68.65；H，4.85；N，16.85％；found：C，68.63；H，4.86；N，16.86％。 

实施例三：(E)-2-(2-((1-甲基-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-(4-(三氟甲基苯基)苯基)噻唑的制备 

制备方法同实施例一，以4-三氟甲基-α-溴代苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率86.3％.m.p.230～235℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：3.83(s，3H)，7.21～7.29(m，2H)，7.36(s，1H)，7.52(d，J＝ 8.08Hz，1H)，7.61(d，J＝8.56Hz，2H)，7.80(t，J＝10.26Hz，3H)，8.18～8.20(m，2H)，11.82(s，1H).MS(ESI)：401.1([M+H]⁺).Anal.calc.for C₂₀H₁₅F₃N₄S：C，59.99；H，3.78；N，13.99％；found：C，59.98；H，3.77；N，13.97％。 

实施例四：(E)-4-(4-溴苯基)-2-(2-((1-甲基-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)噻唑的制备 

制备方法同实施例一，以4-溴-α-溴代苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率87.3％.m.p.237～241℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：3.83(s，3H)，7.21～7.31(m，2H)，7.37(s，1H)，7.52(d，J＝8.08Hz，1H)，7.61(d，J＝8.56Hz，2H)，7.80(t，J＝10.26Hz，3H)，8.22～8.26(m，2H)，11.9(s，1H).MS(ESI)：411.02([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₉H₁₅BrN₄S：C，55.48；H，3.68；N，13.62％；found：C，55.47；H，3.66；N，13.64％。 

实施例五：(E)-4-(3-溴苯基)-2-(2-((1-甲基-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)苯基)噻唑的制备 

制备方法同实施例一，以3-溴-α-溴代苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率84.5％.m.p.195～198℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：3.83(s，3H)，7.22～7.31(m，2H)，7.38(t，J＝7.86Hz，1H)，7.45(s，1H)， 7.51(t，J＝7.06Hz，2H)，7.78(s，1H)，7.87(d，J＝7.88Hz，1H)，8.06(s，1H)，8.24(t，J＝8.10Hz，2H)，11.92(s，1H).MS(ESI)：411.02([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₉H₁₅BrN₄S：C，55.48；H，3.68；N，13.62％；found：C，55.46；H，3.69；N，13.64％。 

实施例六：(E)-4-(邻甲氧基苯基)-2-(2-((1-甲基-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4苯基)噻唑的制备 

制备方法同实施例一，以邻甲氧基-α-溴代苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率81.3％.m.p.218～219℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：3.84(s，3H)，3.92(s，3H)，7.05(t，J＝5.6Hz，1H)，7.15(d，J＝8.20Hz，1H)，7.23～7.38(m，4H)，7.53(d，J＝8.08Hz，1H)，7.83(s，1H)，7.92(s，1H)，8.22～8.27(m，1H)，8.34(s，1H)，12.1(s，1H).MS(ESI)：363.12([M+H]⁺).Anal.calc.for C₂₀H₁₈N₄OS：C，66.28；H，5.01；O，4.41；N，15.46％；found：C，66.29；H，5.03；O，4.43；N，15.45％。 

实施例七：(E)-2-(2-((1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-(4-甲氧基苯基)噻唑的制备 

在通风橱中，低温条件下，100mL单口圆底烧瓶中加入10mL的DMF，将5mL POCl₃缓慢滴加至烧瓶中，再将溶于10mL DMF的1-H吲哚(1.17g，10.0mmoL)缓慢滴加到烧瓶中，搅拌反应约2h后，升高温度至室温，反应约2-3h， 反应结束后，静置待其冷却后，将反应物加入到20mL冰水中，用Na₂CO₃或K₂CO₃调节PH值至9，析出的固体过滤后烘干，得到黄色粉末。取上述得到的固体(0.55g，3.8mmoL)加入到50mL单口圆底烧瓶中，加25mL异丙醇溶解，再加入0.35g的氨基硫脲，室温下搅拌反应，TLC跟踪反应，约24h后结束反应，过滤，得到黄色固体。取上述黄色固体(0.1g，0.46mmoL)置于50mL的单口圆底烧瓶中，加25mL异丙醇溶解，再加入等物质量(11mg，0.46mmoL)的对甲氧基-α-溴代苯乙酮，室温下搅拌反应，TLC跟踪，约24h后反应完全，过滤得到黄色粉末状目标化合物。产率81％.m.p.205～207℃.1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：6.92～7.09(m，2H)，7.09～7.29(m，3H)，7.44～7.76(m，3H)，7.79(d，J＝8.80Hz，1H)，7.85～7.92(m，1H)，8.07～8.24(m，1H)，8.37～8.57(m，1H)，11.66(s，1H).MS(ESI)：349.10([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₉H₁₆N₄OS：C，65.50；H，4.63；O，4.59；N，16.08％；found：C，65.47；H，4.64；O，4.58；N，16.06％。 

