手参药材的检测方法

摘要

本发明涉及一种手参药材的检测方法，通过薄层色谱鉴别、多糖含量检测、特征图谱峰及天麻素的含量检测等方法中的一个或多个对手参药材进行检测，薄层鉴别方法专属性强，灵敏度高；对多糖和天麻素进行含量检测可进一步衡量手参药材的内在品质，本发明还通过实验选定了更具有针对性的特征图谱及其检测方法，能更准确的检测手参。

说明书

技术领域

本发明涉及一种药材的检测方法，特别涉及一种手参药材的检测方法，属于医药技术 领域。

背景技术

手参，藏名“旺拉”，为兰科手参属植物手参Gymnadenia conopsea(L.)R.Br.的块根， 具有很好的填精补髓、增强体质、生津止渴、安神增智等作用，为藏、蒙药补肾处方中常 用药材。

目前，对于手参的检测方法研究较少，基础薄弱。文献《HPLC测定藏药手掌参旺拉中 4种有效成分的含量》（中国中药杂志，2009年14期，简称“文献1”）介绍了一种同时测 定4种益智类成分dactylorhin B,loroglossin,dactylorhin A,militarine的方法， 采用C18反相色谱柱,以甲醇-水梯度洗脱(0min15%→10min20%→20min45%→35min70%), 流速0.7ml·min-1,在222nm波长处检测4种有效成分的的含量。线性范围为dactylorhin  B0.2-4.0μg,l—oroglossin0.01-5.0μg,dactylorhin A0.08-4.5μg,militarine 0.08-4.5μg。文献《HPLC测定青藏高原不同地区藏药手掌参中天麻素》（中成药，2011年 5期，简称“文献2”）介绍了一种手参中天麻素的测定方法，采用Hypersil ODS-2(4.6 mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水(含0.04%的磷酸)=8∶92,体积流量1mL/min, 检测波长222nm,柱温30℃。结果天麻素进样量在1.400～8.400μg范围内与峰面积呈良 好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为99.14%,RSD为0.69%(n=9)。

上述对于手参药材的检测方法不尽完善。对于文献1的方法，4种成分的标准品难以获 取，且操作复杂繁琐，实验结果不稳定，重复性较差；对于文献2的方法，单靠检测一种 成分含量的方法，对于成分复杂的中药材的检测，代表性较差。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明提供了一种手参药材的检测方法。

本发明的技术方案如下：

一种手参药材的检测方法，包括下述方法中的一种或多种：

A、手参药材的薄层色谱鉴别法：

取手参药材细粉0.2-1g，加水饱和正丁醇10-30ml，超声处理20-40min，滤过，滤液 蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D101大孔树脂柱，先以20ml水洗，弃去滤液，再以60%-80% 乙醇25ml洗脱，收集滤液，蒸干，残渣加70%-80%甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取 手参对照药材，同法制备对照药材溶液；分别吸取供试品溶液、对照药材溶液各10μl， 点于硅胶G薄层版上，以体积比为8.5-9：0.8-1.2：0.2-0.3的乙酸乙酯-甲醇-水混合液 为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；供试品 色谱图中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

B、总多糖的含量测定法：

1）对照溶液的制备：取无水葡萄糖对照品，加水配制成0.1mg/ml的溶液；

2）标准曲线的制备：精密量取上述对照溶液0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.8ml、1ml， 分别置于10ml的具塞试管中，各加水至2.0ml，摇匀，在冰浴中缓慢滴加重量体积比0.2% 蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后至水浴保温10分钟，取出，立即用冰浴冷却10分钟， 分别在582nm处测定吸光度，并绘制吸光度—浓度标准曲线；

