复方金钱草制剂在制备预防和治疗慢性肾功能衰竭及肾纤维化中的应用

摘要

本发明提供复方金钱草制剂在制备预防或治疗慢性肾功能衰竭以及肾纤维化的药物中的新用途。所述的复方金钱草制剂的药效成分是由广金钱草200-220份、车前草100-115份、光石韦100-115份、玉米须45-60份制备而成，优选广金钱草218份、车前草109份、光石韦109份、玉米须54.5份。按常规药剂技术制备的制剂，如颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、合剂、糖浆剂。其中优选颗粒剂。

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药制剂在制备预防或治疗慢性肾功能衰竭以及肾纤维化的药物中的应用。

背景技术

肾纤维化是在各种致病因子如炎症、损伤等作用下间质细胞及细胞间质增多，基质蛋白大量 堆积导致肾小球硬化和肾间质纤维化，是一种不可逆性肾损伤，是影响各类肾脏疾病治疗及预后 的重要因素，是各种原因肾脏疾病进展到慢性肾功能衰竭(CRF)终末期的共同途径。慢性肾功能 衰竭是多种慢性肾脏疾病进展到晚期的严重综合症候群，肾纤维化与慢性肾功能衰竭的进展关系 十分密切，阻止或减慢这一过程的发生与发展，可预防慢性肾功能衰竭的发生。

本发明的复方金钱草制剂记载在发明专利200910114530.8中，本发明人意料之外的发现，所 述中药制剂除治疗泌尿结石和泌尿感染外，还具有较强抗肾纤维化的作用，可作为用于预防和治 疗慢性肾功能衰竭及肾纤维化。

发明内容

本发明提供了一种中药制剂在制备预防或治疗慢性肾功能衰竭的药物中的应用，本发明还提 供了该中药制剂在制备预防或治疗肾纤维化的药物中的应用。其中所述的中药制剂来自于发明专 利200910114530.8，其药效成分是由广金钱草200-220份、车前草100-115份、光石韦100-115 份、玉米须45-60份制备而成，优选广金钱草218份、车前草109份、光石韦109份、玉米须54.5 份。按常规药剂技术制备的制剂，如颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、合剂、糖浆剂。其中优选颗 粒剂。

有益效果

一、实验材料

1.实验动物

Wistar雄性大鼠，SPF级，体重180～200g，由广西医科大学实验动物中心提供，实验动物 生产许可证号：SCXK桂2009-0003。动物饲养于SPF级动物实验室，足量供饲供水。

2.实验药品与试剂

本发明药物，批号：090211；以上样品由广西万通制药有限公司提供，每g相当于药材4g。 即用型第二代免疫组化Elivision plus广谱试剂盒，福州迈新生物技术开发有限公司提供。

二、实验方法

取Wistar雄性大鼠55只，将45只大鼠行5／6肾切除手术制作CRF动物模型：术前禁食12h(不 禁水)，腹腔注射10％水合氯醛(35mg／100g体重)麻醉，取俯卧位固定于手术台上，无菌操作下在 肋脊角左下1cm处向左下做一3cm切口，充分暴露左肾，分离并暴露肾蒂，用止血夹夹住肾蒂， 分别剪除左肾上下各1／3皮质，吸收性明胶海绵压迫止血3min，松开止血夹，观察无明显出血后 复位残肾，腹腔注入8万u青霉素预防感染，逐层缝合创口；观察1W后行第二次手术，结扎肾蒂， 切除右肾，腹腔注入8万u青霉素预防感染，关腹。造模过程中死亡4只，将剩余的41只大鼠随 机分为4组，每组10～11只，即模型组、本发明药物15.0g总药材／kg、7.5g总药材／kg、3.25g 总药材／kg三个剂量组。另10只大鼠为假手术组，同期行两次手术，每次仅打开腹腔、暴露肾脏， 关腹。于第二次手术后1W开始灌胃给药(假手术组、模型组给生理盐水)，每天1次，给药体积均 为0.2ml／100g，连续8W。末次给药后次日，经经腹主动脉取血测定血清尿素氮(BUN)、肌酐(CREA) 含量观察肾功能变化；剖取左肾制备石蜡切片，按照试剂盒步骤做免疫组化，采用病理图像分析 软件作免疫组化半定量分析，观察TGF-β1在肾组织中的表达。