实施例八：(E)-2-(2-((1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-苯基噻唑的制备 

制备方法同实施例四，以α-溴代苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率84.2％.m.p.245～246℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.18～7.25(m，2H)，7.32～7.37(m，2H)，7.43～7.48(m，2H)，7.7～7.86(m，3H)，8.23(d，J＝6Hz，1H)，8.37(s，1H)，11.6(s，1H).MS(ESI)：319.09([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₈H₁₄N₄S：C，67.90；H，4.43；N，17.60％；found：C，67.89；H，4.42；N，17.58％。 

实施例九：(E)-2-(2-((1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-(邻甲氧基苯基)噻唑的制备 

制备方法同实施例四，以邻甲氧基-α-苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率85.4％.m.p.245～246℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：3.92(s，3H)，7.07(t，J＝5.6，1H)，7.17～7.29(m，3H)，7.34(s，1H)，7.40(t，J＝5.31Hz，1H)，7.49(d，J＝5.40Hz，1H)，7.84～7.91(m，2H)，8.21(d，J＝5.49Hz，1H)，8.45(s，1H)，11.71(s，1H).MS(ESI)：349.10([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₉H₁₆N₄OS：C，65.50；H，4.63；O，4.59；N，16.08％；found：C，65.48；H，4.64；O，4.60；N，16.07％。 

实施例十：(E)-2-(2-((1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-(3-溴苯基)噻唑的制备 

制备方法同实施例四，以3-溴-α-苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率88.4％.m.p.237～238℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.18～7.23(m，2H)，7.38(s，1H)，7.45(d，J＝7.40Hz，2H)，7.61(d，J＝8.52Hz，2H)，7.76～7.82(m，3H)，8.27(d，J＝7.68Hz，1H)，8.30(s，1H)，11.56(s，1H).MS(ESI)：397.00([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₈H₁₃BrN₄S：C，54.42；H，3.30；N，14.10％；found：C，54.43；H，3.33；N，14.12％。 

实施例十一：(E)-2-(2-((1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-(4-三氟甲基苯基)噻唑的制备 

制备方法同实施例四，以4-三氟甲基-α-苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率90.4％.m.p.201～202℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.11～7.37(m，3H)，7.44～7.62(m，2H)，7.62～7.81(m，3H)，7.85(s，1H)，7.94～8.02(m，1H)，8.01～8.25(m，1H)，8.34～8.47(m，1H)，11.6(s，1H).MS(ESI)：387.08([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₉H₁₃F₃N₄S：C，59.06；H，3.39；N，14.50％；found：C，59.04；H，3.38；N，14.52％。 

实施例十二：(E)-2-(2-((1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-(4-溴苯基)噻唑的制备 

制备方法同实施例四，以4-溴-α-苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率87.2％.m.p.209～210℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.17～7.24(m，2H)，7.37(s，1H)，7.45(d，J＝7.40Hz，2H)，7.61(d，J＝8.52Hz，2H)，7.79～7.83(m，3H)，8.22(d，J＝7.68Hz，1H)，8.30(s，1H)，11.60(s，1H).MS(ESI)：397.00([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₈H₁₃BrN₄S：C，54.42；H，3.30；N，14.10％；found：C，54.44；H，3.29；N，14.11％。 

实施例十三：(E)-2-(2-((1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-((1，1′-联苯)-4-基)噻唑的制备 

