藿香正气水中多种有效成分的含量测定方法

摘要

本发明公开了一种对藿香正气水中甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素、橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚、苍术素等7种有效成分进行含量测定的方法，包括色谱条件与系统适用性试验、对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、测定法等。本发明具有灵敏度高、重现性与稳定性好等特点，大大提高了检验效率，方便快捷，经济环保，可有效控制藿香正气水的质量。

说明书

技术领域

本发明涉及一种对藿香正气水中多种有效成分进行含量测定的方法，具体地说，是利用超高效液相色谱法(UPLC)法对藿香正气水中甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素、橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚、苍术素等7种有效成分的含量进行测定的一种方法。

背景技术

藿香正气水源自宋代《太平惠民和剂局方》，原为散剂，为了解决散剂服用不便的缺陷，后人研制了多种剂型，其中以藿香正气水最为常见。其主要由苍术、陈皮、厚朴、白芷、茯苓、大腹皮、生半夏、甘草浸膏、广藿香油、紫苏叶油等10味药组成，方中藿香味辛，性微温，既可解表散风寒，又芳香化湿浊，且辟秽和中，升清降浊，为君药；以紫苏、白芷二药辛温发散，助藿香外散风寒，芳化湿浊，为臣药；厚朴、大腹皮行气燥湿、除满消胀，半夏、陈皮燥湿和胃、降逆止呕，苍术、茯苓燥湿健脾、和中止泻，共为佐药；甘草调和脾胃与药性，为使药；诸药组合，共奏解表化湿，理气和中之效。功能与主治为解表化湿，理气和中。用于外感风寒、内伤湿滞或夏伤暑湿所致的感冒，症见头痛昏重、胸膈痞闷、脘腹胀痛、呕吐泄泻；胃肠型感冒见上述证候者。

目前藿香正气水收载于《中国药典》2010年版一部，主要制法为：苍术、陈皮、厚朴、白芷分别照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法，用60％乙醇作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集渗漉液，浓缩。茯苓加水煮沸后，80℃温浸二次，取汁；生半夏用冷水浸泡，泡至透心后，另加干姜13.5g，加水煎煮二次；大腹皮加水煎煮3小时，甘草浸膏打碎后水煮化开；合并上述水煎液，滤过，滤液浓缩至适量。广藿香油、紫苏叶油用乙醇适量溶解。合并以上溶液，混匀，用乙醇与水适量调整乙醇含量，并使全量成2050ml，静置，滤过，灌装。

现行质量标准中主要对苍术、甘草、白芷、广藿香油、厚朴、陈皮等部分药味进行了薄层鉴别，对厚朴酚、和厚朴酚、橙皮苷等3种有效成分进行了含量控制，但方法操作烦琐，费时费力，检验周期较长，且要用到大量有毒有害试剂，如三氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯等，本发明就是为了克服上述缺陷，建立一种快速环保的检测方法来对藿香正气水中多种有效成分的含量进行控制，保证药品质量。

发明内容

本发明目的是提供一种藿香正气水中甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素、橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚、苍术素等7种有效成分含量进行测定，该方法利用超高效液相色谱法(UPLC)法进行测定，该方法快速、环保，可有效控制药品质量。

本发明所述的含量测定方法就是利用超高效液相色谱法，建立一种针对藿香正气水中7种有效成分的含量测定方法。

色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Acquity BEH C₁₈(2.1×100mm，1.7μm)

流动相：乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，梯度表见表1。

表1流动相梯度洗脱表

检测波长：249nm(甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素)、281nm(橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚)、336nm(苍术素)。

柱温：35℃。

流速：0.4ml/min。

供试品溶液的制备

精密量取本品10ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.2μm滤膜滤过，即得。

对照品溶液的制备

取甘草酸铵、欧前胡素、异欧前胡素、橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚和苍术素对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml含甘草酸60μg、欧前胡素20μg、异欧前胡素10μg、橙皮苷60μg、厚朴酚0.2mg、和厚朴酚0.1mg、苍术素10μg的混合溶液，即得。(每1g甘草酸铵相当于1.0207g甘草酸)

专属性试验

取各味药材，按处方比例和制法分别制备不含甘草、陈皮、白芷、厚朴、苍术的阴性样品，结果表明，方中其他药味不干扰甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素、橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚、苍术素的检出。