3）供试品溶液制备和测定法：取手参药材细粉0.5-5g，精密称定，置圆底烧瓶中，加 乙醇100ml回流提取1小时，水浴保温2小时后，过滤，弃去滤液，将残渣及滤纸置于烧 瓶中，加蒸馏水100ml，加热回流提取2小时，趁热滤过，残渣及烧瓶用水洗涤3次，每 次20ml，合并滤液与洗液，放冷，转移至250ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1ml 置于10ml的具塞干燥试管中，加水至2.0ml，摇匀，在冰浴中缓慢滴加重量体积比0.2% 蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后至水浴保温10分钟，取出，立即用冰浴冷却10分钟， 于582nm处测定吸光度，并根据标准曲线计算手参中多糖的含量；

C、特征图谱峰和天麻素的含量检测法：

1）色谱条件与系统适应性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长222nm，柱 温40℃，理论板数按天麻素峰计算应不低于2000，以乙腈为流动相A，以每100ml加0.1ml 磷酸的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，采用流动相A、流动相B同时进行梯度洗脱， 0min→10min→45min→70min→90min，按照上述时间段，流动相A：3%→3%→17%→17%→25%； 流动相B：97%→97%→83%→83%→75%；

2）对照品溶液的制备：取天麻素对照品，加甲醇溶解并稀释，制成每1ml甲醇含有0.1mg 天麻素的对照品溶液；

3）供试品溶液的制备：取手参药材细粉1-5g，精密称定，精密加入水饱和正丁醇溶液 25ml，称定重量，超声提取1h，放冷，再称定重量，用水饱和正丁醇补足减失的重量，摇 匀，滤过，滤液蒸干后加甲醇5ml溶解，即得；

4）测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即 得；

所得供试品特征图谱中呈现5个特征峰，其中1个峰与天麻素峰保留时间相对应，为S 峰，计算其它4个特征峰相对保留时间与S峰的比值，4个比值为：1.83、5.14、5.65、 6.12，差值在±10%以内，同时根据峰面积计算天麻素含量。

本发明优选的，手参药材的薄层色谱鉴别法为：

取手参药材细粉0.5g，加水饱和正丁醇10ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残 渣加水2ml使溶解，通过内径为1.5cm，柱高为12cm的D101大孔树脂柱，先以20ml水洗， 弃去滤液，再以70%乙醇25ml洗脱，收集滤液，蒸干，残渣加70%甲醇1ml溶解，作为供 试品溶液；另取手参对照药材，同法制备对照药材溶液；分别吸取供试品溶液、对照药材 溶液各10μl，点于硅胶G薄层版上，以体积比为9：1：0.2的乙酸乙酯-甲醇-水混合液 为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；供试品 色谱图中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

本发明优选的，总多糖的含量测定法步骤3）供试品溶液制备和测定法中，手参药材细 粉的取样量为2g。

本发明优选的，特征图谱峰和天麻素的含量检测法步骤3）供试品溶液的制备中，手参 药材细粉的取样量为2g。

本发明重量份和体积份的关系为g/ml或kg/L。

本发明的有益效果

本发明提供了一种手参药材的检测方法，通过手参药材的鉴别，和/或手参总多糖含量 测定，和/或手参的特征图谱的检测，既能测定天麻素的含量，兼能利用5个特征图谱峰指 纹鉴别手参，能针对性的对手参进行检测。薄层鉴别方法专属性强，灵敏度高；对多糖和 天麻素进行含量检测可进一步衡量手参药材的内在品质，本发明还通过实验选定了更具有 针对性的特征图谱及其检测方法，能更明确的检测手参。结果表明方法简便可行，具有较 好的准确性和精密度，可有效地保证质量。

附图说明

图1为参照物天麻素的色谱图；

图2为手参药材的色谱图，其中峰1为S峰，峰1-5为特征峰；

其中，横坐标是时间，单位：分钟（Minutes）；纵坐标是电压，单位：伏特（Volts）。

具体实施方法

下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例1、薄层色谱鉴别法

取手参对照药材（青海金诃藏药药业股份有限公司提供，批号为111021）粉末0.5g、 手参药材样品（青海金诃藏药药业股份有限公司提供，批号为120801）粉末0.5g、复方手 参丸（青海金诃藏药药业股份有限公司提供，批号为20111215）粉末3g，平行操作如下： 加水饱和正丁醇10ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D101 大孔树脂柱（内径1.5cm，柱高12cm），20ml水洗，弃去滤液，以70%乙醇25ml洗脱，收 集滤液，蒸干，残渣加70%甲醇1ml溶解，分别制得对照药材溶液、供试品溶液1和供试 品溶液2；分别吸取上述三种溶液各10μl，点于硅胶G薄层板上，以体积比为9：1：0.2 的乙酸乙酯-甲醇-水混合液为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃ 加热至斑点清晰。