制备方法同实施例四，以邻甲氧基-α-苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率85.4％.m.p.245～246℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.15～7.23(m，2H)，7.38(s，1H)，7.42(d，J＝7.40Hz，2H)，7.59(d，J＝8.50Hz，2H)，7.79～7.83(m，3H)，7.80～7.92(m，4H)，7.93～7.95(m，1H)，8.35(d，J＝7.68Hz，1H)，8.38(s，1H)，11.68(s，1H).MS(ESI)：395.13([M+H]⁺).Anal.calc.for C₂₄H₁₈N₄8：C，73.07；H，4.60；N，14.20％；found：C，73.06；H，4.61；N，14.22％。 

实施例十四：(E)-2-(2-((5-甲氧基-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-(4-甲氧基苯基)噻唑的制备 

在通风橱中，低温条件下，100mL单口圆底烧瓶中加入10mL的DMF，将5mL POCl₃缓慢滴加至烧瓶中，再将溶于10mL DMF的5-甲氧基吲哚(1.47g，10.0mmoL)缓慢滴加到烧瓶中，搅拌反应约2h后，升高温度至室温，反应约2-3h，反应结束后，静置待其冷却后，将反应物加入到20mL冰水中，用Na₂CO₃或K₂CO₃调节PH值至9，析出的固体过滤后烘干，得到黄色粉末。取上述得到的固体(0.67g，3.8mmoL)加入到50mL单口圆底烧瓶中，加25mL异丙醇溶解，再加入0.35g的氨基硫脲，室温下搅拌反应，TLC跟踪反应，约24h后结束反应，过滤，得到黄色固体。取上述黄色固体(0.1g，0.41mmoL)置于50mL的单口圆底烧瓶中，加25mL异丙醇溶解，再加入等物质量(9.39mg，0.41mmoL)的对甲氧基-α-溴代苯乙酮，室温下搅拌反应，TLC跟踪，约24h后反应完全， 过滤得到黄色粉末状目标化合物。产率81％.m.p.205～207℃.¹H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ：3.80(s，3H)，3.87(s，3H)，6.88～6.85(m，1H)，7.02～6.96(m，2H)，7.15(s，1H)，7.36(d，J＝6.57Hz，1H)，7.90～7.66(m，4H)，8.34(s，1H)，11.47(s，1H).MS(ESI)：379.12([M+H]⁺).Anal.calc.for C₂₀H₁₈N₄O₂S：C，63.47；H，4.79；O，8.46；N，14.80％；found：C，63.48；H，4.78；O，8.45；N，14.79％。 

实施例十五：(E)-2-(2-((5-甲氧基-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-苯基噻唑的制备 

制备方法同实施例七，以α-溴代苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率85.5％.m.p.209～210℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：3.88(s，3H)，6.87(dd，J₁＝9Hz，J₂＝9Hz，1H)，7.33～7.38(m，4H)，7.44～7.48(m，2H)，7.77(s，1H)，7.81～7.84(m，3H)，8.40(s，1H)，11.50(s，1H).MS(ESI)：349.10([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₉H₁₀N₄OS：C，65.50；H，4.63；O，4.59；N，16.08％；found：C，65.48；H，4.63；O，4.58；N，16.09％。 

实施例十六：(E)-4-(4-溴苯基)-2-(2-((5-甲氧基-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)噻唑的制备 

制备方法同实施例七，以4-溴-α-溴代苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率79.8％.m.p.175～176℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：3.87(s，3H)，6.87(dd，J₁＝9Hz，J₂＝9Hz，1H)，7.34～7.37(m，2H)，7.61(d，J＝6， 3H)，7.73(s，1H)，7.78～7.82(m，3H)，8.27(s，1H)，11.40(s，1H).MS(ESI)：427.01([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₉H₁₅BrN₄OS：C，53.40；H，3.54；O，3.74；N，13.11％；found：C，53.41；H，3.53；O，3.74；N，13.12％。 

实施例十七：(E)-2-(2-((5-甲氧基-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-(4-三氟甲基苯基)噻唑的制备 