线性关系考察

甘草酸：分别配制不同浓度的甘草酸铵对照品溶液，精密吸取2μl，注入液相色谱仪。以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，表明甘草酸在0.026984～0.67460μg的范围内呈良好的线性关系，回归方程为y＝2.006×10⁶x+4933 r＝0.9999，结果见表2。

表2甘草酸线性关系考察结果

欧前胡素：分别配制不同浓度的欧前胡素对照品溶液，精密吸取2μl，注入液相色谱仪。以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，表明欧前胡素在0.009135～0.228372μg的范围内呈良好的线性关系，回归方程为y＝1.260×10⁷x+7.293  r＝0.9999，结果见表3。

表3欧前胡素线性关系考察结果

异欧前胡素：分别配制不同浓度的异欧前胡素对照品溶液，精密吸取2μl，注入液相色谱仪。以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，表明异欧前胡素在0.004716～0.2358μg的范围内呈良好的线性关系，回归方程为y＝1.016×107x+1176  r＝0.9999，结果见表4。

表4异欧前胡素线性关系考察结果

橙皮苷：分别配制不同浓度的橙皮苷对照品溶液，精密吸取2μl，注入液相色谱仪。以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，表明橙皮苷在0.01416～0.354μg的范围内呈良好的线性关系，回归方程为y＝4.592×106x+6665  r＝0.9999，结果见表5。

表5橙皮苷线性关系考察结果

厚朴酚：分别配制不同浓度的厚朴酚对照品溶液，精密吸取2μl，注入液相色谱仪。以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，表明厚朴酚在0.02152～0.538μg的范围内呈良好的线性关系，回归方程为y＝3.813×106x+7213  r＝0.9999，结果见表6。

表6厚朴酚线性关系考察结果

和厚朴酚：分别配制不同浓度的和厚朴酚对照品溶液，精密吸取2μl，注入液相色谱仪。以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，表明和厚朴酚在0.044376～1.109388μg的范围内呈良好的线性关系，回归方程为y＝3.6479×106x+17463  r＝0.9999，结果见表7。

表7和厚朴酚线性关系考察结果

苍术素：分别配制不同浓度的苍术素对照品溶液，精密吸取2μl，注入液相色谱仪。以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，表明苍术素在0.00392～0.098004μg的范围内呈良好的线性关系，回归方程为y＝3.282×107x-41577  r＝0.9999，结果见表8。

表8苍术素线性关系考察结果

重复性试验

取同一批号样品，精密量取5、10、15ml各3份置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，制备供试品溶液，测定，计算含量，结果甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素、橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚、苍术素含量RSD分别为1.3％、1.5％、2.2％、1.5％、1.1％、1.3％、1.2％，表明各成分重复性良好。

回收率试验

取已知各成分含量的同一批号样品，精密量取5ml置25ml量瓶中，分别精密加入甘草酸、欧前胡素、异欧前胡素、橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚、苍术素对照品适量，测定，计算回收率，结果见表9，结果表明各成分回收率良好。

表9回收率测定结果

上述试验可知，本方法可准确测定藿香正气水中甘草酸、橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚、欧前胡素、异欧前胡素、苍术素等7种有效成分的含量，如实反映企业是否按处方投料及生产工艺是否稳定等情况，可作为控制样品质量的可靠方法。

本发明的优点

本发明采用超高效液相色谱法同时测定藿香正气水中7种有效成分的含量，可有效控制药品质量，而且仅用十几分钟即可完成测试，方便快捷，高效环保。

附图说明

图1甘草酸对照品标准曲线

图2欧前胡素对照品标准曲线

图3异欧前胡素对照品标准曲线

图4橙皮苷对照品标准曲线

图5厚朴酚对照品标准曲线

图6和厚朴酚对照品标准曲线

图7苍术素对照品标准曲线

图8混合对照品、藿香正气水样品、阴性样品色谱图(249nm)

图9混合对照品、藿香正气水样品、阴性样品色谱图(281nm)

图10混合对照品、藿香正气水样品、阴性样品色谱图(336nm)

具体实施方式

分别取七个不同生产企业的样品，按上述方法进行测定，结果见表10。

表10不同企业样品7种成分测定结果(单位：mg/ml)