一种含有柠檬苦素治疗溃疡性结肠炎的药物及其制备方法和应用

摘要

本发明提供一种含有柠檬苦素治疗溃疡性结肠炎的药物，该药物对于溃疡性结肠炎具有治疗效果，通过实验证明柠檬苦素在治疗溃疡性结肠炎方面有显著的疗效，剂型为片剂、胶囊、糖浆、口服液、注射液等，本发明采用柠檬苦素治疗溃疡性结肠炎具有无任何毒性、副作用少、疗效显著、无禁忌症及不良反应等优点，其有效率可以达到97.5%，可以长期服用，并公开了制备方法和用途。

说明书

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种含有柠檬苦素治疗溃疡性结肠炎的药物及 其制备方法和应用。

背景技术

溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，简称UC)是以腹泻、粘液脓血便、腹痛、里急后 重等为主要症状，以结肠粘膜慢性炎症和溃疡形成为病理特点的一种消化道疾病。该病 在欧美发达地区发病率较高，约为10万分之18，而亚洲地区，尤其是日本在70年代以 后随着经济的复苏，其发病率迅速增长，60-70年代曾创下发病率增加15倍以上的历史。 在我国，近年来由于生活水平的不断提高，饮食结构、生活习惯的改变，加之检查诊断 技术的提高，发病率亦呈逐年上升趋势。由于本病治愈难度大，且又常易复发，并与结 肠癌的发病存在一定的关系，因此被世界卫生组织列为现代难治病之一。

目前尚无特效治疗，常用的西药有柳氮磺胺吡啶或其有效成份5-氨基水杨酸，肾上 腺皮质激素及免疫抑制剂(硫唑嘌吟、6-巯基嘌吟、甲氨喋吟等)，甲硝唑等。近年来不 少学者采用5-氨基水杨酸肛栓或局部药物灌肠，由于局部药物浓度较高，并维持时间较 久，使疗效明显提高，而全身不良反应降低，具有作用直接、疗效迅速等优势，被国内 临床治疗UC广泛采用。

柠檬苦素(Limonin，LM)最早发现于1989年并在日本专利一号372132文献中公开。 柠檬苦素具有抗肿瘤和抗癌作用，同时还具有镇痛和消炎等作用。对此，中国专利 001306227公开的“一种从柑桔类种子中提取药物活性物质的工艺”和中国专利 001062859公开的“从芸香科果实中提取柠檬苦素的方法”中均有说明。但是，到目前 为止，还未见应用柠檬苦素治疗溃疡性结肠炎的报道。

发明内容

发明目的：提供一种含有柠檬苦素治疗溃疡性结肠炎的药物及其制备方法和应用。

技术方案：

柠檬苦素在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。

柠檬苦素作为唯一原料药在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。

上述应用中所述药物的剂型为片剂、胶囊、糖浆、口服液、注射液。

上述应用中所述药物的剂型中含有辅料，辅料为糊精、乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、 微晶纤维素、甘露糖、甲基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、生理盐水和甜菊苷 的一种或几种。

上述应用中片剂是由柠檬苦素、乳糖、淀粉、低取代轻丙基纤维素、淀粉浆所组 成，各成份的重量配比为：

柠檬苦素5～50份

乳糖20～45份

淀粉50～65份

低取代经丙基纤维素3～6份

5%的淀粉浆5～20份。

制备方法：按上述重量配比称取柠檬苦素、乳糖、淀粉和低取代轻丙基纤维素，充 分混匀，加淀粉浆(5%)适量制成适宜软材，过60目筛制粒，60～70℃干燥，40目筛整粒， 混合均匀，压片，即得片剂成品。

上述应用中胶囊剂是由柠檬苦素、乳糖、淀粉、低取代轻丙基纤维素、淀粉浆所组 成，各成份的重量配比为：

柠檬苦素30～100份

乳糖20～45份

淀粉50～65份

低取代经丙基纤维素3～6份

5%的淀粉浆5～20份。

制备方法：按上述重量配比称取柠檬苦素、乳糖、淀粉和低取代轻丙基纤维素，充 分混匀，加淀粉浆(5%)适量制成适宜软材，过60目筛制粒，60～70℃干燥，40目筛整 粒，混合均匀，套胶囊即得成品。

