一种牡蛎种间核质互换新品系的制种方法

摘要

本发明公开了一种牡蛎种间核质互换杂交新品系的制种方法。本发明通过牡蛎细胞核杂交系制备、同型核系优先选配、核质互换系筛选、核质互换系自繁等技术手段，开发出新的牡蛎种质资源。本发明利用牡蛎细胞质母系遗传特点，克服了长期以来牡蛎无法利用细胞核移植技术进行种质改良的缺陷，创建了一套高效的核质互换新品系的制种方法。本发明培育的新品系，具有高产、优质、稳定遗传等优点，可以提高产量30%以上（相对双亲）。本发明具有实用性强，易于推广等优点。

说明书

技术领域：

本发明属于现代海洋农业中贝类遗传育种技术领域，具体涉及一种牡蛎种间核质互换新 品系的制种方法。

背景技术：

种间杂交是动、植物基本育种手段之一，特点是它可以显著的扩大动植物的基因库，促 进种间交流，引入异种有利基因，创造出新的变异类型，甚至会合成新的物种（楼允东，1999）。

目前，我国的牡蛎种间杂交技术日益成熟，学者们培育出大量的可存活牡蛎种间杂种（张 跃环等，2014）。其中，包括香港牡蛎×长牡蛎（Zhang等，2012）、香港牡蛎×葡萄牙牡蛎 （Zhang等，2014）、香港牡蛎×近江牡蛎（Huo等，2013）、长牡蛎×近江牡蛎（张跃环等， 2012）、熊本牡蛎×近江牡蛎（Xu等，2009）等种间杂交组合。

发明内容：

本发明的目的是提供一种牡蛎种间核质互换新品系的制种方法，利用该方法能够培育出 具有高产、优质、稳定遗传等优点的新品系。

经过我们研究发现，所有的巨蛎属牡蛎种间杂种均为细胞质母系遗传，而细胞核两性融 合的特点，且处于杂合状态的细胞核具有遗传分离现象。作为牡蛎，无法采用鱼类细胞核移 植技术进行核质互换品系制备，获得稳定遗传的核质互换种质资源。为了解决以上问题，本 发明通过细胞核杂交系制备、同型核系优先选配、核质互换系筛选、核质互换系自繁等技术 手段开发出一套高效的核质互换新品系的制种方法，为牡蛎的种质资源拓宽及良种培育奠定 了良好理论与实践基础。

本发明的牡蛎种间核质互换新品系的制种方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、细胞核杂交系制备：利用巨蛎属两个不同物种牡蛎进行杂交，获得细胞质稳定遗传、 细胞核处于双亲融合状态的杂交系；

b、同型核系优先选配：以a步骤中杂交系为母本，与杂交系母本不同的亲本种作为父本 进行测交；

c、核质互换系筛选：经过检测，发现b步骤获得的测交子代中，包括核质互换系，核质 恢复系和细胞核杂交系，筛选出核质互换系。绝大部分为核质互换系，还有少部分核质恢复 系及其细胞核杂交系；

d、核质互换系自繁：利用c步骤筛选出的核质互换系作为亲本自繁，即可获得核质互换 新品系。

所述的巨蛎属两个不同物种牡蛎可以为香港牡蛎、近江牡蛎、长牡蛎、葡萄牙牡蛎、熊 本牡蛎等任意两个物种组合。

本发明通过牡蛎细胞核杂交系制备、同型核系优先选配、核质互换系筛选、核质互换系 自繁等技术手段，开发出新的牡蛎种质资源。本发明利用牡蛎细胞质母系遗传特性，克服了 长期以来牡蛎无法利用细胞核移植技术进行种质改良的缺陷，创建了一套高效的核质互换新 品系的制种方法。本发明培育的新品系，具有高产、优质、稳定遗传等优点，可以提高产量 30%以上（相对双亲）。本发明具有实用性强，易于推广等优点。

附图说明：

图1为本发明技术路线图。其中，小圈表示细胞核，大圈表示细胞质。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1

如图1所示，本实施例的牡蛎种间核质互换新品系的制种方法，包括以下步骤：

a、细胞核杂交系制备：于2010年7月，在大连庄河海洋贝类苗种场以雌性香港牡蛎个 体与雄性长牡蛎个体进行种间杂交，获得杂种HG。其中，杂种HG细胞质均来源于香港牡蛎， 而细胞核来源于双亲。

b、同型核系优先选配：经过一周年的养成，于2011年7月，在大连庄河海洋贝类苗种 场以发现杂种HG中有10-20%雌性完全可育个体，利用雌性杂种HG与其雄性长牡蛎G进行 测交，获得了大量测交子代。

c、核质互换系筛选：参照Wang&Guo（2008）的分子方法检测，发现b步骤获得的子 代中，70%为核质互换系，还有20%核质恢复系及10%细胞核杂交系。为此，筛选出核质互 换系。

d、核质互换系自繁：于2012年7月，在大连庄河海洋贝类苗种场利用c步骤筛选出的 核质互换系作为亲本自繁，获得300万核质互换新品系。经过分子手段检测，其核质互换系 100%稳定遗传。经过一周年养成，发现其产量相对长牡蛎提高了36%，相对于香港牡蛎提高 了75%。

实施例2

如图1所示，本实施例的牡蛎种间核质互换新品系的制种方法，包括以下步骤：

a、细胞核杂交系制备：于2010年7月，在大连庄河海洋贝类苗种场以雌性长牡蛎个体 与雄性近江牡蛎个体进行种间杂交，获得杂种GA。其中，杂种GA细胞质均来源于长牡蛎， 而细胞核来源于双亲。

b、同型核系优先选配：经过一周年的养成，于2011年7月，在大连庄河海洋贝类苗种 场以发现杂种GA雌性完全可育，利用雌性杂种GA与其雄性长牡蛎G进行测交，获得了大 量测交子代。

c、核质互换系筛选：参照Wang&Guo（2008）的分子方法检测，发现b步骤获得的测 交子代中，60%为核质互换系，还有25%核质恢复系及15%细胞核杂交系。为此，筛选出核 质互换系。

d、核质互换系自繁：于2012年7月，在大连庄河海洋贝类苗种场利用c步骤筛选出的 核质互换系作为亲本自繁，获得100万核质互换新品系子代。经过分子手段检测，其核质互 换系100%稳定遗传。经过一周年养成，发现其产量相对长牡蛎提高了30%，相对于近江牡 蛎提高了60%。