手参及复方手参丸的图谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实验例2、总多糖的测定方法

1.仪器、试药和供试样品

仪器：电子天平：岛津AUW220D型；岛津UV-2450型紫外分光光度仪。

对照品：无水葡萄糖对照品。（中国药品生物制品鉴定所；批号：110833-200503）

样品：手参药材（青海金诃藏药药业股份有限公司提供），批号分别为：120801、120802、 120803。

2.总多糖含量测定

对照溶液的制备：取无水葡萄糖对照品10mg，置100ml的容量瓶中，加水溶解并稀释 至刻度，摇匀，即得。

标准曲线的制备：精密量取上述对照溶液0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.8ml、1ml， 分别置于10ml的具塞试管中，各加水至2.0ml，摇匀，在冰浴中缓慢滴加重量体积比0.2% 蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后至水浴保温10分钟，取出，立即用冰浴冷却10分钟， 分别在582nm处测定吸光度，并绘制吸光度—浓度标准曲线；

供试品溶液制备和测定法：取手参细粉0.2g，精密称定，置圆底烧瓶中，加乙醇100ml 回流提取1小时，水浴保温2小时后，过滤，弃去滤液，将残渣及滤纸置于烧瓶中，加蒸 馏水100ml，加热回流提取2小时，趁热滤过，残渣及烧瓶用水洗涤3次，每次20ml，合 并滤液与洗液，放冷，转移至250ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1ml置于10ml 的具塞干燥试管中，加水至2.0ml，摇匀，在冰浴中缓慢滴加重量体积比0.2%蒽酮-硫酸溶 液至刻度，混匀，放冷后至水浴保温10分钟，取出，立即用冰浴冷却10分钟，于582nm 处测定吸光度，并根据标准曲线计算手参中多糖的含量。

3.重现性试验

取120801批号手参药材样品6份，按总多糖含量测定项下方法测定，计算总多糖含量 及其相对标准偏差。见表1，结果表明该方法重复性良好。

表1总多糖含量测定重现性试验结果

4.回收率试验

精密称取已知总多糖含量的同一批手参药材样品6份（批号：120801），分别精密加入 无水葡萄糖对照品，按总多糖含量测定项下方法测定，计算回收率及其相对标准偏差。结 果表明：该测定方法测定结果准确。结果见表2。

表2回收率实验结果

5.三批药材总多糖含量测定

取藏药材手参三批，按总多糖含量测定项下方法测定，计算手参中总多糖含量。结果 见表3。

表3总多糖含量测定结果

实验例3、手参特征峰确定及天麻素含量测定方法

1.仪器、试药和供试样品

仪器：高效液相色谱仪：安捷伦1260型；电子天平：岛津AUW220D型。

对照品：天麻素对照品（中国药品生物制品鉴定所，批号：110807-200205。）

样品：手参药材（青海金诃藏药药业股份有限公司提供），批号分别为：120801、120802、 120803、1200804、120805、120806。

2.液相色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长222nm，柱温40℃，理论板数按天麻素 峰计算应不低于2000，以乙腈为流动相A，以每100ml加0.1ml磷酸的0.05mol/L磷酸二 氢钾溶液为流动相B，采用流动相A、流动相B同时进行梯度洗脱，