三、实验结果

1.肾功能检测

给药8W后模型组的血清尿素氮(BUN)和肌酐(CREA)含量均明显增高，较假手术组差异有显著 意义(P＜0.01)。本发明药物15.0g／kg剂量组的CREA略低于模型组(P＜0.05)，提示本发明药物 对5／6肾切除CRF模型大鼠具有明显的改善肾功能的作用。详见表1。

2.肾脏组织TGF-β1表达

假手术组肾小球内皮细胞、毛细血管内皮细胞及肾小管上皮细胞均有微弱表达，而模型组肾 小球内皮细胞、毛细血管内皮细胞及肾小管上皮细胞均高表达，与假手术组比较差异有显著意义 (P＜0.01)，本发明药物15.0g／kg、7.5g／kg二个剂量组的TGF-β1表达均低于模型组(P＜0.05 或＜0.01)，提示其对5／6肾切除CRF模型大鼠的肾纤维化均有抑制作用。详见表1。

表1对5／6肾切除CRF模型大鼠肾功能及肾组织TGF-β1表达影响的比较

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，其余P＞0.05

四、结果分析

TGF是多肽类生长因子，有5种异构体，各种异构体的生物效应相似，在肾组织中TGF-β1 表达最多。TGF-β1被认为是最重要的促纤维化因子之一，可促进细胞外基质(ECM)的积聚，在肾 小球硬化和肾间质纤维化中起重要作用。①促进多种ECM成分如I、II、III、IV、V型胶原和多种 蛋白多糖的合成；②抑制ECM的降解，既抑制降解ECM成分的酶类如胶原酶系的合成，又促进纤 溶酶原激活抑制因子和金属蛋白酶组织抑制因子等的表达；③促进细胞表面的受体-整合素的表 达，进一步促进ECM的表达，诱导肾小管上皮细胞凋亡或肾小管上皮细胞-间充质细胞转化，参与 肾纤维化的进展；④自我诱生作用，即在损伤部位释放TGF-β1可诱导细胞产生更多的TGF-β1， 从而在局部放大了其生物学作用。由此提示TGF-β1的过度表达是构成肾组织纤维化的病理学基 础，有效切断TGF-β1的信号转导，是终止和减轻肾纤维化的关键。

本实验结果表明，本发明中药制剂能降低CRF大鼠血清CREA，可以有效降低5／6肾切除致 CRF大鼠肾组织中TGF-β1的表达，从而减少ECM的积聚，减缓肾纤维化的发展，延缓CRF的进 展，具有明显的抗肾纤维化作用，能够预防或治疗肾纤维化以及由此导致的慢性肾功能衰竭。

具体实施方式

下面通过具体实施例进一步说明本发明的技术方案，这些实施例仅对本发明作进一步说明和补充， 本发明不限于这些实施例。

实施例1

广金钱草218份   车前草109份   光石韦109份   玉米须54.5份

取上述四味药物，将广金钱草、车前草、玉米须三味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次 1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至70℃相对密度为1.10-1.30的清膏；光石韦加水煎煮二次， 第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至70℃相对密度为1.10-1.25的清膏， 放冷；加入1.5倍量95％乙醇，搅匀，静置24小时；取上清液，回收乙醇，浓缩；与上述清膏混 匀，加入乳糖、糊精和甜味剂，制成颗粒，即得颗粒剂，通过口服给药。

实施例2

广金钱草218份   车前草109份   光石韦109份   玉米须54.5份

取上述四味药物，将广金钱草、车前草、玉米须三味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次 1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至70℃相对密度为1.10-1.30的清膏；光石韦加水煎煮二次， 第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至70℃相对密度为1.10-1.25的清膏， 放冷；加入1.5倍量95％乙醇，搅匀，静置24小时；取上清液，回收乙醇，浓缩；与上述清膏混 匀，加入赋形剂制粒，干燥，加入崩解剂、润滑剂，压片，包衣，即得片剂，通过口服给药。

实施例3

广金钱草218份   车前草109份   光石韦109份   玉米须54.5份

取上述四味药物，将广金钱草、车前草、光石韦、玉米须等四味加水煎煮二次，第一次2小 时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至70℃相对密度为1.10-1.30的清膏，加入赋形 剂制粒，干燥，加入崩解剂、润滑剂，压片，包衣，即得片剂，通过口服给药。

实施例4

广金钱草218份   车前草109份   光石韦109份   玉米须54.5份

取上述四味药物，将广金钱草、车前草、光石韦、玉米须等四味加水煎煮二次，第一次2小 时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至70℃相对密度为1.10-1.30的清膏，加入赋形 剂制粒，干燥，即得颗粒剂，通过口服给药。