上述应用中糖浆剂是由柠檬苦素、蒸馏水和单糖浆所组成，各成份的重量配比为：

柠檬苦素5～50份

蒸馏水180～200份

单糖浆750～850份。

制备方法：按上述重量配比称取柠檬苦素，溶于蒸馏水，加单糖浆即得成品。

上述应用中口服液是由柠檬苦素、蔗糖、蒸馏水所组成，各成份的重量配比为：

柠檬苦素5～50份

蔗糖10～20份

蒸馏水950～1000份。

制备方法：按上述重量配比称取柠檬苦素，溶于蒸馏水，加蔗糖即得口服液成品。

上述应用中注射剂是由柠檬苦素和生理盐水所组成，各成份的重量配比为：

柠檬苦素30～100份

生理盐水900～1000份。

制备方法：按上述重量配比称取柠檬苦素，溶于生理盐水并稀释，即得注射液成品。

有益效果：

一、为了探索柠檬苦素治疗溃疡性结肠炎的有效性及安全性，使用柠檬苦素治疗溃 疡性结肠炎40例，试验情况如下：

1、研究方法：采用开放、自身对照研究，收集2012年就诊于本院的溃疡性结肠炎 病例共40例，年龄29～56岁，平均(45.61±9.72)岁。

2、药物及使用方法：按照实施例2的方法制备柠檬苦素胶囊剂，每粒含柠檬苦素 30mg。药品使用方法：每天一粒，连服12周。西药对照组：美沙拉嗪缓释颗粒（5-ASA） （商品名：艾迪莎）法国爱的发制药，0.5g/袋，4g每天。

3、诊断标准：参照《中药新药临床研究指导原则》中“中药新药治疗慢性非特异 性溃疡性结肠炎的临床研究指导原则”。

4、入选病例：

1)符合溃疡性结肠炎西医诊断标准且病情分期为活动期的患者。

2)临床严重程度为中度、重度。

3)符合中医证候诊断标准。

年龄在18～65岁之间，性别不限。

5、疗效判定标准：

[1]临床疗效：总Sutherland评分从基线水平降低3分或30％以上，同时伴有出 血亚评分降低1分以上或直肠出血亚评分的绝对分为0分或1分。

[2]临床缓解：总Sutherland评分为2分或更低。

[3]粘膜愈合：Sutherland评分内镜亚评分的绝对分为0分或1分。

[4]结肠镜检查Baron分级标准

0级：正常黏膜图像；

Ⅰ级：轻度病变（血管纹理模糊，黏膜充血，但无出血）；

Ⅱ级：中度病变（黏膜呈颗粒样变化，有中度接触性出血）；

Ⅲ级：重度病变（明显溃疡形成并自发性出血）。

[5]黏膜组织学检查分级标准[7]

0级：黏膜固有层无中性白细胞浸润；

Ⅰ级：固有层有少量中性白细胞（＜10个/HP）浸润，累及少量隐窝；

Ⅱ级：固有层有明显中性白细胞（10～50个/HP）浸润，累及50％以上隐窝；

Ⅲ级：固有层有大量中性白细胞（＞50个/HP）浸润，伴隐窝脓肿；

Ⅳ级：固有层有明显急性炎症伴溃疡形成。

[6]证候疗效评定标准

疗效指数=(疗前积分-疗后积分)÷疗前积分╳100％

①临床缓解：用药前、服药后，症状和体征明显改善(疗效指数≥95％)；

②显效：服药后，症状和体征明显改善(70％≤疗效指数＜95％)；

③有效：服药后，症状和体征有改善(30％≤疗效指数＜70％)；

④无效：服药后，症状和体征无明显减轻或加重者(疗效指数＜30％)