3.参照物溶液的制备

取天麻素对照品，加甲醇制成每1ml含天麻素0.1mg的溶液，即得。

4.供试品溶液的制备

取手参药材样品粉末2.0g，精密称定，精密加入水饱和正丁醇溶液25ml，称定重量， 超声提取1h，放冷，再称定重量，用水饱和正丁醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液蒸 干后加甲醇5ml溶解，即得。

5.手参药材标准特征峰图谱的选定

取藏药手参药材6批，分别制备成供试品溶液，在上述液相色谱条件下，分别精密吸 取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1和图2。依据 6批样品的图谱，选定手参药材的特征指纹图谱峰：色谱图中应呈现5个特征峰，其中1 个峰应与参照物天麻素峰的保留时间相一致，记为S峰，并计算其余4个特征峰相对保留 时间与S峰的比值。

结果表明，选定的5个共有特征峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于5%，符 合指纹图谱分析要求。根据标准指纹图谱，5个特征峰相对保留时间与S峰的比值为：1.00 （峰1）、1.83（峰2）、5.14（峰3）、5.65（峰4）、6.12（峰5），结果见表4和图2。

表4共有特征峰相对保留时间表

6.手参药材中天麻素的含量

根据峰面积，按外标法计算，上述6批手参药材中天麻素的平均含量为0.321%。

以下实施例均能实现上述实验例的效果，其中

手参对照药材：青海金诃藏药药业股份有限公司提供，批号为111021。

手参药材，青海金诃藏药药业股份有限公司提供，批号为120801。

实施例1

A、薄层色谱鉴别

取手参对照药材粉末0.5g、手参样品粉末0.5g，平行操作如下：加水饱和正丁醇10ml， 超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D101大孔树脂柱（内径 1.5cm，柱高12cm），20ml水洗，弃去滤液，以70%乙醇25ml洗脱，收集滤液，蒸干，残 渣加70%甲醇1ml溶解，分别制得对照药材溶液、供试品溶液；分别吸取上述2种溶液各 10μl，点于硅胶G薄层版上，以体积比为9：1：0.2的乙酸乙酯-甲醇-水混合液为展开剂 展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。供试品色谱图 中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

B、总多糖的含量测定

1）仪器、试药和供试样品

仪器：电子天平：岛津AUW220D型；岛津UV‐2450型紫外分光光度仪。

对照品：无水葡萄糖对照品。（中国药品生物制品鉴定所；批号：110833-200503）

2）对照溶液的制备：取无水葡萄糖对照品10mg，置100ml的容量瓶中，加水溶解并 稀释至刻度，摇匀，即得。

3）标准曲线的制备：精密量取上述对照溶液0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.8ml、1ml， 分别置于10ml的具塞试管中，各加水至2.0ml，摇匀，在冰浴中缓慢滴加重量体积比0.2% 蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后至水浴保温10分钟，取出，立即用冰浴冷却10分钟， 分别在582nm处测定吸光度，并绘制吸光度—浓度标准曲线；

4）测定法：取手参药材样品细粉2g，精密称定，置圆底烧瓶中，加乙醇100ml回流提 取1小时，水浴保温2小时后，过滤，弃去滤液，将残渣及滤纸置于烧瓶中，加蒸馏水100ml， 加热回流提取2小时，趁热滤过，残渣及烧瓶用水洗涤3次，每次20ml，合并滤液与洗液， 放冷，转移至250ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1ml置于10ml的具塞干燥试管 中，加水至2.0ml，摇匀，在冰浴中缓慢滴加重量体积比0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀， 放冷后至水浴保温10分钟，取出，立即用冰浴冷却10分钟，于582nm处测定吸光度，并 根据标准曲线计算手参中多糖的含量，结果为34.55%。

C、特征图谱及天麻素含量检测法：

1）色谱条件与系统适应性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长222nm，柱 温40℃，理论板数按天麻素峰计算应不低于2000，以乙腈为流动相A，以每100ml加0.1ml 磷酸的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，采用流动相A、流动相B同时进行梯度洗 脱， 0min→10min→45min→70min→90min，按照上述时间段，流动相A： 3%→3%→17%→17%→25%；流动相B：97%→97%→83%→83%→75%；

