一种含有胸腺法新的冻干药物组合物及制备方法

摘要

本发明涉及一种含有胸腺法新的冻干药物组合物及其制备方法，属医药领域。本发明所述的冻干药物组合物包括以下成分：胸腺法新，甘露醇，绿原酸，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠。

说明书

技术领域：

本发明涉及一种含有胸腺法新的冻干药物组合物及其制备方法，属医药领 域。本发明所述的冻干药物组合物包括以下成分：胸腺法新，甘露醇，绿原酸， 磷酸氢二钠，磷酸二氢钠。

背景技术

胸腺法新，又称：胸腺肽α₁（Tα₁）化学式如下：

Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Ly s-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH

胸腺素是由动物胸腺上皮细胞分泌的一类多肽和蛋白质激素的总称。其中有 一组分子量为1000到15000D的多肽混合物，称为胸腺素组分5（TF₅）。在TF₅中以Tα₁研究得较为透彻，是其中生物活性最强的多肽之一^[1]。

1977年，被称为“胸腺之父”的Allen Goldstein博士从胸腺肽第V组分中提 取出其中最具免疫活性的成分：胸腺肽α₁(Tα₁)。Tα₁是一种生物反应调节剂 (BRM)，主要存在于胸腺中，在脾、肺、肾、脑及其他组织中也有低水平存在。 它可以促使骨髓产生的干细胞成长为能够特异识别抗原的功能T细胞，增加各种 淋巴因子如a、β干扰素的分泌，从而有增强细胞免疫功能的作用。在临床上与 其他生物反应调节剂，如II2、IFN一2、胸腺因子等起协同作用。胸腺肽α因子 (Tα)系列部分分离得α₁-α7，其中免疫激动作用的主要成分胸腺肽α₁已完全阐 明结构。该物质是由28个氨基酸残基构成，N末端被乙酰化，是一种分子量为3108D 的多肽。28个氨基酸分别属于九种。作为天然胸腺激肽的主要组分α₁大致含量 在整个胸腺肽组成中约占1%左右。Tα₁与胸腺肽各单一组分间，或与胸腺肽整体 比较，生物活性均属Tα₁为高。对自行合成的Tα₁活性检定，其活性相当于胸腺 肽的2000倍。

胸腺法新是一种免疫调节因子，由28个氨基酸组成，它可以启动T淋巴细 胞的成熟、刺激分泌干扰素及各种淋巴介素，以及增强自然杀伤（NK）细胞介导 的细胞毒性。Tα₁在T淋巴细胞成熟和免疫功能方面有很大的作用，这些作用包 括：诱导分化的特异标志；促进干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-2（IL-2）及其受 体表达；增强细胞在外源因子刺激时的生长；增加抗体产生，以调节T细胞的细 胞毒性和帮助等功能。

胸腺法新对经Con A刺激的脾细胞分化成前T细胞的研究中发现，给成年鼠 注射Tα₁，可以提高脾细胞表现辅助T细胞的活性，并使脾细胞表达IL-2受体。 其它研究表明Tα₁能使不成熟的T细胞变成具功能的成熟T细胞，并且分泌许多 细胞因子（如IFN-α，IFN-γ，IL-2，CSF）。还发现Tα₁配伍其它细胞因子共 同使用具有抗肿瘤作用。Tα₁作为疫苗的辅助药物已应用于临床治疗乙肝、丙肝、 癌症及免疫缺陷等疾病的研究中。

胸腺法新治疗慢性乙型肝炎或在增进免疫系统反应性方面的作用机理尚未 完全明确，但在多个不同的体外试验表明，胸腺肽α₁是一种生物反应调节因子， 它可以特异性地诱导T细胞Lyt1⁺、2⁺、3⁺表面标志的产生，促使T细胞及自然杀 伤细胞（NK）的分化与成熟，促使致敏的T细胞在各种抗原或有丝分裂原激活后 产生各种淋巴因子，如白介素22（IL22）、α₂干扰素（IFN2α）、γ2干扰素（IFN2 γ）等淋巴因子，促使对IL22高亲和力受体的表达增加，增强Th细胞的功能， 同时它还通过对T₄细胞的激活作用来增强异体和自体的人类混合的淋巴细胞反 应。分泌和增加T细胞上的淋巴因子受体的水平。胸腺肽α₁可能影响NK前体细 胞的募集，这类前体细胞在经干扰素作用后变得更有细胞毒性。在活体内，胸腺 肽α₁能增强经刀豆球蛋白A激活后的小鼠淋巴细胞增加分泌白介素2，和增加白 介素2受体的表达作用。

胸腺法新作为一种细胞免疫剂增强剂，正越来越受到医学界的重视。它对慢 性乙型肝炎、肿瘤、重型病毒性肝炎、流行性乙型脑炎等疾病的治疗效果明显， 副作用少。具有较高的临床研究价值和应用前景。在临床上主要用于：

（1）治疗慢性乙型肝炎；（2）在肿瘤治疗中的应用；（3）治疗重症肝炎；（4） 治疗流行性乙型脑炎；（5）应用于治疗外科感染性疾病。

胸腺法新是一种纯合成制备的α-1胸腺素，属于免疫制剂中高端产品， 最先由美国赛生药厂开发上市，商品名为日达仙，单独使用或与抗病毒 药物、抗癌症药物联用具有较好疗效，已在30多个国家获得上市批准。

现有技术中对胸腺法新注射剂有多种报道，本发明发现，现有胸腺法新注射 剂在注射时具有血管刺激性，甚至引发局部疼痛，本发明在研究绿原酸时将胸腺 法新和绿原酸同时注射发现，血管刺激性大大减轻。同时将绿原酸和胸腺法新一 起制备成冻干制剂，可以加快药物的复溶速度，有利于冻干制剂的使用，