6、治疗结果：

(1)治疗后腹泻停止率：

柠檬苦素胶囊剂治疗2,4,8,12周后腹泻停止率分别为54%,73%,86%,97%

(2)治疗后脓血便或血便消退率：

柠檬苦素胶囊剂治疗2,4,8,12周后脓血便或血便消退率分别为45%,62%,81%, 93%

(3)治疗后腹痛消失率：

柠檬苦素胶囊剂治疗2,4,8,12周后腹痛消失率分别为61%,78%,89%,97%

(4)治疗后腹胀消失率：

柠檬苦素胶囊剂治疗2,4,8,12周后腹胀消失率分别为67%,83%,91%,100%

(5)不良反应：

柠檬苦素胶囊剂治疗期间未发现明显的不良反应。

7、临床结果：40人中，痊愈35例，痊愈率87.5%，有效39例，有效率（含痊愈） 97.5%，无效1例，无效率为0.25%。对照组美沙拉嗪缓释颗粒的有效率为89.6%。

8、结论：本发明柠檬苦素对溃疡性结肠炎病人具有良好的治疗作用。

柠檬苦素治疗溃疡性结肠炎急性发作疗效显著且无任何不良反应，值得进一步研 究。与现有的治疗溃疡性结肠炎的药物相比，本发明采用柠檬苦素治疗溃疡性结肠炎具 有下列优点：由于柠檬苦素是由纯天然产品提取而成的，无任何毒性、副作用少、无禁 忌症及不良反应。柠檬苦素具有口服效果好、质量稳定的特点，便于服用和贮存。采用 柠檬苦素治疗溃疡性结肠炎的疗效显著。安全可靠，可以长期服用。由于实验表明口服 柠檬苦素后，在人体和动物体肠道内柠檬苦素的含量较高，且柠檬苦素具有镇痛和消炎 等作用，柠檬苦素具有治疗溃疡性结肠炎的作用。

二、柠檬苦素在治疗溃疡性结肠炎时，其药理作用主要体现在：

1、抗炎作用：按照实施例2的方法制备柠檬苦素胶囊剂，每粒30mg。取小鼠50 只，体重18-22g，雌雄各半，随机分成5组，每组10只，实验设空白对照组(0.5%CMC)， 阿司匹林组(300mg/kg)，柠檬苦素(Limonin，LM)高剂量组(100mg/kg)，柠檬苦素 (Limonin，LM)中剂量组(50mg/kg)，柠檬苦素(Limonin，LM)低剂量组(25mg/kg)。连续 灌胃给药7天，每天1次，每次0.5mL/20g，末次给药后1h，用二甲苯(0.05ml/只)涂于 右耳致炎，2h后处死，用直径9mm打孔器取左右耳同部位耳片，称重，以左右耳片重 量差为肿胀度，并计算肿胀抑制率，经t检验。实验研究结果表明，与空白对照组相比， 柠檬苦素(100，50mg/kg,ig)对由二甲苯引起的小鼠耳肿胀有显著的抑制作用（p<0.01）；

取雄性SD大鼠40只，体重（100-140）g，随机分5组，每组8只，实验设空白对 照组(CMC)，ASP组(200mg/kg)，柠檬苦素(Limonin，LM)高、中、低剂量组(36，18， 9mg/kg)。在各鼠右后足踝关节处划线，测右后足正常踝关节周长(mm)，灌胃给药一次(与 临床用药途径一致)，给药体积为1ml/100g。灌胃给药后0.5h于右后足跖腱膜下注射0.5% 角叉菜胶(0.1ml/只)，此后每1h测踝关节周长一次，连续测4h，以致炎前后的踝关节周 长差为肿胀度，进行t检验。实验研究结果表明，柠檬苦素(36，18mg/kg)在致炎后3h 内对由角叉菜胶致引起的大鼠足跖肿胀有显著地抑制作用（p<0.01，p<0.05）；