2）对照品溶液的制备：取天麻素对照品，加甲醇溶解并稀释，制成每1ml甲醇含有0.1mg 天麻素的对照品溶液；

3）供试品溶液的制备：取手参药材样品粉末2g，精密称定，精密加入水饱和正丁醇溶 液25ml，称定重量，超声提取1h，放冷，再称定重量，用水饱和正丁醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，滤液蒸干后加甲醇5ml溶解，即得；

4）测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即 得；

所得供试品特征图谱中呈现5个特征峰，其中1个峰与天麻素峰保留时间相对应，为S 峰，计算其它4个特征峰相对保留时间与S峰的比值，4个比值为：1.82、5.15、5.65、6.13， 差值在±10%以内，同时根据峰面积计算天麻素含量，结果为0.323%。

实施例2：

A、薄层色谱鉴别

取手参对照药材粉末1g、手参样品粉末1g，平行操作如下：加水饱和正丁醇30ml， 超声处理40min，滤过，滤液蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D101大孔树脂柱（内径 1.5cm，柱高12cm），20ml水洗，弃去滤液，以60%乙醇25ml洗脱，收集滤液，蒸干，残 渣加70%甲醇1ml溶解，分别制得对照药材溶液、供试品溶液；分别吸取上述2种溶液各 10μl，点于硅胶G薄层版上，以体积比为8.5：1.2：0.3的乙酸乙酯-甲醇-水混合液为展开 剂展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。供试品色谱 图中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

B、总多糖的含量测定

1）仪器、试药和供试样品

仪器：电子天平：岛津AUW220D型；岛津UV‐2450型紫外分光光度仪。

对照品：无水葡萄糖对照品。（中国药品生物制品鉴定所；批号：110833-200503）

2）对照溶液的制备：取无水葡萄糖对照品10mg，置100ml的容量瓶中，加水溶解并 稀释至刻度，摇匀，即得。

3）标准曲线的制备：精密量取上述对照溶液0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.8ml、1ml， 分别置于10ml的具塞试管中，各加水至2.0ml，摇匀，在冰浴中缓慢滴加重量体积比0.2% 蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后至水浴保温10分钟，取出，立即用冰浴冷却10分钟， 分别在582nm处测定吸光度，并绘制吸光度—浓度标准曲线；

4）测定法：取手参药材样品细粉5g，精密称定，置圆底烧瓶中，加乙醇100ml回流提 取1小时，水浴保温2小时后，过滤，弃去滤液，将残渣及滤纸置于烧瓶中，加蒸馏水100ml， 加热回流提取2小时，趁热滤过，残渣及烧瓶用水洗涤3次，每次20ml，合并滤液与洗液， 放冷，转移至250ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1ml置于10ml的具塞干燥试管 中，加水至2.0ml，摇匀，在冰浴中缓慢滴加重量体积比0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀， 放冷后至水浴保温10分钟，取出，立即用冰浴冷却10分钟，于582nm处测定吸光度，并 根据标准曲线计算手参中多糖的含量，结果为34.64%。

C、特征图谱及天麻素含量检测法：

1）色谱条件与系统适应性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长222nm，柱 温40℃，理论板数按天麻素峰计算应不低于2000，以乙腈为流动相A，以每100ml加0.1ml 磷酸的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，采用流动相A、流动相B同时进行梯度洗 脱， 0min→10min→45min→70min→90min，按照上述时间段，流动相A： 3%→3%→17%→17%→25%；流动相B：97%→97%→83%→83%→75%；

2）对照品溶液的制备：取天麻素对照品，加甲醇溶解并稀释，制成每1ml甲醇含有0.1mg 天麻素的对照品溶液；

3）供试品溶液的制备：取手参药材样品粉末5g，精密称定，精密加入水饱和正丁醇溶 液25ml，称定重量，超声提取1h，放冷，再称定重量，用水饱和正丁醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，滤液蒸干后加甲醇5ml溶解，即得；