制备方法同实施例七，以4-三氟甲基-α-溴代苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率88.8％.m.p.165～166℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：3.87(s，3H)，6.86(dd，J₁＝8.72Hz，J₂＝8.76Hz，1H)，7.35(d，J＝8.76Hz，1H)，7.53(s，1H)，7.74～7.79(m，5H)，8.07(d，J＝8.12Hz，2H)，8.29(s，1H)，11.43(s，1H).MS(ESI)：417.09([M+H]⁺).Anal.calc.for C₂₀H₁₅F₃N₄OS：C，57.69；H，3.63；O，3.84；N，13.45％；found：C，57.68；H，3.64；O，3.84；N，13.43％。 

实施例十八：(E)-4-(3-溴苯基)-2-(2-((5-甲氧基-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)噻唑的制备 

制备方法同实施例七，以3-溴-α-溴代苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率86.2％.m.p.229～230℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：3.88(s，3H)，6.86(dd，J₁＝6.57Hz，J₂＝6.60Hz，1H)，7.35～7.41(m，3H)，7.45(s，1H)，7.51(d，J＝7.88Hz，1H)，7.76(s，1H)，7.79(s，1H)，7.87(d，J＝7.84Hz，1H)，8.06(s，1H)，8.29(s，1H)，11.4(s，1H).MS(ESI)：427.01([M+H]⁺).Anal.calc.for  C₁₉H₁₅BrN₄OS：C，53.40；H，3.54；O，3.74；N，13.11％；found：C，53.41；H，3.53；O，3.74；N，13.12％。 

实施例十九：(E)-2-(2-((5-甲氧基-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-(邻甲氧基苯基)噻唑的制备 

制备方法同实施例七，以邻甲氧基-α-溴代苯乙酮代替α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率89.8％.m.p.175～176℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：3.77(s，3H)，3.91(s，3H)，6.86～6.94(m，2H)，7.02～7.22(m，2H)，7.33～7.56(m，4H)，7.75(s，1H)，7.93(s，1H)，8.47～8.61(s，1H)，11.70(s，1H).MS(ESI)：479.12([M+H]⁺).Anal.calc.for C₂₀H₁₈N₄O₂S：C，63.47；H，4.79；O，8.46；N，14.80％；found：C，63.46；H，4.78；O，8.47；N，14.80％。 

实施例二十：(E)-2-(2-((5-溴-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-(4-甲氧基苯基)噻唑的制备 

在通风橱中，低温条件下，100mL单口圆底烧瓶中加入10mL的DMF，将5mLPOCl₃缓慢滴加至烧瓶中，再将溶于10mLDMF的5-溴吲哚(1.96g，10.0mmoL)缓慢滴加到烧瓶中，搅拌反应约2h后，升高温度至室温，反应约2-3h，反应结束后，静置待其冷却后，将反应物加入到20mL冰水中，用Na₂CO₃或K₂CO₃调节PH值至9，析出的固体过滤后烘干，得到黄色粉末。取上述得到的 固体(0.85g，3.8mmoL)加入到50mL单口圆底烧瓶中，加25mL异丙醇溶解，再加入0.35g的氨基硫脲，室温下搅拌反应，TLC跟踪反应，约24h后结束反应，过滤，得到黄色固体。取上述黄色固体(0.1g，0.34mmoL)置于50mL的单口圆底烧瓶中，加25mL异丙醇溶解，再加入等物质量(7.79mg，0.34mmoL)的对甲氧基-α-溴代苯乙酮，室温下搅拌反应，TLC跟踪，约24h后反应完全，过滤得到黄色粉末状目标化合物。产率81％.m.p.205～207℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：3.80(s，3H)，7.00(d，J＝8.76Hz，2H)，7.19(s，1H)，7.34～7.37(m，1H)，7.44～7.46(m，2H)，7.79(d，J＝8.84Hz，2H)，7.88(s，1H)，8.30(s，1H)，8.40(s，1H)，11.77(s，1H).MS(ESI)：427.01([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₉H₁₅BrN₄OS：C，53.40；H，3.54；O，3.74；N，13.11％；found：C，53.42；H，3.54；O，3.74；N，13.12％。 

实施例二十一：(E)-2-(2-((5-溴-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4苯基噻唑的制备 