取雄性SD大鼠40只，体重（130-160）g，随机分5组，每组8只，实验设空白对 照组，阿司匹林（200mg/kg），柠檬苦素(Limonin，LM)高、中、低剂量组(36，18，9mg/kg)。 在乙醚浅麻醉下腹部去毛消毒，腹部切口，将两个灭菌棉球分别植入大鼠两侧腋窝部皮 下。手术当天开始给药，连续灌胃给药一周，每天一次，给药体积为1ml/100g。第8天 颈椎脱臼处死，取出棉球，在60℃烤箱放置12小时后称重，减去原棉球重量即为肉芽 肿净重,并计算肉芽肿抑制率。实验研究结果表明，柠檬苦素(36，18mg/kg)对肉芽组织 增生有显著地抑制作用（p<0.01，p<0.05）；

2、促进组织修复：按照实施例2的方法制备柠檬苦素胶囊剂，每粒30mg。柠檬苦 素可以使创面中血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、纤维连接蛋白的含 量明显增高，促进创面组织的愈合。

3、抗菌作用：按照实施例2的方法制备柠檬苦素胶囊剂，每粒30mg。柠檬苦素体 外抗菌试验，试验中所使用的培养基为通用的MH培养基。对营养要求较高的菌株如肺 炎双球菌等须加入5%的脱脂羊血(固体琼脂培养基)或羊血清(液体培养基)。采用琼脂双 倍稀释法测定最低抑菌浓度（MIC）。精密定量量取试验样品，用适量无菌生理盐水进 行倍比稀释，使各药液成一系列浓度梯度。然后取各梯度药液2ml，分别加入到无菌平 皿中，再加入已灭菌融化的保温于55℃水浴中的MH培养基，立即充分混匀，冷凝后 待用。同时设空白对照，只加入的琼脂培养基。将已预先活化的各试验菌株分别接种到 2ml培养液中，37℃培养过夜，再用相应的培养液作适当的稀释。控制菌液浓度方法： 用分光光度计测定培养液的光密度，然后作适当的稀释），然后用多点接种仪点种各试 验菌于各含药的MH培养基平板上，空白对照同时进行。37℃，培养24小时，观察并 记录各菌的MIC值，并计算MIC₅₀和MIC₉₀。体外抗菌实验研究结果表明,柠檬苦素体 外对试验菌株除了绿脓杆菌外，均有一定的抗菌活性，其中对金黄色葡萄球菌、福氏痢 疾杆菌、嗜血流感杆菌的抗菌活性略强。

具体实施方式

以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此 理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术 均属于本发明的范围。

1、制备实施例

实施例1：用柠檬苦素制成片剂，其处方如下(1000片量)：

按处方称取柠檬苦素、乳糖、淀粉和低取代经丙基纤维素，充分混匀，加淀粉浆(5%) 适量制成适宜软材，过60目筛制粒，60～70℃干燥，40目筛整粒，混合均匀，压片，即 得成品。

实施例2：用柠檬苦素制成胶囊，其处方如下(1000粒量)：

按处方称取柠檬苦素、乳糖、淀粉和低取代羟丙基纤维素，充分混匀，加淀粉浆(5%) 适量制成适宜软材，过60目筛制粒，60～70℃干燥，40目筛整粒，混合均匀，套胶囊即 得成品。

实施例3：用柠檬苦素制成糖浆，其处方如下(1000mL量)：

柠檬苦索    20g

蒸馏水      180mL

单糖浆加至  1000mL

按处方称取柠檬苦素，溶于蒸馏水，加单糖浆至1000mL即得。

实施例4：用柠檬苦素制成口服液，其处方如下(1000mL量)：

柠檬苦素   30g

蔗糖       10g

蒸馏水加至 1000m1

按处方量称取柠檬苦素，溶于蒸馏水，加蔗糖至1000m1即得。

实施例5：用柠檬苦素制成注射液，其处方如下(1000mL量)：

柠檬苦素     50g

生理盐水     1000mL

按处方称取柠檬苦素，溶于生理盐水，稀释至1000mL即得。

本发明所用柠檬苦素购自南京泽朗医药科技有限公司，HPLC含量≥95%，批号为 20110821。