发明内容：

本发明提供一种胸腺法新的冻干药物组合物，其为冻干药物制剂形式，每 1000支冻干注射剂用以下组分制备而成：

本发明还提供本发明的胸腺法新的冻干药物组合物的制备方法，制备步骤如下： 1）取磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，混匀配制成0.1mol/L磷酸钠缓冲液，调节pH 至6.8±0.3之间。121℃、0.11MPa下湿热灭菌30分钟，得到灭菌的0.1mol/L 磷酸钠缓冲液，

2）取胸腺法新，绿原酸，20%甘露醇注射液，用总体积50%-70%注射用水溶解， 加入灭菌的0.1mol/L磷酸钠缓冲液，混合均匀，用注射用水定溶，

3）0.22μm滤膜除菌过滤，中间体检验，分装，冻干，加塞、轧盖，包装，入库。

绿原酸（Chlorogenicacid）是由咖啡酸（Caffeic acid）与奎尼酸（Quinic  acid）组成的缩酚酸，异名咖啡单宁酸，化学名3-O-咖啡酰奎酸 （3-O-caffeoylquinic acid）分子式：C₁₆H₁₈O₉，分子量：354.30，是植物体在 有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯类化合物。绿原酸广泛存在于高等双 子叶植物和蕨类植物中，主要丰在于忍冬科忍冬属（Lonicera）、菊科蒿属 （Artemisia）植物中，其中含量较高的植物主要为杜仲、金银花、向日葵、继 木、咖啡、可可树等。绿原酸具有广泛的生物活性，现代科学对绿原酸生物活性 的研究已深入到食品、保健、医药和日用化工等多个领域。绿原酸是一种重要的 生物活性物质，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、 降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用。

本发明在研究绿原酸注射剂过程中发现，其可以降低血管刺激性和局部疼 痛，同时本发明经过筛选发现绿原酸的使用量在10mg，该剂量不会产生任何的 副作用，但可以起到辅助胸腺法新的作用。

以下通过实验数据说明本发明的有益效果：

对比实验：

考察实施例1和不加绿原酸的对比例以及已经上市的注射用胸腺法新样品的各 项指标

1.血管刺激性实验方法

选体重2.5～3.0kg、雌雄各半的大耳白家兔9只，随机分四组，每组3只。 分别设为实施例1样品（加绿原酸）组、对比例1样品（不加绿原酸）组、已经 上市的胸腺法新样品组。分别于耳缘静脉给予临床使用浓度下的样品，连续7天 给药，每天给药前及给药后48～96小时肉眼观察动物和注射部位。末次给药后 48～96小时观察期结束，取部分动物给药部位组织切片进行病理学检查。留下 的动物根据受试物的特点和刺激性反应情况，继续观察14－21天再进行组织病 理学检查。

2.局部疼痛实验方法

从自愿参加试验研究的健康人中随机抽取60例，男女各半，年龄25-55岁。 随机分为3组，每组20人。分别设为实施例1样品（加绿原酸）组、对比例1 样品（不加绿原酸）组、已经上市的胸腺法新样品组。皮下注射样品后，观察受 试者的疼痛反应。采用Wong—Banker面部表情量表（FPS—R）进行评估，脸谱 下标有0－5的数字，数字越大，表示疼痛强度越大。试验结束后，采用SPSS11.5 版软件进行统计学处理，以P<0.05为差别有统计意义。

3.溶解速度实验方法

取胸腺法新样品16mg，溶于10ml灭菌注射用水中。观察样品溶解情况。

4.加速3个月药物含量测定实验方法

随机取3个批次的样品进行加速试验，放置在商业化生产产品相同或相似的 包装容器中，试验条件为25℃±2℃/60%RH±5%RH，考察时间为3个月。采用 高效液相色谱法测定胸腺法新的含量。方法原理：供试品制成流动相溶液，进 入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长210nm处检测胸 腺法新吸收值，计算出其含量。

具体实施方式：

实施例1

每1000支冻干注射剂用以下组分制备而成：

本发明还提供本发明的胸腺法新的冻干药物组合物的制备方法，制备步骤如下： 1）0.1mol/L磷酸钠缓冲液(PB)配制

取磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，混匀配制成0.1mol/L磷酸钠缓冲液，调节pH 至6.8±0.3之间。121℃、0.11MPa下湿热灭菌30分钟。

2）注射用溶液的配制

取胸腺法新，绿原酸，20%甘露醇注射液，用总体积50%-70%注射用水溶解， 加入灭菌的PB(pH6.8)缓冲液，混合均匀，用注射用水定溶，

3）0.22μm滤膜除菌过滤，中间体检验，分装，冻干，加塞、轧盖，包装，入库。 对比例

每1000支冻干注射剂用以下组分制备而成：

本发明还提供本发明的胸腺法新的冻干药物组合物的制备方法，制备步骤如下：

1）0.1mol/L磷酸钠缓冲液(PB)配制

取磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，混匀配制成0.1mol/L磷酸钠缓冲液，调节pH 至6.8±0.3之间。121℃、0.11MPa下湿热灭菌30分钟。

2）注射用溶液的配制

取胸腺法新，20%甘露醇注射液，用总体积50%-70%注射用水溶解，加入灭 菌的PB(pH6.8)缓冲液，混合均匀，用注射用水定溶，

3）0.22μm滤膜除菌过滤，中间体检验，分装，冻干，加塞、轧盖，包装，入库。