制备方法同实施例十，以α-溴代苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率82.9％.m.p.92～93℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.33～7.36(m，3H)，7.41～7.47(m，4H)，7.78～7.90(m，3H)，8.30～8.41(m，2H)，11.80(s，1H).MS(ESI)：397.00([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₈H₁₃BrN₄S：C，53.42；H，3.30；N，14.10％；found：C，53.41；H，3.33；N，14.11％。 

实施例二十二：(E)-2-(2-((5-溴-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-(3-溴苯基)噻唑的制备 

制备方法同实施例十，以3-溴-α-溴代苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率86.1％.m.p.94～95℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.33～7.45(m，4H)，7.49(s，2H)，7.86(s，2H)，8.06(s，1H)，8.25(s，1H)，8.40(s，1H)，11.73(s，1H).MS(ESI)：474.91([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₈H₁₂Br₂N₄S：C，45.40；H，2.54；N，11.77％；found：C，45.41；H，2.53；N，11.76％。 

实施例二十三：(E)-2-(2-((5-溴-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-(邻甲氧基苯基)噻唑的制备 

制备方法同实施例十，以邻甲氧基-α-溴代苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率82.9％.m.p.92～93℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：3.91(s，3H)，7.06～7.19(m，1H)，7.35～7.52(m，5H)，7.74～7.87(m，2H)，7.96～8.10(m，1H)，8.30～8.50(m，2H)，11.6(s，1H).MS(ESI)：427.01([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₉H₁₅BrN₄OS：C，53.40；H，3.54；O，3.74；N，13.11％；found：C，53.41；H，3.53；O，3.74；N，13.12％。 

实施例二十四：(E)-2-(2-((5-溴-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-(4-三氟甲基苯基)噻唑的制备 

制备方法同实施例十，以4-溴-α-溴代苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率79.4％.m.p.175～176℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.17～7.32(m，1H)，7.32～7.60(m，3H)，7.70～7.80(m，2H)，7.85～8.18(m，3H)，8.21～8.38(m，1H)，8.46～8.67(m，1H)，11.83(s，1H).MS(ESI)：464.99([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₉H₁₂BrF₃N₄OS：C，49.05；H，2.60；N，12.04％；found：C，49.04；H，2.62；N，12.03％。 

实施例二十五：(E)-2-(2-((5-溴-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)-4-(4-溴苯基)噻唑的制备 

制备方法同实施例十，以4-溴-α-溴代苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率83.4％.m.p.186～187℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.33～7.45(m，3H)，7.54～7.73(m，3H)，7.75～7.86(m，3H)，8.25(s，1H)，8.41(s，1H)，11.7(s，1H).MS(ESI)：474.91([M+H]⁺).Anal.calc.for C₁₈H₁₂Br₂N₄S：C，45.40；H，2.54；N，11.77％；found：C，45.42；H，2.53；N，11.76％。 

实施例二十六：(E)-4((1，1′-联苯)-4-基)-2-(2-((5-溴-1-H-吲哚-3-基)亚甲基)联氨)噻唑的制备 

制备方法同实施例十，以4-苯基-α-溴代苯乙酮代替4-甲氧基-α-溴代苯乙酮，得到黄色粉末状目标化合物。产率85.5％.m.p.228～229℃.¹H NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：7.43～7.36(m，3H)，7.73～7.57(m，3H)，7.86～7.75(m，3H)，8.17(s，1H)，8.25(s，1H)，8.28～8.38(m，4H)，8.41(s，1H)，11.70(s，1H).MS(ESI)：473.04([M+H]⁺).Anal.calc.for C₂₄H₁₇BrN₄S：C，60.89；H，3.62；N，11.84％；found：C，60.88；H，3.64；N，11.84％。 

实施例二十七：吲哚接枝噻唑腙类衍生物体外抗肿瘤活性研究 

采用MTT[3-(4，5)-双甲基-2-噻唑-(2，5)-苯基溴化四氮唑蓝]法来测定吲哚接枝噻唑腙类衍生物对人乳腺癌细胞株(MCF-7)和人体肺癌细胞株(A549)的半数抑制浓度(IC_so)。 