4）测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即 得；

所得供试品特征图谱中呈现5个特征峰，其中1个峰与天麻素峰保留时间相对应，为S 峰，计算其它4个特征峰相对保留时间与S峰的比值，4个比值为：1.84、5.13、5.66、6.13， 差值在±10%以内，同时根据峰面积计算天麻素含量，结果为0.320%。

实施例3

A、薄层色谱鉴别

取手参对照药材粉末0.2g、手参样品粉末0.2g，平行操作如下：加水饱和正丁醇10ml， 超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D101大孔树脂柱，20ml 水洗，弃去滤液，以80%乙醇25ml洗脱，收集滤液，蒸干，残渣加80%甲醇1ml溶解， 分别制得对照药材溶液、供试品溶液；分别吸取上述2种溶液各10μl，点于硅胶G薄层 版上，以体积比为9：0.8：0.2的乙酸乙酯-甲醇-水混合液为展开剂展开，取出，晾干，喷 以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。供试品色谱图中，在与对照药材色谱 相应的位置上，显相同颜色的斑点。

B、总多糖的含量测定

1）仪器、试药和供试样品

仪器：电子天平：岛津AUW220D型；岛津UV‐2450型紫外分光光度仪。

对照品：无水葡萄糖对照品。（中国药品生物制品鉴定所；批号：110833-200503）

2）对照溶液的制备：取无水葡萄糖对照品10mg，置100ml的容量瓶中，加水溶解并 稀释至刻度，摇匀，即得。

3）标准曲线的制备：精密量取上述对照溶液0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.8ml、1ml， 分别置于10ml的具塞试管中，各加水至2.0ml，摇匀，在冰浴中缓慢滴加重量体积比0.2% 蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后至水浴保温10分钟，取出，立即用冰浴冷却10分钟， 分别在582nm处测定吸光度，并绘制吸光度—浓度标准曲线；

4）测定法：取手参药材样品细粉0.5g，精密称定，置圆底烧瓶中，加乙醇100ml回流 提取1小时，水浴保温2小时后，过滤，弃去滤液，将残渣及滤纸置于烧瓶中，加蒸馏水 100ml，加热回流提取2小时，趁热滤过，残渣及烧瓶用水洗涤3次，每次20ml，合并滤 液与洗液，放冷，转移至250ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1ml置于10ml的具 塞干燥试管中，加水至2.0ml，摇匀，在冰浴中缓慢滴加重量体积比0.2%蒽酮-硫酸溶液至 刻度，混匀，放冷后至水浴保温10分钟，取出，立即用冰浴冷却10分钟，于582nm处测 定吸光度，并根据标准曲线计算手参中多糖的含量，结果为34.71%。

C、特征图谱及天麻素含量检测法：

1）色谱条件与系统适应性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长222nm，柱 温40℃，理论板数按天麻素峰计算应不低于2000，以乙腈为流动相A，以每100ml加0.1ml 磷酸的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，采用流动相A、流动相B同时进行梯度洗 脱， 0min→10min→45min→70min→90min，按照上述时间段，流动相A： 3%→3%→17%→17%→25%；流动相B：97%→97%→83%→83%→75%；

2）对照品溶液的制备：取天麻素对照品，加甲醇溶解并稀释，制成每1ml甲醇含有0.1mg 天麻素的对照品溶液；

3）供试品溶液的制备：取手参药材样品粉末1g，精密称定，精密加入水饱和正丁醇溶 液25ml，称定重量，超声提取1h，放冷，再称定重量，用水饱和正丁醇补足减失的重量， 摇匀，滤过，滤液蒸干后加甲醇5ml溶解，即得；

4）测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即 得；

所得供试品特征图谱中呈现5个特征峰，其中1个峰与天麻素峰保留时间相对应，为S 峰，计算其它4个特征峰相对保留时间与S峰的比值，4个比值为：1.81、5.15、5.64、6.12， 差值在±10%以内，同时根据峰面积计算天麻素含量，结果为0.325%。