(1)培养液(每升)的配制：①悬浮细胞：RPMI-1640培养粉一袋(10.4g)，新生牛血清100ml，青霉素溶液(20万U/ml)0.5ml，链霉素溶液(20万U/ml)0.5ml，加三蒸水溶解后，用5.6％的NaHCO₃溶液调PH值至7.2-7.4，最后定容至1000ml。过滤灭菌。②贴壁细胞：同上，再加入NaHCO₃2.00g，HEPES2.38g。 

(2)D-Hanks缓冲液(每升)的配制：NaCl8.00g，KCl0.40g，Na₂HPO₄·12H₂O0.06g，KH₂PO₄0.06g，NaHCO₃0.35g。高压灭菌。 

(3)胰蛋白酶液的配制：利用D-Hanks缓冲液配成浓度为0.5％胰蛋白酶液。过滤除菌。 

(4)实验药液的配制：将测试样品用少量的三蒸水溶解配成储备液，一般按实验最高浓度的10倍配制储备液。根据化合物溶解性不同，可用三蒸水直接溶解，或用少量DMSO助溶，再加三蒸水溶解。DMSO在培养液中的浓度不宜过大，加药后的每孔细胞悬液中DMSO的终浓度一般不超过0.05％-0.1％。储备 液保存于-20℃冰箱中备用。 

(5)人乳腺癌细胞MCF-7的培养：为贴壁生长细胞，常规培养于RPMI-1640培养液内(含10％小牛血清、100U/ml链霉素)，置37℃、5％CO₂培养箱中培养，每隔3-4天传代一次。传代时先弃去原培养液，再用D-Hanks缓冲液洗涤；然后用0.5％胰蛋白酶消化30秒左右，加入少量新鲜培养液终止消化；吹打，使贴壁细胞从培养瓶壁上脱落下来；移取适量至新鲜培养瓶中，再补充新鲜培养液至原体积(培养液体积约为培养瓶容量的1/10)。 

(6)人肺癌细胞A549的培养：为贴壁生长细胞，常规培养于RPMI-1640培养液内(含10％小牛血清、100U/ml链霉素)，置37℃、5％CO₂培养箱中培养，每隔3-4天传代一次。传代时先弃去原培养液，再用D-Hanks缓冲液洗涤；然后用0.5％胰蛋白酶消化30秒左右，加入少量新鲜培养液终止消化；吹打，使贴壁细胞从培养瓶壁上脱落下来；移取适量至新鲜培养瓶中，再补充新鲜培养液至原体积(培养液体积约为培养瓶容量的1/10)。 

(7)细胞孵育：取对数生长期的肿瘤细胞，调细胞悬液浓度为1-1.5×10⁵个ml^-1。在96孔培养板中每孔加细胞悬液100μl，置37℃，5％CO₂培养箱中培养24h。培养24h后，分别按设计加入药液。 

(8)加药：将测试药液按照最终浓度的浓度梯度分别加入到各个孔中，每个浓度设6个平行孔。实验分为药物试验组(分别加入不同浓度的测试药)、对照组(只加培养液和细胞，不加测试药)和空白组(只加培养液，不加细胞和测试药)。将加药后的96孔板置于37℃，5％CO₂培养箱中培养48h。阳性对照药物的活性按照测试样品的方法测定。 

(9)存活细胞的测定：在培养了48h后的96孔板中，每孔加MTT40μl(用D-Hanks缓冲液配成4mg/ml)。在37℃放置4h后，移去上清液。每孔加150μl DMSO，振荡5min，使formazan结晶溶解。最后，利用自动酶标仪在570nm波长处检测各孔的光密度(OD值)。 

抑制率的计算：细胞生长的抑制率按照下列公式计算： 

生长抑制率＝(1-存活率)×100％＝[1-(OD_实验-OD_空白)/(OD_对照-OD_空白)]×100％(OD_实验表示测试药物组的平均光密度，OD_对照表示对照组的平均光密度，OD_空白表示对照组的平均光密度)。 

半数抑制浓度(IC₅₀)定义为当50％的肿瘤细胞存活时的药物浓度。根据测定的光密度(OD值)，制作细胞生长抑制率的标准曲线，在标准曲线上求得其对应的药物浓度。 

测得的IC₅₀见表1所示。 

表格1本发明所列吲哚接枝噻唑腙类衍生物对肿瘤细胞的抑制IC₅₀值